CC BY
17
УДК 619:616-097:576.895.1
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПРОТОСКОЛЕКСОВ ECHINOCOCCUS MULTILOCULARIS К АНТИБИОТИКАМ
Тхакахова A.A., Андреяное О.Н., Тимофеева О.Г.
ФГБНУ «ВНИИ фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К.И. Скрябина» (1980oleg@mail.ru)
Введение. Поддержание личинок цестод в условиях лаборатории преследует познание биологического развития паразитов, изучение клеточной структуры цепней, возможность получение клеточных и метаболических антигенов, исследование происхождения мембран эхинококков, моделирование инвазии и другое [1, 2]. При парентеральном пассировании протосколексов эхинококков внутрибрюшинно лабораторным грызунам используются антибиотики разных марок. Нашей целью было исследовать чувствительность и сохраняемость биологических свойств протосколексов альвеолярного эхинококка Echinococcus multilocularis в растворах разных антибиотиков.
Материалы и методы. Моделью для исследований служили протосколексы возбудителя альвеолярного гидатидоза E. multilocularis, зрелые цисты которого поддерживаются на лабораторных белых крысах и мышах в лаборатории иммунодиагностики и клеточной технологии ФГБНУ «ВНИИП им. К.И. Скрябина». Из брюшной полости зараженных животных, после медикаментозной эвтаназии, извлекали полноценные цисты гельминта. Измельченные глазными ножницами гидатидные пузыри растирали в фарфоровой ступке пестиком до образования равномерного гомогенизата. Полученную массу разбавляли стерильным физиологическим раствором, промывали и отстаивали трижды. Далее, взвесь пропускали через металлическое сито и получали очищенные протосколексы с осадком гидатидозного песка.
В опытах были испытаны антибиотики ампициллин 1,0 (ОАО «Синтез»), стрептомицин 500 мг (ОАО «Биохимик»), фармаксидин 1% (ЗАО «Мосагроген»), бетамокс LA (амоксициллин, Norbrook Laboratories Limited), байтрил 2,5% (энрофлоксацин, ЗАО «Байер» - ФГУ «ВНИИЗЖ»), Один флакон ампициллина и стрептомицина растворяли в 1,0 л физиологического раствора при комнатной температуре под вытяжкой. Фармаксидин, бетамокс и байтрил объемом по 1,0 мл разводили в 99 мл физиологического раствора. В приготовленные растворы антибиотиков объемом по 100 мл вносили полиэтиленой пипеткой (3,0 мл) суспензии протосколексов объемом 5,0 мл и выдерживали в холодильнике при 5±2°С. В качестве контроля использовали физиологический раствор - 0,89% NaCl.
Биопробу проводили через 2 суток после хранения протосколексов в холодильнике. В исследованиях были использованы лабораторные мыши линии C57BL6 массой 20±1,5 г разного пола по 2 животных в опытной группе. Всего было инвазировано 12 животных. Мышей заражали взвесью сколексов E. multilocularis объемом 1,0 мл внутрибрюшинно в область печени стерильным многоразовым
шприцом. Результаты инвазирования (биологической пробы) учитывали через 4 месяца по наличию образовавшихся ларвоцист гельминта и зрелых сколексов.
Жизнеспособность культуры протосколексов цестоды оценивали по проявлению двигательной активности на столике Морозова при микроскопии (увеличение х40) после 10-15-ти минутной экспозиции на часовом стекле.
Результаты. В результате исследований было выявлено, что растворы антибиотиков не влияют на жизнеспособность и инвазионность протосколексов альвеолярного эхинококка. Во время хранения взвеси сколексов в холодильнике и в растворах разных антибиотиков, показатель жизнеспособности снижался постепенно. Так, через 2 часа хранения при 5±2°С жизнеспособность сколексов E. multilocularis колебалась от 92,9 до 94,5%, в контроле же она оставалась 93,5%. Через 24 часа показатели жизнеспособности в опыте были от 74,3 до 79,5%, в контроле 78,5%. Спустя 48 часов сохранение сколексов в опыте было от 51,3 до 60,1%, а в контроле 57,8%.
Исследуемые растворы антибиотиков хорошо растворялись в физиологическом растворе, кроме бетамокса LA. Его раствор образовывал суспензию при размешивании и, затем, полученная взвесь оседала.
Показатель инвазионности протосколексов E.multilocularis на лабораторных мышах был практически одинаковый в каждой опытной группе. Его мы исследовали на 2 сутки хранения культуры при 5±2°С. Через 4 месяца, после медикаментозной эвтаназии и при патологоанатомическом вскрытии мышей, во всех опытных группах у животных развились множественные ларвоцисты цепня размером 1,2-13 мм. Цисты локализовались в печени, на брыжейке кишечника, сальнике, на селезенке и на париетальной брюшине. В контрольной группе одно животное погибло на 4 сутки опыта с похожими признаками инфекционного перитонита и дистрофии печени, у второго к 4-м месяцам опыта образовались цисты размером 1,2 - 5,5 мм с наличием казеозной массы внутри без сколексов. Полученные результаты исследований согласуются с данными Colli C.W., Schantz P.M. [2], Ahmadnia S.[3] и другими [4], которые хранили сколексы и яйца E. granulosus в растворах антибиотиков и проверяли инвазионность на линейных мышах линии Balb/c.
Заключение. Таким образом, доступные в ветеринарных аптеках антибиотики не оказывали никакого влияния на жизнеспособность протосколексов E. multilocularis во время хранения при 5±2°С. Кроме того, сохранение сколексов в растворах антибиотиков не повлияло на инвазионность культуры, хранившейся в условиях холодильника в течение 2 суток, для лабораторных мышей линии c57BL6. Через 4 месяца (продолжительность биологической пробы) развились полноценные ларвоцисты с наличием протосколексов.
Литература: l.Rupp S., Sohn К. Host-Pathogen interactions. Methods and Protocols//Humana Press.- 2009. - a part of Springer Science+Business Media, LLC. -416p. 2.Colli C.W., Schantz P.M.// J. Parasitology. -1974,- Vol. 60.-N. l.-P. 53-58. 3.Ahmadnia S., Moazeni M., Mohammadi-Samani S., Mootabi Alavi A.//J. Parasit. Dis., Jan-Mar, 2014.-№ 38 (1): P. 77-80.
Sensitivity of Echinococcus multilocularis protoscolices to antibiotics. Thakahova A.A., Andreyanov O.N., Timofeeva O.G. All-Russian K.I. Scryabin Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animal and Plants.
Summary. Antibiotics available in veterinary pharmacies had no effect on the viability of E. multilocularis protoscolices during storage at 5±2°C. In addition preservation of scolices in solutions of antibiotics did not affect the infectivity of culture stored in refrigerator for 2 days for laboratory C57BL6 mice. After 4 months (the duration of the biological test) full-value larval cysts developed with presence of protoscolices.
