Частота выделения и лекарственная резистентность грибов рода Candida от больных ВИЧ-инфекцией в Иркутске

Донгак Долаана Александровна; Карноухова Ольга Геннадьевна; Коган Галина Юрьевна; Распопина Любовь Алексеевна; Ботвинкин Александр Дмитриевич

ЧАСТОТА ВЫДЕЛЕНИЯ И ЛЕКАРСТВЕННАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ГРИБОВ РОДА CANDIDA ОТ БОЛЬНЫХ ВИЧ-ИНФИЦИЕЙ В ИРКУТСКЕ

Долаана Александровна Донгак1, Ольга Геннадьевна Карноухова1, Галина Юрьевна Коган1,

Любовь Алексеевна Распопина2, Александр Дмитриевич Ботвинкин1 ('Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов; 2Иркутская областная инфекционная клиническая больница, гл. врач — к.м.н. В.А. Хабудаев)

Резюме. Проведено сравнительное рандомизированное исследование в двух группах пациентов: 104 больных ВИЧ-инфекцией из инфекционного стационара и 205 амбулаторных пациентов с неустановленным ВИЧ-статусом. Изучено 57 изолятов Candida, в том числе C. albicans — 73,7% и C. non-albicans — 22,3% (C. krusei, C. glabrata и C. tropicalis). Частота выделения Candida была выше в группе больных ВИЧ-инфекцией, в сравнении с амбулаторными пациентами: 38,5% (29,0+48,0) против 6,8% (3,2+10,4). Различия для С. non-albicans выражены сильнее. Все изоляты C. albicans были чувствительны к нистатину, от 45 до 62 % резистентны к флуконазолу, интроканозолу и кетакано-золу, от 10 до 46% — к амфотерицину В и клотримазолу, без статистически значимых различий между группами (х2 от 0,01 до 2,70).

Ключевые слова: Candida, лекарственная резистентность, ВИЧ-инфекция, Иркутск.

FREQUENCY OF ISOLATION AND DRUG RESISTANCE OF FUNGI CANDIDA GENUS FROM THE PATIENS WITH HIV-INFECTION IN IRKUTSK

D.A. Dongak1, O.G. Karnoukhova1, G.U. Kogan1, L.A. Raspopina2, A.D. Botvinkin1 (1Irkutsk State Midical University, Russia; 2Irkutsk Regional Infectious Clinic, Russia)

Summery. Two groups of the patients were tested in comparative randomised study: 104 hospital patients with HIV-infection and 205 outpatients with unknown HIV-status. In the study 57 strains of Candida were isolated; C. albicans — 73,7% и C. non-albicans — 22,3% (C. krusei, C. glabrata и C. tropicalis). The frequency of confirmation of Candida infection were greater among HIV-patients, in compare with outpatients: 38,5% (29,0+48,0) against 6,8% (3,2+10,4). These differences were more obvious for С. non-albicans. All the isolates of C. albicans demonstrated the sensitivity to Nystatine, 45 — 62 % had resistance to Fluconazole, Introkanozole and Ketakonasole, 10-46% — had resistance to Amphotericine B and Clotrimazole, without statistically significant differences between the groups (х2 0,01-2,70).

Key words: Candida, drug resistance, HIV-infection, Irkutsk-city.

Проблема распространения ВИЧ-инфекции более 25 лет остается актуальной для мирового сообщества. Масштабы распространения вируса иммунодефицита человека приобрели глобальный характер и представляют реальную угрозу социально-экономическому развитию большинства стран мира [3]. Причиной летальных исходов у более 90% больных СПИДом являются вторичные заболевания, в число которых входят как оппортунистические инфекции, так и другие болезни инфекционной и неинфекционной природы, характерные для ВИЧ-инфекции [5]. Кандидоз развивается на ранних стадиях ВИЧ-инфекции (начиная с 2В) и играет значительную роль в формировании клинической картины на поздних стадиях с тяжелыми поражениями бронхов, пищевода и других органов в финале болезни [6]. По распространенности ВИЧ-инфекции Иркутская область занимает одно из первых мест в Российской Федерации. В Иркутске инфицировано ВИЧ более 1% населения. Неуклонно увеличивается число больных ВИЧ-инфекцией с клиническими проявлениями болезни, в том числе, в терминальной стадии [9]. Возросла актуальность диагностики и лечения кандидозов [1,6,7,8, 11].

Цель исследования: характеристика частоты выделения грибов рода Candida от больных ВИЧ-инфекцией в стационаре, в сравнении с амбулаторными пациентами с неизвестным ВИЧ-статусом в г. Иркутске, и оценка резистентности выделенных культур к антимикотикам.

Материалы и методы

В 2011г. в бактериологической лаборатории центра лабораторной диагностики «Мечников» (ЦЛД) Иркутского государственного медицинского университета исследована 201 проба биоматериала от 104 ВИЧ-инфицированных больных (от 1 до 3 проб на одного пациента), госпитализированных в областную клиническую инфекционную больницу. Пациенты обследованы по клиническим показаниям. Персональные данные

пациентов были скрыты; пробы регистрировали под условными номерами по мере поступления в лабораторию. Контрольную группу формировали методом случайной выборки (с использованием генератора случайных чисел в программе Excel) из числа 1922 амбулаторных пациентов, обратившихся за медицинской помощью в различные медицинских организаций г. Иркутска и обследованных бактериологически в ЦЛД ИГМУ в 2011 г. ВИЧ-статус пациентов контрольной группы не был известен. Исходя из распространенности ВИЧ-инфекции в Иркутской области, среди амбулаторных пациентов ожидаемая доля ВИЧ-инфицированных не превышала 5%. В контрольную группу вошли 205 пациентов, от каждого из которых исследовано по одной пробе биологического материала. Опытная и контрольная группы обозначены условно в тексте и таблицах как ВИЧ (+) и ВИЧ (-), соответственно.

Всего исследовано 406 проб биологического материала, в том числе: из органов дыхательной системы — мазки из зева и носа; желудочно-кишечного тракта — мазки из глотки, испражнения; мочеполовой системы — моча, соскоб из уретры, соскоб из цервикального канала, секрет предстательной железы, мазки из влагалища, шейки матки, полости матки.

Выделение грибов рода Candida проводили на среде Сабуро с антибиотиком цефабол (цефуроксим) методом полуколичественного посева по Гоулду. Учитывали как положительные только те пробы, в которых КОЕ выде-

Табпица 1

Частота выделения (%) грибов рода Candida от пациентов с различным ВИЧ-статусом

Пациенты разных групп х2

ВИЧ (+) n=104 ВИЧ (-) n=205

C. albicans 25,9% (17,3+34,5) 6,3% (2,9+9,7) 23,57

C. non-albicans 12,5% (6,1 + 18,9) 0,5% (0+1,5) 23,03

BceroCandida 38,4% (28,9+48,1) 6,8% (3,2+10,4) 47,87

Таблица 2

Частота выделения (%) грибов рода СапШйаиз проб различной локализации при обследовании пациентов с различным ВИЧ-статусом

Пробы различной локализации (по системам) Результаты исследования проб от пациентов разных групп X2

ВИЧ (+) ВИЧ (-)

Исследовано проб Выделено культур Исследовано проб Выделено культур

Дыхательная система 134 26,1% (18,5+33,7) 66 7,6% (1,0+14,2) 9,50

Мочеполовая система 63 6,4% (0,2%+12,6) 118 7,6% (6,8%+4,6) 0,10

Пищеварительная система 4 100% 10 0 -

Прочие 0 0 12 0 -

Всего проб 201 21,4% (18,5+27,2) 205 6,8% (4,2+9,4) 17,84

ленных грибов составляло 104 и более микробных клеток в 1 мл, что говорит об активности инфекционного процесса и позволяет дифференцировать носительство от патологии. Для первичной идентификации использовалась хромогенная среда CandidalD («BioMerieux», Франция). Все выделенные культуры разделены на две группы: C. albicans и C. non-albicans.

Чувствительность к шести антимикотикам: амфоте-рицину В, нистатину, клотримазолу, флуконазолу, ин-траконазолу и кетоконазолу определяли диско-диффу-зионным методом.

Опытную и контрольную группы сравнивали по частоте выделения различных видов грибов, с учетом места выделения, и частоте встречаемости резистентных изо-лятов. Статистическую значимость различий оценивали по доверительному интервалу для уровня значимости 95% (±2m) и критерию х2. Результаты считали достоверными, если вероятность нуль-гипотезы не превышала

0,05 (р<0,05). Статистическая обработка данных проведена с использованием программы Microsoft Excel, 2007.

Результаты и обсуждение

Всего выделено 57 культур грибов рода Candida, в том числе 42 (73,7%) — C. albicans и 15 (22,3%) — C. nonalbicans (C. krusei, C. glabrata и C. tropicalis). Таким образом, доминирующим является C. albicans. От больных ВИЧ-инфекцией выделено 29 культур C. albicans, при этом от одного пациента одновременно выделены культуры C. albicans и C. non-albicans (C.krusei); от двух пациентов грибы Candida выделены из проб разной локализации (мокрота, моча и кал). В пересчете на число пациентов, доля обследованных с положительным результатом больных в стационаре составила 38,4%. От больных ВИЧ-инфекцией выделено 14 культур C. non-albicans двух видов (C. krusei и C. glabrata). От амбулаторных пациентов с неустановленным ВИЧ-статусом выделено всего 14 культур грибов рода Candida, в том числе 13 — C. albicans и лишь 1 — C. non-albicans (C.krusei).

Частота выделения грибов рода Candida от больных ВИЧ-инфекцией, как и ожидалось, была значительно выше, чем от амбулаторных пациентов (табл. 1). Группы сравнения отличались по частоте выделения грибов разных видов; если для C. albicans число больных ВИЧ-инфекцией, обследованных с положительным результатом, было в 2 раза выше в сравнении с амбулаторными пациентами, тогда как для — C. non-albicans — в 13 раз.

Основная часть культур грибов рода Candida вы-

делена из проб с органов дыхательной системы — 70,2%; примерно четверть — 22,8% из проб с органов мочеполовой системы, остальные — из проб из желудочно-кишечного тракта, которые были представлены в небольшом количестве. Частота выделения грибов по отношению к числу исследованных проб составила 20%, 7,2% и 28,6%, соответственно. Как видно из табл. 2, различия между группами ВИЧ-инфицированных и амбулаторных пациентов по частоте лабораторного подтверждения кандидоза были обусловлены, главным образом, различиями в частоте поражения дыхательной системы.

Все изоляты C. albicans, независимо от источника выделения, были чувствительны к нистатину. Примерно половина изолятов от пациентов обеих групп была резистентна к флуконазолу, интроканозолу и кетака-

Таблица 3

Частота встречаемости лекарственной резистентности культур C. albicans, выделенных от пациентов с различным ВИЧ-статусом (%)

Препарат Культуры от пациентов разных групп X2

ВИЧ (+) n=29 ВИЧ (-) n=13

Нистатин 0 0 -

Амфотерицин В 10% (0+21,2) 30,8% (5,3+56,4) 2,70

Клотримазол 24,1% (8,3+39,9) 46,2% (18,6+73,8) 2,04

Флуконазол 44,8% (26,4+63,2) 46,2%(18,6+73,8) 0,01

Интраконазол 58,6% (40,4+76,8) 61,5% (34,5+88,5) 0,03

Кетаконазол 48,3% (29,7+66,9) 53,8% (26,2+81,4) 0,11

нозолу. Более выраженные, но статистически не значимые, различия между изолятами от больных ВИЧ-инфекцией и амбулаторных пациентов отмечены для амфотерицина В и клотримазола (табл. 3).

Известно, что наиболее вирулентным видом дрожжеподобных грибов рода Candida является вид C.albicans, который может вызывать заболевания у людей с нормальным функционированием иммунной системы [4]. У больных ВИЧ-инфекцией, возрастает частота выделения грибов группы C. non-albicans, которые на фоне глубокого иммунодефицита способны к интенсивному размножению. В первую очередь страдают органы дыхательной системы, что подтверждается увеличением частоты выделения со слизистых оболочек носа и зева у пациентов с ВИЧ-инфекцией. Полученные результаты согласуется с литературными данными [5, 6].

Резистентность к противогрибковым препаратам является одним из факторов патогенности [1,2,10,11]. Для возникновения заболевания необходимы сочетания нескольких факторов, а именно: достаточное количество микробов (КОЕ) и наличие у них факторов агрессии, в том числе резистентности к антимикотикам. Результаты сравнения частоты лекарственной резистентности у изолятов C. albicans от ВИЧ-инфицированных и амбулаторных пациентов не выявили существенных различий. Однако тенденция к меньшей частоте резистентности к двум из шести из исследованных антимикотиков заслуживает внимания и дальнейшего изучения.

ЛИТЕРАТУРА

1. Анкирская А.С., Муравьева В.В., Миронова Т.Г. и др. Генитальный кандидоз в структуре оппортунистических инфекций влагалища. Принципы лабораторной диагностики и значение мониторинга чувствительности грибов к антимикотикам. // Акушерство и гинекология. — 2009 . — № 5. — С. 31-37.

2. Веселов А.В., Мултых И.Г., Клясова Г.А. и др. Эпидемиология возбудителей кандидозов и их чувствительность к азо-

лам: результаты исследования ARTEMISDisk в России. // Клиническая микробиол. антимикробн. химиотер. — 2005. — Т. 7. №1. — С. 68-76.

3. Голиусова М.Д. Эпидемия ВИЧ-инфекции в Российской Федерации и ее особенности на современном этапе. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2011. — № 6. — С. 97-100.

4. Годовалов А.П., Быкова Л.П., Ожгибесов Г.П. Значение грибов рода Candida при заболеваниях дыхательных путей. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2008. — №7. — С. 10-12.

5. Ермак Т.Н. Кравченко А.В., Шахгильдян В.И. и др. Анализ причин летальных исходов больных ВИЧ-инфекцией в Российской Федерации. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2010. — №3. — С. 19-22.

6. Ермак Т.Н., Перегудов А.В., Груздев Б.М. Оппортунистические инфекции у ВИЧ-инфицированных: чудес не бывает. // Терапевтический архив. — 2006. — №11. — С. 80-81.

7. Кулько А.Б. Исследование чувствительности к противо-микробным препаратам клинических штаммов Candida krusei, выделенных от больного туберкулезом легких. // Антибиотики и химиотерапия. — 2008. — Т. 53. №11-12. — С. 22-24.

8. Кудрина М.И. Вульвовагинальный кандидоз — совре-

менный подход к выбору лекарственных препаратов. // Российский вестник акушера-гинеколога. — 2011. — Т. 11. № 6. — С. 89-93.

9. Шарифулина Н.Л., Аитов К.А. Анализ смертности от ВИЧ-инфекции в стадии СПИД в Иркутской области в 2007 г. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2008. — №7. — С. 85-87.

10. Soll D.R. Mating in Candida albicans and Related Species. // Biology of the Fungal cell, 2d ed. The MYCOTA VIII. R. J. Howrd and N. A. R. Gow (Eds.). — Springer-Verlag Berlin, Heidelberg, 2007. — P. 195-217.

11. Venkatesh M.P., Pham D., Fein M., et al. Neonatal Coinfection Model of Coagulase-Negative Staphylococcus (Staphylococcus epidermidis) and Candida albicans: Fluconazole Prophylaxis Enhances Survival and Growth // Antimicrob Agents Chemother. — 2007. — Vol. 51, №4. — P. 1240-1245.

Информация об авторах: Донгак Долаана Александровна — интерн; Карноухова Ольга Геннадьевна — доцент кафедры, к.м.н., e-mail: olga196464@rambler.ru; Коган Галина Юрьевна — заведующая центром лабораторной диагностики; Распопина Любовь Алексеевна — заведующая лабораторией; Ботвинкин Александр Дмитриевич — заведующий кафедрой, профессор, д.м.н., 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, тел. (3952) 240841,

e-mail: botvinkin_ismu@mail.ru

ИЗУЧЕНИЕ АДАПТАЦИИ RICKETTSIA RAOULTII К ОСНОВНЫМ ПЕРЕНОСЧИКАМ — КЛЕЩАМ РОДА DERMACENTOR С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МЕТОДОВ

Ирина Евгеньевна Самойленко1, Станислав Николаевич Шпынов1,2,

Валерий Викторович Якименко1, Николай Викторович Рудаков1,2 (Юмский НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора, директор — д.м.н., проф. Н.В. Рудаков, лаборатория зоонозных инфекций, зав. — к.м.н. Г.В. Березкина; 2Омская государственная медицинская академия,

ректор — д.м.н., проф. А.И. Новиков)

Резюме. Три генотипа недавно описанного нового вида Rickettsia raoultii выявлены в России в нескольких видах клещей рода Dermacentor. Проведено изучение экологической специфичности четырех видов клещей рода Dermacentor: D.nuttallii, D.marginatus, D.reticulatus, D.silvarum в качестве вектора R. raoultii с использованием экспериментальных методов. Наши данные показывают, что все четыре изучаемые виды клещей Dermacentor являются эффективными векторами R. raoultii.

Ключевые слова: R. raoultii, векторы, экологическая специфичность.

THE STUDY OF ADAPTATION OF RICKETTSIA RAOULTII TO MAJOR VECTORS — TICKS OF THE GENUS DERMACENTOR USING EXPERIMENTAL METHODS

I.E. Samoylenko1, S.N. Shpynov1,2, V.V. Yakimenko1, N.V. Rudakov1,2 (1Omsk Research Institute of Natural Foci Infections, Russia; 2Omsk State Medical Academy, Russia)

Summary. Three genotypes of the recently described species Rickettsia raoultii have been identified in several Dermacentor species in Russia. The ecological specificity of four Dermacentor species: D. nuttallii, D. marginatus, D.reticulatus, D.silvarum as vectors R. raoultii was studied with use of experimental methods. Our data shows that all four studied species of Dermacentor ticks are efficient vectors of R. raoultii.

Key words: R. raoultii, vectors, the ecological specificity.

В 1999 г. в клещах, собранных на территории России, с использованием амплификации и секвенирова-ния rrs (16S rRNA), gltA и ompA генов были идентифицированы три новых генотипа риккетсий: RpA4, DnS14 и DnS28 [9]. Rickettsia sp. генотипы DnS14 и DnS28 были выявлены в клещах Dermacentor nuttalli, собранных в Сибири, в то время как генотип RpA4 был обнаружен в клещах Rhipicephalus pumilio, из Астраханской области. Эти риккетсиальные агенты формируют достоверный кластер внутри группы Rickettsia massiliae [10]. Данная группа имеет определенные генотипические и фенотипические характеристики [4,8,9] и включает R.massiliae, R.rhipicephali, R.aeschlimannii и R. montanensis, которые отличаются от остальных представителей рода Rickettsia своей устойчивостью к ри-фампицину, обусловленной мутацией в гене rpoB [4,8]. В связи с филогенетической гомогенностью Rickettsia sp. генотипов RpA4, DnS14 и DnS28 было высказано предположение, что эти три генотипа принадлежат к

новому виду [10]. В 2008 г. эти генотипы описаны как принадлежащие к новому виду риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки Rickettsia raoultii sp. nov. (вид назван в честь руководителя лаборатории риккет-сиозов Средиземноморского университета профессора Didier Raoult [6].

Вероятно, географическое распространение R.raoultii соответствует распространению клещей рода Dermacentor [7], ареал этого вида риккетсий занимает обширные территории от азиатской части России [13] до Северной Африки. Патогенность для человека окончательно не установлена, но часть случаев синдрома TIBOLA связывают с R.raoultii [5, 7].

Экологические особенности риккетсий обусловлены их облигатным внутриклеточным паразитизмом с широким кругом хозяев — кровососущих членистоногих и их теплокровных прокормителей. Высокая адаптация к организму членистоногих большинства видов риккет-сий, в том числе патогенных для позвоночных живот-

Frequency of isolation and drug resistance of fungi Candida genus from the patiens with HIV-infection in Irkutsk

Текст научной работы на тему «Частота выделения и лекарственная резистентность грибов рода Candida от больных ВИЧ-инфекцией в Иркутске»