CC BY
19
Medical Immunology (Russia)/ Медицинская иммунология СООО^&еНЫЯ Meditsinskaya Immunologiya
2018, Т. 20, № 2, стр. 263-270 Г^ . 2018, Vol. 20, No 2, pp. 263-270
© 2018, СПбРО РААКИ ShOVt COmmUniCtttlOnS © 2018, SPb RAACI
ЧАСТОТА СДВИГОВ ОТ НОРМЫ В СУБПОПУЛЯЦИОННОМ СОСТАВЕ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ С ЦЕНТРАЛЬНОЙ ЯЗВОЙ РОГОВИЦЫ
Куликова И.Г., Балацкая Н.В., Ковалева Л.А., Макаров П.В.
ФГБУ«Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Резюме. В статье представлена подробная характеристика сдвигов в субпопуляционном составе лимфоцитов крови, ассоциированных с развитием язвенного поражения роговицы, а также при проведении сквозной кератопластики.
Выявлены общие изменения, характерные для пациентов с ЯР и группы СКП, отражающие воспалительную активность: достоверное повышение количества лимфоцитов (СD45+), относительного и абсолютного содержания популяции Т-клеток ^D3+), субпопуляции СD3+СD4+, а также В-лимфоцитов ^D19+) по сравнению с группой контроля.
Отличительной особенностью группы с СКП явился статистически значимый рост содержания натуральных киллеров СD16+СD56+.
При анализе средних значений иммунорегуляторного индекса больных с ЯР не обнаружено статистически значимой разницы между исследуемыми клиническими группами. Однако индивидуальное сравнение по характеру и частоте сдвигов CD4+/CD8+ среди пациентов с «высоким» индексом качественно выделило III группу (ЯР тяжелого течения): тяжелый дисбаланс основных иммунорегулятор-ных Т-субпопуляций в ней выявлялся в 2,4 раза достоверно чаще, чем в группе пациентов с ЯР легкой степени.
Полученные данные представляются важными для понимания патогенеза ЯР центральной локализации (характера и степени тяжести деструктивных повреждений) и должны приниматься во внимание при прогнозировании, разработке дифференцированного подхода к лечению заболевания.
Ключевые слова: лимфоциты, фенотип, кровь, язвенное поражение роговицы
FREQUENCY OF DEVIATIONS FROM NORMAL VALUES IN THE BLOOD SUBPOPULATIONS' PROFILE IN THE PATIENTS WITH CENTRAL CORNEAL ULCERS
Kulikova I.G., Balatskaya N.V., Kovaleva L.A., Makarov P.V.
Moscow Helmholtz Research Institute of Eye Diseases, Moscow, Russian Federation
Abstract. This article presents a detailed description of shifts in subsets of blood lymphocyte subpopulations associated with development of the corneal ulcerative lesions as well as during penetrating keratoplasty.
Адрес для переписки: Address for correspondence:
Куликова Ирина Геннадьевна Kulikova Irina G.
ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт Moscow Helmholtz Research Institute of Eye Diseases
глазных болезней имени Гельмгольца» Министерства 105062, Russian Federation, Moscow, Sadovaya-
здравоохранения РФ Chernogryazskaya str., 14/19.
105062, Россия, Москва, ул. Садовая-Черногрязская, 14/19. Phone: 7(926) 386-40-29.
Тел.: 8(926) 386-40-29. E-mail: [email protected]
E-mail: [email protected]
Образец цитирования: For citation:
И.Г. Куликова, Н.В. Балацкая, Л.А. Ковалева, I.G. Kulikova, N.V. Balatskaya, L.A. Kovaleva, P.V. Makarov
П.В. Макаров «Частота сдвигов от нормы "Frequency of deviations from normal values in the blood
в субпопуляционном составе крови у пациентов subpopulations'profile in the patients with central corneal
с центральной язвой роговицы» // Медицинская ulcers", Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya
иммунология, 2018. Т. 20, № 2. С. 263-270. Immunologiya, 2018, Vol. 20, no. 2, pp. 263-270.
doi: 10.15789/1563-0625-2018-2-263-270 doi: 10.15789/1563-0625-2018-2-263-270
© Куликова И.Г. и соавт., 2018 DOI: 10.15789/1563-0625-2018-2-263-270
We have revealed some general changes typical for patients with corneal ulcer and patients with keratoplasty, reflecting inflammatory activity, i.e., a significant increase in the numbers of lymphocytes (CD45+), relative and absolute contents of the T-cell population (CD3+), CD3+ CD4+ subpopulation, and B-lymphocytes (CD19+), as compared with the control group. A statistically significant increase in natural killer cells (CD16+CD56+) proved to be a distinctive feature of the group with keratoplasty.
When analyzing mean values of CD4+/CD8+ cells from the patients with corneal ulcer, there was no statistically significant difference between the clinical groups studied. However, individual comparison of nature and frequency of CD4+/CD8+ shifts among the patients with «high» index allowed qualitative separation of the third group (severe corneal ulcer): a severe imbalance of main T-cell subpopulations was detected 2.4 times significantly more often than in the group of patients with mild forms of corneal ulcers.
The obtained data are important for understanding pathogenesis of centrally localized corneal ulcer, and should be taken into account when predicting and developing a differentiated approach to the treatment of the disease.
Keywords: lymphocytes, phenotype,blood, corneal ulcer (helcoma)
Введение
Язвы роговицы (ЯР) — тяжелое заболевание глаза, характеризующееся поражением глубоких слоев роговой оболочки (глубже боуменовой мембраны в область стромы, нередко с захватом десцеметовой оболочки, слоя эндотелиальных клеток) вследствие обширного экссудативно-де-структивного воспаления, наличием язвенных образований, лейкоцитарного инфильтрата [4, 8]. ЯР являются одной из причин значительного снижения остроты зрения и слепоты, составляющей в развитых странах от 6,3 до 30%. Известно, что они могут приводить к эндофтальмиту, перфорации роговицы и потере глаза [7, 16]. Деструктивный процесс при ЯР может затрагивать любую часть роговой оболочки, но чаще локализуется в центральной (оптической) зоне (по архивным данным отдела инфекционных и аллергических заболеваний глаз — более чем в 70% случаев), где воспаление протекает тяжело, трудно поддается лечению, а рубцевание в этой области всегда приводит к образованию интенсивного помутнения — бельма, значительно снижающего зрительные функции. Тяжелые ЯР требуют кардинального вмешательства, как правило, оперативного — выполнения кератопластики ([КП] — трансплантации роговицы) [8]. Среди факторов, способствующих развитию заболевания, выделяют два основных — инфекционный фактор и снижение местной (в том числе ослабление поверхностной защиты глаза; нарушение целостности эпителия роговицы) резистетности [4]. Несмотря на успехи и достижения современной медицины, прогноз и лечение центральных ЯР на сегодняшний день представляет большие трудности.
В первую очередь это определяется неполно исследованным патогенезом заболевания, в частности недостаточными и противоречивыми сведениями о вкладе иммунологических факторов (как локальных, так и системных) в развитие язвенных поражений центральной области роговицы.
Считают, что истинно иммунную природу (нарушения аутоиммунной регуляции) имеют краевые кератиты и ЯР (например, язва Мурена) [11].
Вместе с этим, по нашим предварительным данным, системный клеточный ответ на антигены тканей глаза (роговицы и/или хрусталика, увеа, сетчатки) выявляется почти в трети случаев при центральной инфекционной ЯР и коррелирует с ее тяжестью [3].
Эти наблюдения предполагают определенный вклад аутоиммунного компонента в воспалительную деструкцию при центральных ЯР, позволяют рассматривать органоспецифическую сенсибилизацию как серьезный фактор риска развития прогрессирования и осложнения течения заболевания. Известно, что активации и развитию иммунного ответа на антигены собственных тканей могут способствовать разнообразные нарушения в функционировании иммунной системы организма, в том числе в субпопуляционном составе лимфоцитов [9].
Однако данный вопрос при развитии ЯР центральной локализации, разных клинических вариантах течения заболевания остается практически неизученным.
Цель: анализ содержания основных субпопуляций лимфоцитов в крови больных с центральной ЯР в зависимости от степени тяжести течения заболевания.
Материалы и методы
Обследовано 192 пациента в возрасте от 18 до 85 лет (76 женщин и 116 мужчин) с ЯР центральной локализации. Основанием для этиологической диагностики ЯР служили данные анамнеза, клинические признаки, выявленные при биомикроскопии, и лабораторные методы исследования. На основании разработанных в отделе инфекционных и аллергических заболеваний глаз ФГБУ «МНИИ глазных болезней им. Гель-мгольца» Минздрава РФ [2] критериев оценки степени тяжести течения ЯР, были сформированы 4 группы больных: 1-я — ЯР легкой степени тяжести (с инфильтратами до 3 мм в диаметре,
площадью изъявления до 1/4 площади роговицы и глубиной изъявления не более 1/3 толщины стромы роговицы) — 21 пациент, II-я группа — средняя степень тяжести заболевания (с инфильтратами от 3 до 5 мм в диаметре, изъявлением от 1/4 до 1/2 площади роговицы и глубиной не более 2/3 толщины стромы роговицы) — 81 человек; у 55 пациентов, составивших III-ю группу, ЯР относились к тяжелой степени (с инфильтратами более 5 мм в диаметре, изъявлением более 1/2 площади роговицы и глубиной до десцемето-вой оболочки). В IV-ю группу вошли 35 больных с тяжелой ЯР и оперативным вмешательством — пересадкой роговицы (сквозная кератопластика [СКП]), из них 18 пациентам выполнялась повторная СКП. Контрольную группу составили 33 практически здоровых донора соответствующего возраста и пола.
Материалом исследования служили пробы цельной крови, взятой из локтевой вены натощак в утренние часы (с 9.00-10.00 ч) при помощи вакуумных систем в пробирки Va^ette® c антикоагулянтом K3EDTA. Иммунофенотипи-рование проведено методом лазерной цитофлуо-риметрии на проточном цитометре BD FACS Canto II (BectonDickinson, США) с использованием системы моноклональных антител Multitest 6-Color TBNK Reagent в пробирках BD Tra Count (BectonDickinson, США). Для лизиса эритроцитов и фиксации лейкоцитов использовался ли-зирующий раствор BD FACS TM Lysing Solution (BectonDickinson, США). Относительное и абсолютное содержание популяций и субпопуляций лимфоцитов определялось в программе Canto (Becton Dickinson, США), с выделением анализируемого региона по общей популяции, экспрессирующей CD45+ антиген и по гранулярности клеток (CD45+PerCP-Cy5,5*/SSC); использовались меченные флуорохромами ан-тителакCD3+(FITC),CD4+(PE-Cy7*),CD8+(APC-CY7*), CD16+/56+(PE), CD19+(APC*), позволяющие дифференцировать клетки: Т-лимфоциты (CD3+), Т-хелперы (CD3+CD4+CD8-), T-цито-токсические (CD3+CD4"CD8+), T-дубль-пози-тивные (CD3+CD4+CD8+), NK-клетки - натуральные киллеры (CD16+CD56+), В-лимфоциты (CD19+), вычислить соотношение субпопуляций CD3+CD4+/CD3+CD8+, отражающее баланс T-хелперов и цитотоксических Т-клеток (CD4+/ CD8+).
Статистическая обработка данных и вариационный анализ выполнены в программах Biostatd, Exel (М — среднее значение, а — среднее квадра-тическое отклонение; t — критерий Стьюдента); уровень статистической значимости: p < 0,05.
Результаты и обсуждение
Данные иммунофенотипирования основных субпопуляций лимфоцитов крови больных с цен-
тральной язвой роговицы в сравнении с контролем представлены в таблице 1.
При анализе результатов исследования во всех клинических группах пациентов с ЯР выявлено статистически значимое повышение абсолютного количества лимфоцитов (CD45+) по сравнению с группой здоровых, а также достоверный рост общей популяции Т-клеток (относительного и абсолютного содержания).
В 1-й группе (ЯР легкой степени течения) среди популяции Т-лимфоцитов было обнаружено статистически значимое увеличение содержания Т-хелперов (CD3+CD4+), как абсолютного, так и процентного, послужившее причиной значительного повышения СD4+/CD8+ (р < 0,05). Кроме того, в группе с ЯР легкой степени отмечен достоверный рост абсолютного количества В-лимфоцитов (CD19+) по сравнению с таковым в группе здоровых добровольцев без офтальмо-патологии. Характерным для 1-й группы стало существенное статистически значимое снижение абсолютного и относительного содержания натуральных киллеров (CD16+CD56+).
При исследовании субпопуляционного состава лимфоцитов крови пациентов с ЯР средней степени тяжести (II группа) выявлено достоверное значительное повышение абсолютного количества общей популяции Т-клеток и их субпопуляции CD3+CD4+ лимфоцитов — хел-перов, а также В-лимфоцитов (р < 0,05). В этой же группе сохранялась тенденция к снижению абсолютного и относительного содержания NK (CD16+CD56+).
Отличительной особенностью II группы (ЯР средней тяжести течения) явилось статистически значимое повышение абсолютного количества Т-цитотоксических лимфоцитов (CD3+CD8+) по сравнению с группой здоровых доноров без офтальмопатологии.
Деструктивный процесс глубоких слоев роговой оболочки и развитие осложнений при ЯР тяжелого течения (Ш-я группа) сопровождались дальнейшими значительными сдвигами в субпопуляционном составе лимфоцитов крови с тенденцией к повышению индекса CD4+/ CD8+: направление динамики относительного и абсолютного содержания иммунокомпетент-ных клеток в целом было аналогичным таковому в I и II группах. Характерным для Ш-й группы (ЯР тяжелого течения) больных стало статистически значимое повышение абсолютного количества Т-дубль-позитивных лимфоцитов (CD3+CD4+СD8+).
Наиболее значительные изменения были выявлены в IV группе больных с СКП: в первую очередь, это существенный рост абсолютного количества лимфоцитов (CD45+), Т-лимфоцитов (CD3+) и субпопуляции Т-хелперов (CD3+CD4+), прогрессивное усугубление дисбаланса в системе Т-клеток — значительное повышение
ТАБЛИЦА 1. ФЕНОТИПИЧЕСКИЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ЛИЦ И БОЛЬНЫХ С ЦЕНТРАЛЬНОЙ ЯЗВОЙ РОГОВИЦЫ (М±а)
ТABLE 1. PHENOTYPIC CONTENTS OF BLOOD LYMPHOCYTES IN HEALTHY PEOPLE AND PATIENTS WITH CENTRAL CORNEAL ULCERS(М±ст)
Показатель Factors Контрольная группа Control group (n = 33) Группы Groups
I II III IV
Степень тяжести ЯР Severity of central corneal ulcers
легкая mild (n = 21) средняя medium (n = 81) тяжелая severe (n = 55) СКП keratoplasty (n = 35)
Лимфоциты CD45+ Lymphocytes CD45+ X 109/л X 109/l 2,06±0,11 2,4±0,16 2,63±0,1* 2,49±0,13* 2,79±0,24*
Т-лимфоциты общая популяция CD3+ Т lymphocytes (total population) CD3+ % 73,1±0,87 76,5±1,28* 75,11±0,78 75,24±0,84 70,39±1,29
X 109/л X 109/l 1,51±0,08 1,85±0,14* 1,97±0,07* 1,88±0,1* 1,99±0,04*
Т-хелперы CD3+CD4+ Т helphers CD3+CD4+ % 45,7±1,19 51,4±1,57* 48,7±0,78 50,3±0,07* 47,09±1,28
X 109/л X 109/l 0,97±0,06 1,27±0,11* 1,28±0,05* 1,24±0,07* 1,3±0,11*
Т-цитотоксические CD3+CD8+ Т cytotoxic CD3+CD8+ % 25,6±1,04 22,8±1,21 24,5±0,82 23,4±0,84 21,69±1,14
X 109/л X 109/l 0,52±0,03 0,57±0,044 0,65±0,03* 0,58±0,04 0,67±0,08
Т-«дубль-позитив-ные» лимфоциты «double-positive» lymphocytes CD3+CD4+CD8+ % 0,54±0,31 1,02±0,22 0,7±0,06 0,8±0,07 0,92±0,19
X 109/л X 109/l 0,009±0,007 0,025±0,006 0,018±0,002 0,02±0,002* 0,027±0,005*
В-лимфоциты CD19+ В lymphocytes CD19+ % 12,8±0,63 14,4±0,802 14,9±0,62 15,06±0,69 * 13,9±1,02
X 109/л X 109/l 0,24±0,02 0,34±0,03* 0,41±0,03* 0,39±0,03* 0,39±0,05*
Натуральные киллеры CD16+CD56+ Natural killers CD16+CD56+ % 14±0,87 8,6±1,01*# 9,5±0,51*# 9,12±0,69*# 14,7±1,08
X 109/л X 109/l 0,29±0,03 0,19±0,02*# 0,23±0,01*# 0,21±0,01*# 0,37±0,03
CD4+/CD8+ рассч.ед. conventional unit 1,95±0,12 2,47±0,18* 2,45±0,22 2,8±0,32 2,6±0,19*
Примечание. п -количество обследуемых в группе; * - достоверность различия параметров у больных исследуемых групп по сравнению с группой контроля (р < 0,05); # - достоверность различия параметров у больных исследуемых групп по сравнению с группой после пересадки роговицы (р < 0,05).
Note. n, number of experimental subjects in the group; *, the differences in study group in comparison with control are significant by p < 0.05; # - the differences in study group in comparison with the group after corneal transplantation are significant by p < 0.05.
CD4+/CD8+. Содержание двойных позитивных Т-клеток (CD3+CD4+СD8+) статистически значимо в три раза превышало таковое в контрольной группе здоровых.
Отличительной особенностью IV группы было достоверное значительное повышение абсолютного и процентного количества NK-клеток в крови пациентов, перенесших СКП, по сравнению с остальными клиническими группами.
В ходе исследования был проведен сравнительный анализ частоты случаев выявления характерных сдвигов в субпопуляционном составе лимфоцитов и повышения СD4+/CD8+ у пациентов исследуемых клинических групп (рис. 1).
В 27% случаев при ЯР легкой степени отмечено повышение содержания лимфоцитов (CD45+), в 23% — рост основной популяции Т-клеток (CD3+) и Т-хелперов (CD3+CD4+), у трети обследованных больных этой группы высокие значения CD4+/CD8+ и повышение количества Т-дубль-позитивных лимфоцитов CD3+CD4+СD8+ (31% случаев) (рис. 1А)
ЯР средней степени течения (II группа) характеризовались дальнейшим увеличением частоты случаев повышения содержания лимфоцитов (CD45+) (35%), цитотоксических Т-клеток (CD3+ СD8+) (у 35% больных П-й группы против 15% Ьй; р < 0,05), а также В-лимфоцитов (с 8% случаев в !-й группе до 22% во П-й). В этой же группе более чем в 2 раза возрастало количество пациентов (с 5% в группе с ЯР легкой степени течения до 11% во II группе) со значительным снижением содержания в крови NK-лимфоцитов (CD16+CD56+). Повышенные значения CD4+/ CD8+ встречались у 30% пациентов (рис. 1Б).
Динамика случаев сдвигов показателей клеточного иммунного статуса, описанная во П-й группе больных, в целом сохранялась при ЯР тяжелой степени, за исключением Т-дубль-позитивных лимфоцитов CD3+CD4+СD8+, повышенное содержание этой субпопуляции отмечено в крови 37% пациентов с тяжелыми язвенными поражениями роговицы (рис. 1В).
В IV группе больных (СКП) повышение CD4+/ CD8+ выявлено уже практически в половине случаев. Следует отметить, что только в группе пациентов с СКП (у 13 % больных) встретились случаи повышения количества NK-лимфоцитов (CD16+CD56+), не обнаруженные более ни в одной из клинических групп (рис. 1Г).
Таким образом, как при общем, так и при дифференцированном анализе данных были выявлены нарушения в субпопуляционном составе лимфоцитов периферической крови пациентов с ЯР различной степени тяжести течения заболевания, а также в группе с СКП; при этом изменение клинической картины (от ЯР легкой степени к усилению деструктивного процесса с развитием осложнений) ассоциировалось с нарастанием
частоты случаев характерных иммунологических сдвигов (рис. 1).
В целом во всех клинических группах пациентов, страдавших ЯР, по сравнению с группой здоровых, имело место статистически значимое повышение общего содержания лимфоцитов, абсолютного количества общей популяции Т-лимфоцитов (CD3+), отражающее воспалительную активность, наиболее выраженную в группах с ЯР средней степени тяжести и СКП, что согласуется с данными литературы, отмечающими активацию лимфоцитарного звена при инфекционной нагрузке, а также в условиях трансплантации.
Увеличение абсолютного количества популяции Т-хелперов, послужившего причиной достоверного повышения СD4+/CD8+ у трети больных с ЯР различной степени тяжести и практически в половине случаев в группе пациентов с СКП (по сравнению с группой здоровых доноров) свидетельствует о развитии дисбаланса субпопуляций Т-клеток у этой части пациентов.
Известно, что доминирование популяции CD3+CD4+ способствует развитию иммунного ответа, в том числе и на аутоантигены. Прямая взаимосвязь повышения СD4+/CD8+ и активации системного клеточного ответа на антигены тканей глаза была показана в работах при воспалительной офтальмопатологии [6].
Сравнительный анализ средних значений CD4+/CD8+ пациентов с ЯР не выявил статистически значимой разницы между исследуемыми клиническими группами. Однако индивидуальный сравнительный анализ по характеру и частоте индекса среди пациентов с высоким CD4+/ CD8+ между клиническими группами качественно выделил Ш-ю группу (ЯР тяжелого течения) и показал в ней достоверное, в 2,4 раза чаще выявляемое значительное повышение CD4+/CD8+ (от 4,0 до 8,5), чем в группе пациентов с ЯР легкой степени (табл. 2).
Известно, что наряду с основными, достаточно хорошо изученными субпопуляциями (CD3+CD4+CD8-и CD3+CD4-CD8+) в крови человека, могут обнаруживаться дубль-позитивные Т-клетки, характеризуемые как лимфоциты с фенотипом CD3+CD4+СD8+. К настоящему времени установлено, что дубль-позитивные Т-лимфоциты являются высокодифференциро-ванными клетками памяти [15].
Накоплено достаточное количество данных, рассматривающих CD3+CD4+СD8+ как возможный показатель развития аутоиммунных процессов, но единого мнения по этому вопросу не достигнуто [9].
Отмеченное нами повышение содержания дубль-позитивных Т-клеток у всех больных и особенно их абсолютного количества при тяжелом течении (Ш-я группа) ЯР и группе с СКП, согласуется с данными Раге! У и соавт. (2007),
А (A)
CD4DCD8+ CD 16456+ CD16+ CD3[369+ CD353+ CD36r CD3+ CD4i5*
Ле гкая сте пень I case
Б(В)
CD(+(CD8+
CD 19+ CCC49+ CDD+^^fä+ CD44+ CD3+ CD45+
Средняя ст«ЕЯпень Mediurin case
Ei (CT)
Тяжелая степен ь Severe case
CD4+/CD8+ CD 14(6+ CD 18+
CDD-19+ CD34+ DD3+ CD45+
Г (D)
CD4//CD8+ CD16+56+ CID 194)+ CD3453* C4 ИЭЗЗ -194+ CD3+4+ CD 43:4+ C[C(654
С кератопластикой With kecatoplasty
■ ■
20% 40% 60% 80% 100%
LI Норма(погта1) ■ Понижение (fall) СИ Повышение (increase)
1эисууиок 1. Частота сдвигоо от нормы из субпопуляционном составе крови у пациентов с центральной язвой роговицы
Примнчави е. По оси абсцис с - чнстота сдвигов (отнооительные зиачения); по оси ординат - абсолютное колечнство субпопуляций.
Figure 1. Frequency of deviations from normal values in tha blood subpopulations' profile in the pa(ents with central corneal ulcers N ote . Abscissa, freq u ency of ab norma l s h ifts (rel ative co ntent); Ordinate, albsolu te nu mber of a subpopulation.
Armengol M.P. и соавт. (2008), И.В. Кудрявцева и активную миграцию CD16+CD56+ лимфоци-
и соавт. (2014), показавшими увеличение содержания этой минорной субпопуляции у пациентов с аутопммунными заболевпниями [5, 100, 17].
Помимо Т-циаотоксическит лимфоцитов aCD3+CDD+), субгюп^яцию CD3+CD9+CD8-клетсо {Э£1с;с;]м:;^^ив£1ют в аспебтб защиеыз елг инфекций. Есть сваеения аб ум-ел:и'л[^:1е1а^ CXIC^t+i^yD:;^^ лимфоцитов в пе]рукХ)(5р)ич(5с1;;сзй крови j^jc^ инфек-ционпом мононуклеозе, ВИЧ-инфекции и др. Считают, что дубль-позисивныи Т-лимПоцитыс мот"- имевь бовьшое значение г ртакцияк иуам-т-вного лм сп;^ни[':иелР;^ is оив ет на различ Р1Ы.1 п ибф ев-ционныы1е агенты [15]. Увеличение частоты случаев повышения как CD3+CD8+ (достоверное во II-й группе), так, и CD3+CD4TMD8+ сушопултщш в крови пациеиаов с ееттрепьноИ ЯР иожеа слу-жиат доказательстаом тммунного ответга на присутствие инфекционных возбудителе:, которое было податгрждено перлд лечепием у- всех бальных иптциальными лабартторныши метбдамы (.е)^кт^13^1Г(^лоп-,чес1Уи]у[и и спролотичис]кими при опредетении этиолоеии язтенбого процесса).
Относительное и абсолютное количеытво популяции NK в ирови больных с. ЯР I-III клиничтской гругш 6млт з-ггсчпртг^лЕьию нтже, о В-лимфоцивов — выше норм1с1.. В целом вакая ыинамика хара^-ерна при инфекцвтннмв зат болеваниях, и наши результаты согласуются с дптными в>а,(5от, в частн-стт Алексеевой Л.А. и соави, прoиемoвcтритoвасцшми нтко6лпнии CDI9+ (К-лимфодитов) в системном крбвовоке
тов (NK-клеток) s очаг воспаления при вирусных if бактериальных менингитах, Liu F. и соавт., обнаружившими снижение попутяции циркулирующих натуральных киллеров и ослаблении их функциональней активноста при вирусноа вепа-тите IX [1, 02].
Подобную динамику для NK-клетох (миграцию из системного кровотоки и втоуачных лимфоидных органов на периферию в очаг воспаления) нусмххи Liu СНи ставт. при эиеперимет-тальноа тревже ]^ог^13иц:е>1 у мышей [13].
Отноеитетьное содержание натуральных кил-лтрол в крови пациентов группы с СКП было достоверно выше, чем в основных гпуппах с ЯР, помимо этогм, обсхлютнос количества эттй суВ-птпуляции правышалт дактвое в групое зторо-выл доноров. Следует отметить, что IV-я группа от-л^ч[ал^сь о>т оч^т£,л^1н]Е>-:?- хлиническсх групп: ее -¡оставили плциенты с нанбонее сяжмлыми поражениями ртговицы, котлрым было выптлнент кератопластика, при этом практически половине из них — -8 блуьнпем — поведены п твтмрные трансплтнттции (2 и балес раит).
СубаoпаJнщия CDb6TCD5C+ лимфоцитот (NK-клеток) в последнее время активно изучается в трансплантол огии Лв частности в плане овлоржения ттаисплннмттл). Молуненные нтми результаты хля труппы см СПЬЕЛет нлходяг косвентое подлторждение в работхх Lopez-Botet M. о соавт., посвященных ыз^пнию роли натуральных килт л^рэов в аыживхнии почечнаох ораноплмнтатов,
ТАБЛИЦА 2. ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ХАРАКТЕРА И ЧАСТОТЫ СДВИГОВ CD4+/CD8+ СРЕДИ ПАЦИЕНТОВ С ВЫСОКИМИ ЗНАЧЕНИЯМИ CD4+/CD8+ ИССЛЕДУЕМЫХ КЛИНИЧЕСКИХ ГРУПП С ЯР (%)
ТABLE 2. INDIVIDUAL ANALYSIS OF CHARACTERISTICS AND FREQUENCY OF SHIFTS CD4+/CD8+AMONG PATIENTS WITH HIGH CD4+/CD8+ VALUES IN DISTINCT CLINICAL GROUPS WITH CORNEAL ULCERS (%)
Диапазон повышения CD4+/CD8+ Range of CD4+/CD8+ increase Группы Groups
I II III IV
Степень тяжести ЯР Severity of central corneal ulcers
легкая mild (n = 8) средняя medium (n = 28) тяжелая severe (n = 20) СКП keratoplasty (n = 24)
незначительное t minor [2,5-3,0] 37,5 35,7 35 42
умеренное tt moderate [3,0-3,9] 50 46,3 35 37
значительное ttt major [4,0-8,5] 12,5 17,8 30* 21
Примечание. n - количество пациентов с повышенными значениями CD4+/CD8+ в группе; * - достоверность различия частоты повышения CD4+/CD8+ у больных I-й группы по сравнению с III-й (p < 0,05).
Note. n, number of patients with high values of CD4+/CD8+ in the group; *, the differences in frequency of CD4+/CD8+ rise between the first third group are significant by p < 0.05.
а также Schwartzkopff J. и соавт., исследовавших субпопуляцию CD16+СD56+ при пересадке роговицы в условиях эксперимента [14,18].
Таким образом, в результате проведенных исследований представлена характеристика сдвигов в субпопуляционном составе лимфоцитов крови, ассоциированных с развитием язвенных поражений роговицы при легком, среднем и тяжелом
течении заболевания, а также при проведении сквозной кератопластики. Полученные данные представляются важными для понимания патогенеза ЯР центральной локализации (характера и степени тяжести деструктивных повреждений) и должны приниматься во внимание при прогнозировании, разработке дифференцированного подхода к лечению заболевания.
Список литературы / References
1. Алексеева Л. А., Железникова Г.Ф., Жирков А.А., Скрипченко Н.В., Вильниц А.А., Монахова Н.Е., Бессонова Т.В. Субпопуляции лимфоцитов и цитокины в крови и цереброспинальной жидкости при вирусных и бактериальных менингитах // Инфекция и иммунитет, 2016. Т. 6, № 1. С. 33-44. [Alekseeva L.A., Zheleznikova G.F., Zhirkov A.A., Skripchenko N.V., Vilnits A.A., Monakhova N.E., Bessonova T.V. Limphocyte subsets and cytokines in blood and cerebrospinal fluid in children with viral fnd bakterial meningitis. Infektsiya i immunitet = Russian Journal of Infection and Immunity, 2016, Vol. 6, no. 1, pp. 33-44. (In Russ.)] doi: 10.15789/22207619-2016-1-33-44.
2. Арестова Н.Н., Бржеский В.В., Вахова Е.С., Яни Е.В. Клиника, диагностика и консервативная терапия бактериальных язв роговицы // Федеральные клинические рекомендации. М., 2014. С. 16. [Arestova N.N., Brzhesky V.V., Vakhova E.S., Yani E.V. Clinic, diagnosis and conservative therapy of bacterial corneal ulcers. Federal clinical guidelines]. Moscow, 2014, p. 16.
3. Ковалева Л.А., Слепова О.С., Куликова И.Г., Миронкова Е.А. Роль аутоиммунного компонента при центральных язвах роговицы // Российский офтальмологический журнал, 2013. № 2. С. 29-31. [Kovaleva L.A., Slepova O.S., Kulikova I.G., Mironkova E.A. The role of the autoimmune component in central corneal ulcers. Rossiyskiy oftalmologicheskiy zhurnal = Russian Journal of Ophthalmology, 2013, no. 2, pp. 29-31. (In Russ.)]
4. Копаева В.Г. Глазные болезни. М.: Медицина, 2002. С. 200-244. [Kopaeva V.G. Eye diseases]. Moscow: Medicine, 2002, pp. 200-244.
5. Кудрявцев И.В., Захарова Г.А., Гапонова Т.В. Исследование основных субпопуляций Т-хелперов и цитотоксических Т-клеток при ревматоидном артрите // Российский иммунологический журнал, 2014. Т. 8 (17), № 2 (1). С. 89-92. [Kudryavtsev I.V., Zakharova G.A., Gaponova T.V. Investigation of the main subpopulations of T-helpers and cytotoxic T cells in rheumatoid arthritis. Rossiyskiy immunologicheskiy zhurnal = Russian Journal of Immunology, 2014, Vol. 8 (17), no. 2 (1), pp. 89-92. (In Russ.)]
6. Куликова И.Г., Слепова О.С., Макаров П.В., Ковалева Л.А., Кугушева А.Э. Роль (суб)популяционного дисбаланса лимфоцитов крови в развитии системной органоспецифической сенсибилизации при воспалительной и посттравматической патологии глаз // Российский офтальмологический журнал, 2013. Т. 6, № 4. С. 71-75. [Kulikova I.G., Slepova O.S., Mironkova E.A., Makarov P.V., Kugusheva A.E., Kovaleva L.A. The role of (sub) populational imbalance of blood lymphocytes in development of systemic organ-specific sensitization in inflammatory and posttraumatic eye diseases. Rossiyskiy oftalmologicheskiy zhurnal = Russian Journal of Ophthalmology, 2013, Vol. 6, no. 4, pp. 71-75. (In Russ.)]
7. Майчук Ю.Ф. Терапевтические алгоритмы при инфекционных язвах роговицы // Вестник офтальмологии, 2000. № 3. С. 35-37. [Maychuk Yu.F. Therapeutic algorithms for corneal infectious ulcers. Vestnik oftalmologii = Bulletin of Ophthalmology, 2000, no. 3, pp. 35-37. (In Russ.)]
8. Ченцова Е.В., Вериго Е.Н., Хазамова А.И., Яни Е.В. Современные аспекты лечения язвенных поражений роговицы // Евразийский союз ученых, 2016. № 2-2 (23). С. 99-105. [Chentsova E.V., Verigo E.N., Khazamova A.I., Yani E.V. Modern aspects of the treatment of corneal ulcerations. Evraziyskiy soyuz uchenykh = Eurasian Union of Scientists, 2016, no. 2-2 (23), pp. 99-105. (In Russ.)]
9. Ярилин А.А. Иммунология. М.: ГЕОТАР-Медиа, 2010. С. 314-332, 588-624. [Yarilin A.A. Immunology]. Moscow: GEOTAR-Media, 2010, pp. 314-332, 588-624.
10. Armengol M.P., Sabater L., Fernandez M. Influx of recent thymic emigrants into autoimmune thyroid disease glands in humans. Clinical and Experimental Immunology, 2008, Vol. 153, pp. 338-350.
11. Kafkala C., Choi J., Zafirakis P., Baltatzis S., Livir-Rallatos C., Rojas B., Foster C.S. Mooren ulcer: an immunopathologic study. Cornea, 2006, Vol. 25, no. 6, pp. 667-673.
12. Liu F., Duan X., Wan Z., Zang H., You S., Yang R., Liu H., Li D., Li J., Zhang Y., Xin S. Lower number and decreased function of natural killer cells in hepatitis B virus related acute-on-chronic liver failure. Clin. Res. Hepatol. Gastroenterol., 2016, Vol. 40, no. 5, pp. 605-613.
13. Liu Q., Smith C.W., Zhang W., Burns A.R., Li Z. NK cells modulate the inflammatory response to corneal epithelial abrasion and thereby support wound healing. Аm. J. Pathol., 2012, Vol. 181, no. 2, pp. 452-462.
14. López-Botet M., Vilches C., Redondo-Pachón D., Muntasell A., Pupuleku A., Yélamos J., Pascual J., Crespo M. Dual role of natural killer cells on graft rejection and control of cytomegalovirus infection in renal transplantation. Front. Immunol., 2017, no. 8, p. 166.
15. Nascimbeni M., Shin E.C., Chiriboga L., Kleiner D.E., Rehermann B. Peripheral CD4(+)CD8(+) T cells are differentiated effector memory cells with antiviral functions. Blood, 2004, Vol. 104, no. 2, pp. 478-486.
16. Nurozler A.B., Salvarli S., Budak K. Results of therapeutic penetrating keratoplasty. Jpn. J. Ophthalmol., 2004, Vol. 48, no. 4, pp. 368-371.
17. Parel Y., Aurrand-Lions M., Scheja A. Presence of CD4+CD8+ double-positive T cells with very high interleukin-4 production potential in lesional skin of patients with systemic sclerosis. Arthritis. Rheum., 2007, Vol. 56, pp. 3459-3467.
18. Schwartzkopff J., Schlereth S.L., Berger M., Bredow L., Birnbaum F., B5hringer D., Reinhard T. NK cell depletion delays corneal allograft rejection in baby rats. MolVis, 2010, no. 16, pp. 1928-1935.
Авторы:
Куликова И.Г. — старший научный сотрудник, отдел иммунологии и вирусологии ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Балацкая Н.В. — к.б.н., ведущий научный сотрудник, отдел иммунологии и вирусологии ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Ковалева Л.А. — научный сотрудник, отдел инфекционных и аллергических заболеваний глаз ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия Макаров П.В. — д.м.н., ведущий научный сотрудник, отдел травматологии, реконструктивной, пластической хирургии и глазного протезирования ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Поступила 10.05.2017 Отправлена на доработку 19.06.2017 Принята к печати 12.10.2017
Authors:
Kulikova I.G., Senior Research Associate, Department of Immunology and Virology, Moscow Helmholtz Research Institute of Eye Diseases, Moscow, Russian Federation
Balatskaya N.V., PhD (Biology), Leading Research Associate, Department of Immunology and Virology, Moscow Helmholtz Research Institute of Eye Diseases, Moscow, Russian Federation
Kovaleva L.A., Research Associate, Department of Infectious and Allergic Eye Diseases, Moscow Helmholtz Research Institute of Eye Diseases, Moscow, Russian Federation
Makarov P.V., PhD, MD (Medicine), Leading Research Associate, Department of Traumatology, Moscow Helmholtz Research Institute of Eye Disease, Moscow, Russian Federation
Received 10.05.2017 Revision received 19.06.2017 Accepted 12.10.2017
