CC BY
0
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Читанава Т. В., Власик Р. А., Макарова Т. А., Казанская Н. С., Кудрявцева Е. С., Богданов К. В., Мерзликина О. В., Никулина Т. С., Сиордия Н. Т., Кулемина О. В., Заммоева Д. Б., Точеная Е. Н., Лазорко Н. С., Сбитякова Е. И., Шналиева Н. А., Ломаиа Е. Г.
ЧАСТОТА МУТАЦИЙ В ХРОНИЧЕСКОЙ ФАЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО МИЕЛ0ЛЕЙК03А У ПАЦИЕНТОВ С РЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ
К ИНГИБИТОРАМ ТИРОЗИНКИНАЗ
ФГБУ «НМИЦ им В.А. Алмазова» Минздрава России
Введение. Наиболее распространенной причиной резистентности больных хроническим миелолейкозом (ХМЛ) к терапии ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) являются мутации киназ-ного домена гена BCR-ABL. Согласно рекомендациям European Leukemia Net (ELN) 2020 определение мутационного статуса BCR-ABL является обязательным видом анализа для всех больных ХМЛ в дебюте фазы акселерации или бластного криза, а также у пациентов с недостаточным первичным ответом на терапию первой и последующих линий.
Цель работы. Определить частоту выявления мутаций ки-назного домена BCR-ABL на различных линиях терапии у резистентных пациентов в хронической фазе ХЖЛ.
Материалы и методы. В ретроспективное исследование включено 118 пациентов (мужчин п=52 (44%)) в ХФ ХМЛ с резистентностью к ингибиторам тирозинкиназ, наблюдающихся в период с 2009 по 2021 г. в ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России. Точечные мутации гена BCR-ABL в образцах мРНК анализировали с помощью полимеразной цепной реакции и последующего секвенирования по Сэнгеру. На момент диагностики заболевания, на момент начала НТК, на момент выполнения первого мутационного анализа медиана возраста составила 42 (12—81), 44 (13—81), 47 (19—85) лет соответственно. Медиана длительности ХМЛ от моментаустановления диагноза до НТК в первой линии, от постановки диагноза до выполнения мутационного анализа, от НТК в первой линии до мутационного анализа составила 2 (0—232), 51 (4—303) и 44 (1—168) мес. соответственно. Статистический анализ частот обнаружения мутаций на каждой линии, достижений ответа и общей выживаемости
выполнен с использованием метода X2 с помощью программного обеспечения SPSS 23.0.
Результаты и обсуждение. Мутационный анализ был выполнен у всех пациентов: после 1, 2, 3-й, последующих линий терапии у 36 (31%), 69 (58%), 11 (9%), 2 (2%) пациентов соответственно. Мутации выявлены у 58/118 (49%). Из них у 8/58 (14%) было выявлено более 2 мутаций. Клинически значимые мутации были выявлены у 38/58 (65%). Среди них мутация T315I у 23/58 (40%) резистентных пациентов. Выбор ИТК осуществляли на основании мутационного статуса. Пациенты с мутациями T315I получали терапию ИТК 3-го поколения. Наилучшими цитогенетиче-скими ответами (ЦГО), достигнутыми когда-либо на ИТК среди пациентов с мутациями, были: минимальный/малый ЦГО (мин/ малЦГО) 9/58 (15%), частичный ЦГО (ЧЦГО) 9/58 (15%), полный ЦГО (ПЦГО) 24/58 (42%), 16/58 (28%) не достигли ЦГО на ИТК. Схожие результаты были достигнуты у резистентных пациентов без мутаций: мин/малЦГО 6/60 (10%), ЧЦГО 11/60 (18%), ПЦГО 32/60 (54%), не достигли ЦГО на ИТК 11/60 (18%). Достижение ПЦГО когда-либо в обеих группах составило 24/58 (42%) в группе с мутациями, 32/60 (54%) в группе без мутаций (р>0,05). Общая выживаемость (ОВ) в группе с мутациями, в группе без мутаций составила 14/58 (24%) и 10/60 (16%) соответственно (р>0,05).
Заключение. На настоящий момент, согласно результатам нашего исследования, достижение ПЦГО, данные ОВ среди пациентов с мутациями и без них были схожими, соответственно своевременное выполнение мутационного анализа и выбор оптимального ИТК может иметь большое значение для долговременно -гоуспешного планирования терапии.
Чумак А. А., Белякова В. В., Майорова О. А., Пухликова Т. В., Кравчук О. А., Мишакина С. В., Донская О. В.
КОМПЛЕКСНЫЙ ПОДХОД К ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ
МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ
ГБУЗ «Центр крови им. О.К. Гаврилова ДЗМ»
Введение. Внедрение новейших технологий иммунологического типирования групп крови значительно улучшило качество трансфузиологической помощи. Тем не менее встречаются ситуации, когда определение групповой принадлежности невозможно. Во многихучреждениях службы крови по всему миру в сложно-диагностируемых случаях стандартные серологические тесты дополняют методами генотипирования.
Цель работы. Оценить опыт использования различных моле-кулярно-биологических методов для определения групповой принадлежности.
Материалы и методы. Исследовали 220 236 образцов крови доноров и 6138 образцов крови пациентов. Серологические тесты выполнены на гелевых картах (Bio-Rad, Швейцария). В 25 случаях дополнительно потребовалось генотипирование по системе ABO методом аллель-специфичной ПЦР (PCR-SSP) на коммерческих реагентах (BAG, Германия). Также некоторым образцам выполнили секвенирование 6-го и 7-го экзона гена ABO по Сэнгеру. Обозначение аллелей проведено согласно номенклатуре Международного общества переливания крови (ISBT).
Результаты и обсуждение. У 11 человек (6 доноров и 5 пациентов) серологически установлен фенотип Аслабый. В этой группе методом PCR-SSP были обнаружены аллели ABO'Al.Ol (n=l), *А2.01 (n=4, с.467С>Т; c.l061delC), *AW30.01 (п=1, с.646Т>А) и *AW.06 (n=5, c.502C>G). В двух других случаях не удалось верифицировать О и А группу, несмотря на тестирование на разных ана -литических системах. В первом из них методом PCR-SSP определены аллели ABO'O.Ol.Ol и ABO'Al.Ol, т.е. фенотип Al. При этом секвенирование выявило делецию c.261delG в гетерозиготном
состоянии, которая характерна для группы О, атакже ранее не описанную нуклеотидную замену в 7-м экзоне (с.677С>Т, р.ТКг22611е). Похожую ситуацию наблюдали у пациентки с посттрансфузион-ным химеризмом. Секвенирование также показало делецию с.26ЫеЮ и полиморфизм в 7-м экзоне с.848С>Т (8КР гэ34163698), соответствующий замене Аланина на Валин в 283-й позиции полипептидной цепи. Основываясь на данных серологического и генетического исследований, у этих лиц определена группа А. Однако идентифицировать аллели не представляется возможным, так как в номенклатуре 18ВТ нет информации о выявленных нами вариантах. Предположительно указанные замены вызывают ослабление активности СТА и экспрессии антигена А. В двух случаях фенотипа АВслабый генотипирование методом PCR-SSP определило аллели групп А и В. При этом В, вопреки ожиданиям, оказался обычным аллелем АВО*В.01. Секвенирование выявило в обоих случаях редкий аллель АВО*В"^15. Как и в предыдущем примере, групповая принадлежность при генотипировании методом РСК-88Р была успешно определена, но секвенирование позволило объяснить причину неоднозначностей и понять закономерности ослабления экспрессии групповых антигенов. В 7 случаях посттрансфузионного химеризма и 3 случаях панагглютинации группа крови верифицирована благодаря PCR-SSP.
Заключение. Возникновение спорных ситуаций при определении групповой принадлежности требует использования генотипирования как дополнительного диагностического критерия. Наш опыт позволяет сделать вывод о необходимости комплексного применения различных методов молекулярной биологии в данной области исследований.
