CC BY
45
ISSN 0321-3005 ИЗВЕСТИЯ ВУЗОВ. СЕВЕРО-КАВКАЗСКИЙ РЕГИОН._ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ. 2016. № 4
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2016. No. 4
УДК 663.262:663.223.1 (470.67) DOI 10.18522/0321-3005-2016-45-49
БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВОГО ШТАММА ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE Y-3980
© 2016 г. С.Ц. Котенко, Э.А. Исламмагомедова, Э.А. Халилова, А.А. Абакарова
BIOTECHNOLOGICAL PROPERTIES OF NEW STRAIN OF YEAST SACCHAROMYCES CEREVISIAE Y-3980
S.Ts. Kotenko, E.A. Islammagomedova, E.A. Khalilova, A.A. Abakarova
Котенко Светлана Цалистиновна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник, лаборатория биохимии и биотехнологии, Прикаспийский институт биологических ресурсов Дагестанского научного центра РАН, ул. М. Гаджиева, 45, г. Махачкала, 367000.
Svetlana Ts. Kotenko - Candidate of Biology, Leading Researcher, Laboratory of Biochemistry and Biotechnology, Caspian Institute of Biological Resources, Dagestan Scientific Centre, Russian Academy of Science, M. Gadzhiev St., 45, Makhachkala, 367000, Russia.
Исламмагомедова Эльвира Ахмедовна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, лаборатория биохимии и биотехнологии, Прикаспийский институт биологических ресурсов Дагестанского научного центра РАН, ул. М. Гаджиева, 45, г. Махачкала, 367000, е-тай: islamma-gomedova@mail.ru
Elvira A. Islammagomedova - Candidate of Biology, Senior Researcher, Laboratory of Biochemistry and Biotechnology, Caspian Institute of Biological Resources, Dagestan Scientific Centre, Russian Academy of Science, M. Gadzhiev St., 45, Makhachkala, 367000, Russia, e-mail: islammagomedova@mail.ru
Халилова Эсланда Абдурахмановна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник, лаборатория биохимии и биотехнологии, Прикаспийский институт биологических ресурсов Дагестанского научного центра РАН, ул. М. Гаджиева, 45, г. Махачкала, 367000.
Eslanda A. Khalilova - Candidate of Biology, Senior Researcher, Laboratory of Biochemistry and Biotechnology, Caspian Institute of Biological Resources, Dagestan Scientific Centre, Russian Academy of Science, M. Gadzhiev St., 45, Makhachkala, 367000, Russia.
Абакарова Аида Алевдиновна - инженер, лаборатория биохимии и биотехнологии, Прикаспийский институт биологических ресурсов Дагестанского научного центра РАН, ул. М. Гаджиева, 45, г. Махачкала, 367000.
Aida A. Abakarova - Engineer, Laboratory of Biochemistry and Biotechnology, Caspian Institute of Biological Resources, Dagestan Scientific Centre, Russian Academy of Science, M. Gadzhiev St., 45, Makhachkala, 367000, Russia.
Исследованы биотехнологические свойства, активность ферментов углеводного и азотистого обмена, минеральный состав нового штамма cerevisiae У-3980 для производства игристых вин. Обнаружено, что оптимальное содержание макро- и микроэлементов, определяющих устойчивость к стрессовым воздействиям внешних факторов при вторичном брожении, повышенная активность в-фруктофуранозидазы, протеиназы, пируватдекарбоксилазы и алкогольдегидрогена-зы оказали влияние на физиологическую и бродильную активность дрожжей. Шампанское, полученное с использованием штамма cerevisiae У-3980, отличается длительной игрой, ароматом и вкусом.
Ключевые слова: дрожжи, биотехнологические свойства, минеральный состав, ферментативная активность, игристое вино.
The biotechnological properties, activity of enzymes of carbohydrate and nitrogenous metabolism, mineral composition of new strain S. cerevisiae Y-3980for the production of sparkling wines are researched. Found that the optimal content of macro- and microelements, determining resistance to stressful influences of external factors in the secondary fermentation, and higher activity of fi-fructofuranozidase, proteinase, pyruvate decarboxylase, alcohol dehydrogenase influenced by physiological and fermenting activity of yeast. Champagne produced using a strain of S. cerevisiae Y-3980, different the long game, aroma and taste.
Keywords: yeast, biotechnological properties, mineral composition, enzymatic activity, sparkling wine.
Использование современных биотехнологий в производстве игристых вин позволяет получить качественное вино с улучшением вкуса, сокращением затрат и времени изготовления. Накоплен большой мировой опыт в этой области виноделия: ведутся фундаментальные исследования, предложены инте-
ресные технологические решения [1]. На формирование качества игристых вин оказывают влияние многие факторы, в том числе физиолого-био-химические свойства используемых дрожжей [2]. Известно, что различные штаммы в зависимости от условий культивирования обладают отличительной
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2016. No. 4
способностью к регулированию биохимических процессов [3], способностью в условиях вторичной ферментации тиражной смеси адаптироваться к этанолу, кислотности, давлению, температуре [4]. Авторами статьи методом производственной селекции выделен штамм Saccharomyces cerevisiae Y-3980, предназначенный для вторичного сбраживания тиражной смеси под давлением [5]. В настоящее время актуально исследование в дрожжах концентрации минеральных веществ, в том числе тяжелых металлов, для выявления роли штамма в сложении качественных особенностей игристых вин [6]. Потребность дрожжей в микроэлементах в количественном отношении невелика, однако их воздействие на физиологические процессы огромно, так как даже в незначительных концентрациях они являются существенными компонентами витаминов и ферментативных систем, участвующих в регуляции процессов метаболизма клетки. Кроме того, ионы металлов могут воздействовать на стабильность и динамику клеточных мембран, что влияет на проницаемость клеток, а также выступают в качестве модуляторов адаптации дрожжей к физиологическому стрессу [7]. В основе технологии получения игристых вин лежат сложные микробиологические и биохимические процессы, в которых ферментам определена важная роль [8]. Представляет интерес изучение активности ферментов, участвующих в углеводном и азотистом обмене, занимающих особую роль в реакциях клетки на различные стрессовые состояния и определяющих характер биохимической трансформации составных веществ виноматериалов при шампанизации.
Цель данной работы - исследование минерального состава, ферментативной активности винного штамма Saccharomyces cerevisiae Y-3980 и их влияния на качество игристого вина.
В работе использованы штамм Saccharomyces cerevisiae Y-3980 [5], выделенный из шампанизируемого вина на ОАО «Дербентский завод игристых вин» (находящийся в коллекциях лаборатории биохимии и биотехнологии Прикаспийского института биологических ресурсов Дагестанского научного центра Российской академии наук и Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов Федерального государственного унитарного предприятия «Государственный научно-исследовательский институт генетики»), и промышленный штамм Saccharomyces cerevisiae Litto-Levure CHA, используемый в качестве контроля. Видовую идентификацию штамма Y-3980 проводили на основе анализа нуклеотидных последовательностей ITSI-5.8S-ITS2 региона рДНК по стандартной методике [9]. Секвенирование амплифицированного фрагмента ДНК проводили в компании «Синтол» (Мо-
сква). Видовую идентификацию осуществляли сравнением полученных нуклеотидных последовательностей с данными, размещенными в генбанке NCBI (ncbi.nlm.nih.gov) и базе данных CBS (cbs.knaw.nl) [10]. Дрожжи культивировали в тиражной среде из следующих виноматериалов, %: Пино - 40, Рислинг - 20, Алиготе - 20, Шардоне -20. Бродильная смесь содержала 2,5 % углеводов; 11,2 — спирта; 0,3 г/дм3 фенольных веществ; 17,8 г/дм3 редуктонов, а также имела 9,1 г/дм3 титруемой и 0,17 — летучей кислотности. Посевной материал составлял 3 % от объема среды. Вторичное сбраживание виноматериалов проводилось периодическим способом в акратофоре при 9^10 °С и давлении 0,4^0,5 МПа; рН 3,3^3,5 в течение 20 дней.
Исследование макро- и микроэлементного состава дрожжей осуществляли методом атомно-абсорбционной спектрометрии [11]. Активность ß-фруктофуранозидазы (ЕС 3.2.1.26) определяли поляриметрическим модифицированным методом; пируватдекарбоксилазы (ЕС 1.2.4.1) - манометрическим; алкогольдегидрогеназы (ЕС 1.1.1.1) - спек-трофотометрическим; суммарной протеиназы (ЕС 3.4.21.63) — модифицированным методом Ансона [12]. Химические показатели игристых вин (титруемая кислотность, фенольные вещества, содержание сернистой кислоты, азотистых веществ, редуктонов) изучали с использованием общепринятых методов [13].
В результате исследования качественного состава биомассы дрожжей, используемых для производства игристого вина, в обоих вариантах выявлены идентичные минеральные вещества (табл. 1).
Таблица 1
Минеральный состав винных штаммов дрожжей, мг/кг (в пересчете на абсолютно сухое вещество)
/ The mineral composition of wine yeast strains, mg/kg (calculated on dry substance)
Штаммы
Элемент S. cerevisiae S. cerevisiae Litto -
Y-3980 (опыт) Levure (контроль)
Натрий 251,14±14,08 158,86±12,64
Калий 6929,71±97,86 7622,26±99,43
Кальций 20,40±2,08 10,91±1,86
Магний 258,57±20,88 325,42±28,97
Литий 0,34±0,03 0,14±0,01
Железо 2,06±0,15 1,77±0,10
Кадмий 0,14±0,01 0,28±0,02
Цинк 4,46±0,42 6,09±0,59
Медь 5,71±0,50 8,86±0,79
Свинец 0,48±0,05 0,20±0,02
Никель 2,03±0,18 2,51±0,22
Стронций 6,00±0,53 3,71±0,39
Хром 0,17±0,02 0,89±0,08
В сумме 7481,21±136,8 8141,90±145,12
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
Количественное изучение макро- и микроэлементного состава биомассы показало, что их суммарное содержание в дрожжах S. cerevisiae Y-3980 (опыт) было ниже данного показателя в S. cere-visiae Litto-Levure CHA (контроль). Общее количество макроэлементов в опытном варианте в пересчете на абсолютно сухое вещество меньше на 8,1 % по сравнению с контролем. В обоих вариантах в количественном отношении преобладали ионы калия, играющие важную роль в окислительном фосфорилировании, биосинтезе белков и липидном обмене дрожжевых клеток; в биомассе их концентрация составляла 92,6: 93,6 % от общей суммы (опыт: контроль). Ионы калия оказывают влияние на качество вина, в составе солей органических кислот обеспечивая его бактерицидные свойства. В опытной биомассе обнаружено повышенное содержание таких макроэлементов, как кальций (в 1,9) и натрий (в 1,6 раза), стимулирующих рост и размножение клеток, улучшающих бродильную активность дрожжей, что оказывает влияние на ход технологического процесса и качество вина. Кроме того, ионы кальция играют ключевую роль в процессе флокуляции [7]. Установлено, что общее содержание микроэлементов в опытной биомассе было ниже на 12,5 % по сравнению с контролем при повышенной концентрации железа (в 1,2), стронция (в 1,6), лития (в 2,4) и свинца (в 2,4 раза). Потребность клеток в железе очень высока, так как оно способствует усилению процесса бродильной активности дрожжей и влияет на свойства игристого вина. Известно, что дрожжи, в отличие от многих живых организмов, могут поглощать соединения свинца в большом количестве без всякого угнетения обмена веществ; литий и природный стронций в ничтожных количествах также необходимы микроорганизмам и являются их частью [14, 15]. В контрольном варианте биомассы обнаружено повышенное содержание таких тяжелых металлов, как цинк (в 1,4 раза), медь (в 1,5), никель (в 1,2), кадмий (в 2,0), хром (в 5,2). Ионы цинка и меди активируют или входят в состав отдельных ферментов; ионы никеля в определенном количестве положительно влияют на ряд металлоферментных комплексов; физиологическая роль кадмия в клетке заключается в связывании и транспортировке тяжелых металлов совместно с определенными низкомолекулярными белками; хрома — в процессе усвоения аминокислот. В повышенных концентрациях данные элементы оказывают токсическое действие на дрожжи, но, несмотря на преимущество опытного образца, в обоих вариантах жизнедеятельность дрожжей не угнеталась [10]. Обращает на себя
NATURAL SCIENCE. 2016. No. 4
внимание большее накопление минеральных веществ в клетках контрольного варианта по сравнению со штаммом S. cerevisiae Y-3980. По-видимому, это явление можно объяснить различной сбалансированностью метаболических процессов в клетках исследуемых дрожжей. На формирование органолептических свойств шампанского минеральные вещества оказывают как положительное, так и отрицательное влияние. Так, избыток ионов тяжелых металлов придает вину посторонний неприятный привкус [15]. Установлено, что в исследуемых нами вариантах шампанского концентрации макро- и микроэлементов, выполняющих важнейшие функции в организме человека, были во много раз меньше их токсических доз и практически не отразились на вкусе вина.
В процессе брожения в дрожжах Y-3980 активируются Р-фруктофуранозидаза (на 26,2 %), имеющая большое значение в инверсии сахарозы и улучшении органолептических качеств игристых вин, и пируватдекарбоксилаза (на 13,1 % раза выше по сравнению с контролем). Благодаря её действию образуется значительная часть углекислого газа. В биомассе штамма S. cerevisiae Y-3980 активность алкогольдегидрогеназы, важнейшего фермента спиртового брожения, превышает аналогичный показатель в контроле в 1,40 раза (рис. 1).
Е/мг
0 12 3 4
!^0ПЫТ I I КОНТРОЛЬ
Рис. 1. Активность ферментов в дрожжах S. cerevisiae Y-3980 (опыт) и S. cerevisiae Litto-Levure CHA (контроль): 1 - Р-фруктофуранозидаза; 2 - суммарная протеиназа; 3 - пируватдекарбоксилаза; 4 - алкогольдегидрогеназа / Fig. 1. The activity of enzymes in the yeast S. cerevisiae Y-3980 (experience) and S. cerevisiae Litto-Levure CHA (control): 1 - P-fructofuranosidase; 2 - total proteinase; 3 - pyruvate decarboxylase; 4 - alcohol dehydrogenase
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
Оптимальное содержание минеральных веществ, повышенная ферментативная активность S. cerevisiae Y-3980 повлияли на формирование биотехнологических свойств игристого вина при вторичном брожении. Установлено, что опытный образец вина, полученного с использованием S. cerevisiae Y-3980, несколько отличался от контроля по органолептическим показателям и химическому составу (табл. 2). В опытном варианте обнаружено снижение содержания сернистой кислоты, отмечено более высокое содержание общего и аминного азота по сравнению с тиражной смесью, что отразилось на формировании вкусовых качеств вина. Обнаруженные в обоих образцах концентрации титруемых кислот, фенольных веществ и редуктонов, усиливающих восстанавливающую способность вина, среднее мелкодисперсное пенообразование и длительная игра отражали хорошее качество игристых вин.
Таблица 2
Химические показатели шампанских вин / Chemical indicators of sparkling wines
Ранее установлено, что содержание свободных аминокислот, способствующих формированию вкуса и аромата игристых вин, сохранению связанных форм углекислоты, улучшению игристых и пенистых свойств, в опытном варианте вина составило 543,4 г/дм3, что на 33,8 % превышает аналогичный показатель в контроле [10]. В вине, полученном с использованием штамма 8. cerevisiae У-3980, почти в 2 раза повышена концентрация обладающих антиоксидантными свойствами незаменимых аминокислот, наличие которых необходимо для стабильного физиологического состояния дрожжевых клеток в экстремальных условиях.
NATURAL SCIENCE. 2016. No. 4
Большую роль в качестве предшественников ряда биологически активных соединений, ответственных за травяной аромат игристых вин, играют полиненасыщенные жирные кислоты; их накопление может оказывать влияние на игристые и пенистые свойства вин. Суммарное количество ненасыщенных жирных кислот — миристолеиновой (14:1ю-9), маргаринолеиновой (17:1), линоэладиковой (18:2), линолевой (18:2ю-6), нервоновой (24:1ю-9) — на 40,9 % выше в опытном варианте. Известно, что количество летучих примесей, составляющих комплекс ароматических компонентов, формирует характерные сенсорные свойства конечного продукта брожения. При использовании штамма S. cerevisiae Y-3980 суммарное количество высших спиртов на 24 % больше по сравнению с контролем, в том числе /9-фенилэтанола c ароматом розы (в 1,4) и пропанола (в 1,6 раз). Содержание сложных эфиров этиллактата, гераниолацетата, ди-этилмалата, улучшающих вкус, аромат и формирование в букете вина подсолнечных тонов, в опытном образце выше на 46,7, 50,0 и 20,7 % соответственно [10]. Новый штамм синтезирует почти вдвое больше контрольного терпеновые соединения, такие как линалоол, гераниол, цис-фарнезол и транс-фарнезол (рис. 2), придающие аромату цитронные тона и оттенки аромата розы, характерные для лучших образцов игристых вин.
L
3 4 5 6
ОПЫТ I I контроль
Рис. 2. Содержание терпеновых соединений в шампанских
винах, мг/дм3: 1 - линалоол; 2 - окись линалоола-1; 3 - окись линалоола-2; 4 - гераниол, 5 - транс-фарнезол; 6 - цис-фарнезол / Fig. 2. The content of terpene compounds in sparkling wines, mg/dm3: 1 - linalool; 2 - linalool oxide 1; 3 - linalool oxide 2; 4 - geraniol; 5 - trans-farnesol; 6 - cis-farnesol
Показатель Тиражная смесь Шампанское вино
S. cerevisiae Y-3980 (опыт) S. cerevisiae Litto-Levure (контроль)
Титруемая кислотность, г/дм3 6,50±0,27 6,80±0,38 7,70±0,44
Фенольные вещества, г/дм3 0,22±0,01 0,18±0,01 0,20±0,01
Сернистая кислота общая, мг/дм3 135,20±4,00 121,3±3,55 129,00±3,89
Содержание азотистых веществ в пересчете на азот: общий, мг/дм3 аминный, мг/дм3 208,00±7,01 270,00±9,66 250,00±8,41
83,00±3,40 159,00±5,46 133,00±4,10
Редуктоны, мг/дм3 13,80±0,70 16,70±0,79 15,50±0,75
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
Таким образом, содержащиеся в клетках S. ce-revisiae Y-3980 макро- и микроэлементы, ферменты углеводного и азотистого обмена оказали влияние на физиологическую и бродильную активность, устойчивость дрожжей к стрессовым воздействиям в условиях вторичной ферментации. Игристое вино, полученное с использованием нового винного штамма, отличалось тонким ароматом, гармоничным вкусом, длительной игрой, средним мелкодисперсным пенообразованием.
Авторы выражают благодарность генеральному директору ОАО «Дербентский завод игристых вин» М.М. Садулаеву и заместителю генерального директора Ю.Л. Пальян за помощь в проведении селекционных работ и полупроизводственных испытаний винного штамма S. cerevisiae Y-3980.
Работа выполнена при финансовой поддержке программы Президиума РАН «Биологическое разнообразие природных систем. Биологические ресурсы России: оценка состояния и фундаментальные основы мониторинга».
Литература
1. Torresi S., Frangipane M.T., Anelli G. Biotechnologies in sparkling wine production, Interesting approaches for quality improvement: A review // Food Chemistry. 2011. № 129. P. 1232-1241.
2. Steensels J., Snoek T., Meersman E., Picca N.M., Voordeckers K., Verstrepen K.J. Improving industrial yeast strains exploiting natural and artificial diversity // Microbiology Reviews. 2014. № 38. P. 947-995.
3. Aliverdieva D.A., Mamaev D.V., Bondarenko D.I. Plasmalemma dicarboxylate transporter of Saccharomyces cerevisiae is involved in citrate and succinate influx and is modulated by pH and cations // Biochemistry (Moscow) Supplement. Series A: Membrane and Cell Biology. 2008. Vol. 2, № 4. P. 354-364.
4. Borrull A., Lopez-Martínez G., Miro-Abella E., Salvado Z., Poblet M., Cordero-Otero R., Rozes N. New insights into the physiological state of Saccharomyces cerevisiae during ethanol acclimation for producing sparkling wines // Microbiology. 2016. № 5. P. 20-29.
5. Пат. 2526493 RU C12N 1/16, C12G 1/06, C12R 1/865. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae для производства шампанского / С.Ц. Котенко, М.М. Са-дулаев, Ю.Л. Пальян, Э.А. Халилова, Э.А. Исламма-гомедова, Д.А. Аливердиева. 20.08.2014.
6. Viviers M., Smith M., Wilkes E., Smith P., Johnson D. The role of trace metals in wine 'reduction' // Wine & Viticulture J. 2014. № 29(1). P. 38-40.
NATURAL SCIENCE. 2016. No. 4
7. Walker G. Metals in yeast fermentation processes // Advances in Applied Microbiology. 2004. № 54. P. 197-229.
8. Ugliano M Enzymes in winemaking // Wine chemistry and biochemistry. N.Y., 2009. Р. 103-126.
9. Качалкин А.В. Новые данные о распространении некоторых психрофильных дрожжевых грибов в Московской области // Микробиология. 2010. Т. 79, № 6.
C. 843-847.
10. Котенко С.Ц., Халилова Э.А., Исламмагомедо-ва Э.А., Аливердиева Д.А. Физиолого-биохимические особенности винного штамма Saccharomyces cerevisiae Y-3980 // Фундаментальные исследования. 2015. № 7. С. 255-259.
11. Лурье Ю.Ю. Аналитическая химия промышленных сточных вод. М., 1984. С. 21-229.
12. Практикум по биохимии / под ред. С.Е. Северина, Г.А. Соловьевой. М., 1989. 509 с.
13. Методы технохимического контроля в виноделии : учеб.-метод. пособ. / под ред. В.Г. Гержиковой. Симферополь, 2002. 260 с.
14. Volpe M.G., Cara F., Volpe F., Mattia A., Serino V. Heavy metal uptake in the enological food chain // Food Chemistry. 2009. № 117(3). P. 553-560.
15. Galani-Nikolakaki S., Kallithrakas-Kontos N., KatsanosA.A. Trace element analysis of Cretan wines and wine Products // The Science of the Total Environment. 2002. № 285. P. 155-163.
References
1. Torresi S., Frangipane M.T., Anelli G. Biotechnologies in sparkling wine production, Interesting approaches for quality improvement: A review. Food Chemistry. 2011, no. 129, pp. 1232-1241.
2. Steensels J., Snoek T., Meersman E., Picca N.M., Voordeckers K., Verstrepen K.J. Improving industrial yeast strains exploiting natural and artificial diversity. Microbiology Reviews. 2014, no. 38, pp. 947-995.
3. Aliverdieva D.A., Mamaev D.V., Bondarenko D.I. Plasmalemma dicarboxylate transporter of Saccharomyces cerevisiae is involved in citrate and succinate influx and is modulated by pH and cations. Biochemistry (Moscow) Supplement. Series A: Membrane and Cell Biology. 2008, vol. 2, no. 4, pp. 354-364.
4. Borrull A., Lopez-Martinez G., Miro-Abella E., Salvado Z., Poblet M., Cordero-Otero R., Rozes N. New insights into the physiological state of Saccharomyces cerevisiae during ethanol acclimation for producing sparkling wines. Microbiology. 2016, no. 5, pp. 20-29.
5. Kotenko S.Ts., Sadulaev M.M., Pal'yan Yu.L., Khalilova E.A., Islammagomedova E.A., Aliverdieva
D.A. Shtamm drozhzhei Saccharomyces cerevisiae dlya proizvodstva shampanskogo [The strain of the Saccharomyces cerevisiae yeast for the production of champagne].
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
Certificate, no. 2526493 RU C12N 1/16, C12G 1/06, C12R 1/865, 20.08.2014.
6. Viviers M., Smith M., Wilkes E., Smith P., Johnson
D. The role of trace metals in wine 'reduction'. Wine & Viticulture J. 2014, no. 29 (1), pp. 38-40.
7. Walker G. Metals in yeast fermentation processes. Advances in Applied Microbiology. 2004, no. 54, pp. 197229.
8. Ugliano M. Enzymes in winemaking. Wine chemistry and biochemistry. New York, 2009, pp. 103-126.
9. Kachalkin A.V. Novye dannye o rasprostranenii nekotorykh psikhrofil'nykh drozhzhevykh gribov v Moskovskoi oblasti [New data on the distribution of some psychrophilic yeasts in the Moscow Region]. Mikrobiologiya. 2010, vol. 79, no. 6, pp. 843-847.
10. Kotenko S.Ts., Khalilova E.A., Islammagomedova
E.A., Aliverdieva D.A. Fiziologo-biokhimicheskie osobennosti vinnogo shtamma Saccharomyces cerevisiae Y-3980 [Physiological and biochemical characteristics of
Поступила в редакцию /Received_
NATURAL SCIENCE. 2016. No. 4
the wine strain Saccharomyces cerevisiae Y-3980]. Fundamental'nye issledovaniya. 2015, no. 7, pp. 255-259.
11. Lur'e Yu.Yu. Analiticheskaya khimiya promyshlennykh stochnykh vod [Analytical chemistry of industrial waste water]. Moscow, 1984, pp. 21-229.
12. Praktikum po biokhimii [Workshop on biochemistry]. Ed. S.E. Severin, G.A. Solovieva. Moscow, 1989, 509 p.
13. Metody tekhnokhimicheskogo kontrolya v vinodelii [Methods of technochemical control in winemaking]. Teaching manual. Ed. V.G. Gerzhikova. Simferopol, 2002, 260 p.
14. Volpe M.G., Cara F., Volpe F., Mattia A., Serino V. Heavy metal uptake in the enological food chain. Food Chemistry. 2009, no. 117(3), pp. 553-560.
15. Galani-Nikolakaki S., Kallithrakas-Kontos N., Katsanos A.A. Trace element analysis of Cretan wines and wine Products. The Science of the Total Environment. 2002, no. 285, pp. 155-163.
_16 июня 2016 г. / June 16, 2016
