CC BY
175
УДК 615.454.2:618.1 Кубанский научный медицинский вестник № 3 (126) 2011
маркеров может быть рекомендовано для применения в терапевтической практике в качестве диагностического критерия преждевременного старения и своевременного проведения оздоровительных программ. Возможность воздействия на уровень данных показателей открывает новые перспективы геропро-текции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Анисимов В. Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. - СПб: Наука, 2003. - 468 с.
2. Белозерова Л. М. Методы определения биологического возраста по умственной и физической работоспособности. - Пермь, 2000. - 58 с.
3. Гумеров А. Г., Зайнуллин Р. С. Безопасность нефтепроводов. - М.: Недра, 2000. - 308 с.
4. Донцов В. И., Крутько В. Н., Подколзин А. А. Фундаментальные механизмы геропрофилактики. - М.: Биоинформсер-вис, 2002. - 464 с.
5. Зайнуллин В. Г., Москалев А. А. Роль апоптоза в возрастных патологиях // Онтогенез. - 2001. - Т. 32. № 4. - С. 245-251.
6. Залесский В. Н., Великая Н. В. Механизмы цитотоксичес-ких эффектов активных молекул кислорода и развитие апоптоза // Совр. пробл. токсикол. - 2003. - № 1. - С. 11-17.
7. Ковальчук Л. В., Ганковская Л. В., Рубакова Э. И. Система цитокинов. - М.: Янус-К, 2000. - 63 с.
8. Коршак А. А., Шаммазов А. М. Основы нефтегазового дела. - Уфа: ООО «ДизайнПолиграфСервис», 2002. - 544 с.
9. Москалев А. А. Старение и гены. - СПб: Наука, 2008. - 358 с.
10. Симбирцев А. С. Цитокины - новая система регуляции защитных реакций организма //Цитокины и воспаление. - 2002. -Т. 1. № 1. - С. 9-16.
11. Cande C., Cecconi F., Dessen P. Apoptosis-inducing factor: key to the conserved caspase - independent pathways of cell death? // Cell. Sci. - 2002. - V. 115. - P. 4727-4734.
12. Johnson P., Boldyrev A. Oxidative stress at molecular, cellular and organe levels. - Trivandrum (India): Research Singpost Pabl. -2002. - 142 p.
13. MayerB., OberbauerR. Mitochondrial regulation of apoptosis // News in physiol. sci. - 2003. - V. 18. - P. 89-94.
Поступила 04.03.2011
Т. В. АВТИНА, Т. А. ПАНКРУШЕВА, М. В. ПОКРОВСКИИ
БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАЗРАБОТКИ СУППОЗИТОРИЕВ С ФЛУКОНАЗОЛОМ
Кафедра фармацевтической технологии Курского государственного медицинского университета, Россия, 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3. E-mail: [email protected]
В статье приведены результаты биофармацевтических исследований по выбору оптимальной суппозиторной основы, предназначенной для разработки состава и технологии интравагинальной лекарственной формы с флуконазолом и влияния поверхностно-активных веществ на его технологические характеристики.
Ключевые слова: суппозитории, кандидоз, флуконазол, биофармацевтические исследования.
Т. V. AVTINA, T. A. PANKRUSHEVA, M. V. POKROVSKY BIOPHARMACEUTICAL ASPECTS OF WORKING OUT SUPPOSITORIES WITH FLUCONAZOLE
Department of pharmaceutical technology Kursk state medical university,
Russia, 305041, Kursk, street K. Marksa, 3. E-mail: [email protected]
The results of the biopharmaceutical studies on the choice of optimal suppository base, designed to develop composition and technology of intravaginal dosage form with the antimycotic agent. The effect of surfactants on the technological characteristics of fluconazole in the manufacture of suppositories.
Key words: suppositories, candidiasis, fluconazole, biopharmaceutical research.
Введение
Вагинальный кандидоз - распространенная клиническая болезнь в гинекологии, которая представляет как медицинскую, так и социальную проблему, требующую для своего решения внедрения эффективных фармакологических субстанций и создания на их основе новых лекарственных форм [4].
Среди групп современных синтетических анти-микотических средств выделяются азолы, наиболее популярным представителем которых является флуконазол, использованный нами в качестве действующей субстанции в разрабатываемой лекарственной форме [3].
Анализ литературы и ассортимента лекарственных форм, применяемых для лечения интраваги-нальных инфекций, свидетельствует о достаточно широкой популярности суппозиториев, которые обладают рядом известных положительных свойств [1, 5].
В настоящее время общепризнанно при разработке лекарственной формы проводить биофармацевтичес-кие исследования, позволяющие определить наиболее значимые факторы, которые влияют на их качественные характеристики. При создании суппозиториев к таким факторам относят физико-химические свойства лекарственного вещества, природу суппозиторной
основы, наличие вспомогательных веществ, технологический режим их изготовления.
Цель работы - изучение влияния биофармацевти-ческих факторов на процесс высвобождения флукона-зола из разрабатываемых составов суппозиториев.
Материалы и методы
Для проведения исследований были приготовлены суппозитории на основах гидрофобного, гидрофильного и дифильного характера: витепсол Н-15, комплексно-жировая основа (КЖО), полиэтиленоксидная (сплав ПЭО-400:ПЭС>-1500 в соотношении 2:8), ГХМ-5Т, бутирол.
При изготовлении лекарственной формы руководствовались основными положениями статьи ГФ-Х1-изд. «Суппозитории» (вып. 2, 1989, стр. 151). Разрабатывая состав и технологию суппозиториев с флуконазолом, учитывали его физико-химические свойства, в частности растворимость. Суппозитории готовили методом выливания, используя формы с объемом гнезда 1,5 г. Предварительно экспериментальным путем был установлен обратный коэффициент замещения флукона-зола (0,63), поскольку его содержание, 150 мг в одном суппозитории, превышало 5%.
Компоненты основ сложного состава сплавляли в фарфоровой чашке на водяной бане с учетом их температур плавления, а витепсол плавили. Флуконазол при изготовлении суппозиторной массы вводили по типу суспензии. При этом использовали субстанцию лекарственного вещества, измельченную в мельнице марки МЛ-1, а также диспергированную после измельчения с поверхностно-активными веществами твином-80 и бензалкония хлоридом, взятыми в общеизвестных концентрациях - 2,0% и 0,02% соответственно.
Влияние основы и поверхностно-активных веществ на степень дисперсности флуконазола и процесс его высвобождения оценивали методами дисперсологи-ческого анализа, диализа через полупроницаемую мембрану, теста «Растворение».
Дисперсность субстанции изучали с использованием микроскопа для морфологических исследований марки «Микмед-1» объективом маркировки 10х0,2 и измерительным окуляром 15х. Под микроскопом просматривали по 500 частиц.
Диализ осуществляли в условиях термостата, используя в качестве полупроницаемой мембраны целлофановую пленку МСАТ-200 толщиной 0,25 мм и размером пор 50 мкм, а в качестве акцепторной среды - 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, имеющий темпе-
ратуру 37±1° С. Пробы диализата по 10,0 мл отбирали через 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 мин с момента начала эксперимента, восполняя взятые количества новыми порциями среды до объема 50 мл. Проводили по пять параллельных исследований.
Тест «Растворение», который в первом приближении характеризует биодоступость лекарственного препарата, осуществляли в приборе «вращающаяся корзинка» (скорость вращения 100 об/мин) с использованием тестера для проверки растворимости Етеека серии ОТ 606. В качестве акцепторной среды использовали 0,1М раствор кислоты хлористоводородной, объем которой составил 1000 мл. Пробы по 10 мл отбирали через 5, 10, 15, 30, 45 минут с момента начала опыта. Взятые количества пробы восполняли новыми порциями среды растворения с температурой 37±1° С. Проводили по три параллельных исследования.
В обоих случаях количественную оценку флукона-зола проводили методом УФ-спектрофотометрии при длине волны 261±1 нм. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора стандартного образца флуконазола (Еиг РИ ОРЭ). Измерения выполняли на фоне растворителя - 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, так как предварительные исследования показали, что компоненты основ не поглощают в максимуме абсорбции флуконазола.
Результаты и обсуждение
Изучена степень дисперсности неизмельченной и измельченной субстанций флуконазола до введения в суппозиторные основы, а также образцов суппозиториев, изготовленных на пяти основах и содержащих измельченный флуконазол. Полученные результаты представлены в таблице 1. Из них следует, что предварительное измельчение флуконазола значительно изменяет фракционный состав частиц: отсутствуют частицы размером более 50 мкм, в то время как доля этой фракции в исходной, неизмельченной субстанции составляет 65%. В диспергированном флуконазоле в 9 раз возросло количество частиц размером до 30 мкм.
При введении измельченного флуконазола в суппо-зиторные основы и проведении анализа проб суппозиториев, изготовленных на витепсоле Н-15, КЖО, ГХМ-5Т и ПЭО, установлено незначительное влияние основ на дисперсность субстанции: уменьшилось количество частиц фракции размером от 31 до 50 мкм и возросло (суммарно) до 30 мкм.
Таблица 1
Результаты дисперсологического анализа флуконазола в субстанции и в суппозиториях
Объект исследования Размер частиц, мкм
До 10 От 11 до 30 От 31 до 50 От 51 и более
Субстанция флуконазола до измельчения 2% 6% 27% 65%
Субстанция флуконазола после измельчения 19% 58% 23% -
Суппозитории на основе бутирола 19% 59% 22% -
Суппозитории на основе витепсола Н-15 20% 60% 20% -
Суппозитории на КЖО 17% 65% 18% -
Суппозитории на основе ГХМ-5Т 16% 66% 18% -
Суппозитории на ПЭО 18% 63% 19% -
Кубанский научный медицинский вестник № 3 (126) 2011
Кубанский научный медицинский вестник № 3 (126) 2011
На следующем этапе изучено влияние ПАВ на степень дисперсности флуконазола. При изготовлении суппозиториев предварительно измельченный флу-коназол диспергировали в ступке, в одном случае с твином-80, в другом - с бензалкония хлоридом (БАХ). Полученную пульпу смешивали с заранее подготовленной основой и разливали в формы. Результаты оценки дисперсности лекарственного вещества представлены в таблице 2.
Из представленных данных следует, что измельчение флуконазола с ПАВ влияет на структуру фракционного состава частиц: отсутствуют частицы размером более 30 мкм, и образуется новая фракция мелкодисперсных частиц - до 5 мкм, не отмеченная ранее. При измельчении флуконазола с твином-80 или БАХ приблизительно в четыре раза наблюдается увеличение фракции с размером частиц до 10 мкм по сравнению с субстанцией активного компонента, измельченного без введения ПАВ (табл. 1).
Т. е. применяемые ПАВ обладают выраженным диспергирующим действием в отношении флуконазо-ла, которое в большей степени выражено у твина-80: процентное содержание частиц размером до 5 мкм превышает их содержание при измельчении с БАХ. Однако в обоих случаях введение в состав разрабатываемых суппозиториев указанных ПАВ оправданно и позволяет получить высокодисперсную систему.
действие на грибы рода С. albicans. В фармацевтической технологии БАХ часто используют в качестве консерванта лекарственных форм (мазей, гелей, капель и
др) [2].
Учитывая полученные результаты и теоретические предпосылки использования твина-80 и БАХ при изготовлении суппозиториев, изучили вопрос их совместного введения и влияния на степень дисперсности лекарственного вещества. При разработке технологии суппозиториев флуконазол поочередно измельчали вначале с БАХ, а затем с твином-80. Полученную пульпу смешивали с расплавленной основой и методом выливания формировали суппозитории. В таблице 3 представлены результаты проведенного дисперсоло-гического анализа проб изготовленной лекарственной формы.
Анализ полученных данных позволил установить, что комплексный диспергирующий агент как в субстанции, так и в суппозиториях обеспечивает размер частиц до 30 мкм. Однако при этом уменьшается доля частиц размером от 11 до 30 мкм и увеличивается - до 5 мкм. Наибольшее влияние на фракционный состав частиц флуконазола диспергатор оказал при введении субстанции в основы витепсола и полиэтиленоксидную.
Влияние степени дисперсности флуконазола, полученной при его диспергировании с БАХ в сочетании с твином-80, на высвобождение флуконазола изучали
Таблица 2
Влияние ПАВ на дисперсность флуконазола в субстанции и в суппозиториях
Суппозитории, содержащие твин-80 Объект исследования Суппозитории, содержащие БАХ
Размер частиц, мкм Размер частиц, мкм
до 5 от б до i0 от ii до ЗО до 5 от б до i0 от ii до ЗО
20% 62% 18% Субстанция флуконазола после измельчения с ПАВ 15% 62% 23%
20% 63% 17% Суппозитории на основе бутирол 13% 64% 23%
21% 61% 18% Суппозитории на основе витепсол Н-15 14% 64% 22%
19% 63% 18% Суппозитории на КЖО 13% 63% 24%
19% 62% 19% Суппозитории на основе ГХМ-5Т 13% 64% 23%
23% 61% 16% Суппозитории на ПЭО 16% 62% 22%
Влияние основы и процесса изготовления суппозиториев на дисперсность частиц субстанции лекарственного вещества после его измельчения с ПАВ не установлено.
Современный анализ результатов бактериологических исследований показал, что воспалительные заболевания половых органов сопровождаются ассоциациями как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов [6]. Поэтому при разработке суппозиториев рассмотрена возможность сочетания флуко-назола с катионным ПАВ (БАХ), который в малых концентрациях обладает бактериостатическим действием в отношении грамположительных кокков, грамотрицательных бактерий, а также оказывает фунгицидное
методами диализа через полупроницаемую мембрану и тест «Растворение».
Анализ результатов, полученных методом диализа через полупроницаемую мембрану, свидетельствует о том, что на высвобождение антимикотика значительную роль оказывает не только характер основы, но и наличие ПАВ, влияющих на степень дисперсности.
Наиболее полное и быстрое высвобождение лекарственного вещества в диализат отмечено из суппозиториев, приготовленных на гидрофильной полиэтиленок-сидной основе. Достигнутая к 45-й мин максимальная концентрация вещества держалась на одном уровне до конца эксперимента. Из основы высвободилось почти 100% флуконазола, в то время как из суппозиториев,
Таблица 3
Влияние комплексного диспергатора на фракционный состав флуконазола в субстанции и в суппозиториях
Объект исследования Размер частиц, мкм
До 5 От б до Ю От ii до ЗО
Субстанция флуконазола после измельчения с твином-80 и бензалкония хлоридом 23% 63% 14%
Суппозитории на основе бутирола 22% 64% 13%
Суппозитории на основе витепсол Н-15 24% 63% 13%
Суппозитории на КЖО 21% 64% 15%
Суппозитории на основе ГХМ-5Т 21% 64% 15%
Суппозитории на ПЭО 25% 62% 13%
приготовленных на этой же основе, но без содержания ПАВ этот показатель равен 76,0%.
Второй по скорости и полноте высвобождения лекарственного вещества является основа витепсол, содержащая сочетания ПАВ. Концентрация флуконазола в акцепторной среде постепенно нарастала, и по завершении опыта его было обнаружено около 100%. Процесс высвобождения флуконазола из суппозиториев без предварительного диспергирования с ПАВ достаточно замедлен. За время эксперимента не достигнута полнота высвобождения действующего вещества.
Самые низкие показания по интенсивности и полноте высвобождения субстанции установлены при анализе суппозиториев, изготовленных на гидрофобных основах бутирол, ГХМ-5Т и КЖО. Введение твина-80 в сочетании с БАХ в эти основы привело лишь к незначительному повышению концентрации антимикотика в диализной среде.
В процессе проведения теста «Растворение» установлено, что из суппозиториев, не содержащих ПАВ, быстрое и полное высвобождение флуконазола обеспечивает полиэтиленоксидная основа. За 10 мин эксперимента его содержание в акцепторной среде составляет около 80%, а к 15-й мин - практически 100%. Динамика высвобождения вещества из основ витеп-сол, бутирол, КЖО и ГХМ-5Т практически одинакова. Наблюдается постепенное нарастание концентрации действующего компонента в среде растворения в течение всего времени эксперимента.
Введение измельченного флуконазола с твином-80 и БАХ в суппозитории значительно повышает скорость высвобождения, особенно приготовленных на основах витепсол Н-15 и ПЭО. Содержание антими-котика в среде растворения в фиксированных точках эксперимента в 9 и 1,2 раза больше соответственно
и уже к 10-й мин составляет не менее 90%. Наличие ПАВ увеличивает высвобождение флуконазола из суппозиториев на основах бутирол, КЖО, ГХМ-5Т. Однако и к 45-й мин эксперимента не отмечено полноты его высвобождения.
Таким образом, исследовано влияние суппозитор-ных основ и ПАВ на степень дисперсности флуконазола и процесс его высвобождения из суппозиториев в опытах in vitro. Результаты эксперимента свидетельствуют о том, что оптимальным требованиям по высвобождению субстанции соответствуют полиэтиленоксидная основа и витепсол Н-15, в которые флуконазол введен поочередным диспергированием с БАХ и твином-80.
ЛИТЕРАТУРА
1. Астраханова М. М., Охотникова В. Ф. Суппозитории как лекарственная форма высокой биологической доступности // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. -2010. - № 6. - С. 9-12.
2. Красильников А. П. Справочник по антисептике. - Мн: Высш. шк., 1995. - 367 с.
3. Маркова Т. П., Чувиров Т. Н. Флуконазол в терапии кандидо-за // Русский медицинский журнал. - 2002. - № 15. - С. 64-65.
4. Миронов А. Ю., Терехов Ю. Б. Лечение вульвовагинального кандидоза у женщин детородного возраста // Гинекология. - 2009. -Том 11. № 4. - С. 36-38.
5. Панкрушева Т. А., Зубова С. Н., Медведева О. А., Нестерова А. В. Суппозитории для лечения бактериального вагинита // Вестник ВГУ. Серия «Химия, биология, фармация». - Воронеж, 2004. - № 2. - С. 249-253.
6. Прилепская В. Н., Байрамова Г. Р. Грибковые инфекции в гинекологии. Принципы лечения // Гинекология. - 2007. - Том 9. № 6. - С. 4-6.
Поступила 17.02.2011
Ж. К. АЛБЕГОВА1, В. Б. БРИН12, Т. В. МОЛДОВАН1, Э. М. ГАГЛОЕВА’
ВЛИЯНИЕ НАНОКОМПОЗИТНЫХ ЭНТЕРОСОРБЕНТОВ НА НАКОПЛЕНИЕ
МОЛИБДЕНА В ТКАНЯХ У КРЫС
Кафедра нормальной физиологии ГОУ ВПО СОГМА Минздравсоцразвития РФ,
Россия, 362019, РСО — Алания, г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40. E-mail: nosma @dol.ru; 2УРАН Институт биомедицинских исследований ВНЦ РАН и Правительства РСО — Алания
i5
Кубанский научный медицинский вестник № 3 (126) 2011 УДК 615326:54677
