Биология и физиология протеина C. современные представления о механизмах лечебного действия активированного протеина с Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

биология и физиология протеина с. современные представления О МЕХАНИЗМАХ ЛЕЧЕБНОГО ДЕЙСТВИЯ АКТИВИРОВАННОГО ПРОТЕИНА С

УДК 615.03

© В. И. Ващенко, Т. Н. Ващенко

Военно-медицинская академия им.С. М. Кирова МО РФ, Санкт-Петербург

Ключевые слова:

протеин С; зигрис; сепсис; тромбин; тромбомоду-лин; эндотелий.

В обзоре рассмотрены основные биологические и физиологические свойства протеина С. Проанализированы современные представления о цитопротективных эффектах активированного протеина С. Механизмы действия лекарственного препарата активированного рекомбинатного протеина С человека приводятся в связи с его практическим применением в лечебных программах. Библ. 143 назв.

ВВЕДЕНИЕ

Одним из достижений теоретической медицины является разработка концепции о безопасности применения для лечения человека естественных метаболитов. В настоящее время для лечения гемофилий широко используются компоненты гемостаза факторы VIII и IX. Расширение спектра лечебных факторов — назревшая небходимость современности. Так свыше 2 000 000 публикаций посвящены изучению свойств важного компонента коагуляционного каскада протеина С (по данным Google). Несомненным успехом научных достижений прошедшего десятилетия является расширение наших представлений об этом давно установленном компоненте, активная форма которого зарегистрирована в конце ХХ века как лекарственный препарат дротрекогин альфа (Xigris). Однако, как свидетельствуют работы последних лет [80], действием его в качестве антикоагулянта не исчерпываются все функции. Настоящий обзор суммирует обобщенные представления, основанные на данных, полученных как in vitro так и in vivo, а также на исследовании прямых цитопротективных эффектов активированного протеина C, ко-

торые включают благоприятные изменения экспрессии генов, противовоспалительные действия, антиапоптозную активность и стабилизацию эндотелиального барьера. Представлена также современная концепция о механизмах действия препарата зигрис ^д^) при лечении сложных растройств, включая тяжелый сепсис, септический шок, тромбоз и ишемический инсульт.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОТЕИНА С

Протеин С (ПрС) впервые был получен из плазмы крови крупного рогатого скота Johan Stenflo в 1976 г [118]. Последующими многочисленными иссследованиями доказано, что ПрС — основной физиологический антикоагулянт. Под действием тромбина и тромбомодулина он превращается в активированный ПрС — витамин K-зависимый про-теолитический фермент — сериновую протеазу (КФ 3.4.21.69).

ПрС человека — это гликопротеин с молекулярным весом 62 000 дальтон, состоящий из легкой цепи с молекулярным весом 21 000 дальтон и тяжелой цепи с молекулярным весом 41 000 дальтон, соединенных вместе дисульфидной связью [76]. Он синтезируется гепатоцитами в печени в виде по-липептидной цепи, содержащей легкую и тяжелую цепи, которые соединены в единую цепь дипептидом lys-arg. Преобразование этой полипептидной цепи в протеин С сопровождается отщеплением препролидерной последовательности из 42 аминокислот сигнальными пептидазами с последующим протеолитическим расщеплением прозимоге-на в положениях -1,155,157, а также отщеплением соединяющего дипептида lys-arg. Таким образом, в процессе протеолиза одноцепочечная молекула ПрС превращается в двучепочечную, состоящей из легкой цепи с молекулярным весом 21 000 дальтон и тяжелой — с молекулярным весом 41 000 дальтон.

ПрС

і ________Тромбин

I Тромбомодулин

Активированный ПрС

Фактор VIIIa Протеин S

1

Фактор VIII неактивный Фактор Va

Фактор V неактивный

■ Рисунок 1. Схема коагуляционного каскада протеина С при инактивации факторов УШа и Уа

По аминокислотной последовательности и структуре ПрС высокогомологичен тромбину и другим витамин К-зависимыми коагуляционным факторам: фVII, ф1Х, фХ [11].

Ген ПрС расположен на длинном плече хромосомы 2 — (2q13-14/PROC [99]). По протяженности он составляет 11 килобаз и разделяется 7 интро-нами на 9 экзонов. Эти девять экзонов кодируют препролидерную последовательность белка из 42 аминокислот, легкую цепь из 155 аминокислот и тяжелую цепь из 262 аминокислот, соединенных вместе дипептидом arg-lys. Установлено, что в 5'-области гена «TATA» последовательности локализуются в положении -1785 и -1853, в 3' области гена последовательности ATTAAA и AATAAA локализуются в положениях -9022 и -9251 [121]. Размер интронов варьирует от 92 до 2668 пар нуклеотидов, а размер экзонов колеблется от 25 до 885 пар оснований. В интронах также идентифицированы регуляторные последовательности [108]. К настоящему времени известно, что интрон E содержит 2 Alu последовательности, локализованные на расстоянии 30 нуклеотидов друг от друга и имеющие ориентацию 3'-5' и 5'-3', а также 2 прямых повтора из 160 нуклеотидов, разделенных 10 нуклеотидами пока неизвестного назначения.

КАСКАДНЫЙ ПУТЬ АНТИКОАГУЛЯНТНОГО ДЕЙСТВИЯ ПРОТЕИНА С

Антикоагулянтная система ПрС является важным связующим звеном процесса свертывания крови,

объединяя сосудисто-тромбоцитарный гемостаз, коагуляционный гемостаз и фибринолиз [90]. Она включает два белка: протеин S, связанный с мембранами эндотелиальных клеток и ПрС; оба имеют также рецепторы к тромбину и тромбомодулину. ПрС в активной форме выполняет функцию антикоагулянта гидролизуя, связанные с фосфолипидами активированные факторы Vа и VШа (рис. 1) [5] .

ПрС в норме циркулирует в плазме в форме зимогена размером 70 нм в неактивной форме и проявляет антикоагулянтную активность серино-вой протеазы в виде активированного протеина С (аПрС) среднее количество которого в плазме здоровых людей около 40 пкМ (~2,3 нг/мл [56]). Переход в активированную форму (сериновую протеазу) осуществляется за счет протеолиза, катализируемого тромбином, трипсином и тромбомодулином. Активируется ПрС на поверхности эндотелиальных клеток и тромбоцитов тромбином, который при этом связывается с тромбомодулином. Активация достигается расщеплением пептидной связи Агд-12^еи в ^концевой части профермента с высвобождением 12-членного полипептида [102].

ПрС уникален среди известных белков протром-бинового комплекса, так как не содержит модифицированные остатки бета-гидроксилированной аспарагиновой кислоты (Нуа). В кофакторе ПрС протеине S Нуа содержится только в первом G-домене, три другие домена содержат остаток бета-гидроксилированного аспарагина (Нуп). Протеин S был первым белком, в котором был идентифицирован такой остаток. В настоящее время Нуа обнаружен также в белках системы комплемента

ИЛ-8

ТНФ-а

Бактерии

НТФ + УИа-

ИЛ-8

ТНФ-а

Уа + УІІІа^

ТРРІ антитромбин

тромбин

V + VIII

Тромбин Л УИа, Ха

I

ПАР-1 ПАР-2

Мультимер

ф\Л/В

Микрочастицы

Гф

Тромбоциты

Циркулирующие

эндотелиальные

клетки

мультимер

ф\л/в

Клетки эндотелия

Апоптоз

клеток

эндотелия

Усиление

проницаемости

сосудов

■ Рисунок 2. Схема взаимодействия антикоагулянтных и цитопротективных каскадов протеина С [по М. Schouten еі а1, 2008, с изменениями]

Обозначения: аПрС — активированный протеин С; ТМ — тромбомодулин; ЭРПС — эндотелиальный рецептор протеина С; ПАР-1, ПАР-2 — протеазоактивируемыерецепторы, связывающие аПрС и индуцирующий его цитопротек-тивные эффекты; ИЛ-6 и ТНФ-а — провоспалительные цитокины; ф^В — фактор Виллебранда.

С1г и Сів , в тромбомодулине и в некоторых других белках.

В соответствии с современными представлениями ПрС и протеин S образуют стехиометрический (1 : 1) комплекс [35, 85], связанный с заряженными фосфолипидами на поверхности эндотелиальных клеток. При этом протеин S увеличивает сродство ПрС к клеточной мембране и повышает его активность в десятки тысяч раз. Прямое взаимодействие этих белков осуществляется на поверхности мембран эндотелиальных клеток и тромбоцитов, как нативных, так и активированных различными агонистами.

Установлено, что на поверхности клетки локализовано и индуцируется множество биохимических преобразований, в которые вовлекается ПрС и различные клеточные белковые рецепторы. Эти биохимические реакции включают активацию ПрС, которая приводит к усилению антикоагулянтной активности аПрС и инициации цитопротективных действий аПрС (рис. 2).

Физиологическая протеолитическая активация тромбином ПрС происходит на поверхности эндотелиальных клеток, в этот процесс вовлекаются два мембранных рецептора: тромбомодулин и эндотелиальный рецептор ПрС (ЭРПС) [35, 50] (рис. 3).

В качестве антикоагулянта аПрС раскалывает активированные факторы Уа и УШа , чтобы превратить в инактивированные кофакторы фУ и фУШ. Инактивация факторов Уа и У111а при помощи аПрС усиливается белковыми кофакторами (протеином S, фактором У) и различными липидными кофакторами (фосфатидилсерином, кардиолипидом, гликозилце-рамидом, ЛПВП) [32, 35, 46, 48, 90].

Образование комплекса тромбин-тромбомодулин на эндотелиальной поверхности происходит при участии тромбинового прокоагулянтного экзосайта I [45]. Затем присоединяясь к аПрС комплекс тромбин-тромбомодулин индуцирует антикоагулянтные свойства аПрС. Эта реакция усиливается локализацией комплекса на поверхности эндотелия при помощи связи аПрС с ЭРПС [117, 132]. Осуществление других полезных действий аПрС, в которых задействованы прямые эффекты аПрС на клетки, требует взаимодействия клеточных рецепторов ЭРПС и ПАР-1. Рецепторы ПАР являются связанными с G-белком рецепторами и активируются протеолитическим отщеплением Ы-терминальной внеклеточной части, затем ПАР формирует внутримолекулярный привязанный лиганд, являющийся триггером для внутриклеточных сигналов

[28]. В реакциях, требующих ЭРПС, аПрС может активировать ПАР-1 на клетках эндотелия а ПАР-1 и ПАР-2

научные обзоры

■ Рисунок 3. Схема преобразования протеина C в активную форму при участии тромбин-тромбомодулина и эндотелиального рецептора ПрС

Обозначения: ТМ — тромбомодулин; ПрС — неактивная форма протеина С; аПрС — активированный протеин С: IIa — коагуляционный фактор тромбин; ЭРПС — эндотелиальный рецептор ПрС.

на трансфекционных клетках, хотя до настоящего времени только при активации ПАР-1 продемонстрировано изменение функциональной активности клеток [25, 34, 89, 105]. В присутствии ЭРПС аПрС вызывает ПАР-1-зависимое МПРК-фосфорилирование, увеличивает внутриклеточные потоки кальция и модулирует ПАР-1-специфическую экспрессию генов в эндотелиальных клетках [34, 105, 106]. Связанный с рецепторами ЭРПС и ПАР-1 аПрС ингибирует гипоксию/гипогликемию или апоптоз, вызванный стауроспорином в различных типах эндотелиальных клеток [24, 69, 87]. Это указывает на то, что в присутствии ЭРПС аПрС может вызвать воздействуя через ПАР-1 в клетках эндотелия трансдукцию через соответствующие внутриклеточные сигналы.

МЕХАНИЗМ ЦИТОПРОТЕКТИВНЫХ ДЕЙСТВИЙ АПРС

В реакциях, опосредуемых ЭРПС, эффекторным рецептором 1 [35] и активированным рецептором ПАР-1 [126], аПрС воздействует непосредственно на клетки, проявляя этим самым различные цито-протективные эффекты, включая: 1 — изменение уровня экспрессии генов; 2 — противовоспалительную активность; 3 — антиапоптозную активность; 4 — защиту функции эндотелиального барьера

(рис. 6) [24, 33, 69, 87, 105]. Как следует из схем, представленных на рисунках 2 и 3, каскадный путь антикоагулянтного действия и цитопротективный каскадный путь отличаются не только по названию биологических эффектов, но и по названиям субстратов и кофакторов. Так субстратами для антикоагулянтного действия аПрС являются факторы Va и Villa, в то время как для цитопротективного действия — ПАР-1. Мы хотели бы подчеркнуть наличие явного различия между цитопротективным каскадом и антикоагулянтным каскадом действий ПрС, потому что эта отличительная особенность будет полезна для интерпретации доклинических и клинических исследований и также экспериментов in vitro. Кроме того, это различие послужило основанием для получения генноинженерных вариантов аПрС с селективной специфичностью связывания с фактором Va и с рецептором ПАР-1 [45, 47]. Такие генноинженерные образцы аПрС смогли облегчить проведение экспериментов для доказательства различия между прямым влиянием аПрС на клетки и его антикоагулянтным действием.

В настоящее время установлено, что распределение ЭРПС и тромбомодулина на клетках разных тканей является неодинаковым. Наблюдаются более высокие уровни ЭРПС на поверхности эндотелия больших сосудов по сравнению с небольшими сосудами, тогда как тромбомодулина больше на

поверхности эпителия малых сосудов и меньше на эндотелии больших сосудов [9, 30, 35, 78, 87]. Нет пока исследований, в которых была бы определена клеточная локализация ЭРПС относительно тромбомодулина и ПАР-1 в клетках разных типов. Интересно экспериментально установить также степень прочности, до которой тромбомодулин и ЭРПС укреплены в слоях липидной мембраны в тех тканях, где активация ПрС может быть ограничена по сравнению с парной локализацией ПАР-1 и ЭРПС. Такие данные позволят сделать вывод о тканевой специфичности антикоагулянтного действия ПрС при сравнении степени усиления цитопротектив-ного действия аПрС.

И антикоагулянтные и цитопротективные каскады действий ПрС в равной степени важны для интерпретации полезных эффектов аПрС на разных уровнях регуляции этих эффектов. Каскадный путь антикоагулянтного действия аПрС акцентирован на инактивации факторов Va и Villa, в котором задействованы белок и липидные кофакторы (рис. 1 и 3). Поэтому до недавнего времени, исследователи считали, что системная антикоагулянтная активность аПрС опосредует его благотворный противовоспалительный эффект, потому что этим путем аПрС регулирует производство тромбина, противовоспалительные свойства которого давно установлены. Однако, современнные результаты клинических исследований и основные лабораторные данные изменили эту точку зрения и стимулировали исследование каскадного пути цитопротективного действия ПрС. В клинических исследованиях было установлено, что именно эта способность аПрС, но не антикоагулянта антитромбина Ill, тканевых факторов или ингибиторов каскадного пути ведет к уменьшению сроков лечения сепсиса у тяжелых септических пациентов в рандомизированных контролируемых исследованиях 3-й фазы лечения по протоколу PROWESS [4, 6, 12, 128]. В лабораториях, которые широко использовали в опытах in vitro и in vivo модели ишемического инсульта на крысах было установлено, что нейропротективные эффекты аПрС, по крайней мере частично, независимы от антикоагулянтной активности аПрС [25]. Однако, более поздние исследования показали, что препараты аПрС со строго уменьшенной активностью антикоагулянта предотвращают смерть мышей при моделировании эндотоксемии [37, 75]. Эти разные наблюдения подтверждают предположение, что цитопротективные эффекты аПрС полезны in vivo и что они, по крайней мере, частично, независимы от антикоагулянтной активности аПрС [75, 89, 93]. Анализ современных работ показывает, что при непосредственном действии аПрС на клетки его цито-

протективные эффекты проявляются в: изменении уровня экспрессии генов; противоспалительной активности; антиапоптозной активности и стабилизации эндотелиального барьера. Хотя потенциально существует вероятность, что они взаимодействуют, однако каждый из этих эффектов аПрС значительно отличается друг от друга, и по всей видимости, не вовлекает те же самые внутриклеточные механизмы с их специфическими характеристиками дозированной реакции аПрС. Эта реакция, в свою очередь, зависит от конфигурации клеточного рецептора ЭРПС и его специфической локализации на клетке, от состояния или специфических свойств клетки. Так, например, ЭРПС требуется больше всего в том случае, если известны не все цитопро-тективные эффекты аПрС и поэтому участие ПАР-1 также необходимо учитывать во многих из эффектов аПрС. Рассмотрим подробнее каждый из этих важнейших цитопротективных эффектов.

1. Модуляция экспрессии генов

Изучение транскрипционной активности для оценки экспрессии генов, вызванное обработкой клеток при помощи аПрС, раскрыло модуляцию экспрессии генов для главных каскадных путей воспаления и апоптоза [25, 44, 70, 71, 106, 107]. Доказано, что эффекты аПрС включают прямое регулирование противоспалительного и антиапоптозного каскада сверху-вниз и обратное регулирование снизу-вверх противовоспалительного и антиапоптозного каскада (рис. 4 и 5), что позволяет объяснять противовоспалительные и антиапоптозные эффекты аПрС. АПрС подавляет транскрипцию ядерного фактора кВ модулированных NF^ генов, непосредственно уменьшая экспрессию NF^ и, таким образом, понижает функциональную активность клетки. Это вызывает ингибирование цитокинового сигнала, ингибирование а-ТНФ и зависимой индукции молекул адгезии. АПрС регулирует также антиапоптозные генные продукты, связанные с Bcl-2 и подавляет антиапоптозный р53 и экспрессию Bax [25, 44, 71].

Действие аПрС на уровень экспрессии генов осуществляется по крайней мере частично благодаря ингибированию активности факторов транскрипции. Показано, что аПрС подавляет активированные воспалением факторы транскрипции активатора протеина-1 (АП-1) семейства c-Fos и FosB [21], которые непосредственно индуцируют межклеточную молекулу-1 адгезии (1САМ-1) и хемоантрактантный белок-1 моноцитов (МХБ-1) в клетках эндотелия, так же как и с-Rel, принадлежащий к семейству NF^ [70].

Точные молекулярные механизмы действия аПрС на экспрессию генов остаются пока невыясненными, хотя установлено, что большая часть моду-

■ Рисунок 4. Противовоспалительная активность аПрС как проявление цитопротективного эффекта Обозначения: Мас-1 — лейкоцитарный интегрин CD11b/CD18; ПР3 — протеаза 3; рЭРПС — растворимый эндотелиальный рецептор протеина С.

ляции уровня экспрессии генов при помощи аПрС опосредована ЭРПС-зависимой активацией ПАР-1. Следует заметить, что аПрС-вызванные изменения экспрессии генов, для которых требовался ПАР-1, заметно не отличались от аналогичных изменений, вызванных тромбином, когда эффекты этих 2-х протеаз изучались in vitro на не стимулиронных клетках эндотелия. Однако, после стимуляции эндотелиальных клеток при помощи ФНО-а, некоторые из эффектов аПрС на экспрессию генов отличались от эфектов вызванных действием тромбина [22, 106]. Регулируемый тромбином уровень мРНК p53 снижался значительно сильнее, чем при действии аПрС [25]. Подобные результаты наблюдались при изучении экспрессии тромбоспондина-1, которая регулировалась при помощи аПрС, но не тромбином [79, 83, 106]. Показано, что аПрС но не тромбин осуществляет регуляцию экспрессии мРНК p53 по каскадному пути сверху-вниз [34, 106].

Таким образом, у подвергнутых стрессу клеток эндотелия эффекты изменения транскрипции под действием аПрС и тромбина очевидно не совпадают, хотя они оба могут активировать один и тот же рецептор ПАР-1. Имеющиеся результаты не дают ясности, как агонисты двух протеаз могут активировать соединенный с G-белком тот же самый рецептор ПАР-1. Из анализа этих данных ясно, что аПрС изменяет транскрипцию мРНК через механизмы, которые, по крайней мере, частично, отличаются от механизма, объясняющего действие тромбина.

2. Противовоспалительная цитопротективная активность аПрС

Противовоспалительные эффекты аПрС включают: действие аПрС непосредственно на клетки сосудистого эндотелия и действие аПрС на циркулирующие лейкоциты крови (рис. 4). Ингибирование экспрессии генов при воспалении в клетках

■ Рисунок 5. Схема участия аПрС в антиапоптозных эффектах.

Обозначения: активация аПрС требует рецепторов ЭПРС и ПАР-1; частично зависит от модуляции генной экспрессии (широкая стрелка). АПрС регулирует по нисходящей проапоптозный белок р53 и белок Вах и поддерживает защитный уровень антиапоптозного белка Вс1-2 (Т-образные стрелки), изменяя соотношение Вах/Вс1-2 и ингибируя активацию (заостренные стрелки) обоих инициаторов каспаз так же, как и активацию эффекторов каспаз. Заостренные с двух сторон стрелки указывают на стимуляцию и ингибирование, черные стрелки/блоки обозначают стимуляцию/ингибирование основного направления реакции

эндотелия при помощи аПрС осуществляется при участии ЭРПС и ПАР-1. Процесс воздействия аПрС на клетки эндотелия включает ингибирование выпуска медиатора воспаления и регулирование каскада сосудистых млекул адгезии, уменьшая тем самым адгезию лейкоцитов и тканевую инфильтрацию, что ограничивает повреждение основной ткани. Кроме того, аПрС защищает и поддерживает нормальную функцию эндотелиального барьера а также уменьшает хемотаксический потенциал нескольких мощных хемотаксических агентов [38, 42, 92, 97, 142].

Установлено, что аПрС ингибирует выпуск медиатора воспаления как из эндотелиальных клеток, так и из лейкоцитов. Уменьшая выпуск цитокинов таких как ФНО-а и ИЛ-1 в из лейкоцитов аПрС может, таким образом, понизить инициацию реакции системного воспаления. Можно предположить, что это действие аПрС на клетки человека может уменьшить так называемый «шторм» цитокинов

[74], который, как известно, связан с сепсисом. В ряде экспериментов установлено, что аПрС ингибирует индуцированную ЛПС продукцию моноцитами противовоспалительных медиаторов [20, 57, 130, 140].

АПрС также регулирует экспрессию сосудистых молекул адгезии (ІСАМ-1, VCAM-1 и Е-селектин) на поверхности эндотелия в присутствии медиаторов воспаления, таким образом ограничивая адгезию и инфильтрацию лейкоцита. Однако, точные механизмы воздействия аПрС на лейкоциты при возникновении противоспалительных эффектов не совсем ясны, хотя имеющиеся данные указывают на важную роль рецептора ЭРПС [114, 115, 119, 139]. Показано, что ЭРПС находится на поверхности моноцитов, натуральных киллеров (CD56+), нейтрофилов и ацидофильных гранулоцитов, но отсутствует на поверхности Т- и В-клеток [38, 49, 72, 119]. Интересно, что растворимый внемем-бранный EPCR, не имея трансмембранной спирали

■ Рисунок 6. Схема участия аПрС в стабилизации эндотелиального барьера.

Обозначения: АПС — активированный протеин С; ПАР-1 — протеазоактивируемый рецептор; SphK-1 — сфингозинкиназа-1; S1P — сфингозин-1-фосфат, экскретируемый из активированных тромбоцитов; SlP1 — рецептор сфингозинфосфата для связи с G-белком

нативного ЭРПС взаимодействует с комплексом интегрина Mac-1 (CD11b/CD18), расположенном на лейкоцитах, из чего следует, что привязывание растворимого ЭРПС к CD11b/CD18 могло осуществляться за счет адгезии лейкоцита (рис. 2) [78]. Протеаза 3 (ПР3), сериновая протеаза с эластазо-подобными свойствами, присутствующая в гранулах нейтрофилов, также связывает и CD11b/ CD18 и растворимый ЭРПС. Активность ПР3 на плазматической мембране нейтрофилов возрастает при возбуждении нейтрофила. Можно выдвинуть предположение, что ПР3 может опосредовать привязывание растворимого ЭРПС к CD11b/CD18, обнаружить доказательства функциональной роли самого комплекса ЭРПС-ПР3-CD11b/CD18 пока не удалось. Однако, так как растворимый комплекс ЭРПС -ПР3 связывает ПрС и аПрС, то возможно, что этот комплекс может инициировать клеточные сигналы аПрС и/или активацию ПрС на лейкоцитах [75, 77].

Исследование свежих ран согласуется с гипотезой, что аПрС ингибирует выпуск цитокинов лейкоцитами, а также хемотаксис лейкоцитов и их миграцию in vivo. И у крыс и у человека аПрС ингибирует, вызванное эндотоксином воспаление и повреждение легких, по крайней мере, частично, через ингибирование хемотаксиса и накопления лейкоцитов

[92, 97]. У крыс на модели повреждения спинного мозга, вызванные компрессией, аПрС уменьшает уровни а-ТНФ, накопление нейтрофилов и снижает моторные растройства [121]. Однако, нужно отметить, что накопление нейтрофилов увеличивается и при фибринолизе. Следовательно, антикоагулянт-ное действие аПрС, которое уменьшает образование тромбина, косвенно может понижать накопление нейтрофилов в тканях и, таким образом, уменьшать отложение фибрина.

В экспериментах in vivo показано, что аПрС продлевает время циркулирования моноцитов при помощи ингибирования спонтанного апоптоза моноцитов [71, 118]. Полезно ли продление времени жизни моноцитов во время сепсиса, спорный вопрос, поскольку последовательный длительный выпуск медиатора воспаления может увеличить повреждение ткани и усилить реакцию воспаления. С другой стороны, непосредственная реакция хозяина на вторжение микроорганизмов и устранение препятствий для промежуточного фагоцитоза патогенных микроорганизмов выиграли бы от снижения количества моноцитов. Ингибирование апоптоза моноцитов при помощи аПрС требует рецепторов ЭРПС и ПАР-1, что сопоставимо с результатами по ингибированию апоптоза в клетках эндотелия [119]. Селективное ингибирование выпуска

противовоспалительного медиатора моноцитами при помощи аПрС, снижает антибактериальную фагоцитарную активность интактных моноцитов и этот факт позволяет предположить, что действие аПрС по блокированию апоптоза в моноцитах, вероятно, в целом содействует усилению противовоспалительного эффекта [51].

Эксперименты in vivo по изучению противовоспалительных и нейропротективных эффектов аПрС показали, что для этого требуются ПАР-1 и ЭРПС

[29]. Используя модифицированные аПрС из крыс и мышей, имевшие целенаправленные делеции в генах ПАР-1 (т. е. строго дефицитными по ЭРПС) показали, что ПАР-1 и ЭРПС необходимы для фармакологической коррекции при помощи аПрС благоприятных воздействий на мышах in vivo при моделировании ишемического инсульта [25, 26, 57, 81]. ПАР-3 в нейронах крыс, по-видимому, действует в роли поддержки опосредованного аПрС цитопро-тективного эффекта как дополнение к ПАР-1 [58]. Установлено, что тромбин активируют тромбоциты человека через ПАР-1 и ПАР-4, в то время как тромбоциты мышей активируются через ПАР-3 и ПАР-4 [73, 95]. Отметим, что ПАР-3 у крыс, непосредственно не активируется тромбином для того, чтобы генерировать клеточный сигнал и поэтому можно предположить, что он служит кофактором в процессе протеолитической активации тромбином ПАР-4 [92]. Такая специфика различий могла бы усложнить сравнение данных о роли механизма специфичности ПАР, используя для сравнения данные, полученные на моделях раны на крысах с результатами лечения, наблюдаемыми у людей. Таким образом, очевидно, что польза от фармакологического использования аПрС продемонстрированная на различных моделях раны находится в прямой зависимости от ПАР-1, поскольку механизм его действия в цитопротективных эффектах был тщательно изучен.

3. Антиапоптозная активность аПрС

Апоптоз — это высоко отрегулированный процесс, выполняющий эффективную детерминированную программу смерти клетки [55, 104]. Апоптозные сигналы, приходящие изнутри клетки, активизируют внутренний путь в ответ на клеточный стресс (например, при гипоксии) и выход цитохрома С из митохондрии с последующей активацией прокаспазы 3 — ключевого этапа сложного каскада процесса гибели [1, 17]. Ключевые регуляторы, такие как белок p53 супрессор опухоли и семейство белков Bcl-2 контролируют роль митохондрии как щита-распределителя сигналов апоптоза и сигналов жизни. Активация внешнего пути апоптоза, который осуществляется через активацию инициа-

тора каспаз-прокаспазы 8, зависит как от рецепторов смерти (CD95), связанных с мембраной, так и от иницирующих сигналов внеклеточной среды. Внешний каскад апоптозного пути может также использовать элементы внутренего каскада или через активацию проапоптозных элементов семейства Bcl-2 или непосредственно активировать каскад программированной гибели при помощи активации прокаспазы 3 (рис.). Независимо от того, активируется внутренний или внешний каскад, разрушение каспазой 3 специфических клеточных субстратов приводит к характерным признакам апоптоза: морфологическим и биохимическим индикаторам клеточной гибели [17, 55, 104].

АПрС проявляет антиапоптозные эффекты in vitro и in vivo и эта его деятельность требует ферментативной активации сайта аПрС и его рецепторов ЭРПС и ПАР-1 (рис. 5) [25, 70, 82, 88].

На моделях раневых повреждений крысы продемонстрировано, что ингибируя апоптоз, аПрС обеспечивает нейропротекцию. Установлено, что редукция апоптоза связана с сокращением продолжительности сепсиса, поэтому можно предположить, что антиапоптозная активность аПрС может играть важную роль в сокращении сроков выхода пациента из сепсиса [63, 129].

Показано, что аПрС снижает уровни многих индикаторов апоптоза, включая деградацию ДНК, активацию каспазы 3 и перемещение фосфатидилсе-рина к внешней мембране клетки [27, 70, 90, 104]. К настоящему времени внутриклеточные мишени специфичные для аПрС, которыми опосредуется ингибирование апоптоза, не идентифицированы. Однако, в эндотелиальных клетках возбужденного мозга человека, действия аПрС уменьшают количество белка p53 и мРНК, вызванных гипоксией [27]. Следует при этом отметить, что каскадная регуляция комплексом ПАР-1-аПрС-ЭПРС контролируется небольшим количеством генных продуктов, таких как p53 и тромбоспондин-1, что отличитает этот процесс от регуляции тромбином [108]. Кроме того во время гипоксического стресса мозга в клетках эндотелия аПрС снижает регуляцию проапоптозного Bax и поддерживает уровни защитного белка Bcl-2, таким образом ослабляя стимуляцию апоптозного каскада по внутреннему пути [104].

Антиапоптозные эффекты аПрС не лимитированы внутренним апоптозным каскадом, поскольку аПрС противодействует нейротоксичности тканевого активатора плазминогена (ТАП), который проявляет проапоптозную активность через внешний апоптозный каскад [82]. При регулировании ТАП-вызванного апоптоза клеток мозга аПрС ингибирует активацию каспазы 8, показывая тем самым,

когда или внешний или внутренний апоптозные каскады активированы в мозге. Таким образом, антиапоптозными эффектами аПрС подтверждает свою обширную цитопротективность как in vitro так и in vivo.

Дальнейшие исследования в этом направлении необходимо продолжить для того, чтобы выяснить окончательно, как аПрС проявляет антиапоптозную активность и лимитирована ли эта деятельность влиянием аПрС на экспрессию генов или могут быть и другие аддитивные эффекты, такие, например, как специфический для аПрС сигнал или рецепторы протеолиза специфичные для аПрС.

4. Стабилизация эндотелиального барьера

Расстройство функций эндотелиального барьера — ключевой фактор в патогенезе воспаления. Последствиями увеличенной проницаемости эндотелиального барьера могут быть образование опухоли, гипотония и содействие развитию воспаления и эти процессы могут способствовать обширному развитию сепсиса, острой ране легкого и полиорганной недостаточности [23, 86]. АПрС ставит мощный защитный барьер, вызывая активацию ПАР-1- ЭРПС и регулируя образование сфингозин-1-фосфата при помощи сфингозинкиназы (рис. 6) [39, 42, 85].

Сфингозинфосфат — это биологически активный сфинголипид, который соединяясь через рецептор S1P1 с G-белком, передает сигнал дифференци-ровочным генам эндотелия. Активация рецептора S1P1 посредством сфингозинфосфата уменьшает эндотелиальную проницаемость и стабилизирует клеточный цитоскелет через стабилизацию элементов цитоскелета, которая зависит от модуляции ГТФ-аз семейства Rho и митогенстимулированных протеинкиназ (МПРК) [23, 86, 116].

Защита функции эндотелиального барьера при помощи аПрС требует рецепторов ЭПРС и ПАР-1 [39, 42]. Прямое взаимодействие ЭПРС с S1P1 постулируется, но механизм содействия для защитных эффектов эндотелиального барьера остается неясным (знак вопроса на рис. 6) [42]. В дополнение к защитным эффектам, сфингозинфосфат также предопределяет выживание клетки. В противоположность этому, церамид и сфингозин способствуют сигналам, вызывающим смерть клетки. Динамическое равновесие между формированием и деградацией церамида, свингозина и сфингозинфосфата осуществляет свинголипидный «реостат», а параметры регулировки этого реостата балансируют сигналы, инициирующие смерть или предотвращающие смерть клетки. В настоящее время неясно, способствует ли сфингозинфосфат сигналам выживания клетки в антиапоптозной активности аПрС через

другие цитопротективные связи S1P1 процесса усиления защиты эндотелиального барьера.

Установлено, что для усиления защиты эндотелиального барьера при помощи аПрС требуется также ПАР-1. Заметим, что устойчивое связывание ПАР-1 непосредственно с тромбином приводит к дестабилизации эндотелиального барьера, в то время как активация ПАР-1 через эффекты аПрС приводит к стабилизации барьера [39]. Различия в действии на эндотелиальный барьер, опосредуемые тромбином и аПрС, зависят от уровня индукции S1P, от концентрации селективных рецепторов вторичных мессенджеров Rac (защитных), от сигналов Rho (дестабилизирующих) и от вовлечения SIPI-рецепторов в микродомены, богатые кавео-лином [116]. Результаты опытов выполненных in vitro свидетельствуют, что наблюдаемое функциональное взаимодействие ЭПРС с S1P1 связано со стабилизацией эндотелиального барьера [42]. Эти защитные эффекты аПрС, могут быть более эффективными при дополнительном поступлении эндогенного аПрС [40]. Эти факты свидетельствуют о наличии нового механизма связи между ци-топротективным каскадом протеина С и каскадом сфингозинфосфат-опосредованной модуляции эндотелиального барьера [42, 103].

Но не только сфингозинфосфат усиливает стабильность эндотелиального барьера, используя в качестве посредников, антиапоптозные сигналы. Установлено, что гликозилцерамид, главный метаболический продукт церамидов, увеличивает антикоа-гулянтную активность аПрС [33, 138] — это позволяет предположить, что взаимодействие между регуляторным каскадом свинголипидов и каскадом протеина С должно быть более сложным и играет более существенную роль, чем было известно раньше.

ДЕФЕКТЫ ГЕНА ПРОТЕИНА С -ПАТОЛОГИЯ СИСТЕМЫ КОАГУЛЯЦИИ

Ген ПрС человека расположен на длинном плече хромосомы 2 (2q13-q21/PROC — serine protease destroying coagulation factors Va and Villa) [98]. Он содержит 5'-некодирующую область из 73 нуклеотидов, область для кодирования 461 аминокислотного остатка, включая 33 аминокислоты сигнальной последовательности, 9 аминокислот пропептида, 427 аминокислот пептида и З'-некодирующую область из 296 нуклеотидов а также 38 оснований сайта по-лиаденилирования. Первая мутация в гене протеина C была выявлена в 1981 году [52]. К настоящему времени в гене протеина C выявлено более 100 мутаций (табл. 1).

■ Таблица 1. Идентифицированные мутации в гене протеина C человека

1) Мутации в промоторной области

Номер нуклеотида Замена нуклеотидов Кем и когда определены

-1533 A-G Greengard J. S., 1994

-1520 T-A Poort S. R., 1993

-1515 T-C Berg L. P, 1993

-1511 C-T Greengard J. S., 1994

-1480 G-A Soria J. M., 1994

-17 G-C Soria J. M., 1994

-14 T-C Berg L. P, 1994

2) Missence мутации

Экзон Кодон Замена нуклеотидов Замена аминокислот Кем и когда определены

2 -42 ATG-ACG met-thr Zheng Y. Z.,1994

2 -40 CAG-CCG gln-pro Gandrille S.,1994

2 -34 CTG-CCG leu-pro Gandrille S.,1994

2 -29 TGG-GGG trp-gly Poort S. R.,1993

3 -17 GTG-ATG val-met Long G. L.,1994

3 -11 CGT-TGT arg-cys Ireland H.,1993

3 -5 CGG-TGG arg-trp Gandrille S.,1993

3 -3 CGC-TGC arg-cys Gandrille S.,1994

3 -1 CGT-TGT arg-cys Gandrille S.,1993 Gandrille S.,1992 Girolami A.,1993

3 -1 CGT-CAT arg-his Gandrille S.,1991 Lind B.,1993

3 9 CGT-TGT arg-cys Sala N.,1991

3 12 AGC-TGC ser-cys Tait R. C.,1994

3 12 CGG-TGG arg-trp Matsuda M.,1988

3 15 CGG-TGG arg-trp Lind B.,1993 Gandrille S.,1991

3 15 CGG-GGG arg-gly Mimuro J.,1993

3 15 CGG-CAG arg-gin Gandrille S.,1991

3 20 GAG-GCG glu-ala Bovill E. G.,1992

3 25 GAG-CAG glu-gin Long G. L.,1994

3 25 GAG-AAG glu-lys Ido M.,1993

3 34 GTG-ATG val-met Bovill E. G.,1992

4 40 TTC-TTA phe-leu Gandrille S.,1994

5 47 GGT-TGT gly-cys Grundy C. B.,1994

5 54 CCC-TCT pro-ser Soria J. M.,1994

5 66 CAC-AAC his-asn Tsay W.,1991

5 67 GGC-CGC gly-arg Poort S. R.,1994

5 72 GGC-CGC gly-arg Poort S. R.,1994

5 72 GGC-TGC gly-cys Witt I.,1994

5 76 TTC-CTC phe-leu Reitsma P. H.,1991

5 78 TGC-GGC cys-gly Tait R. С.,1994

5 87 CGC-CAC arg-his Sala N.,1993

6 103 GGC-CGC gly-arg Greengard J. S.,1994

■ Таблица 1 (продолжение). Идентифицированные мутации в гене протеина С человека

Экзон Кодон Замена нуклеотидов Замена аминокислот Кем и когда определены

6 105 TGC-TAC cys-tyr Reitsma P. H.,1991

6 107 CAT-CCT his-pro Hasstedt S. J.,1998

6 118 TGT-TAT cys-tyr Long G. L.,1994

6 119 AGC-AGG ser-arg Reitsma P. H.,1991

6 124 TAC-TGC tyr-cys Estelles A.,1984

6 136 GCA-CCA ala-pro Dreyfus M.,1991 Long G. L.,1994

7 139 TTC-CTC phe-leu Tait R. C.,1994

7 141 TGT-CGT cys-arg Reitsma P. H.,1991

7 141 TGT-TAT cys-tyr Witt I., 1994

7 147 CGG-TGG arg-trp Tsay W.,1991

7 152 CGC-TGC arg-cys Gandrille S.,1990

7 168 CCG-CTG pro-leu Conard J.,1992 Gandrille S.,1991

7 169 CGG-TGG arg-trp Foster D. C.,1985 Matsuda M.,1988 Grundy C., 1989 Ireland H.,1993 Marchetti G.,1993 Witt I., 1994 Lensing A. W. A.,1999 Alhenc-Gelas M.,2000

7 169 CGG-CAG arg-gln Poort S. R.,1993

7 178 CGG-TGG arg-trp Reitsma P. H.,1991 Sala N.,1991

7 178 CGG-CAG arg-gln Grundy C. B.,1992 Gandrille S.,1990 Gandrille S.,1991 Gandrille S.,1993 Poort S. R.,1993 Sala N.,1991 Soria J. M.,1992 Soria J. M.,1996

7 184 CAG-CAC gln-his Soria J. M.,1994 Lind B.,1993

8 197 GGG—GAG gly-glu Gandrille S.,1994

8 201 ATC-ACC ile-thr Greengard J. S.,1994

8 202 CAC-TAC his-tyr Poort S. R.,1993

8 211 CAC-CAA his-gln Poort S. R.,1993 Witt I.,1994

8 223 CTT-TTT leu-phe Reitsma P. H.,1991 Gandrille S.,1991 Gandrille S.,1993

9 225 GAG—CAG glu-gln Witt I.,1994

9 229 CGG-TGG arg-trp Salab N.,1991

9 229 CGG-CAG arg-gln Gandrille S.,1991 Grundy C. B.,1992 Gaussem P. ,1994

9 230 CGC-TGC arg-cys Broekmans A. W.,1983 Reitsma P. H.,1991 Bertina R. M.,1982

9 232 GAG—AAG glu-lys Gandrille S.,1994

■ Таблица 1 (продолжение). Идентифицированные мутации в гене протеина С человека

Экзон Кодон Замена нуклеотидов Замена аминокислот Кем и когда определены

9 247 CCC-CTC pro-leu Grundy C. B.,1992

9 252 AGC-AAC ser-asn Tsay W.,1991 Gandrille S.,1991 Gaussem P.,1994

9 256 AAT-GAT asn-asp Poort S. R.,1994

9 259 GCA-GTA ala-val Grundy C. B.,1991

9 267 GCC-ACC ala-thr Conard J.,1992

9 270 TCG-CCG ser-pro Gandrille S.,1993

9 270 TCG-TTG ser-leu Poort S. R.,1994

9 279 CCG-TCG pro-ser Tait R. C.,1994

9 279 CCG-CTG pro-leu Poort S. R.,1993

9 282 GGC-AGC gly-ser Doig R. G.,1994

9 282 GGC-CGC gly-arg Lind B.,1993

9 286 CGC-TGC arg-cys Poort S. R.,1993 Lind B.,1993

9 286 GGC-CAC arg-his Long G. L.,1994

9 292 GGC-AGC gly-ser Reitsma P. H.,1991 Yamamoto K.,1992

9 293 CAG-CAC gln-his Gandrille S.,1994

9 297 GTG-ATG val-met Millar D. S.,1993

9 298 ACG-ATG thr-met Bovill E. G.,1989 Tomczak J. A.,1994 Ireland H.,1993

9 298 ACG-AAG thr-lys Gandrille S.,1994

9 301 GGC-AGC gly-ser Conard J.,1992

9 301 GGC-GTC gly-val Tait R. C.,1994

9 314 CGC-TGC arg-cys Witt I., 1994

9 318 CTC-TTC leu-phe Gandrille S.,1994

9 323 ATT-TTT ile-phe Gandrille S.,1994

9 325 GTG-GCG val-ala Witt I., 1994

9 327 CCG-CTG pro-leu Lind B.,1993 Zheng Y. Z.,1994

9 342 AAC-AGC asn-ser Witt I.,1994

9 343 ATG-ATA met-ile Poort S. R.,1993

9 346 GCG-ACG ala-thr Poort S. R.,1993

9 346 GCG-GTG ala-val Poort S. R.,1993

9 350 GGG-AGG gly-arg Zheng Y. Z.,1994

9 352 CGG-TGG arg-trp Rintelen C.,2001

9 359 GAC-AAC asp-asn Zheng Y. Z.,1994

9 364 ATG-ATA met-ile Yamamoto K.,1992

9 371 ACC-GCC thr-ala Tait R. C.,1994

9 376 GGC-GAC gly-asp Sugahara Y.,1992

380 Levo A.,2000

9 381 GGT-AGT gly-ser Marchetti G.,1993

9 382 GAG-AAG glu-lys Koster T.,1994

9 383 GGC-TGC gly-cys Sala N.,1993 Sala N.,1987

■ Таблица 1 (продолжение). Идентифицированные мутации в гене протеина С человека

Экзон Кодон Замена нуклеотидов Замена аминокислот Кем и когда определены

9 384 TGT-TAT cys-tyr Greengard J. S.,1994

9 385 GGG—CGG gly-arg Miyata T.,1994

9 391 GGC-AGC gly-ser Sala N.,1993

9 393 TAC-AAC tyr-asn Witt I.,1994

9 394 ACC-CCC thr-pro Soria J.M.,1994

9 394 ACC-AAC thr-asn Ireland H.,1993

9 398 CGC-CAC arg-his Tait R. C.,1994

9 399 TAC-TCC tyr-his Zheng Y. Z.,1994

9 402 TGG-TGC trp-cys Romeo G.,1987 Gonzalez R.,1985

9 403 ATC-CTC ile-leu Gandrille S.,1994

9 403 ATC-AT ile-met Reitsma P. H.,1991 Gandrille S.,1993

3) Nonsense мутации

2 -29 TGG-TAG trp-ter Griffin J. H.,1981

5 49 CAG-TAG gln-ter Soria J. M.,1994

5 92 GAG-TAG glu-ter Roort S. R.,1995

6 105 TGC-TAC cys-ter Reitsma R H.,1991

6 132 CAG-TAG gln-ter Reitsma R H.,1991 Estelles A.,1984

7 145 TGG-TAG trp-ter Greengard J. S.,1994

7 157 CGA-TGA arg-ter Gandrille S.,1990, 1991

9 306 CGA-TGA arg-ter RomeoG.,1987 Reitsma R H.,1991

4) Silent мутации

7 178 CGG-CGA arg-arg Reitsma R H.,1991

7 184 CAG-CAA gln-gln Roort S. R.,1994

5) Cплайсинговые мутации

Hомер нукл. Интрон Замена нуклеотида Донор/акцепторныйучасток

-93 A C-T Tomczak J. A.,1994

-26 A C-T as Tait R. C.,1994

74 B A-G ds Gandrille S.,1994

1317 B C-T З'конец Long G. L.,1994

1503 C A-G Soria J. M.,1994

3052 D T-G Tomczak J. A.,1994

3076 D G-A as Tait R. C.,1994

3222 E G-A ds Reitsma P. H.,1991

3222 E G-A ds Gandrille S.,1994

3222 E G-T ds Reitsma P. H.,1991

3222 E G-C ds Reitsma P. H.,1991

3318 E A-G as Soria J. M.,1993

6274 G C-T ds Tsuda S.,1991 Soria J. M.,1992,1993 Sala N.,1987

7054 G-A Soria J. M.,1993

7257 H G-T ds Gandrille S.,1994

■ Таблица 1 (окончание). Идентифицированные мутации в гене протеина С человека

6) Делеции

Локализация Количество нуклеотидов Делеция аминокислот Кем и когда определены

1380-1386 7 arg,lys fs ter-16 Sala N.,1991

3156-3170 15 gly,ile,gly, ser,phe Lind B.,1993

3172-3189 18 ser,cys,asp, cys,arg,ser Tsuda S.,1991 Miletich J. R ,1987

3448-3452 5 -pro,ala Sugahara Y.,1992

6153 1 fs,ter-115 Grundy C.,1991

8485/6 или 8486/7 2 fs,258ile-arg, ter-329 Gandrille S.,1994

8617 1 fs,-301gly, ter-335 Bernardi F.,1992

8678-8680 или 8677-8679 3 -321 ile Gandrille S.,1993

8678-8680 -321ile,lys-met Sala N.,1991

8801 1 fs,362gly-gly, ter-381 Greengard J. S.,1994

fs,381,gly-val, ter-462 Yamamoto K.,1992 Tokunaga F.,1992; Ido M.,1993

7) Инсерции

Локализация Количество нуклеотидов Последствия Кем и когда определены

3363/4 1 (+C) fs,107his-pro, ter-119 Bovill E. G.,1989 Tomczak J. A.,1994

6139 2(+TT) fs,143arg-leu, ter-156 Soria J. M.,1992

7158 1 (+A) fs,191lys-lys, ter-207 Roort S. R.,1994

8432 6 (+CTGGAC) 239(+lys,asp) Roort S. R.,1993

8505 3 (+TGG) 264(+val) Koster T. ,1994

8506 4 (+TGGC) fs,264,ala-ala, ter-331 Koster T. ,1994

8796/7/8/9- 8801/2 1 (+G) fs,363pro-ala Gandrille S.,1994

8) Делеции + Инсерции

Локализация Делетированные нуклеотиды Инсерцированные нуклеотиды Кем и когда определены

3351 -CGGC + A Berg L. R.,1993

Мутации гена ПрС у человека наследуется по аутосомно-рецессивному типу. Установлено, что генетические дефекты ПрС приводят к дефициту количества пептида ПрС в кровеносном русле, способствующее венозному тромбозу [3, 4, 118]. Однако, известно, что концентрация ПрС не столь жестко связана с наклонностью к тромбозам, как уровень антитромбина III. В настоящее время общепризнано, что жидкое состояние крови поддерживается благодаря непрерывности ее движения, наличию антикоагулянтов и динамическому равновесию факторов свертывания с эндотелием. Важнейшими из антикоагулянтов являются антитромбин III, протеин С, протеин S, а также ингибиторы внешнего механизма свер-

тывания. Точки приложения этих антикоагулянтов различны.

Так снижение уровня антитромбина III, протеина С и протеина S или их структурные аномалии ведут к повышению свертываемости крови. Повышенная свертываемость крови характерна также для часто встречающейся мутации фактора V (Arg506 Gln — Factor V-Leiden-mutation), при которой этот фактор становится устойчивым к действию протеина С [54]. Этот генетический дефект встречается у 20-50 % больных с тромбозами, с рецидивирующими венозными тромбозами и рецидивирующими венозными эмболиями [31].

Установлено также, что риск варфаринового некроза кожи не зависит от характера основно-

го заболевания и концентрации непрямых коагулянтов. Это осложнение чаще всего обусловлено дефицитом ПрС. Поскольку период полураспада ПрС значительно меньше по сравнению с периодом полураспада других факторов свертывания, а варфарин подавляет синтез всех витамин-К-зависимых факторов, то у лиц с наследственным дефицитом ПрС варфарин вызывает прежде всего резкое снижение концентрации протеина С. Это приводит к временному повышению свертываемости крови и тромбозу сосудов кожи с последующим некрозом кожи.

Показано, что даже незначительный дефицит ПрС связан с венозным риском тромбоза, а более серьезный дефицит сопровождается неонатальной пурпурой fulminans [18]. АПрС своей антикоагулянтной активностью способствует про-теолитической инактивации факторов Va и VШa а резистентность эффекта аПрС часто вызывается фактором V Лейдена. Менее известно клиническое участие аПрС в сокращении сроков лечения пациентов с тяжелым сепсисом (PROWESS протокол), что послужило дополнительным стимулом клинических и доклинических исследований по выявлению роли аПрС.

Наиболее отчетливо это продемонстрировано у младенцев с серьезным гомозиготным дефицитом ПрС и имеющих массивные, обычно смертельные, тромботические осложнения. Также существенно увеличивается риск для венозного тромбоза у взрослых с гетерозиготным дефицитом ПрС [16, 50]. Обычно регистрируемый наследственный фактор риска для венозного тромбоза среди белых, включает мутацию сайта -Arg506Gln (фактор V Лейдена), который является главной мышенью для инактивации при помощи аПрС фактора Va [15, 52]. Целенаправленная делеция в гене ПрС у мышей в эксперименте приводила к перинатальной летальности [320, 67]. Однако, при отсутствии в эмбрионе ПрС, эмбриогенез и развитие все-же происходят, возможно за счет имеющегося в зародыше материнского ПрС. Хотя эмбрионы с полным отсутствием ПрС развиваются по ожидаемому менделевскому расщеплению до 17,5 эмбрионального дня, тем не менее у этих эмбрионов не обнаруживается обширного кровотечения, коагу-лопатии, некроза печени и колебаний содержания фибрина [24, 67]. Умеренного дефицита ПрС (в пределах от 1 до 18 %) у мышей было достаточно для рождения и развития, хотя такие мыши проявляли склонность к раннему тромбозу и воспалению, что указывет на физиологическую роль ПрС и как антитромботического и как противовоспалительного белка [79].

МЕХАНИЗМ УЧАСТИЯ АПРС В ЭФФЕКТАХ ЛЕЧЕБНОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА ЗИГРИСА

Благоприятные и полезные эффекты аПрС были продемонстрированы на большом количестве животных на моделях раны и при лечении тяжелого сепсиса у людей в клинических исследованиях (табл. 2).

КЛИНИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ АПРС ПРИ ТЯЖЕЛОМ СЕПСИСЕ

В настоящее время общепризнано, что сепсис является системной воспалительной реакцией на инфекции, в том числе, на раневую инфекцию [2, 8, 111]. Поэтому поиск эффективных лечебных средств по-прежнему является первостепенной задачей для фармакологов. Рубежом в оценке данных о роли аПрС при тяжелом сепсисе стали первые позитивные исследования при лечении сепсиса в клинических условиях (протокол PROWESS), в которых продемонстрировано существенное сокращение смертности при лечении больных с тяжелым сепсисом [7, 13]. В этих рандомизированных контролируемых, с плацебо-контролем многоцентровых испытаниях активированный дротрекогин альфа (зигрис) уменьшал относительный риск смертности (на 19,4 %; Р < 0,05), если этим препаратом проводилась инфузия 24 мкг/кг в час в течение 4 дней (уровень аПрС в плазме составлял в среднем ~50 нг/мл). Эти результаты были особенно примечательны, так как два других сильных антикоагулянта: тканевой фактор ингибирования коагуляции (ТФИК) и антитромбин III были не в состоянии уменьшать смертность в аналогичной 3-й фазе лечебной триады по протоколам OPTIMIST и KyberSept [4, 128]. Разумно считать, что одна только антикоагулянтная активность аПрС не объясняет успех действий аПрС в сокращении смертности. Таким образом, эти исследования подтверждают, что противовоспалительные и антиапоптозные эффекты аПрС тоже важны для сокращения смертности.

Результаты испытаний PROWESS на пациентах с тяжелым сепсисом были подтверждены в исследованиях врачей США по протоколу ENHANCE [14]. Однако, отсутствие эффекта аПрС по снижению смертности у пациентов с сепсисом с низким риском смерти в исследованиях по протоколу ADDRESS и в исследовании на детях по протоколу RESOLVE [94] ясно указывает, что в настоящее время у используемого терапевтического режима аПрС пока есть свои ограничения [10]. Низкий, но

■ Таблица 2. Благоприятные эффекты аПрС, зарегистрированные in vivo

Объект, модель Индуктор активации Конечный эффект Действие аПрС Цитируемый источник

Сепсис

Человек сепсис (повышенный риск смерти) смерть ингибирование Bernard et al. [10] Bernard et al. [12]

Человек сепсис (пониженный риск смерти) смерть нет эффекта Abraham et al. [5]

Человек ЛПС тромбоз/воспаление нет эффекта Kalil et al. [73]

Обезьяна (требует ЭРПС) E. coli смерть ингибирование Taylor et al. [121,122]

Хомяк ЛПС воспаление ингибирование Hoffmann et al. [59]

Крыса ЛПС воспаление ингибирование Iba et al. [63]

Крыса ЛПС артериальное давление повышение Isobe et al. [64]

Крыса ЛПС сердечно-сосудистая дисфункция/воспаление ингибирование Favory et al. [36]

Воспаление легких и раневые

Человек ЛПС тромбоз ингибирование Van der Poll et al. [101]

Человек ЛПС воспаление ингибирование Nick et al. [96]

Крыса ЛПС воспаление ингибирование Murakami et al. [92]

Крыса Ингаляция кислоты воспаление ингибирование Jian et al. [68]

Крыса курение воспаление ингибирование Wong etal. [128]."

Мышь (требует ЭРПС) блеомицын фиброз/воспаление ингибирование Shimizu et al. [112] Yasui et al. [88]

Мышь (требует ЭРПС) овальбумин воспаление ингибирование Yuda et al. [136] W

Стресс(удар)

Кролик И/P нейрологические повреждения ингибирование Yamauchi et al. [134]

Крыса И/P нейрологические повреждения/тромбоз/ воспаление ингибирование Zlokovic et al. [139]

Мышь (требует ПАР-1) И/P нейрологические повреждения/тромбоз/ воспаление ингибирование Cheng et al. [24,25]

Мышь (требует ПАР-3) NMDA апоптоз/нейрологические повреждения ингибирование Zlokovic et al. [139] Fernandez et al.[40] Shibata et al.[111] Guo et al,31 Liu et

Излечение ран/ангиогенез

Крыса биопсия закрытие раны ускорение Xue et al. [142] Jackson et al. [66]

Мышь нет формирование капилляров ускорение Uchiba et al. [123]

Цыпленок нет формирование капилляров ускорение Xue et al. [130]

Смешанные

Крыса (кышечные нарушения) И/Р воспаление ингибирование Schools et al.[109]

Крыса (острый панкреатит) Taurocholate воспаление ингибирование Yamenel et al. [132]

Крыса(повреждение желудка) стресс тромбоз/воспаление ингибирование Isobe et al. [65]

Крыса(повреждение спинного мозга) давление двигательные нарушения/ воспаление ингибирование Taoka et al. [119]

Мышь (трансплантация ткани) трансплантация апоптоз/воспаление ингибирование Contreras et al. [26]

Примечание: ЛПС — липополисахарид; И/Р — ишемия/реперфузия; NMDA — N-метил^-аспартат.

значительно возрастающий риск серьезной кровоточивости продемонстрирован в исследованиях по протоколу PROWESS при инфузии аПрС (24 мкг/ кг в час в течение 96 часов). Неясно, могло ли бы применение аПрС в более высоких дозах и/или в течение более коротких периодов уменьшить риск высокой смертности при сохранении эквивалентной или большей эффективности препарата. Почти ни в одном из экспериментов для оценки благоприятных воздействий аПрС на моделях раны животных не использовался режим, который соотве-ствовал бы клинической триаде PROWESS. Кроме того, в модельных экспериментах не была обнаружена значительная смертность. Это предполагает, что режимы дозировки аПрС, которые еще не были проверены на людях, например, в капсуле или капсула плюс короткие инфузии (от 0,5 до 4 час) в дозах аПрС выше чем 24 мкг/кг в час могли бы дать меньше побочных эффектов и эквивалентную или большую эффективность. Следовательно, как уже упоминалось выше, генноинженерные варианты аПрС с уменьшенной антикоагулянтной активностью, но с нормальным цитопротективным эффектом могли бы обеспечить значительно большие эффекты в клинических ситуациях, например, при тяжелом сепсисе или септическом шоке [84]; такие же варианты аПрС с уменьшенной антикоагулянтной активностью могли бы позволить использовать более высокие дозы, привносимые капсулой или короткими инфузиями в разное время и с меньшим риском высокой смертности.

АКТИВИРОВАННЫЙ ПРОТЕИН С ПРИ ВОСПАЛЕНИИ И ПОВРЕЖДЕНИИ ЛЕГКИХ

Благоприятные эффекты действия аПрС на процесс заживления воспалительной раны показаны на моделях раны легкого. Клинические исследования показали, что уменьшение уровня ПрС в плазме и появление малоактивного аПрС во внутриаль-веолярном пространстве и в бронхоальвеолярном лаваже у пациентов с раной легкого и воспалением дыхательных путей было связано с возрастанием уровня коллагена в легком и ухудшением клинической картины [127, 136]. На модели повреждений легкого мышей вызванных блеомицином, аПрС ингибировал появление фиброза легкого, а на мышиной модели бронхиальной астмы, вызываемой овальбумином, аПрС предупреждал появление аллергического воспаления [137, 139]. Кроме того, в легких мышей пораженных блеомицином, аПрС ингибировал эффекты фактора роста тромбоцитов,

которые включают мощное мутагенное действие, хемоантрактантный эффект и индукцию матричной экспрессии генов (например, коллагена и фи-бронектина) [114]. Если при этом аПрС вводили в качестве фармакологического препарата, то часть защитных эффектов аПрС на рану легкого и воспаление опосредовалась через аПрС-зависимое ингибирование аккумуляции лейкоцитов и их хемотаксиса [92, 97]. Эти исследования дают перспективу для поиска новых направлений в лечении воспаления легкого, фиброза и астмы. Представляет интерес, что эпителиальные клетки воздухоносных путей экспрессируют ПрС, тромбомодулин и ЭПРС и эти же клетки поддерживают производство аПрС в присутствии тромбина [59]. Таким образом, разумно считать, что система эндогенного ПрС, так же как и фармакологического препарата аПрС (зигри-са), введением которого можно управлять, поможет защитить легкие от повреждений.

АКТИВИРОВАННЫЙ ПРОТЕИН С ПРИ ИШЕМИЧЕСКОМ ИНСУЛЬТЕ

В работах Griffin J. H. et al. [53], снованных на доклинических исследованиях на животных и на клинических наблюдениях, предлагается весьма перспективная область для терапии человека аПрС, включая терапию ишемического инсульта. В эпидемиологических исследованиях комитета по изучению риска атеросклероза (ARI^ США) сообщается, что плазменный ПрС кажется защищает от ишемического инсульта (OR = 0,65 [0,4-1,0]) [43]. В экспериментах на крысиных моделях сфокусированной церебральной ишемии показано, что аПрС обеспечивает значительный противовоспалительный и нейропротек-тивный эффект [25, 41, 113]. Нейропротективное действие аПрС наблюдали также у крыс на моделях инсульта, если аПрС добавляли спустя 6 часов после наступления ишемии мозга [142].

Тканевой активатор плазминогена (ТАП), одно из немногих доступных средств лечения ишемического инсульта, эффективно промотирует плазмин-зависимый лизис тромбических окклюзий, но у этого препарата есть известные побочные эффекты. Мало того, что ТАП непосредственно вызывает нейротоксичность в нервно-сосудистых клетках, поскольку он вызывает апоптоз в клетках эндотелия и нейронах мозга, он же усиливает риск геморрагических новобразований из-за дополнительных сигналов регуляции и активации проматричной металлопротеазы 9 (про-ММр9), особенно тогда, когда этот препарат вводят через 3 часа после начала инсульта [26, 82]. Перспективное направление

в лечении ишемического инсульта подразумевается в недавнем исследовании in vivo на крысах при использовании комбинации аПрС и ТАП, применяемых для нейропротекции крысиного ишемического инсульта и для предотвращения повреждающего цитотоксикоза после введения NMDA [26, 82]. И у здоровых животных и на крысиных моделях инсульта обнаружено, что цитопротективные эффекты аПрС эффективно противодействуют нейротокси-ческим эффектам ТАП в клетках эндотелия, в нейронах и нарушениям гемоэнцефалического барьера, и таким образом улучшают общую полезную активность ТАП [25, 81]. АПрС предотвращает ТАП-вызываемую кровоточивость, определенно противодействуя сигналам регуляции ТАП-экспрессии про-ММр9 при стрессе в эндотелии мозга человека, а также в эндотелии in vitro и in vivo при гипоксим мозга крысы [26]. В заключение, препарат аПрС представляется перспективным при лечении ишемического инсульта как в отсутствии, так и в присутствии ТАП.

АКТИВИРОВАННЫЙ ПРОТЕИН С В АНГИОГЕНЕЗЕ, ПРИ ВОСПАЛЕНИИ И ЗАЖИВЛЕНИИ РАН

В эксперименте показано, что аПрС может индуцировать клеточную пролиферацию и ангиогенез клеток эндотелия in vivo и in vitro, которые зависят от ЭПРС и ПАР-1 [125]. Установлено также, что аПрС может стимулировать пролиферацию и миграцию кератиноцитов, и может усилить деградацию внеклеточного матрикса через активацию желатиназы, матричной металлопротеиназы-2 (ММПР-2) [95,132]. Этим самым были продемонстрированы полезные эффекты аПрС в процессах регенерации (например, в ангиогенезе и при заживлении раны). Кроме того, аПрС может индуцировать заживление раны, промотируя миграцию и пролиферацию клеток эндотелия при помощи регуляции эндотелиальных цитокинов (таких как ИЛ-6 и ИЛ-8) или хемокинов (например, МСР-1) [20, 61, 62, 88]. При определенных условиях аПрС может регулировать экспрессию МСР-1 и уровни РНК и белков подавлением синтеза оксида азота (NO) и стабилизацией мРНК [19, 61]. Однако, ясное представление о путях фармакологического применения аПрС в регулировании ангиогенеза или в заживлении раны менее очевидно, чем в регулировании тяжелого сепсиса или ишемического инсульта. Тесные взаимосвязи между воспалением и защитой организма хозяина, а также между воспалением и заживлением раны весьма сложны,

и дальнейшая работа необходима, чтобы разъяснить физиологическую и фармакологическую роль участия аПрС в этих процессах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Воспаление, апоптоз и тромбоз тесно связаны в сложной сети защитных механизмов организма человека. Многие из воспалительных и тромботических процессов за счет обратных связей объединяются, обостряя тем самым патогенные реакции. Таким образом, обобщение основных доклинических и клинических исследований эффектов протеина С позволили расширить наши представления относительно каскадного пути цитопротективного действия аПрС, который, как оказалось, отличается от антикоагулянтного ка-када. Хотя многое еще остается невыясненным в том, как охарактеризовать множественные цито-протективные действия аПрС, однако, более широкое терапевтическое использование лечебного препарата этого фермента имеет замечательные перспективы. Причем, новые терапевтические схемы применения аПрС могут быть составлены с учетом не только пониженной антикоагулянтной активности препарата, но и с его нормальным ци-топротективным эффектом. Именно такие варианты применения аПрС дают надежду на сокращение риска появления серьезной кровоточивости, сохраняя при этом выгодные цитопротективные свойства этого лекарственного средства.

Литература

1. Ващенко В. И., Хансон К. П., Шабанов П. Д. Цитохром С как лекарственное средство: прошлое, настоящее, будущее // Обзоры по клин. фармакол. и лек. терапии. — 2005. — Т. 4, № 1. — C. 27-37.

2. Галстян Г. М., Берковский А. Л., Васильев С. А. Влияние активированного протеина С на систему гемостаза при сепсисе // Инфекции в хирургии. — 2004. — Т 2, № 4. — C. 7-13.

3. Егорова В. В., Амирасланов Ю. А., Светухин А. М. и др. Исследование системы протеина С у больных с хронической венозной недостаточностью // Инфекции в хирургии. — 2004. — Т. 2, № 4. — C. 13-18.

4. Руднов В. А., Гельфанд Б. Р., Алферов А. В. и др. Тяжелая инфекция в хирургии. Применение активированного протеина С при тяжелом сепсисе и септическом шоке: опыт Российских клиник (предварительные результаты) // Consilium-Medicum. — 2004. — Т. 6, № 6. — C.1-7.

5. СидоркинВ. Г., Преснякова М. В. Биохимические основы системы гемостаза и ДВС крови. — Н-Новгород.: НГМА, 2008. — 154 с.

6. Abraham E., Reinhart K., Opal S. et al. Efficacy and safety of tifacogin (recombinant tissue factor pathway inhibitor)

in severe sepsis: a randomized controlled trial // JAMA.-

2003. - Vol. 290, N 2. - P. 238-247.

7. Abraham E., Laterre P. F., Garg R. et al. Drotrecogin alfa (activated) for adults with severe sepsis and a low risk of death // N. Engl. J. Med. - 2005. - Vol. 353, N 13. -P. 1332-1341.

8. Annane D., Bellissant E., Cavaillon J. M. Septic shock // Lancet. - 2005. - Vol. 365, N 9453. - P. 63-78.

9. Balazs A. B., Fabian A. J., Esmon C. T., Mulligan R. C. Endothelial protein C receptor (CD201) explicitly identifies hematopoietic stem cells in murine bone marrow // Blood. - 2005. - Vol. 107, N 6. - P. 2317-2321.

10. Barton Ph., Kalil A., Nadel S. et al. Safety, pharmakokinet-ics and pharmakodinamics of Drotrecogin alfa (activated) in children with severe sepsis // Pediatrics. - 2004. -Vol. 113, N1. - P. 7-17.

11. Beckman R. J., Schmidt R. J., Santerre R. F. et al. The structure and evolution of a 461 amino acid human protein C precursor and its messenger RNA, based upon the DNA sequence of cloned human liver cDNAs // Nucleic acid Res. - 1985. - Vol. 13, N 4. - P. 5233-5247.

12. Bernard G. R., Vincent J. L., Laterre P. F. et al. Efficacy and safety of recombinant human activated protein C for severe sepsis // N. Engl. J. Med. - 2001. - Vol. 344, N10. - P. 699-709.

13. Bernard G. R., Macias W. L., Joyce D. E. et al. Safety assessment of drotrecogin alfa (activated) in the treatment of adult patients with severe sepsis // Crit. Care. - 2003. -Vol. 7, N 2. - P. 155-163.

14. Bernard G. R., Margolis B. D., Shanies H. M. et al. Extended evaluation of recombinant human activated protein C United States trial (ENHANCE, US): a single-arm, phase 3B, multicenter study of drotrecogin alfa (activated) in severe sepsis // Chest. - 2004. - Vol. 125, N 6. - P. 2206-2216.

15. Bertina R. M., Koeleman B. P. C., Koster T. et al. Mutations in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C // Nature. - 1994. - Vol. 369, N 6475. - P. 64-67.

16. Bertina R. M. Protein C deficiency and venous thrombosis - the search for the second genetic defect // Thromb. Haemost. - 2000. - Vol. 83, N 6. - P. 360-361.

17. Boatright K. M., Salvesen G. S. Mechanisms of caspase activation // Curr. Opin. Cell Biol. - 2003. - Vol. 15, N6. - P. 725-731.

18. Branson H. E., Katz J., Marble R., Griffin J. H. Inherited protein C deficiency and coumarin-responsive chronic relapsing purpura fulminans in a newborn infant // Lancet. - 1983. - Vol. 322, N 8360. - P. 1165-1168.

19. Brueckmann M., Lang S., Borggrefe M. et al. Drotrecogin alfa (activated) prolongs half-life time of messenger RNA encoding for interleukin-8 and monocyte chemoattractant protein-1 // Thromb. Haemost. - 2003. - Vol. 90, N 6. -P. 1223-1226.

20. Brueckmann M., Hoffmann U., De Rossi L. et al. Activated protein C inhibits the release of macrophage inflammatory protein-1-alphafrom THP-1 cells and from human monocytes // Cytokine. - 2004. - Vol. 26, N 3. - P. 106-113.

21. Brueckmann M., Horn S., Lang S. et al. Recombinant human activated protein C upregulates cyclooxygenase-2 expression in endothelial cells via binding to endothelial cell protein C receptor and activation of protease-activated receptor-1 // Thromb. Haemost. - 2005. - Vol. 93, N 4. - P. 743-750.

22. Brueckmann M., Nahrup A. S., Lang S. et al. Recombinant human activated protein C upregulates the release of soluble fractalkine from human endothelial cells // Br. J. Haematol. - 2006. - Vol. 133, N 5. - P. 550-557.

23. Burridge K., Wennerberg K. Rho and Rac take center stage. Cell. - 2004. - Vol.116, N 2. - P. 167-179.

24. Castellino F. J. Gene targeting in hemostasis: protein C // Front. Biosci. - 2001. - Vol. 6. - d807-819.

25. Cheng T., Liu D., Griffin J. H. et al. Activated protein C blocks p53-mediated apoptosis in ischemic human brain endothelium and is neuroprotective // Nat. Med. —

2003. — Vol. 9, N3. — P. 338-342.

26. Cheng T., Petraglia A. L., Li Z. et al. Activated protein C inhibits tissue plasminogen activator-induced brain hemorrhage // Nat. Med. — 2006. — Vol. 12, N 10. — P. 1278-1285.

27. Contreras J. L., Eckstein C., Smyth C. A. et al. Activated protein C preserves functional islet mass after intraportal transplantation: a novel link between endothelial cell activation, thrombosis, inflammation, and islet cell death // Diabetes. — 2004. — Vol. 53, N 11. — P. 2804-2814.

28. Coughlin S. R. Thrombin signaling and protease-activated receptors // Nature. — 2000. — Vol. 407, N 6801. — P. 258-264.

29. Coughlin S. R., CamererE. PARticipation in inflammation // J. Clin. Invest. — 2003. — Vol. 111, N 1. — P. 25-27.

30. Crawley J. T., Gu J. M., Ferrell G., Esmon C. T. Distribution of endothelial cell protein C/activated protein C receptor (EPCR) during mouse embryo development // Thromb. Haemost. — 2002. — Vol. 88, N 2. — P. 259-266.

31. DahlbäckB., Carlsson M., Svensson P. J. Familial thrombophilia due to a previously unrecognized mechanism characterized by poor anticoagulant response to activated protein C: prediction of a cofactor to activated protein C // Proc. Natl. Acad. Sci. — 1993. — Vol. 90, N 3. — P. 1004-1008.

32. Dahlbäck B., Villoutreix B. O. Regulation of blood coagulation by the protein C anticoagulant pathway: novel insights into structure-function relationships and molecular recognition.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. — 2005. — Vol. 25, N 7. — P. 1311-1320.

33. Deguchi H., Fernandez J. A., Pabinger I. et al. Plasma glucosylceramide deficiency as potential risk factor for venous thrombosis and modulator of anticoagulant protein C pathway // Blood. — 2001. — Vol. 97, N 7. — P. 1907-1914.

34. Domotor E., Benzakour O., Griffin J. H. et al. Activated protein C alters cytosolic calcium flux in human brain endothelium via binding to endothelial protein C receptor and activation of protease activated receptor-1 // Blood. —

2003. — Vol. 101, N 12. — P. 4797-4801.

35. Esmon C. T. The protein C pathway // Chest. — 2003. — Vol. 124, Suppl. — P. S26-32.

36. Esmon C. T. Is APC activation of endothelial cell PAR1 important in severe sepsis?: no // J. Thromb. Haemost. — 2005. — Vol. 3, N 9. — P. 1910-1911.

37. Favory R., Lancel S., Marechal X. et al. Cardiovascular protective role for activated protein C during endotoxemia in rats // Intensive Care. Med. — 2006. — Vol. 32, N 6. — P. 899-905.

38. Feistritzer C., Sturn D. H., Kaneider N. C. et al. Endothelial protein C receptor-dependent inhibition of human eosinophil chemotaxis by protein C // J. Allergy Clin. Immunol. —

2003. — Vol. 112, N 2. — P. 375-381.

39. Feistritzer C., Riewald M. Endothelial barrier protection by activated protein C through PAR 1-dependent sphingosine 1-phosphate receptor-1 crossactivation // Blood. — 2005. — Vol. 105, N 8. — P. 3178-3184.

40. Feistritzer C., Schuepbach R. A., Mosnier L. O. et al. Protective signaling by activated protein C is mechanically linked to protein C activation on endothelial cells // J. Biol. Chem. 2006. — Vol. 281, N 29. — P. 20077-20084.

41. Fernandez J. A., Xu X., Liu D. et al. Recombinant murine-activated protein C is neuroprotective in a murine ischemic stroke model // Blood Cells Mol. Dis. — 2003. — Vol. 30, N 3. — P. 271-276.

42. Finigan J. H., Dudek S. M., Singleton P. A. et al. Activated protein C mediates novel lung endothelial barrier enhancement: role of sphingosine 1-phosphate receptor transactivation // J. Biol. Chem. — 2005. — Vol. 280, N 17. — P. 17286-17293.

43. Folsom A. R., Rosamond W. D., Shahar E. et al. Prospective study of markers of hemostatic function with risk of ischemic stroke: The Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study Investigators // Circulation. — 1999.— Vol. 100, N 7. — P. 736-742.

44. Franscini N., Bachli E. B., Blau N. et al. Gene expression profiling of inflamed human endothelial cells and influence of activated protein C // Circulation. — 2004. — Vol. 110, N 18. — P. 2903-2909

45. Friedrich U., Nicolaes G. A. F., Villoutreix B. O., Dahlback B. Secondary substrate-binding exosite in the serine protease domain of activated protein C important for cleavage at Arg-506 but not at Arg-306 in factor Va // J. Biol. Chem. — 2001. — Vol. 276, N 25. — P. 23105-23108.

46. Gale A. J., Tsavaler A., Griffin J. H. Molecular characterization of an extended binding site for coagulation factor Va in the positive exosite of activated protein C // J. Biol. Chem. — 2002. — Vol. 277, N 32. — P. 28836-28840.

47. Gale A. J., Heeb M. J., Griffin J. H. The autolysis loop of activated protein C interacts with factor Va and differentiates between the Arg506 and Arg306 cleavage sites // Blood. — 2000. — Vol. 96, N 2. — P. 585-593.

48. Gale A. J., Griffin J. H. Characterization of a thrombomodulin binding site on protein C and its comparison to an activated protein C binding site for factor Va // Proteins. —

2004. — Vol. 54, N 3. — P. 433-441.

49. Galligan L., Livingstone W., Volkov Y. et al. Characterization of protein C receptor expression in monocytes. Br J Haematol. — 2001. — Vol. 115, N 2. — P. 408-414.

50. Gandrille S. Endothelial cell protein C receptor and the risk of venous thrombosis // Haematologica. — 2008. — Vol. 93, N 6, P. 812-816

51. Goldenberg N. A., Manco-Jonson M. J. Protein C deficiency // Haemophilia. — 2008. — Vol. 14, N. 6. — P. 1214-1221.

52. Griffin J. H., Evatt B., Zimmerman T. S. et al. Deficiency of protein C in congenital thrombotic disease // J. Clin. Invest. — 1981. — Vol. 68, N 5. — P. 1370-1373.

53. Griffin J. H., Fernandez J. A., Liu D. et al. Activated protein C and ischemic stroke // Crit. Care. Med. — 2004. — Vol. 32, N 5, Suppl. — P. S247-S253.

54. Greengard J. S., Sun X., Xu X. et al. Activated protein C resistance caused by Arg506Gln mutation in factor Va // Lancet.— 1994.— Vol. 343, N 8909.— P. 1361—1362.

55. Green D. R. Apoptotic pathways: ten minutes to dead // Cell. — 2005. — Vol. 121, N 5. — P. 671-674.

56. Gruber A., Griffin J. H. Direct detection of activated protein C in blood from human subjects // Blood. — 1992. — Vol. 79, N 12. — P. 2340-2348.

57. Grey S. T., Tsuchida A., Hau H. et al. Selective inhibitory effects of the anticoagulant activated protein C on the responses of human mononuclear phagocytes to LPS, IFN—gamma, or phorbol ester // J. Immunol. — 1994. — Vol. 153, N 8. — P. 3664-3672.

58. Giro H., Liu D., Gelbard H. et al. Activated protein C prevents neuronal apoptosis via protease activated receptors 1 and 3 // Neuron. — 2004. — Vol. 41, N 4. — P. 563-572.

59. Hataji O., Taguchi O., Gabazza E. C. et al. Activation of protein C pathway in the airways // Lung. — 2002. — Vol. 180, N 1. — P. 47-59.

60. Hoffmann J. N., Vollmar B., Laschke M. W. et al. Micro-hemodynamic and cellular mechanisms of activated protein C action during endotoxemia // Crit. Care. Med. —

2004. — Vol. 32, N 4. — P. 1011-1017.

61. Hooper W. C., Phillips D. J., Renshaw M. A. et al. The up-regulation of IL-6 and IL-8 in human endothelial cells by activated protein C // J. Immunol. — 1998. — Vol. 161, N 5. — P. 2567-2573.

62. Hooper W. C., Phillips D. J., Renshaw M. A. Activated protein C induction of MCP—1 in human endothelial cells: a possible role for endothelial cell nitricoxide synthase // Thromb. Res. — 2001. — Vol. 103, N 3. — P. 209-219.

63. Hotchkiss R. S., Chang K. C., Swanson P. E. et al. Cas-pase inhibitors improve survival in sepsis: a critical role of the lymphocyte // Nat. Immunol. — 2000. — Vol. 1, N 6. — P. 496-501.

64. Iba T., Kidokoro A., Fukunaga M. et al. Activated protein C improves the visceral microcirculation by attenuating the leukocyte—endothelial interaction in a rat lipopolysaccha-ride model // Crit. Care. Med. — 2005. — Vol. 33, N 2. — P. 368-372.

65. Isobe H., Okajima K., Uchiba M. et al. Activated protein C prevents endotoxin-induced hypotension in rats by inhibiting excessive production of nitric oxide // Circulation. — 2001. — Vol. 104. — P. 1171-1175.

66. Isobe H., Okajima K., Harada N. et al. Activated protein C reduces stress-induced gastric mucosal injury in rats by inhibiting the endothelial cell injury // J. Thromb. Haemost. — 2004. — Vol. 2, N 2. — P. 313-320.

67. Jackson C. J., Xue M., Thompson P. et al. Activated protein C prevents inflammation yet stimulates angiogenesis to promote cutaneous wound healing // Wound Repair Regen. — 2005. — Vol. 13, N 3. — P. 284-294.

68. Jalbert L. R., Rosen E. D., Moons L. et al. Inactivation of the gene for anticoagulant protein C causes lethal perinatal consumptive coagulopathy in mice // J. Clin. Invest.— 1998. — Vol. 102, N 8. — P. 1481-1488.

69. Jian M. Y., Koizumi T., Tsushima K. et al. Activated protein C attenuates acid-aspiration lung injury in rats // Pulm. Pharmacol. Ther. — 2005. — Vol. 18, N 4. — P. 291-296.

70. Joyce D. E., Gelbert L., Ciaccia A. et al. Gene expression profile of antithrombotic protein C defines new mechanisms modulating inflammation and apoptosis // J. Biol. Chem. — 2001. — Vol. 276, N 14. — P. 11199-11203.

71. Joyce D. E., GrinnellB. W. Recombinant human activated protein C attenuates the inflammatory response in endothelium and monocytes by modulating nuclear factor-kappaB // Crit. Care. Med. — 2002. — Vol. 30 (5 Suppl). —

S. 288-293.

72. Joyce D. E., Nelson D. R., Grinnell B. W. Leukocyte and endothelial cell interactions in sepsis: relevance of the protein C pathway // Crit. Care. Med. — 2004. — Vol. 32, N 5, Suppl. — P. S280-S286.

73. Kahn M. L., Nakanishi-Matsui M., Shapiro M. J. et al. Protease-activated receptors 1 and 4 mediate activation of human platelets by thrombin // J. Clin. Invest. — 1999. — Vol. 103, N 6. — P. 879-887.

74. Kalil A. C., Coyle S. M., Um J. Y. et al. Effects of drotrec-ogin alfa (activated) in human endotoxemia // Shock.—

2004. — Vol. 21, N 3. — P. 222-229.

75. Kerschen E. J., Cooley B. C., Castellino F. J. et al. Protective effect of activated protein C in murine endotoxemia: mechanism of action [abstract] // Blood. — 2005. — Vol. 106, N 11. — Abstract 26.

76. Kisiel W. Human plasma Protein C. Isolation, characterization and mechanism of activation by alpha-thrombin // J.Clin.Invest. — 1979. — Vol. 64, N. 3. — P. 761-769.

77. Kurosawa S., Esmon C. T., Stearns-Kurosawa D. J. The soluble endothelial protein C receptor binds to activated neutrophils: involvement of proteinase-3 and CD11 b/ CD18 // J. Immunol. — 2000. — Vol. 165, N 8. — P. 46974703.

78. Laszik Z., Mitro A., Taylor F.B. Jr. et al. Human protein C receptor is present primarily on endothelium of large blood vessels: implications for the control of the protein C pathway // Circulation. — 1997. — Vol. 96, N 10. — P. 3633-3640.

79. Lay A. J., Liang Z., Rosen E. D., Castellino F. J. Mice with a severe deficiency in protein C display prothrombotic and proinflammatory phenotypes and compromised maternal reproductive capabilities // J. Clin. Invest. — 2005. — Vol. 115, N 6. — P. 1552-1561.

80. LeviM. Activated protein C in sepsis: a critical review // Curr. Opin. Hematol. — 2008. — Vol. 15, N 5. — P. 481-486.

81. Liaw P. C. Y., Mather T., Oganesyan N. et al. Identification of the protein C/activated protein C binding sites on the endothelial cell protein C receptor: implications for a novel mode of ligand recognition by a major histocom—patibil-ity complex class 1— type receptor // J. Biol. Chem. — 2001. — Vol. 276, N 11. — P. 8364-8370.

82. Liu D., Cheng T., Guo H. et al. Tissue plasminogen activator neurovascular toxicity is controlled by activated protein C // Nat. Med. — 2004. — Vol. 10, N 12. — P. 1379-1383.

83. Ludeman M. J., Kataoka H., Srinivasan Y. et al. PAR1 cleavage and signaling in response to activated protein C and thrombin // J. Biol. Chem. — 2005. — Vol. 280, N 13. — P. 13122-13128.

84. MatherT., Mancebo J. Editors’ comments on a new trial of activated protein C for persistent septic shock // Intensive Care Med. — 2008. — Vol. 34, N 11. — P. 1948-1949.

85. Marlar R. A. The protein C system — howcomplex is it? // Thromb.Haemost. — 2001. — Vol. 85, N 5. — P. 756-757.

86. McVerry B. J., Garcia J. G. Endothelial cell barrier regulation by sphingosine 1-phosphate // J. Cell Biochem. 1 —

2004. — Vol. 92, N 6. — P. 1075-1085.

87. Mollica L. R., Crawley J. T., Liu K. et al. Role of a 5’—en-hancer in the transcriptional regulation of the human endothelial cell protein C receptor gene // Blood. — 2006. — Vol. 108, N 4. — P. 1251-1259.

88. Mosnier L. O., Griffin J. H. Inhibition of staurosporine-in-duced apoptosis of endothelial cells by activated protein C requires protease activated receptor-1 and endothelial cell protein C receptor // Biochem. J. — 2003. — Vol. 373(Pt 1). — P. 65-70.

89. Mosnier L. O., Gale A. J., Yegneswaran S., Griffin J. H. Activated protein C variants with normal cytoprotective but reduced anticoagulant activity // Blood.— 2004.— Vol. 104, N 6. — P. 1740-1745.

90. Mosnier L. O., Griffin J. H. Protein C anticoagulant activity in relation to anti-inflammatory and antiapoptotic activities // Front. Biosci. — 2006. — Vol. 11. — P. 2381-2399.

91. Mosnier L. O., Zlokovic B. V., Griffin J. H. The cytopro-tective protein C pathway // Blood. — 2007. — Vol. 109, N 8. — P. 3161-3172.

92. MullerL., JaberS., Raillard A., Lefrant J. Y. Mechanisms for mortality reduction by activated protein C in severe sepsis [abstract] Use of recombinant human activated protein C in patients with severe sepsis: a French retrospective multicentre study // Intensive Care Med. — 2008. — Vol. 34, N 5. — P. 977-979.

93. Murakami K., Okajima K., Uchiba M. et al. Activated protein C attenuates endotoxin-induced pulmonary vascular injury by inhibiting activated leukocytes in rats // Blood. — 1996. — Vol. 87, N 2. — P. 642-647.

94. Nadel S., Goldstein B., Williams M. D. et al. Researching severe Sepsis and Organ dysfunction in children: Researching severe Sepsis and Organ dysfunction in children: a global perspective (RESOLVE) study grouP. Drotrecogin alfa (activated) in children with severe sepsis: a multicentre phase III randomised controlled trial // Lancet. — 2007. — Vol. 369, N 9564 .— P. 836-843.

95. Nakanishi-Matsui M., Zheng Y. W., Sulciner D. J. et al. PAR3 is a cofactor for PAR4 activation by thrombin // Nature. — 2000. — Vol. 404, N 6778. — P. 609-613.

96. Nguyen M., Arkell J., Jackson C. J. Activated protein C directly activates human endothelial gelatinase A // J. Biol. Chem. — 2000. — Vol. 275, N 13. — P. 9095-9098.

97. Nick J. A., Coldren C. D., Geraci M. W. et al. Recombinant human activated protein C reduces human endotoxin-induced pulmonary inflammation via inhibition of neutrophil chemotaxis // Blood. — 2004. — Vol. 104, N 13. — P. 3878-3885.

98. Oganesyan V., Oganesyan N., Terzyan S. et al. The crystal structure of the endothelial protein C receptor and a bound phospholipid // J. Biol. Chem. — 2002. — Vol. 277, N 28. — P. 24851-24854.

99. Patracchini P., Aiello V., Palazzi P. et al. Sublocalization of the human protein C gene on chromosome 2q13-q14 // Hum.Genet. — 1989. — Vol. 81, N 2. — P. 191-192.

100. Pellequer J. L., Gale A. J., Getzoff E. D., Griffin J. H. Threedimensional model of coagulation factor Va bound to activated protein C // Thromb. Haemost. — 2000. — Vol. 84, N 5. — P. 849-857.

101. Van der Poll T., Levi M., Nick J. A., Abraham E. Activated protein C inhibits local coagulation after intrapulmonary delivery of endotoxin in humans // Am. J. Respir. Crit. Care Med. — 2005. — Vol. 171, N10. — P. 1125-1128.

102. Preston R. J., Ajzner E., Razzari C. et al. Multifunctional specificity of the protein C/activated protein C GLA domain // J. Biol. Chem. — 2006. — Vol. 281, N 39. — P. 28850-28857.

103. Perez-Casal M., Downey C., Cutillas-Moreno B. et al. Microparticle-associated endothelial protein C receptor and the induction of cytoprotective and anti-inflammatory effect // Haematologica. — 2009. — Vol. 94, N 3. — P. 387-394.

104. Reed J. C. Proapoptotic multidomain Bcl—2/Bax—family proteins: mechanisms, physiological roles, and therapeutic opportunities // Cell Death Differ. — 2006. — Vol. 13, N 8. — P. 1378-1386.

105. Rezaie A. R. Exosite-dependent regulation of the protein C anticoagulant pathway // Trends Cardiovasc. Med.— 2003.—Vol. 13, N 1. — P. 8-15.

106. Riewald M., Petrovan R. J., Donner A. et al. Activation of endothelial cell protease activated receptor 1 by the protein C pathway // Science. — 2002. — Vol. 296, N 5574. — P. 1880-1882.

107. Riewald M., Ruf W. Protease-activated receptor-1 signaling by activated protein C in cytokine perturbed endothelial cells is distinct from thrombin signaling // J. Biol. Chem. —

2005. — Vol. 280, N 20. — P. 19808-19814.

108. Ruf W. Is APC activation of endothelial cell PAR1 important in severe sepsis?: yes // J. Thromb. Haemost. — 2005. — Vol. 3, N 9. — P. 1912-1914.

109. Shamsher M. K., Chuzhanova N. A., Friedman B. et al. Identification of aa intronic regulatory element in the human protein C (PROC) gene // Hum.Genet. — 2000. — Vol. 107, N 5. — P. 458-465

110. Schoots I. G., Levi M., van Vliet A. K. et al. Inhibition of coagulation and inflammation by activated protein C or antithrombin reduces intestinal ischemia/reperfusion injury in rats // Crit Care. Med.— 2004.—Vol. 32, N 6. — P. 13751383.

111. Schouten M., Wiersinga W. J., Levi M., van der Poll T. Inflammation, endothelium, and coagulation in sepsis // J. Leuk. Biol. — 2008. — Vol. 83, N 3. — P. 536-545.

112. Shen L., Villoutreix B. O., Dahlback B. Involvement of lys 62(217) and lys 63(218) of human anticoagulant protein C in heparin stimulation of inhibition by the protein C inhibitor // Thromb. Haemost. — 1999. — Vol. 82, N 3. — P. 72-79.

113. Shibata M., Kumar S. R., Amar A. et al. Anti-inflammatory, antithrombotic, and neuroprotective effects of activated protein C in a murine model of focal ischemic stroke // Circulation. — 2001. — Vol. 103, N 3. — P. 1799-1805.

114. Shimizu S., Gabazza E. C., Taguchi O. et al. Activated protein C inhibits the expression of platelet-derived growth factor in the lung // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. —

2003. — Vol. 167, N 10. — P. 1416-1426.

115. Shu F., Kobayashi H., Fukudome K. et al. Activated protein C suppresses tissue factor expression on U937 cells in the endothelial protein C receptor-dependent manner // FEBS Lett. — 2000. — Vol. 477, N 3. — P. 208-212.

116. Singleton P.A., Dudek S. M., Chiang E. T., Garcia J. G. Regulation of sphingosine 1-phosphate-induced endothelial cytoskeletal rearrangement and barrier enhancement by S1P1 receptor, PI3 kinase, Tiam1/ Rac1,and alpha-actinin // FASEB J. — 2005. — Vol. 19, N 12. — P. 1646-1656.

117. Stearns-Kurosawa D. J., Kurosawa S. Mollica J. S. et al. The endothelial cell protein C receptor augments protein C activation by the thrombin-thrombomodulin complex // Proc. Natl. Acad. Sci. — 1996. — Vol. 93, N19. — P. 10212-10216.

118. Stenflo J. A new, vitamin K-dependent protein. Purification from bovine plasma and preliminary characterization // J. Biol. Chem. — 1976. — Vol. 251, N 10. — P. 355-363.

119. Stephenson D. A., Toltl L. J., Beaudin S., LiawP. C. Modulation of monocyte function by activated protein C, a natural anticoagulant // J. Immunol. — 2006. — Vol. 177, N 4. — P. 2115-2122.

120. Sturn D. H., Kaneider N. C., Feistritzer C. et al. Expression and function of the endothelial protein C receptor in human neutrophils // Blood. — 2003. — Vol. 102, N 4. — P. 1499-1505.

121. Taoka Y., Okajima K., Uchiba M. et al. Activated protein C reduces the severity of compression-induced spinal cord injury in rats by inhibiting activation of leukocytes // J. Neurosci. — 1998. — Vol. 18, N 4. — P. 1393-1398.

122. Taylor F. B. Jr., Chang A. C., Esmon C. T. et al. Protein C prevents the coagulopathic and lethal effects of Escherichia coli infusion in the baboon // J. Clin. Invest. — 1987. — Vol. 79, N 3. — P. 918-925.

123. Taylor F. B. Jr. Staging of the pathophysiologic responses of the primate microvasculature to Escherichia coli and endotoxin: examination of the elements of the compensated response and their links to the corresponding uncompensated lethal variants // Crit. Care. Med. — 2001. — Vol. 29, N 7, Suppl. — P. S78-S89.

124. Tsay W., Lee Y. M., Lee S. C. et al. Characterization of human protein C gene promoter: insights from natural human mutants // DNA Cell Biol. — 1996. — Vol. 15, N 11. — P. 907-919.

125. Uchiba M., Okajima K., Oike Y. et al. Activated protein C induces endothelial cell proliferation by mitogen-activated protein kinase activation in vitro and angio-genesis in vivo // Circ. Res. — 2004. — Vol. 95, N 1. — P. 34-41

126. Vu T. K., Hung D. T., Wheaton V. I., Coughlin S. R. Molecular cloning of a functional thrombin receptor reveals a novel proteolytic mechanism of receptor activation // Cell. — 1991. — Vol. 64, N 6. — P. 1057-1068.

127. Ware L. B., FangX., Matthay M. A. Protein C and thrombomodulin in human acute lung injury // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. — 2003. — Vol. 285, N 3. — P. 1514-1521.

128. Warren B. L., Eid A., Singer P. et al. High-dose antithrombin III in severe sepsis: a randomized controlled trial // JAMA. — 2001. — Vol. 286, N 15. — P. 1869-1878.

129. Wesche-Soldato D. E., Swan R. Z., Chung C.-S., Ayala A. The Apoptotic Pathway as a Therapeutic Target in Sepsis // Curr.Drug.Targets. - 2007. - Vol. 8, N 4. -P. 493-500.

130. White B., Schmidt M., Murphy C. et al. Activated protein C inhibits lipopolysaccharide-induced nuclear translocation of nuclear factor kappaB (NF-kappaB) and tumour necrosis factor alpha (TNF-alpha) production in the THP-1 monocytic cell line // Br. J. Haematol. - 2000. - Vol. 110, N 1. - P. 130-134.

131. Wong S. S., Sun N. N., Hyde J. D. Drotrecogin alfa (activated) prevents smoke-induced increases in pulmonary microvascular permeability and proin-flammatory cytokine IL-1beta in rats // Lung. - 2004. - Vol. 182, N 6. -P. 319-330.

132. Van de Wouwer M., Collen D., Conway E. M. Trombomod-ulin-protein C-EPCR system: integrated to regulate coagulation and inflammation // Arterioscler. Thromb.Vasc. Biol. - 2004. - Vol. 24, N 8. - P. 1374-1383.

133. Xue M., Thompson P., Sambrook P. N. et al. Activated protein C stimulates expression of angiogenic factors in human skin cells, angiogenesis in the chick embryo and cutaneous wound healing in rodents // Clin. Hemorheol. Microcirc. - 2006. - Vol. 34, N 1-2. - P. 153-161.

134. Yamauchi T., Sakurai M., Abe K. et al. Neuroprotective effects of activated protein C through induction of insulinlike growth factor-1 (IGF-1), IGF-1 receptor, and its downstream signal phosphorylated serine-threonine kinase after spinal cord ischemia in rabbits // Stroke. - 2006. -Vol. 37, N 4. - P. 1081-1086.

135. Yamenel L., Mas M. R., Comert B. et al. The effect of activated protein C on experimental acute necrotizing pancreatitis // Crit. Care.- 2005. - Vol. 9, N 9. - R 184-190.

136. Yasui H., Gabazza E. C., Taguchi O. et al. Decreased protein C activation is associated with abnormal collagen turnover in the intraalveolar space of patients with interstitial lung disease // Clin. Appl. Thromb. Hemost. - 2000.-Vol. 6, N 4. - P. 202-205.

137. Yasui H., Gabazza E. C., Tamaki S. et al. Intratracheal administration of activated protein C inhibits bleomycin-induced lung fibrosis in the mouse // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. - 2001. - Vol. 163, N 7. - P. 1660-1668.

138. Yegneswaran S., Deguchi H., Griffin J. H. Glucosylcer-amide, a neutral glycosphingolipid anticoagulant cofactor, enhances the interaction of human- and bovine-activated protein C with negatively charged phospholipid vesicles // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278, N 17. - P. 14614-14621.

139. Yuda H., Adachi Y., Taguchi O. et al. Activated protein C inhibits bronchial hyperresponsiveness and Th2 cytokine expression in mice // Blood. - 2004. - Vol. 103, N 6. -P. 2196-2204.

140. Yuksel M., Okajima K., Uchiba M. et al. Activated protein C inhibits lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor-alpha production by inhibiting activation of both nuclear factor-kappa B and activator protein-1 in human monocytes // Thromb. Haemost. - 2002. - Vol. 88, N2. - P. 267-273.

141. Zeng W., Matter W. F., Yan S. B. et al. Effect of drotrecogin alfa (activated) on human endothelial cell permeability and Rho kinase signaling // Crit. Care. Med. - 2004. - Vol. 32, N 5, Suppl. - P. S302-S308.

142. Zlokovic B. V., Zhang C., Liu D. et al. Functional recovery after embolic stroke in rodents by activated protein C // Ann. Neurol. - 2005. - Vol. 58, N 3. - P. 474-477.

143. Xue M., Thompson P., Kelso I., Jackson C. Activated protein C stimulates proliferation, migration and wound closure, inhibits apoptosis and up-regulates MMP-2 activity in cultured human keratinocytes // Exp. Cell Res. -

2004. - Vol. 299, N 1. - P. 119-127.

BiOLOGY AND PHYSiOLOGY OF PROTEiN C.

MODERN REPRESENTATiONS ABOUT MECHANiSMS OF MEDiCAL ACTiON OF THE ACTiVATED PROTEiN C

V. I. Vashchenko, T. N. Vashchenko

♦ Summary: In the review, the basic biological and physiological properties of a protein C are described. The modern representations about cytoprotective effects of the activated protein C are be analysed. The mehanisms of action of the new drug Xigris considering a human recombinant activated protein C are discussed in connection with its practical application to medical programs. Ref. 143.

♦ Key words: protein C; Xigris; sepsis; thrombine; thrombomodulin; endotelium

♦ Информация об авторах

Ващенко Владимир Иванович — д. б. н., старший научный сотрудник НИО крови и тканей.

Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова

194044, Россия, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6.

E-mail: icg-adm@bionet.nsc.ru

Ващенко Татьяна Николаевна — врач-биохимик НИО крови и тканей.

Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова

194044, Россия, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6.

E-mail: icg-adm@bionet.nsc.ru

Vashchenko Vladimir Ivanovich — Doctor of Biological Sciences. Military Medical Academy. Military Medical Academy,

194044, St.Petersburg, Acad. Lebedev street, 6.

E-mail: icg-adm@bionet.nsc.ru

Vashchenko Tatyana Nikolaevna

Military Medical Academy. Military Medical Academy,

194044, St.Petersburg, Acad. Lebedev street, 6.

E-mail: icg-adm@bionet.nsc.ru