CC BY
559
Вестник Челябинского государственного университета. 2013. № 7 (298).
Биология. Вып. 2. С. 66-67.
И. Ж. Павлова, Ю. С. Хомич
БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ЛОКУСОВ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЕЙ
Дана краткая оценка уровня бактерионосительства S. aureus среди детей младшего возраста, проживающих в промышленной зоне г. Челябинска. Определена степень выраженности факторов патогенности и антибиотикочувствительности выделенных стафилококков. Все изученные признаки проанализированы методом коэффициента ранговой корреляции Спирмена, найдены связи между различными биологическими свойствами S. aureus и их выраженностью.
Ключевые слова: бактерионосительство, Staphylococcus aureus, факторы патогенности, анти-биотикочувствительность.
Введение. Проблема стафилококкового бактерионосительства является одной из наиболее актуальных для современной медицины в связи с ростом числа носителей стафилококков. По данным ряда авторов, бактерионосительство стафилококков у разных групп населения и больных подвержено большим колебаниям (24-82 %).
Staphylococcus aureus является уникальным микроорганизмом, колонизирующим и поражающим многие органы и ткани, демонстрируя при этом широкий диапазон адаптационных возможностей. Патогенные свойства конкретного штамма стафилококков определяются суммирующим действием факторов патогенности, токсинов и инвазивных свойств этого штамма. При этом патогенность стафилококков варьирует в значительной степени.
Цель. Определить некоторые биологические свойства Staphylococcus aureus, выделенных из различных локусов бактерионосителей.
Материалы и методы. Исследования проводились на базе бактериологической лаборатории Детской городской клинической больницы № 8 г. Челябинска. Всего на предмет стафилококкового бактерионосительства было обследовано 200 детей обоего пола, без локальных клинических проявлений стафилококковой инфекции (бактерионосителей), находящихся на учёте в детской поликлинике, проживающих в Металлургическом районе г. Челябинска. Средний возраст детей составил 11 месяцев.
В работе были использованы 83 культуры S. aureus, выделенные в титре не более 105 КОЕ/г из фекалий (n = 56), из носа (n = 13) и зева (п = 12) детей-бактерионосителей. Идентификация выделенных стафилококков проводилась на основании морфологических, культуральных, биохимических признаков в соответствии с классификацией Берджи (1980) [1]. Оценка антибио-
тикочувствительности проводилась диско-диф-фузионным методом в соответствии с методическими указаниями [2]. Из рекомендованного списка антибиотиков использовали оксациллин, бензилпенициллин, амоксициллин / клавулоно-вая кислота, ципрофлоксацин, амикацин, лин-комицин.
Для определения пигмента и гемолитической активности исследуемые культуры в виде «бляшек» засевали на кровяной агар (КА). Степень продукции гемолизина оценивалась по радиусу зоны гемолиза вокруг «бляшек» (мм). Для определения лецитиназы исследуемые культуры в виде «бляшек» засевали на желточно-солевой агар (ЖСА). О лецитиназной активности свидетельствовало наличие радужного венчика вокруг «бляшек». Для определения ДНКазной активности исследуемые культуры засевали на DNAse TEST AGAR (Manufactured by Hispanlab, Madrid). Положительная реакция: просветление среды вокруг посева. Для определения фибрино-лизина исследуемые культуры засевали в свернутую плазму крови. При положительной реакции происходило растворение фибринового сгустка. Для определения желатиназной активности исследуемые культуры засевали уколом в застывший питательный желатин. При положительной реакции на вторые сутки происходило разжижение желатина.
Фаготипирование культур S. aureus проводилось с использованием международного набора (АНГД, Англия), который включает в себя фаги
I, II, III групп и внегрупповые фаги: 81, 94, 95, 96. Определение адгезивных свойств стафилококков проводили по методу В. И. Брилис и со-авт. (1986). Адгезивные свойства оценивали по среднему показателю адгезии (СПА) и подсчитывали индекс адгезивности микроорганизма (ИАМ).
Статистический анализ проводили с помощью программы SPSS Statistics 17. Для анализа использовали метод корреляций по Спирмену [3].
Результаты и обсуждение. Все выделенные культуры S. aureus проявили 100 %-ную чувствительность к ципрофлоксацину, амикацину, лин-комицину и оксациллину независимо от источника выделения. Более 80 % культур проявили резистентность к бензилпенициллину, что совпадает с литературными данными.
Наибольшую гемолитическую активность (зона гемолиза > 2 мм) проявляли культуры S. aureus, выделенные из зева и носа. Доля негемолитических культур составила в среднем 21,5 %.
Среди выделенных стафилококков преобладали культуры с жёлтым пигментом (53-75 %), по сравнению с белым (1-17 %) и промежуточным — кремовым (25-38 %). По данным научных исследований жёлто-оранжевый пигмент большинства клинических изолятов золотистого стафилококка связан с повышенной бактериальной выживаемостью в неблагоприятных условиях и повышенной патогенностью стафилококков, так как дефицитные по каротиноидам культуры теряют устойчивость к окислительному взрыву нейтрофилов.
Лецитиназная активность была обнаружена у всех выделенных культур. Наиболее выражена лецитиназная активность у стафилококков носовой полости. Большинство культур, выделенных из испражнений (69 %), проявляли ДНКазную активность. Наименьший процент ДНКаза+ культур был среди выделенных из зева (16 %). Фибринолитической и желатиназной активностью обладала примерно половина выделенных культур.
Среди всех культур фаготипируемыми оказались 59,1 %. Из них удельный вес принадлежал III литической группе, что соответствует литературным данным.
Максимальный ИАМ характерен для S. aureus, выделенных из носа (СПА от 0,8 до 16), и равен 6,8±4,1. Минимальная адгезия определена для
S. aureus, выделенных из зева (СПА от 0,1 до 11),— 4,2±3,1. Фекальные стафилококки проявили среднюю адгезивную способность (ИАМ 5,44±3,86).
Все изученные признаки были проанализированы методом коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Были обнаружены следующие корреляции признаков: возраст детей — степень гемолитической активности, гемолиз — лецити-наза, АБЧ — гемолиз, цвет колоний — фибрино-лизин, желатиназа — ДНКаза, адгезия — АБЧ,
адгезия — желатиназа, желатиназа — количество бактерий.
Выводы. 1. Частота носительства S. aureus среди детей, проживающих в промышленной зоне г. Челябинска, составляет 42,5 % (верхние дыхательные пути) и 40 % (в кишечнике).
2. S. aureus обладают 100 % чувствительностью к ципрофлоксацину, амикацину, линко-мицину, амоксиклаву. 80 % культур устойчивы к бензилпенициллину.
3. При стафилококковом бактерионосительстве у детей наиболее часто выделяются типичные культуры с жёлтым пигментом, которые характеризуются повышенной выживаемостью и патогенностью.
4. Все выделенные культуры S. aureus имели типичные для них свойства. Наиболее выражены факторы патогенности у стафилококков, выделенных из носовой полости.
5. Фаготипируемыми оказалось 60 % культур. Преобладающая группа — III (20-25 %). Менее характерна I группа (0-3 %).
6. Наблюдается корреляция между различными признаками S. aureus, что объясняется генетическими механизмами их регуляции.
Заключение. Таким образом, проблема стафилококкового бактерионосительства остаётся актуальной на сегодняшний день и требует целостного изучения на фоне неблагоприятной экологической ситуации. Выявление значительного числа стафилококковых резидентных бактерионосителей среди детей, проживающих на различных территориях не случайно, так как детский контингент в силу несовершенства механизмов адаптации — наиболее чувствительный биоиндикатор воздействия химических полютантов внешней среды на организм.
Список литературы
1. Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений : приказ Минздрава СССР от 22.04.85 № 535.
2. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам : метод. указ. № МУК 4.2.1890-04 : утв. гл. гос. санитар. врачом РФ 04.03.2004.
3. Клиническая лабораторная аналитика. Т. 1 : Основы клинического лабораторного анализа. М. : Агат-Мед, 2002. 860 с.
