CC BY-ND
18
АПРеЛЬ №4 (217)
ЗНиСО
31
БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММОВ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ЛИЦ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ ЗА 2009-2010 ГОДЫ
М.Н. Носик1, К.А. Рыжов1, И.А. Киселева2, А.В. Кравченко3, В.В. Покровский3
BIOLOGICAL PROPERTIES OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS STRAINS ISOLATED FROM HIV-INFECTED INDIVIDUALS LIVING IN THE TERRITORY OF RUSSIA OVER PERIOD OF 2009-2010 YEARS
M.N. Nosik, K.A. Ryzhov, I.A. Kiseleva, A.V. Kravtchenko, V.V. Pokrovsky
'НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, 2ФГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России, 3ФГУН «Центральный научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Роспотребнадзора
Изучены фенотипические и генотипические свойства изолятов ВИЧ, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц, находящихся на 3—4 стадии ВИЧ-инфекции. Показано, что на поздних стадиях заболевания также преобладают несинцитийобразующие штаммы вируса, что, по-видимому, характерно для варианта ВИЧ субтипа А.
Ключевые слова: изоляты вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), субтип А, синцитий-несинцитийобразующие штаммы.
Phenotypic and genotypic properties were studied of HIV-isolates isolated from HIV-individuals with clinical stage III-IV. It was shown that non-syncytium inducing strains prevailed at the latest stages of HIV- infection. It is probably characteristic of HIV-variants of subtype A.
Keywords: Human Immunodeficiency Virus (HIV) isolates, subtype A, syncytium inducing/non-syncytium inducing strains
Проблема ВИЧ-инфекции до сих пор цированы ВИЧ и каждую минуту происходит
остается одной из серьезных мировых про- новое заражение вирусом. В нашей стране эта
блем. Миллионы людей в мире уже инфи- проблема, к сожалению, тоже актуальна. Так,
32
ЗНиСО апрель №4 (217)
по данным Роспотребнадзора РФ, к началу 2011 г. в России зарегистрировано 575 тыс. ВИЧ-инфицированных граждан РФ, из них — 55 тыс. ВИЧ-инфиицрованных детей. Однако эти цифры недостаточно точно отражают картину, потому что на каждого зарегистрированного приходится несколько незарегистро-ванных лиц и реально в России более 1 млн ВИЧ-инфицированных лиц. При этом надо учитывать, что Россия ежегодно принимает свыше 10 млн мигрантов и по масштабам миграции занимает одно из первых мест в мире. Если принять во внимание, что свыше 80 % ВИЧ-инфицированных составляют лица от 15 до 30 лет, то есть речь идет об огромном числе нетрудоспособных лиц молодого возраста, то в итоге данная проблема из разряда медицинской переходит в разряд социальной.
В связи со складывающейся ситуацией, весьма актуально встает вопрос об изучении вариантов ВИЧ, преобладающих на территории Российской Федерации, а также изучение фенотипических и генотипических свойств циркулирующих вариантов вируса, что в дальнейшем позволит использовать новые подходы к терапии ВИЧ-инфицированных и в перспективе послужит фундаментальной базой для создания вакцины против ВИЧ.
В данной работе представлены результаты по изучению биологических свойств 12 изолятов ВИЧ, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц, проживающих на территории Центрального региона РФ, где наблюдается наибольшее количество ВИЧ-инфицированных и где отмечается высокий процент передачи инфекции.
Материалы и методы.
Изоляты вируса. Вирус выделяли из крови ВИЧ-инфицированных лиц, старше 18 лет и с их письменного информированного согласия, по методике, описанной ранее [1,2].
Клетки. В работе использовали перевиваемую лимфобластоидную клеточную линию МТ-4 из коллекции НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, а также лимфоциты периферической крови, которые выделяли по описанной ранее методике [1, 2]. Клетки культивировали в среде ЯРМ1 —1 640 с добавлением 10 % сыворотки эмбрионов коров, 100 мкг/мл гентамицина. Жизнеспособность клеток определяли подсчетом количества живых и погибших клеток после их окрашивания 0,1 %-м раствором трипанового синего.
Маркеры репликации ВИЧ. О наличии вируса в культуре и его количестве судили по
данным непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) и ИФА, предназначенного для выявления антигена р24 (тест-система GenScreen Ultra HIV Ag-Ab, Bio-Rad, Франция) [2].
Субтипирование. Генетический анализ области, кодируемой геном pol, проводили с помощью субтипспецифических праймеров, подходящих для изучения вариантов ВИЧ-1, циркулирующих на территории России [3]. Для анализа субтипов использовали данные HIV Drug Resistance Database.
Результаты и обсуждение.
За период 2009—2010 гг. были собраны образцы крови от 12 ВИЧ-инфицированных лиц, проживающих на территории Центрального региона РФ. Клинико-эпидемиологические показатели обследованных лиц представлены в табл. 1.
В исследованную группу изолятов ВИЧ-1 входили вирусы, выделенные от ВИЧ-инфицированных лиц, находившихся на 3 4 стадии ВИЧ-инфекции (классификация В.И. Покровского). Среди обследованных 75 % составили мужчины и 25 % женщины. Возраст больных в среднем составил 33—40 лет.
Эффективность выделения вирусов составила 100%. Серологический анализ сывороток крови методом иммуноферментного анализа и иммуноблота показал наличие антител к детерминантам ВИЧ-1.
Было установлено, что 11 изолятов относились к субтипу А и 1 изолят к субтипу В.
Исследования показали, что все 12 изо-лятов на всем протяжении культивирования (46—53 суток) характеризовались в целом однотипным поведением. Основной особенностью этих изолятов являлась волнообразность периодов регистрируемой репликации вируса и непродолжительность таких периодов. При этом культивирование изолятов сопровождалось цитопатическим действием (ЦПД), проявлявшимся как на первичных МНК, так и на клетках МТ-4. Характер этого действия у 7 изолятов (№ 714, 710, 712, 707, 713, 711) проявлялся в виде дегенерации клеток, и у 6 изо-лятов — в сочетании денегеративных изменений с формированием синцитий (№ 715, 708, 717, 718, 719) (табл. 2).
У 3-х изолятов (№ 717, 718, 719) формирование синцитий носило эпизодический характер. Лишь у 1 изолята (№ 715) образование синцитий наблюдалось на протяжении всего времени культивирования. И еще 1 изолят (№ 708) после 26 суток культивирования приобрел способность формировать синцитии.
апрель №4 (217)
ЗНчС/О
33
Таблица 1. Клинико-эпидемиологические показатели больных
№ Пациент Возраст Район проживания Стадия заболевания Количество РНК копий, копий/мл Количество CD4+, клеток/мл
715 Мужчина 31 г г. Тула 4А 96602 100
714 Мужчина 37 лет г. Рязань 4А 170000 280
708 Мужчина 64 г г. Рязань 4А 18769 297
710 Мужчина н/и г. Рязань 3 1102 216
712 Женщина 28 л г. Тула 4А 16590 527
707 Мужчина 33 г г. Рязань 4А хронический гепатит С 18852 226
713 Мужчина 44 г Тульская область 4А 3664 139
711 Мужчина 42 г г. Рязань 3 1063 233
709 Мужчина 32 г г. Рязань 3 7742 333
717 Женщина 37 л г. Рязань 4А опоясывающий герпес, ремиссия 4189 333
718 Женщина 34 г г. Ржев 4В фаза прогрессии 36797 286
719 Мужчина 29 л г. Рязань 4В ремиссия 81945 146
Таблица 2. Фенотипические и генотипические свойства выделенных изолятов
№ Субтип Наличие синцитий
Продолжительность культивирования в днях
5 13 19 26 32 39 46 53
715 А — + + + + + + н/к
714 А — — — — — — — н/к
708 А — — — + + + + н/к
710 А — — — — — — — н/к
712 А — — — — — — — н/к
707 А — — — — — — — н/к
713 А — — — — — — — н/к
711 А — — — — — — — н/к
709 А + — — + — — — н/к
717 А — — — + — — — +
718 А + — — — — — + +
719 В — — — — — — — +
Примечание: н/к - не культивировались
Следует также отметить, что в процессе длительного культивирования у 11 изолятов отмечался еще один морфологический маркер — спонтанная дезагрегация клеток МТ-4, которые в норме, растут, собираясь в большие кластеры. Этот феномен характерен для изо-
лятов ВИЧ, не обладающих синцитийобразу-ющей способностью [1].
Таким образом, из 12 выделенных изолятов, 2 изолята относились к синцитийо-бразующим изолятам и 10 изолятов к несин-цитийобразующим. Полученные результаты
34
ЗНиСО АПРеЛЪ №4 (217)
не согласуются с литературными данными о том, что изоляты вируса, выделенные от больных, находящихся на поздних стадиях ВИЧ-инфекции, непременно обладают синцитий-образующей способностью (признак, который является неблагоприятным прогностическим симптомом), а в начале заболевания выделяются лишь несинцитийобразующие изоляты [4]. Возможно, это объясняется тем фактом, что данная закономерность относится лишь к субтипам В и С, а все выделенные изоляты (за исключением одного) относились к субтипу А. Это в свою очередь позволяет предположить, что вариант ВИЧ субтипа А обладает более низкой вирулентностью.
Также не было отмечено никакой разницы в репликативной способности изолятов, относящихся к субтипу А и к субтипу В. Однако этот вопрос требует дальнейшего изучения, поскольку процентное соотношение субтипов не позволяет сделать статистически обоснованных выводов.
Все выделенные изоляты вируса (за исключением одного) относились к субтипу А и подтверждают данные о том, что на территории Центрального региона, несмотря на большой миграционный поток, преобладает данный
вариант субтипа ВИЧ, как и на большей части
территории России.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Маренникова С.С., Степанова Л.Г., Носик М.Н. и др. О штаммовых особенностях циркулирующего в СССР ВИЧ-1 по данным изучения его свойств в клеточных культурах //Вопросы вирусологии. 1991. № 5. С. 356—361.
2. Маренникова С.С., Степанова Л.Г. Носик М.Н. и др. Выделение ВИЧ от детей с начальными при-знакми ВИЧ-инфекции и бессимптомных носителей //Вопросы вирусологии. 1992. № 1. С. 22—24.
3. Рыжов К.А., Алешкина М.А., Носик М.Н. Одновременное определение 4-х субтипов ВИЧ-1, распространенных на территории России с помощью субтипспецифических праймеров //Тезисы Всероссийской научной конференции «Проблемы биомедицинской науки 3-го тысячелетия» 21—22 декабря 2010 г., Санкт-Петербург.
4. Taylor B.S., Sobieszczyk E., McCutcham F.E., Hammer S.M. The Challenge of HIV-1 subtype diversity //The New England Journal of Medicine. 2008. V. 358. P. 1550—1562.
Контактная информация:
Носик Марина Николаевна, тел.: 8-916-490-66-24
Contact information:
Nosik Marina Nikolaevna, tel.: 8-916-490-66-24
