CC BY-ND
34
МАРТ №3 (228)
13
ЭФФЕКТИВНОСТЬ АНТИРЕТРОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ЛИЦ В ДИНАМИКЕ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА
М.Н. Носик1, М.С. Чатаева2, О.А. Лобач2, К.А. Рыжов1, М.В. Таблер3
EFFICACY OF HIGHLY ACTIVE ANTIRETROVIRAL THERAPY FOR HIV-INFECTED PERSONS IN THE PROCESS OF HIV-INFECTION
M.N. Nosik, M.S. Chataeva, O.A. Lobach, K.A. Ryzhov, M.V. Tabler
'НИИ вакцин и сывороток им.И.И. Мечникова РАМН, 2ФГУ «НИИ вирусологии им.Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России, 3ФГУЗ «Федеральный Центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора
Изучены биологические свойства изолятов ВИЧ, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц в динамике инфекционного процесса, и выявлены точечные мутации, приводящие к резистентности к АРВ-препаратам. Показано, что для эффективности лечения необходимо изменить набор применяемых медикаментозных средств.
Ключевые слова: изоляты вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), антиретрови-русная терапия (АРВ-терапия), синцитийобразующий штамм, мутация.
Biological properties isolates a HIV, the persons allocated from a HIV-infected in dynamics of infectious process are studied, and the dot mutations leading to resistance to ARV-preparations are revealed. It is shown that for efficiency of treatment change of a set of applied medicamentous means is necessary.
Keywords: Human Immunodeficiency Virus (HIV) isolates, Highly Active Antiretroviral Therapy (HAART), syncitium inducing strain, mutation.
Лечение ВИЧ-инфекции — одна из актуальнейших проблем современной медицины. В настоящее время с помощью химиопрепа-ратов, направленных на ингибирование различных ферментов вируса, удается значительно улучшить состояние больных, подавляя на какой-то период репродукцию ВИЧ. К сожалению, это временный успех, т. к. сложная природа вируса иммунодефицита человека позволяет ему быстро адаптироваться к действию лекарств. Появляются резистентные к действию препаратов штаммы вируса. Это, в свою очередь, требует увеличения доз препаратов, а также применения их комбинаций. Еще одна проблема заключается в том, что все применяемые антиретровирусные лекарства токсичны для организма человека и довольно дорогостоящие.
Задачей данной работы было оценить эффективность проводимой антиретровирусной терапии (АРВ-терапии) у ВИЧ-инфицированных лиц.
Материалы и методы.
Изоляты вируса. Вирус выделялся из крови ВИЧ-инфицированных лиц старше 18 лет с их письменного информированного согласия по стандартной методике [1; 2].
Клетки. В работе использовались перевиваемые лимфобластоидные клеточные линии МТ-4 и Jurkat из коллекции НИИ вакцин
и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, а также лимфоциты периферической крови, которые выделялись по стандартной методике [1; 2]. Клетки культивировались в среде RPMI-1640 с добавлением 10 %-ой сыворотки эмбрионов коров и 100 мкг/мл гентамицина. Жизнеспособность клеток определялась подсчетом количества живых и погибших клеток после их окрашивания 0,1 % раствором трипа-нового синего.
Маркеры репликации ВИЧ. О наличии вируса в культуре и его количестве судили по данным непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) и ИФА, предназначенной для выявления антигена р24 (тест-система GenScreen Ultra HIV Ag-Ab, Bio-Rad, Франция) [2].
Гибридизация. Гибридизация проводилась на полистироловых планшетах по общепринятой методике [3]. Последовательности олиго-нуклеотидов к гену pol ВИЧ-1 рассчитывались исходя из консенсусной последовательности субтипов, распространенных в России, с помощью программы «Oligo».
Результаты и обсуждение. В ходе работы было выделено 18 изолятов от ВИЧ-инфицированных лиц, получавших антиретро-вирусную терапию (АРВ-терапия) (табл. 1).
Больные получали лечение комбинацией препаратов: нуклеозидные аналоги (ази-дотимидин/диданозин) + ненуклеозидные
14
ЗНиСО МАРТ №3 (228)
Таблица 1. Клинико-эпидемиологические показатели ВИЧ-инфицированных больных, от которых выделены изоляты вируса
Изолят Пол Регион Стадия заболевания
1 ж Приволжский округ 11Б
2 м Приволжский округ 11Б
3 ж Москва 11Б
4 ж Москва 11Б
5 ж Москва 11Б
6 ж Москва 11Б
7 ж Приволжский округ 11Б
8 ж Московская обл. 11Б
9 ж Москва 11Б
10 ж Москва 11Б
11 ж Московская обл. 11Б
12 ж Москва 11Б
13 ж Москва 11Б
14 ж Московская обл. 11Б
15 ж Московская обл. 11Б
16 м Приволжский округ IIB
17 ж Москва 11Б
18 ж Москва IIB
аналоги (эфавиренц) и некоторые больные, помимо нуклеозидных (азидотимидин/лами-вудин) и ненуклеозидных аналагов (эфавиренц), получали лечение ингибиторами протеазы вируса (индинавир или калетра/ лопинавир+ритонавир).
Изоляты, выделенные от больных, исследовались в процессе проведения АРВ-терапии. Забор крови производился в начале лечения, через месяц после лечения, через 3—4 месяца и через 5 месяцев после начала лечения.
Изоляты, выделенные от больных до начала терапии антиретровирусными препаратами, вызывали выраженный цитопатиче-ский эффект в лимфобластоидных клетках, а также экспрессию антигенов ВИЧ в клетках, выявляемых с помощью применения метода непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител к антигенным детерминантам вируса. В культуральной жидкости клеток, инфицированных изолята-ми пациентов, также отмечался повышенный уровень антигена вируса. Через месяц после начала проведения АРВ-терапии у больных отмечалось снижение вирусных маркеров по сравнению с исходным уровнем до начала лечения. Однако через 5 месяцев после нача-
ла АРВ-терапии у 15 больных стали появляться признаки повышения вирусной нагрузки (увеличение количества РНК вируса в периферической крови; увеличение количества вирусного антигена в культуральной жидкости клеток, инфицированных изолятами пациентов; увеличение числа клеток, экспрессирую-щих антигены; выраженное цитодеструктив-ное действие).
У двух (№№ 7 и 8) из 18 больных наблюдались выраженные признаки повышения вирусной нагрузки через 4 месяца после начала лечения. А у одного больного (№ 3) уже через 3 месяца показатели РНК вируса в крови до и после лечения почти сравнялись (табл. 2). Более того, у данного больного спустя 3 месяца после начала лечения было отмечено появление синцитийобразующего штамма вируса, что является крайне неблагоприятным прогностическим симптомом.
С помощью гексануклеотидных зондов в 7 образцах, взятых от пациентов (№№ 3, 6, 7, 8, 16, 17) в процессе проведения лечения, была выявлена мутация, ведущая к устойчивости к ненуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы. И в 3 образцах из 7 была выявлена мутация, ведущая к устойчиво-
МАРТ №3 (228)
15
Таблица 2. Исследование биологических свойств изолятов ВИЧ, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц в динамике инфекционного процесса
Сроки выделения изолята ПЦР, количество РНК копий/мл ИФА, Антиген вируса, разведение* ЦПЭ**
№3 до начала лечения 420.000 10-3 +++
через 1 месяц после начала лечения 13.000 10-1 +
через 3 месяца после начала лечения 380.000 10-3 +++ синцитии
№7 до начала лечения 250.000 10-2 ++
через 1 месяц после начала лечения 2000 0
через 4 месяца после начала лечения 170.000 10-1,5 ++
№8 до начала лечения 110.000 10-2 +
через 1 месяц после начала лечения 1000 0
через 4 месяца после лечения 80.000 10-1 +
Примечание: * - антиген вируса в культуральной жидкости клеток, инфицированных изолятом (метод ИФА), ** - ЦПЭ (цитопатический эффект действия вируса на клетки)
сти к нуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы, т. е. в этих образцах присутствовали мутации, ведущие к устойчивости к нуклеозидным и ненуклеозидным ингибиторам обратной транкскриптазы. Это как раз образцы от 3 больных, у которых отмечалось выраженное повышение вирусной нагрузки уже через 3—4 месяца после начала анти-ретровирусной терапии. В остальных случаях резистентность к АРВ-терапии была обусловлена, по всей видимости, особенностями организма. Имеются данные, что у пациентов, у которых АРВ-терапия не давала выраженного положительного эффекта, снижена абсорбция лекарственных препаратов или повышен их метаболизм.
Полученные данные дают основания предполагать, что уже через 3—4 месяца после начала антиретровирусной терапии у больных начинает формироваться резистентность к антиретро-вирусным препаратам. Таким образом, целесообразно проводить смену антиретровирусных препаратов уже через 2—3 месяца.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Маренникова С.С., Степанова Л.Г., Носик М.Н. и др. О штаммовых особенностях циркулирующего в СССР ВИЧ-1 по данным изучения его свойств в клеточных культурах //Вопросы вирусологии. 1991. № 5. С. 356—361.
2. Маренникова С.С., Степанова Л.Г. Носик М.Н. и др. Выделение ВИЧ от детей с начальными признаками ВИЧ-инфекции и бессимптомных носителей //Вопросы вирусологии. 1992. № 1. С. 22—24.
3. Радюк С.Н., Рыжов К.А., Мацевич Г.Р. и др. Неизотопный вариант количественного анализа с помощью полимеразной цепной реакции в диагностике ВИЧ-инфекции: Методические рекомендации //Вопросы вирусологии. 1996. № 1. С. 44—45.
4. Montessori V., Press N., Harris M., Akagi L., Montaner J.S.G. Adverse effects of antiretroviral therapy for HIV infection. CMAJ. 2004. V. 20. № 170 (2). P. 229—238.
Контактная информация:
Носик Марина Николаевна, тел.: 8 (916) 490-66-24
Contact information:
Nosik Marina Nicolaevna, phone: 8 (916) 490-66-24
