CC BY
77
Заключение
Изученные нами препараты природного происхождения являются эффективными средствами для улучшения иммунологических показателей и повышения воспроизводительной способности коров.
Библиографический список
1. Кудинова С.П. Влияние каролина на воспроизводительную функцию сельскохозяйственных животных / С.П. Ку-
динова, В.А. Антипов, А.Н. Турченко, Р.В. Казарян / / Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: матер. Междунар. науч.-практ. конф. Воронеж, 2002. С. 703-705.
2. Семенова Н.Н. Иммунотропные свойства препарата «Пребиостим» /
Н.Н. Семенова, А.Ф. Колчина // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: матер.
Междунар. науч.-произв. конф. Воронеж, 2006. С. 977-982.
+ + +
УДК 619:616.98:578.824.11 С.К. Абдрахманов,
С.М. Мамадалиев
БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЭПИЗООТИЧЕСКОГО ШТАММА «КОРДАЙ»
ВИРУСА БОЛЕЗНИ АУЕСКИ
В настоящее время эпизоотическое благополучие по инфекционным болезням животных поддерживается путем проведения ветеринарных мероприятий, имеющих профилактическую направленность.
В этой связи актуален вопрос об основных требованиях, предъявляемых к производственным и контрольным штаммам микроорганизмов, используемых юридическими лицами при производстве ветеринарных биологических препаратов [1, 2].
Контрольные штаммы, используемые для проверки вакцин, анатоксинов, гипе-риммунных сывороток и диагностикумов, должны соответствовать по своим антигенным свойствам возбудителю, используемому при производстве биопрепарата, а по вирулентным — эпизоотическому штамму возбудителя болезни [3, 4].
Целью данных исследований явилось изучение биологических свойств эпизоотического штамма вируса болезни Ау-ески, выделенного от больных животных.
Задачей исследований является выявление штамма вируса, отвечающего требованиям, предъявляемым к контрольному штамму для проверки им-муногенности выпускаемых вакцин.
Материалы и методы
В работе использовали следующие штаммы вируса болезни Ауески:
а) вакцинный штамм ГНКИ, прошед-
ший два пассажа в культуре клеток фибробластов куриного эмбриона рол-лерным способом культивирования, титр его при этом составил 7,5 ^
ТЦД50/см3;
б) эпизоотический штамм ВНИЯИ (контрольный вирус) прошел в НИСХИ два пассажа в культуре клеток ПЯ, активность его при титровании в культуре клеток ПЯ-6,0-6,5 ^ ТЦД50/см3; на кроликах — 6,5 ^ ЛКД50. Штамм по паспортным данным патогенен для овец и КРС в дозе 10 000 ТЦД50, вызывает заболевание и гибель на 7-11-е сутки с клинической картиной болезни Ауески. Штамм используется в НИСХИ в качестве контрольного (при проверке имму-ногенности коммерческой вакцины);
в) эпизоотический штамм «Кордай» выделен от больных поросят.
Культуры клеток и питательные среды. Использовали первично-трипси-низированные (первичные) культуры клеток фибробластов куриного эмбриона (ФКЭ), перевиваемые культуры клеток сирийского хомячка (ВНК-21).
При работе с перечисленными культурами клеток использовали в качестве поддерживающей среды питательную среду Игла или питательную среду ПСП.
Животные, методы их иммунизации и заражения. Использовали овец породы южно-казахский меринос в возрасте от 6 мес. до 1,5 лет, клинически здоровых и не содержащих в крови ви-руснейтрализующих антител против болезни Ауески, подсвинков крупной белой породы в возрасте от 2-8 мес., живой массой 20-60 кг, кроликов породы шиншилла, живой массой 2-3 кг.
Иммунизацию овец и подсвинков проводили вирусвакциной из штамма ГНКИ, которую вводили под кожу подмышечной области туловища в объеме
2 мл.
Заражение животных проводили штаммом «Кордай» вируса болезни Ау-ески подкожно в подмышечной области туловища в объеме 1 мл, содержащем 10000 ТЦД50 вируса.
Учет результатов иммунизации или заражения проводили по данным клинических наблюдений (общее состояние организма, характер реакции в местах введения вирусвакцины и контрольного вируса, результатам термометрии) и обнаружения вируснейтрализующих антител в сыворотках крови животных (РН).
Вирусологические работы (определение цитопатической активности, патогенность, антигенные свойства) проводили общепринятыми методами проведения вирусологических исследований.
Статистическую обработку результатов проводили по методам, описанным в руководстве И.П. Ашмарина, А.А. Воробьева.
Результаты исследований
В настоящее время при работе с вирусом болезни Ауески используют, как правило, штаммы разной степени патогенности: эпизоотический (шт. П, шт. ВНИЯИ) и аттенуированные (шт. «БУК-622», «БУК-900», «МК-25») [6].
Штамм «Кордай», выделенный в 1996 г. от больных свиней в свиноводческой фирме АО «Достык» Кор-дайского района Жамбылской области, относится к семейству герпесвирусов, роду герпесвирус, депонирован и хранится в коллекции штаммов микроорганизмов НИСХИ НЦБ РК.
Вирус освежали в культуре клеток ФКЭ, далее пассировали в перевиваемой культуре клеток ВНК-21. Цито-патическое действие проявлялось через 18-36 часов и характеризовались специфичными для данного вируса изменениями клеток (округление клеток, скопление пораженных клеток в виде «гроздьев винограда»). Активность вируса была одинаковой как при титровании в культуре клеток ФКЭ, так и в культуре клеток ВНК-21.
Нами были изучены основные биологические свойства эпизоотического штамма «Кордай» вируса болезни Ауески.
Данный штамм культивируется в организме восприимчивых животных (овец, свиней, кроликов, КРС, пушных зверей, плотоядных) и культурах клеток ПЯ, ВНК, в титрах до 7,5 ^ ТЦД50/см3. Гипериммунизация животных стимулирует образование вируснейтрализующих антител в титре до 1:128.
Штамм хранится в лиофилизиро-ванном состоянии при минус 20°С-40°С со стабилизирующей средой пептон и лактоза 3 и 2% соответственно, без снижения активности в течение 5 лет (срок наблюдения).
Патогенные свойства штамма определяли на овцах и подсвинках.
С этой целью вакцинировали животных против БА вирусвакциной из штамма ГНКИ в дозах 50, 100, 1000, 10000, 100000 ТЦД50 в объеме 2 мл подкожно в подмышечной области туловища. Через каждые 7 суток после вакцинации и перед контрольным заражением проводили взятие сывороток крови для определения титра вируснейтрализующих антител в РН. Через 21 сутки после вакцинации всех животных опытной группы и 2 интактных (контрольных) овец подвергли контрольному заражению вирулентным вирусом БА штамм «Кордай» в дозе 10 000 ТЦД50, в объеме 1 мл. Ре-
з у льтаты РН и реакция животных на контрольное заражение представлены в таблице.
Из данных таблицы следует, что животные, вакцинированные в дозах от 100 до 100000 ТЦД50, были устойчивы к контрольному заражению. У всех вакцинированных животных были обнаружены вируснейтрализующие антитела в титрах от 1:2 до 1:16 в различные сроки
после вакцинации, за исключением тех случаев, когда животных прививали в дозе 100 ТЦД50. Через 7 суток после вакцинации вируснейтрализующие антитела не обнаружены. У животных вакцинированных в дозе 50 ТЦД50, не были обнаружены вируснейтрализующие антитела во все исследуемые сроки. В связи с тем, что вакцинированные подсвинки не реагировали на контрольное заражение, иммуногенность для свиней оценивали по корелляции между титрами ВНА у иммунизированных овец и подсвинков, которые были сопоставимы.
В результате исследований установлено, что животные, вакцинированные в дозах 100, 1000, 10000, 100000 ТЦД50, были устойчивы к контрольному заражению, в то время как животные контрольной группы (овцы) реагировали на контрольное заражение и погибли с характерными клиническими признаками БА к 7-10-м суткам наблюдения, как и овцы, привитые в дозе 50 ТЦД50.
Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что выделенный штамм «Кордай» вируса болезни Ауески отличается высокой цитопатической (7,5 1д ТЦД50/см3) и патогенной активностью для восприимчивых животных.
Выводы
1. Штамм «Кордай» вируса болезни Ауески отличается высокой патогенной активностью (7,5 1д ТЦД50/см3) для восприимчивых животных и культур клеток.
2. Штамм «Кордай» вируса болезни Ауески соответствует требованиям,
предъявляемым к контрольному штамму, и может быть использован для проверки иммуногенности выпускаемых вакцин.
Библиографический список
1. Камалов Г.Х. К контролю штамма БУК-628 вируса болезни Ауески / Г.Х. Камалов, В.И. Полуянов, И.И. Фомина, И.Г. Карандашов // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: тез. докл. V Всес. вет. вирусол. конф. Казань, 1980. С. 132.
2. Качанова С.П. Болезнь Ауески / С.П. Качанова. М.: ВАСХНИЛ, 1985. С. 17-22.
3. Борисович Ю.Ф. Ветеринарные препараты / Ю.Ф. Борисович, Л.В. Кириллов. М.: Колос, 1981. С. 90-96.
4. Коломыцев А.А. Оценка вирусвак-цины для профилактики болезни Ауески свиней / А.А. Коломыцев, В.А. Бабаян, И.Ф. Вишняков, В.В. Куриннов // Ветеринария. 1991. № 1. С. 31-33.
5. Ашмарин Н.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / Н.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. Л.: Наука, 1962.
6. Жестерев В.И. Оценка некоторых биологических свойств штаммов вируса болезни Ауески / В.И. Жестерев, В.А. Мищанин, Р.В. Кошелева,
B.И. Балышева, Н.А. Чермашенцева,
C.Г. Юрков, Н.Б. Исакова // Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии: матер. науч.-практ. конф. ВНИИВВиМ «Классическая чума свиней — неотложные проблемы науки и практики». Покров, 1995. С. 147-148.
Таблица
Реакция животных, вакцинированных различными дозами на контрольное заражение
Вид животных Доза вирус-вакцины в ТЦД50 Кол-во животных Титр ВН антител по срокам, сут. Исход
7 14 21
Подсвинки 50 2 н/о н/о н/о 0/2
Подсвинки 100 2 н/о н/о 1:2 0/2
Подсвинки 1000 2 1:2 1:4 1:4-1:8 0/2
Подсвинки 10000 2 1:2-1:4 1:4 1:8-1:16 0/2
Овцы 50 2 н/о н/о н/о 2/2
Овцы 100 2 н/о 1:2 1:2 0/2
Овцы 1000 3 1:2 1:2-1:4 1:4 0/3
Овцы 10000 4 1:2 1:2-1:4 1:8-1:16 0/4
Овцы 100000 2 1:2 1:4 1:16 0/2
Овцы контроль 2 - - - 2/2
Примечание. н/о — вируснейтрализующие антитела не обнаружены; в числителе — количество павших животных; в знаменателе — общее количество животных в группе.
