CC BY
18УДК: 616-003.23:616.314-007.21:616-089.843
БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ БОЛЬНЫХ С ЧАСТИЧНОЙ АДЕНТИЕЙ НА РАЗНЫХ ЭТАПАХ ЛЕЧЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДЕНТАЛЬНОЙ ИМПЛАНТАЦИИ
Севостьянов И. А., Быков И. М., Попов К. А., Мелконян К. И., Литвинова М. Г.
Кафедра фундаментальной и клинической биохимии, ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России, 350063, ул. Седина 4, Краснодар, Россия;
Для корреспонденции: Быков Илья Михайлович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фундаментальной и клинической биохимии ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России, E-mail: ilya. bh@mail.ru
For correspondence: Ilia M. Bykov, MD, Professor, Head of the department of fundamental and clinical biochemistry Kuban state medical university, E-mail: ilya.bh@mail.ru
Information about authors:
Sevostyanov I. A., http://orcid.org/0000-0002-8472-7279 Bykov I. M., http://orcid.org/0000-0002-1787-0040 Popov K. A., http://orcid.org/0000-0002-3649-1361 Melkonyan K. I., http://orcid.org/0000-0003-2451-6813 Litvinova M. G., http://orcid.org/0000-0002-2814-1409
РЕЗЮМЕ
В работе представлены исследования изменений электролитного баланса и прооксидантно-антиоксидантной системы ротовой жидкости на разных этапах лечения частичной адентии 1-2 зубов с применением дентальной имплантации. Ротовую жидкость собирали до установки имплантатов (1 этап), на этапе снятия швов (2 этап), на этапе установки формирователей десны (3 этап) и после установки ортопедических конструкций (4 этап). У больных с частичной адентией до лечения в ротовой жидкости было определено увеличенное содержание ионов натрия на 59%, сниженное значение концентрации ионов кальция и фосфатов на 17% и 22% соответственно. Низкая концентрация ионов кальция в ротовой жидкости исследуемых больных сохранялась на всем протяжении исследования, однако к 4-му этапу лечения отмечалось статистически значимое увеличение данного показателя на 8-10%. На 3-4-м этапах лечения увеличивался относительно исходных значений уровень фосфат-ионов на 15%. Общая антиоксидантная активность ротовой жидкости больных с частичной адентией была снижена на 15% относительно контрольных цифр. Восстановление целостности зубных рядов сопровождалось увеличением антиоксидантной активности ротовой жидкости до нормальных значений. Интенсивность окислительной модификации биомолекул у больных основной группы на момент первичного осмотра была увеличена в 1,7 раза, однако в процессе лечения было зафиксировано постепенное снижение данного показателя до контрольных цифр.
Проведенные исследования показали восстановление нормального электролитного баланса и функционирования прооксидантно-антиоксидантной системы у больных с адентией 1-2 зубов после проведения лечения с применением дентальной имплантации, что позволяет делать выводы об эффективности и максимальной инертности данного метода лечения для метаболических систем ротовой жидкости.
Ключевые слова: ротовая жидкость, дентальная имплантация, антиоксидантная активность, окислительные модификации, электролитный обмен.
BIOCHEMICAL CHANGES IN ORAL LIQUID OF PATIENTS SUFFERING FROM PARTIAL ADENTIA ON VARIOUS STAGES OF TREATMENT BY MEANS OF DENTAL IMPLANTATION
Sevostyanov I. A., Bykov I. M., Popov K. A., Melkonyan K. I., Litvinova M. G.
Kuban state medical university, Krasnodar, Russia
SUMMARY
In the article the study in changes of electrolyte balance and prooxidant-oxidative system of oral liquid have been presented on various stages of treatment of partial adentia of 1-2 teeth by means of dental implantation. The oral liquid has been sampled before the placement of dental implants (1st stage), by the removal of sutures (2nd stage), by the placement of healing screws (3rd stage) and after the placement of dental prostheses (4th stage). In oral liquid of patients suffering from partial adentia before treatment the content of sodium ions increased by 59% has been detected as well as the lowered concentration of calcium ions and phosphates by 17% and 22% respectively. The lowered concentration of calcium ions in oral liquid of test-persons has been preserved during the entire study, but to the 4th stage of treatment the statistically significant increase in this index by 8-10% has been detected. On 3rd-4th stages of treatment the level of phosphate-ions has increased by 15% in comparison with the initial indices. The general an-tioxidant activity of oral liquid in patients suffering from partial adentia has decreased by 15% in comparison with the control indices. The restoration of integrity of dentition has been accompanied by the increase of antioxidant activity of oral liquid up to the normal level. In patients of the main group at the moment of the initial oral exam the intensity of
oxidative modification of biomolecules has increased by 1,7 times, but during the treatment the gradual lowering of this index up to the control level has been detected.
The performed study has demonstrated the restoration of normal electrolyte balance and the functioning of proox-idant-oxidative system in patients suffering from adentia of 1-2 teeth after treatment by means of dental implantation that allows us making a conclusion about effectiveness and maximal torpidity of the presented method of treatment in metabolic systems of oral liquid.
Key words: oral liquid, dental implantation, antioxidant activity, oxidative modifications, electrolyte metabolism.
Метаболические изменения в тканях и жидкостях ротовой полости у больных с частичной адентией наряду с морфо-функциональными нарушениями обуславливают развитие и про-грессирование осложнений, таких как остео-пороз, атрофия костной ткани, жевательной и мимической мускулатуры, дисфункция ви-сочно-нижнечелюстного сустава [1]. Ротовая жидкость, или смешанная слюна, представлена смесью биожидкостей полости рта (слюна, дес-невая жидкость и др.), продуктов жизнедеятельности микрофлоры, тканевыми компонентами, экзогенными веществами, внесенными с продуктами питания и т.д. [2] Учитывая гомеоста-тическую функцию ротовой жидкости, изменения ее состава могут оцениваться с диагностическими целями. Саливадиагностика сегодня находит широкое применение в лабораторной диагностике соматических заболеваний, однако наибольший потенциал, несомненно, имеет в стоматологической практике [3; 4; 5]. Оценка изменений прооксидантно-антиоксидант-ного баланса у больных с частичной адентией и после лечения с использованием съемного и несъемного протезирования показала усугубление нарушений окислительного метаболизма [1]. Последнее может быть связано с особенностями получения материала протезов в ходе свободнорадикальной полимеризации. Основным методом восстановления целостности зубных рядов сегодня является дентальная имплантация, представляющая собой внедрение имплантата в костную ткань, на который в последующем устанавливается ортопедическая конструкция (коронка) [6; 7; 8]. При этом все использующиеся материалы являются максимально инертными для тканей полости рта человека. Между тем явных доказательств влияния или его отсутствия дентальной имплантации на метаболические показатели ротовой жидкости в настоящее время не имеется [9].
Цель данной работы - изучить изменения электролитного состава, антиоксидантной активности и интенсивности окислительных процессов в ротовой жидкости на разных этапах лечения частичной адентии 1-2 зубов с применением дентальной имплантации.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Характеристика групп испытуемых лиц
Для проведения исследования были сформированы 2 группы испытуемых лиц: контрольная и основная. В контрольную группу были включены 20 условно здоровых человек (10 мужчин и 10 женщин, средний возраст 32±2,5 года) с сохранными зубными рядами, наблюдавшиеся в рамках плановых медицинских осмотров. Основная группа была представлена больными с адентией 1-2 зубов (n=18, 10 мужчин и 8 женщин, средний возраст 35±2,2 лет). Для восстановления целостности зубных рядов больным основной группы выполнялась установка дентальных имплантатов из Ti Grade 4 с последующей установкой ортопедических конструкций. У лиц контрольной группы на момент осмотра собирали ротовую жидкость в объеме 5-7 мл после предварительного ополаскивания полости рта водой. У больных основной группы собирали ротовую жидкость в ходе проведения первичного осмотра, до установки имплантатов (1 этап), на этапе снятия швов (2 этап, 2 недели после первичного осмотра и установки имплантатов), на этапе установки формирователей десны (3 этап, через 5 месяцев после начала наблюдения) и после установки ортопедических конструкций (4 этап, через 6 месяцев после начала наблюдения). Все испытуемые лица наблюдались и проходили лечение на базе Стоматологической поликлиники ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России в соответствии с принципами, изложенными в Хельсинкской Декларации Всемирной медицинской ассоциации (64th WMA General Assembly, Fortaleza, Brazil, October 2013) и Федеральном законе Российской Федерации № 323-ф3 от 21.11.2011 г. «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации».
Лабораторный этап исследования ротовой жидкости
Ротовую жидкость центрифугировали и отбирали чистый прозрачный супернатант без следов крови для проведения дальнейших лабораторных исследований. Для оценки электролитного баланса ротовой жидкости определяли концентрации ионов натрия, калия, кальция и фосфат-ионов фотометрическими метода-
ми с использованием лабораторных наборов реагентов «Витал Девелопмент Корпорэйшн» (Санкт-Петербург, Россия). Для характеристики состояния окислительно-восстановительного гомеостаза ротовой жидкости определяли общую антиоксидантную активность (АОА) фотометрическим железо-восстанавливаю-щим методом FRAP [10] и содержание продуктов окислительных модификаций биомолекул, реагирующих в тест-системе с 2-тиобарбиту-ровой кислотой (ТБК-РП) [11]. АОА выражали в мг/л аскорбиновой кислоты, принятой за стандарт, концентрацию ТБК-РП выражали в условных единицах тиобарбитурового числа (ТБЧ), характеризующего накопление малонового диальдегида, диеновых конъюгатов и других продуктов перекисного окисления липидов.
Статистический анализ
Статистический анализ полученных данных проводили с использованием программы StatPlus (AnalystSoft Inc.). Оценку значимо-
сти отличий между контрольной и основной группами проводили с помощью и-критерия Манна-Уитни. Оценку различий между показателями ротовой жидкости больных основной группы на разных этапах лечения осуществляли с помощью критерия Уилкоксона. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Проведенные исследования электролитного состава ротовой жидкости больных с частичной адентией 1-2 зубов до лечения показали увеличенное содержание ионов натрия на 59%, сниженное значение концентрации ионов кальция и фосфатов на 17% и 22% соответственно (табл. 1). Концентрация ионов калия ротовой жидкости больных основной группы статистически значимо не отличалась от контрольного показателя ни на одном из этапов наблюдения и не претерпевала изменений при сравнении показателей на разных этапах лечения.
Таблица 1
Изменение электролитного состава ротовой жидкости на разных этапах лечения частичной адентии с применением дентальной имплантации (Ме (р0,25/р0,75)
Исследуемые группы Исследуемые показатели
Натрий, ммоль/л Калий, ммоль/л Кальций, ммоль/л Фосфаты, ммоль/л
Контрольная 11,36 (7,16/14,56) 19,14 (17,37/21,34) 1,88 (1,79/1,93) 4,33 (3,82/4,94)
Основная(1 этап) 18,10* (15,08/20,22) 18,72 (16,47/20,50) 1,56* (1,43/1,63) 3,38* (2,98/3,55)
Основная(2 этап) 24,36*Л (20,35/25,70) 14,10 (12,45/18,38) 1,55* (1,42/1,63) 3,52* (3,29/3,80)
Основная(3 этап) 7,51Л (6,90/9,10) 18,32 (16,03/20,37) 1,57* (1,46/1,65) 3,85Л (3,55/4,05)
Основная(4 этап) 7,86 (6,88/9,05) 16,00 (14,89/18,94) 1,70*Л (1,60/1,78) 3,86 (3,58/4,15)
Примечание: * - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя контрольной группы, л - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя на предыдущем этапе наблюдения.
Содержание ионов натрия в ротовой жидкости больных основной группы оставалось увеличенным в 1,6-2,1 раза на первых двух этапах лечения, включающих установку имплан-татов и снятие швов через две недели (табл. 1).
На 3-4 этапах лечения уровень содержания ионов натрия в ротовой жидкости испытуемых лиц основной группы снижался до контрольных значений.
Сниженная на 10-17% концентрация ионов кальция в ротовой жидкости больных основной группы сохранялась на всем протяжении исследования, однако к 4-му этапу лечения отмечалось статистически значимое увеличение
данного показателя на 8-10% относительно значений, определенных на 2-3 этапах лечения.
Содержание фосфат-ионов в ротовой жидкости больных основной группы было снижено до лечения и на этапе снятия швов после установки имплантатов на 19-22%. На этапе установки формирователя десны и ортопедической конструкции, спустя 5-6 месяцев после установки дентальных им-плантатов, уровень фосфат-ионов в ротовой жидкости был увеличен на 15% относительно исходных значений рассматриваемого показателя больных основной группы, однако оставался ниже контрольных цифр.
Таблица 2
Антиоксидантная активность и содержание продуктов окислительной модификации биомолекул в ротовой жидкости на разных этапах лечения частичной адентии с применением дентальной имплантации (Ме ф0,25ф0,75))
Исследуемые группы Исследуемые показатели
Общая АОА, мг/л вит С ТБЧ, усл. ед.
Контрольная 0,41 (0,37/0,45) 0,23 (0,20/0,25)
Основная(1 этап) 0,35 (0,30/0,38)* 0,38 (0,34/0,42)*
Основная (2 этап) 0,36 (0,32/0,39) 0,28 (0,25/0,33)*л
Основная (3 этап) 0,30 (0,28/0,34)* 0,21 (0,18/0,25)л
Основная(4 этап) 0,49 (0,44/0,51)л 0,20 (0,18/0,25)
Примечание: * - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя контрольной группы, л - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя на предыдущем этапе наблюдения.
Изучение общей АОА показало сниженные ее значения у больных с частичной адентией 1-2 зубов на 15% относительно контрольных цифр (табл.2). В ходе проведения лечения с применением дентальной имплантации рассматриваемый показатель оставался ниже показателя относительно здоровых испытуемых лиц на 1527% до 3-го этапа лечения (установка формирователя десны). Восстановление целостности зубных рядов установкой ортопедической конструкции сопровождалось увеличением общей АОА ротовой жидкости до контрольных цифр. Интенсивность окислительной модификации биомолекул у больных основной группы на момент первичного осмотра была увеличена в 1,7 раза, после чего в процессе лечения снижалась. У больных основной группы на 2-м этапе уровень ТБЧ был ниже исходных показателей на 26% и превышал контрольные значения на 22%. В ротовой жидкости больных основной группы на 3-4-м этапах лечения рассматриваемый показатель статистически значимо не отличался от значения соответствующего показателя групп относительно здоровых испытуемых лиц.
ОБСУЖДЕНИЕ
Для интегральной оценки нарушений электролитного баланса ротовой жидкости предложены различные коэффициенты [12], наиболее информативные из которых - соотношение концентраций ионов кальция и фосфат-ионов (Са/Р), натрия и калия (Ма/К). У больных с частичной адентией 1-2 зубов были определены средние значения Са/Р - 0,46, что соответствует нормальному балансу данных ионов в ротовой жидкости. Однако, учитывая сниженные концентрации и катионов кальция и фосфат-ионов, следует диагностировать сниженный потенциал минерализующей функции рото-
вой жидкости, что может благоприятствовать дальнейшему прогрессированию заболевания. В ряде случаев у больных адентией диагностируют наоборот, увеличение минерализующей функции слюны, что объясняется адаптивными изменениями, направленными на сохранение и поддержание здоровья оставшихся зубов. В процессе наблюдений на разных этапах лечения значение соотношения Са/Р оставалось на уровне 0,40-0,44, однако концентрации катионов кальция и фосфат-ионов статистически значимо увеличивались к 5-6 месяцам после начала лечения. Это можно считать важным признаком восстановления нормального баланса электролитного обмена в ротовой жидкости. Изменение соотношения ионов №/К наиболее информативно при сниженном значении Са/Р позволяет разграничить процессы образования кариеса или камней в полости рта. В нашем случае, при нормальном балансе фосфор-но-кальциевого обмена, но значительном увеличении у больных основной группы на 1-2-м этапах соотношения №/К до 1,0 и выше, можно предположить высокий риск образования зубных камней. Резко увеличенные концентрации ионов натрия на данных этапах наблюдения могут быть также обусловлены образованием микротравм с небольшими кровотечениями из тканей полости рта. В последующем весь комплекс лечебно-профилактических мероприятий, включая профессиональную гигиену полости рта, несомненно, способствует нормализации и структуры мягких тканей полости рта, снижению риска травмирования и кровоточивости. Это подтверждается снижением содержания ионов натрия до контрольных значений у больных основной группы на 3-4-м этапах лечения.
Анализ прооксидантно-антиоксидантного баланса ротовой жидкости у больных основ-
ной группы до лечения (на 1-м этапе) показал развитие окислительного стресса, что характеризовалось резко сниженным значением антиоксидантного потенциала и увеличенным содержанием продуктов окислительных модификаций биомолекул. В процессе лечения наблюдалось постепенное снижение уровня ТБЧ, антиоксидантная активность ротовой жидкости оставалась низкой в течение 5-ти месяцев наблюдений, однако к последнему этапу лечения, после установки ортопедических конструкций, был зафиксирован статистически значимый рост данного показателя. Таким образом, у испытуемых лиц основной группы после проведения всех этапов лечения с применением дентальной имплантации в ротовой жидкости были зарегистрированы нормальные значения показателей редокс гомеостаза.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенные исследования показали восстановление нормального электролитного баланса и функционирования прооксидант-но-антиоксидантной системы у больных с адентией 1-2 зубов после проведения лечения, направленного на восстановление целостности зубных рядов с применением дентальной имплантации. Не отмечено негативного влияния внедренных имплантатов на активность окислительного метаболизма в ротовой жидкости, что позволяет делать выводы о максимальной инертности данного метода лечения для метаболических систем ротовой жидкости.
Финансирование. Работа выполнена при поддержке государственного задания Министерства здравоохранения Российской Федерации (от 28.01.2015 г. ч. 1, раздел 1) «Осуществление прикладных научных исследований, в том числе проведение доклинических исследований лекарственных средств и клинических исследований лекарственных препаратов».
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Conflict of interest. The authors have no conflict of interests to declare.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гаспарян А.Ф., Кочконян Т.С., Ладутько А.А., Быков И.М., Еричев В.В., Литвинова М.Г. Интенсивность протекания процессов свободнорадикального окисления биомолекул и состояние ферментов антирадикальной защиты ротовой жидкости при неполных зубных рядах, замещенных протезами. Кубанский научный медицинский вестник. 2010;1:22-27.
2. Быков И.М., Брещенко Е.Е., Быкова Н.И. Биохимия ротовой жидкости. Краснодар, 2018.
3. Быков И.М., Гильмиярова Ф.Н., Доменюк Д.А., Дмитриенко С.В., Иванюта С.О., Будайчиев Г.М.А. Оценка кариесогенной ситуации у детей с сахарным диабетом первого типа с учётом минерализующего потенциала ротовой жидкости и эмалевой резистентности. Кубанский научный медицинский вестник. 2018;25(4):22-36. doi: 10.25207/1608-6228-2018-25-4-22-36.
4. Литвинова М.Г., Басов А.А., Быков И.М. Показатели свободнорадикального окисления в крови и ротовой жидкости у больных при ишемической болезни сердца и сахарном диабете 2-го типа. Кубанский научный медицинский вестник. 2012;3:94-98.
5. Basov A.A., Akopova V.A., Bykov I.M. Changing the parameters of prooxidant-antioxidant system in blood and oral fluid of patients with ischemic heart disease and type 2 diabetes mellitus. International Journal on Immunorehabilitation. 2013;15(2):84-86.
6. Гуськов А.В., Митин Н.Е., Зиманков Д.А., Мир-нигматова Д.Б., Гришин М.И. Дентальная имплантация: состояние вопроса на сегодняшний день (обзор литературы). Клиническая стоматология. 2017;82 (2):32-34.
7. Ушаков А.И., Юрьев Е.М. Дентальная имплантация и выбор костно-пластических материалов в зависимости от типа костной ткани челюстей. Российская стоматология. 2016;9(2):12-17. doi: 10.17116/ rosstomat20169212-17.
8. Compton S.M., Clark D., Chan S., Kuc I., Wubie B.A., Levin L. Dental implants in the elderly population: a long-term follow-up. Int. J. Oral Maxillofac. Implants. 2017;32(1):164-170. doi: 10.11607/jomi.5305.
9. Eger M., Hiram-Bab S., Liron T., Sterer N., Carmi Y., Kohavi D., Gabet Y. Mechanism and prevention of titanium particle-induced inflammation and osteolysis. Front. Immunol. 2018;18;9:2963. doi: 10.3389/ fimmu.2018.02963.
10. Benzie I.F.F., Strain J.J. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of "antioxidant power": the FRAP assay. Anal. Biochem. 1996;239(1):70-76. doi: 10.1006/abio.1996.0292.
11. Камышников В.С. Справочник по клинико-био-химическим исследованиям и лабораторной диагностике. Москва: МЕДпресс-информ; 2004.
12. Бельская Л.В., Голованова О.А. Способ лабораторной диагностики заболеваний ротовой полости по элементному составу слюны. Патент RU 2367959, опубл.2009.
REFERENCES
1. Gasparyan A.F., Kochkonyan T.S., Ladutko A.A., Bikov I.M., Erichev V.V., Litvinova M.G. Intensity of lea king free radical oxidation of biomolecule processes and condition of ferments of antiradical protection in oral liquid at not full dental lines. Kubanskii nauchnyi meditsinskii vestnik. 2010; 1: 22-27. (In Russ).
2. Bykov I.M., Breschenko E.E., Bykova N.I. Biochemistry of oral liquid. Krasnodar, 2018. (In Russ).
3. Bykov I.M., Gilmiyarova F.N., Domenyuk D.A., Dmitrienko S.V., Ivanyuta S.O., Budaychiev G.M-A. Evaluation of cariogenic situation in children with type 1 diabetes mellitus given the mineralizing potential of saliva and enamel resistance. Kubanskii nauchnyi meditsinskii vestnik. 2018; 25(4): 22-36 (In Russ). doi:10.25207/1608-6228-2018-25-4-22-36.
4. Litvinova M.G., Basov A.A., Bykov I.M. Indicators of free radical oxidation in blood and oral liquid of patients with coronary heart disease and type 2 diabetes mellitus. Kubanskij nauchnyj medicinskij vestnik. 2012;3:94-98 (In Russ).
5. Basov A.A., Akopova V.A., Bykov I.M. Changing the parameters of prooxidant-antioxidant system in blood and oral fluid of patients with ischemic heart disease and type 2 diabetes mellitus. International Journal on Immunorehabilitation. 2013;15(2):84-86.
6. Gus'kov A.V., Mitin N.E., Zimankov D.A., Mirnigmatova D.B., Grishin M.I. Dental implants: state of the question today (literature review). Clinical dentistry. 2017;82(2):32-34 (In Russ).
7. Ushakov A.I., Yur'ev E.M. Dental implantation and the choice of the osteoplastic materials taking into
consideration the type of the bone tissue of human jaws. Russian Stomatology. 2016;9(2):12-17. doi: 10.17116/ rosstomat20169212-17. (In Russ).
8. Compton S.M., Clark D., Chan S., Kuc I., Wubie B.A., Levin L. Dental implants in the elderly population: a long-term follow-up. Int. J. Oral Maxillofac. Implants. 2017;32(1):164-170. doi: 10.11607/jomi.5305.
9. Eger M., Hiram-Bab S., Liron T., Sterer N., Carmi Y., Kohavi D., Gabet Y. Mechanism and prevention of titanium particle-induced inflammation and osteolysis. Front. Immunol. 2018;18;9:2963. doi: 10.3389/ fimmu.2018.02963.
10. Benzie I.F.F., Strain J.J. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of "antioxidant power": the FRAP assay. Anal. Biochem. 1996;239(1):70-76. doi: 10.1006/abio.1996.0292.
11. Kamyshnikov V.S. Spravochnik po kliniko-biokhimicheskim issledovaniyam i laboratornoy diagnostike. Moscow: MEDpress-inform; 2004 (In Russ).
12. Belskaya L.V., Golovanova O.A. Method for laboratory diagnosis of diseases of the oral cavity on the elemental composition of saliva. Patent RU 2367959 MnK G01N33/84, 2009.
