CC BY
8УДК [581.4+581.1]:633.521
В. В. Титок
БИОЭНЕРГЕТИЧЕСКАЯ КОНЦЕПЦИЯ ГЕТЕРОЗИСА
ГНУ «Институт генетики и цитологии НАН Беларуси», Республика Беларусь, 220072, г. Минск, ул. Академическая, 27
Получение высокопродуктивных гибридов сельскохозяйственных растений предполагает привлечение для скрещиваний ценного в селекционном отношении исходного материала. Одним из наиболее важных критериев его селекционной ценности является оценка комбинационной способности [1, 2]. Однако прогресс в селекции может быть достигнут не только на основе развития генетических исследований, но и благодаря изучению молекулярных и физиолого-биохимических факторов, определяющих продуктивность и гибридную мощность растений. Несмотря на пристальное внимание к изучению этой проблемы, пока еще нет единой генетической концепции гетерозиса. Медленный прогресс в теории гетерозиса можно объяснить недостаточным учетом вклада отдельных составляющих полигенных систем, формирующих гибридную мощность в процессе фенотипического проявления качественных и количественных признаков.
Для объяснения механизмов гетерозиса было предложено несколько гипотез. Наиболее общепризнанными являются гипотезы сочетания благоприятных факторов или доминирования
[3], сверхдоминирования, или гетерозиготности
[4]. Эти концепции объединила гипотеза генетического баланса, согласно которой при перекрестном оплодотворении естественный отбор в популяциях действует, прежде всего, на гете-розиготы, в результате чего у них складывается оптимальный генный баланс [5, 6]. Согласно этой гипотезе, гетерозисный эффект является результатом суммарного эффекта сходного действия разнородных генетических процессов и объясняется сохранением структурного единства блока генов посредством инверсий и локализацией хиазм во время мейоза.
Изучение молекулярных основ наследственности дало толчок к появлению новых физиолого-генетических концепций гетерозиса. Показано, что специфика гетерозисного эффекта определяется событиями, происходящими на уровне генетического материала клетки и регуляции элементарных
генетических процессов [7]. Особое внимание в оценке общей активности генома при гибридизации уделяется содержанию и структурному состоянию ДНК и РНК. Однако данные литературы о закономерностях взаимосвязи между проявлением гетерозиса, инбредной депрессией и содержанием нуклеиновых кислот неоднозначны. Наряду с многочисленными работами, указывающими на снижение содержания нуклеиновых кислот при инбридинге и повышении при гетерозисе, есть сообщения об отсутствии такой зависимости [8, 9]. Существует мнение, что один из механизмов, обеспечивающих на молекулярном уровне проявление гетерозисного эффекта, является активация процессов транскрипции и трансляции [10, 11]. Показано, что гетерозисные гибриды, как правило, превосходят негетерозисные и родительские формы по интенсивности репликации ДНК, причем наибольшая интенсивность клеточных делений наблюдается в темновой период суток. Такая активность, вероятно, сопряжена с активацией транскрибирующей и репликативной функций ДНК. Большее накопление ДНК, увеличение содержания тРНК, числа повторов рибосомальных цистронов (рРНК), а также интенсивное повышение активности транскрипции в соматических клетках гибридных форм по сравнению с родителями являются предпосылками проявления гетерозиса [7, 12, 13].
Проблема гетерозиса - прежде всего проблема продуктивности, и эти два феномена необходимо рассматривать во взаимосвязи и взаимозависимости. На наш взгляд, важно знать не только специфические особенности гетерозисных гибридов и структурно-функциональную организацию родительских форм, но и проследить изменения, происходящие при гибридизации и приводящие к формированию гетерозисного организма. Результаты таких работ позволяют существенно углубить представления о природе гетерозиса и могут быть использованы для создания системы критериев прогнозирования гетерозисного преимущества.
Цель исследования состояла в разработке биоэнергетических механизмов, обуславли-
генетических принципов концепции фор- вающих реализацию генетического потен-
мирования гетерозиса, основанной на взаи- циала продуктивности сельскохозяйствен-
модействии физиолого-биохимических и ных растений.
Материалы и методы
В качестве материала для исследований были использованы покоящиеся семена, этиолированные и зеленые проростки, листья и стебли растений на различных этапах онтогенеза линий, сортов и Fj-гибридов кукурузы, люпина желтого, томатов и льна-долгунца (Zea mays L., Lupinus luteus L., Lycopersicon esculentum Mill., Linum usitatissimum L. spp. usitatissimum).
Для решения поставленной задачи был использован многотестовый физиолого-биохимический подход, базирующийся на оценке биоэнергетических характеристик, особенностей роста и развития у исходных форм, различающихся по комбинационной способности и урожайности, и Fj-гибридов с неодинаковой степенью гетерозиса по продуктивности [14]. При определении активности биоэнергетических процессов использовали: 1) интегральные показатели энергетического метаболизма (ИПЭМ) - содержание и соотношения никотинамидных коферментов и адениловых нуклеотидов (NAD, NADH, NADP, NADPH, AMP, ADP, ATP); 2) активность муль-тиферментного комплекса ключевых ферментов - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФД), 6-фосфофруктокиназы (6-ФФК), цитохром-С-оксидазы (ЦО) - отдельных звеньев дыхательного метаболизма клетки (пентозофосфатный путь, гликолиз и электрон-транспортная цепь митохондрий). Особенности ростовых процес-
сов оценивали по величинам морфологических признаков и физиологическим показателям (высота растений, число и масса семян, динамика биомассы и количественные параметры роста органов проростков и целых растений, содержание пигментов и др.).
Содержание никотинамидных коферментов и адениловых нуклеотидов определяли методом высокоэффективной ион-парной жидкостной хроматографии высокого давления [15], активность ферментов и количество пигментов - спектрофотометрически [16, 17], электрофорез проводили по [18]. Величины окислительно-восстановительных зарядов рассчитывали по формулам: аденилатный энергетический заряд (АЭЗ) = [АТ Р]+0,5[АБР]/ [АТР]+[АБР]+[АМР] [19]; катаболический восстановительный заряд (КВЗ) = [NADH]/ NAD] + [NADH] [20]; анаболический восстановительный заряд (АВЗ) = |тБРН]/ |тБР] + [КАВРН] [20]; общий восстановительный заряд (ОВЗ) = [NADH] + ^АБРН] / ([NAD] + [NADPH])+ ([NADP]+[NADPH]) [20]. Полученные результаты обрабатывали статистически, используя методы дисперсионного, корреляционного и регрессионного анализов. Достоверность генотипических различий оценивали по наименьшей существенной разнице при Р < 0,05 (НСР05).
Результаты и обсуждение
Сложность наследования количественных признаков у растений при наличии гетерогенных структур фотосинтетических и дыхательных систем и другие особенности клеточного метаболизма позволили прийти к заключению, что знание генетики растительного организма может служить лишь отправной точкой познания фундаментальных основ формирования продуктивности. При создании и отборе форм растений необходимо изучение физиолого-биохимических основ продукционного процесса. Анализ генетических особенностей селекционного мате-
риала на этом фоне позволит более предметно говорить об их взаимообусловленности с физиологическими и биохимическими проявлениями. Связь данных факторов крайне сложна, так как их интеграция и регуляция происходят на разных уровнях структурно-функциональной организации, поэтому для понимания их взаимодействия необходимы комплексные исследования.
Применение многотестового физиолого-биохимического подхода в исследованиях количественных признаков роста, развития и продуктивности у различных сельскохозяйственных культур
позволило сформулировать основные положения биоэнергетической концепции гетерозиса:
1. Гетерозисный эффект реализуется только при обеспеченности клетки макроэргиче-скими и восстановительными эквивалентами. Высокие уровни макроэргических соединений в виде ADP и ATP, а также восстановительных эквивалентов — NADH, NADPH — в клетке снимают конкуренцию между процессами, направленными на новообразование и поддержание элементов структуры организма, субклеточных компонентов, рост и продуктивность растений. Согласованность скоростей генерации и потребления биоэнергетических эквивалентов у гетерозисных Ж1-гибридов служит примером сбалансированности в системе энергетического метаболизма.
В регуляции метаболической активности процесса прорастания семян важная роль принадлежит фитину - основному запасному фосфорсодержащему компоненту (на его долю приходится 60-90 % общего фосфора [21]). Исследования, проведенные на кукурузе, люпине и льне-долгунце, выявили достоверное превос-
80
I 1-
о „-60 CL
s:
Is
е
40
В связи с тем, что фитаза в семенах локализована в непосредственной близости от субстрата (миоинозитгексафосфата [25]), логично предположить, что при высоком соотношении фитин/Р1 в глобоидах алейроновых зерен создаются благоприятные условия для активного ее функционирования. Полученные данные подтверждают это положение и свидетельствуют, что величина отношения фитин/Р1 может
ходство гетерозисных Б1-гибридов над родителями по содержанию фитина в семенах [22, 23]. Количество неорганического фосфата (Р1) в покоящемся зерне значительно ниже, чем фитина, при этом очевидна следующая тенденция - уровень Р1 выше у низкогетерозисных гибридов по сравнению с гетерозисными, содержание Р1 у которых было ниже, чем у худшей по этому показателю родительской формы [24]. Низкий уровень Р1 у гетерозисных комбинаций, который является аллостерическим ингибитором фитазы-фермента, осуществляющего гидролиз фитина, по-видимому, служит предпосылкой для активного гидролиза фитина на ранних этапах прорастания и соответственно накопления биомассы растущими органами проростка и всего растения на начальных этапах онтогенеза.
Анализ величин соотношения фитин/Р1 показал, что низкогетерозисные формы по этому показателю были на уровне худшего родителя, а гетерозисные гибриды превышали лучшую родительскую форму [24]. Регрессионный анализ величины соотношения фитин/Р1 в семенах и массы зерна с початка у линий и Б1-гибридов кукурузы выявил достоверную положительную корреляцию между ними (Рис. 1).
Рис. 1. Регрессионная зависимость между величиной соотношения фитин/Р1 в покоящихся семенах и продуктивностью самоопыленных линий и Б^гибридов кукурузы. Примечание: г - коэффициент парной корреляции при ** Р < 0.01.
косвенно указывать на способность семян к скорейшему прорастанию и накоплению биомассы проростками, что является одной из предпосылок проявления гетерозиса по продуктивности [22].
При гидролизе фитина, кроме Р1, образуется миоинозитол, 3-фосфоглицериновая кислота и катионы металлов, которые, наряду с адениловыми нуклеотидами, обеспечивают
Масса зерна с початка, г
прорастание семян. Анализ полученных результатов показал, что ускоренный рост проростков гетерозисных Б1-гибридов сопровождается интенсивным гидролизом фитина, который приводит к накоплению метаболически активных соединений и их эффективному вовлечению в процессы энергообмена и биосинтеза нуклеиновых кислот [22, 23]. Преимущество гибридов над родителями по активности биоэнергетических процессов создает условия для их интенсивного роста и развития при переходе к автотрофному типу питания, что в дальнейшем может способствовать проявлению гетерозисного эффекта по продуктивности.
Изучение активности функционирования энергетических процессов на стадии этиолированных проростков линий и сортов кукурузы, люпина и льна-долгунца, различающихся по комплексу хозяйственно-ценных признаков, позволило обнаружить достоверные генотипи-ческие различия по величинам исследуемых показателей [22, 23, 26, 27]. На основании полученных результатов были выделены высокопродуктивные формы, этиолированные проростки которых опережали остальные анализируемые линии и сорта по содержанию энергетических и восстановительных эквивалентов и, как следствие, по интенсивности накопления биомассы. Для проростков этих форм характерен сбалансированный и активный метаболизм. Малоурожайные линии и сорта кукурузы, люпина и льна-долгунца отличались низкими эффективностью и мощностью энергообмена вследствие недостаточной активности систем генерации энергии. Положительная корреляция между со-
держанием ЛГР в этиолированных проростках и массой зерна с початка кукурузы, массой семян с соцветия и числом бобов люпина, массой волокна с растения льна-долгунца показывает, что продуктивность может быть детерминирована содержанием макроэргических соединений и восстановительных эквивалентов не только в семенах, но и в проростках на начальных этапах роста растений.
При формировании урожая интегрируются результаты координированного протекания основных процессов жизнедеятельности растений -фотосинтеза, дыхания, транспорта метаболитов, роста и развития. Сведения о механизмах генерации энергии в клетке и путях ее использования позволяют выявлять основные точки взаимодействия различных метаболических систем, представляющих собой отдельные этапы внутриклеточного энергетического метаболизма. Принцип сопряжения между процессами генерации и использования энергии в виде никотинамидных коферментов и адениловых нуклеотидов имеет важное биологическое значение, так как создается гибкая система распределения энергии по различным метаболическим путям [28].
Сравнение родительских и гибридных форм томатов и льна-долгунца выявило гетерозис-ный эффект по содержанию суммарного хлорофилла в листьях и стеблях, которое обусловлено одновременным возрастанием Хл а и Хл b [17]. Сравнительная оценка площади листовой поверхности у томатов не выявила преимущества гибридных форм над сортами и линиями. Напротив, по удельной поверхностной плотности листа (УППЛ) гибридные комбинации превосходили родителей (Рис. 2).
Рис. 2. УППЛ (мг/см2) сортов, линий (1 - Тропсон, 2 - Эдит, 3 - Полусет, 4 - Премьер, 5 - В-82, 6 - Виолент, 7 - Сон, 8 - Кар, 9 - Сократ) и Р1-гибридов томатов (10 - Сон х Тропсон, 11 - Кар х Тропсон, 12 - Кар х Сон, 13 - Сон х Премьер, 14 - Премьер х Тропсон, 15 - Сократ х Премьер); х Р и х Р1 - среднее исходных форм и гибридов первого поколения соответственно; t - критерий Стьюдента при Р < 0,01.
Следует отметить, что Б1-гибриды, наряду с высоким содержанием фотосинтетических пигментов, обладали плотным мезофиллом, о чем свидетельствует удельная поверхностная плотность листа. Это создает оптимальные условия для интенсивной ассимиляции СО2, в результате чего повышается производительность листового аппарата и накопление биомассы растением [29].
Основываясь на том, что продуктивность как один из наиболее энергоемких процессов в значительной степени зависит от функционирования энергообразующих систем клетки, выявленные различия между родителями и гибридами растений томатов и льна-долгунца по содержанию ма-кроэргических соединений и восстановительных эквивалентов могут быть обусловлены различной интенсивностью протекания отдельных реакций, обеспечивающих клетку энергией, а также характером их взаимодействия [17, 30, 31]. Анализ функционирования отдельных звеньев дыхательного метаболизма в зеленых тканях исследуемых форм томатов и льна-долгунца показал, что активность окислительного пентозофосфатного пути и гликолиза по сравнению с таковой в этиолированных проростках ингибирована в различной степени. У Б1-гибридов лимитирование этих циклов более выражено, чем у родителей [18]. Однако в зеленых листьях гетерозисных генотипов обнаружена более высокая по сравнению с родительскими формами активность цитохром-С-оксидазы - ключевого фермента электрон-транспортной цепи митохондрий, т.е. существенный вклад в образование ма-кроэргических соединений помимо фотосинтеза вносит митохондриальное дыхание [32, 33]. Из этого следует, что гетерозисные Б1-гибриды обладают более мощным биоэнергетическим потенциалом, создающим в клетке благоприятные метаболические условия для функционирования ростсинтетических процессов, которые способ-
ствуют формированию высокой продуктивности. Полученные результаты подтверждаются данными морфофизиологического анализа (сырая и сухая масса, величина ассимиляционной поверхности листьев и стеблей, высота растений и др.) линий, сортов и Б1 -гибридов томатов и льна-долгунца [2224, 30, 32-34].
2. В гибридном организме благодаря гетеро-зиготности формируется большее биохимическое разнообразие (увеличение вариантов сборки мультиферментных комплексов, расширение условий протекания метаболических реакций и т.д.), чем у родителей. Присутствие в геноме гибридов гетерозиготных аллелей предполагает возникновение различных форм ферментов, отличающихся по кинетическим и регуляторным свойствам. Образование динамичных мультиферментных ассоциаций в клетках гибридных форм растений и повышение активности функционирования биоэнергетических путей способствуют реализации гетерозисного преимущества.
Исследования, проведенные с помощью изо-ферментного анализа линий, сортов и гибридов томатов, кукурузы и льна-долгунца, позволили выявить полиморфизм по различным ферментным системам (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, 6-фосфоглюконатдегидрогеназа, глутаматдегидро-геназа, шикиматдегидрогеназа, кислая фосфатаза, аспартатаминотрансфераза, цитохром-С-оксидаза и др.) [18, 35]. Сопоставление изоферментных спектров гибридных генотипов, полученных при скрещивании сортов, не различающихся между собой по числу, электрофоретической подвижности и интенсивности окрашивания изоформ исследуемых ферментов, показало, что их энзимограммы аналогичны исходным формам, например, аспар-татаминотрансфераза (Рис. 3).
Рис. 3. Схемы электрофореграмм изофермен-тов аспартатамино-трансферазы родительских сортов и гибридов льна-долгунца. а: 1 - Бал-тучяй, 2 - Белинка х Балтучяй, 3 - Балтучяй х Белинка, 4 - Белинка; б: 5 - Викинг, 6 - Викинг х Белинка, 7 - Викинг х Балтучяй, 8 -Белинка х Викинг.
Однако активность их проявления в геле у гибридов значительно выше. Это может быть обусловлено тем, что у гибридных организмов локусы, контролирующие синтез исследуемых ферментов, как одного, так и другого родителя имеют одинаковую активность, т. е. наблюдается аддитивное наследование (Рис. 3 а). Такие гибриды по сравнению с родителями характеризуются большим количеством ферментного белка, благодаря чему происходит изменение условий протекания различных метаболических реакций в клетках тканей растений. Изо-ферментные спектры гибридных комбинаций, образованных сортами, энзимограммы которых различаются по числу или электрофоретической подвижности фракций исследуемых ферментов, могут включать изоферменты обоих родителей, т.е. спектр гибрида будет состоять из большего числа изоформ (Рис. 3б). Следует отметить, что наибольшее биохимическое разнообразие характерно для ферментов с широкой субстратной специфичностью или выполняющих в организме регуляторные функции. Ферменты, субстраты которых являются специфическими метаболитами, менее полиморфны. Полученные результаты показывают, что гибридные генотипы, благодаря присутствию в их геноме гетерозиготных аллелей, обладают большим биохимическим разнообразием, чем исходные сорта [36]. Биохимическая обогащенность Б1-гибридов за счет взаимодействия аллельных и неаллельных генов обеспечивает стабильность и, возможно, большую скорость метаболических процессов, что приводит к увеличению первичного синтеза нуклеиновых кислот и белков, усиливает гомеостаз развития и т. д. Образование у гибридов изоформ ферментов, различающихся по кинетическим и регуляторным свойствам, может приводить к увеличению вариантов сборки мультифер-ментных комплексов, активизации альтернативных путей отдельных звеньев метаболизма и в конечном итоге к реализации гетерозисного преимущества.
3. Гибридная мощность обусловлена изменением регуляторных механизмов функционирования энергетического метаболизма благодаря присутствию в гетерозиготе различных аллелей, способствующих снятию строгого ограничения активности ростовых процессов.
Комбинированный эффект множества таких изменений приводит к увеличению интенсивности процессов роста и продолжительности фаз онтогенеза у гетеро-зисных гибридов сельскохозяйственных растений.
При изучении функциональной активности генетического аппарата у Б1-гибридов и их родительских форм было показано, что гетерозисное потомство обладает более совершенной регуляцией метаболизма благодаря комплементации свойств исходных генотипов, различающихся по функциональной активности локусов [37, 38]. Такое сочетание родительских геномов вызывает модификацию метаболической активности у Б1-гибридов. При этом эффект гетерозиса на уровне организма зависит от вклада отдельных генетических систем клетки (геномы ядра, хло-ропластов и митохондрий) и их межгеномной комплементации [14]. Анализ связи гетерозиса с активностью ферментов, участвующих в процессах переноса энергии, показал, что при прорастании семян наблюдается более высокое потребление веществ эндосперма и накопление биомассы гибридами, однако активность ферментов у гетерозисных форм характеризуется промежуточной величиной либо приближается к лучшему из родителей [22, 27, 39]. По-видимому, активность ферментов контролируется несколькими кодоминантными аллелями, что подтверждает идею о комплементарном взаимодействии геномов родительских форм при формировании гетерозисного состояния. Поэтому гетерозис по одной отдельно взятой метаболической реакции не может являться преимуществом, так как более высокий, чем оптимальный уровень нескольких биохимических реакций приведет к несбалансированности всей генетической системы [40].
Взаимодействие ядерного генетического материала с геномом цитоплазматических орга-нелл во многом определяет интенсивность метаболических процессов в растительной клетке, направленных на образование пластических веществ. Было показано, что гетерозиготное состояние влияет на функционирование энергообразующих систем хлоропластов, вызывая изменения в составе функциональных групп, окружающих каталитический центр и определяющих его конформацию и активность [41]. По скорости электронного транспорта у Б1-гибридов обнаружено «доминирование» и лишь в единич-
ных случаях «сверхдоминирование» [42, 43], а реакции фотофосфорилирования показали промежуточный характер наследования [42]. При анализе фотохимической активности изолированных хлоропластов мезофилла и содержания светособирающих комплексов тилакоидных мембран у инбредных линий и Б1-гибридов кукурузы выявлены статистически достоверные различия между родителями и гибридами, а также между гибридными генотипами с разной степенью выраженности гетерозисного эффекта [14, 44]. По-видимому, у гетерозисных гибридов имеется более высокая степень сопряжения в системе фотофосфорилирования и увеличение числа фосфорилирующих реакционных центров в электрон-транспортной цепи хлоропластов. Из этого следует, что хлоропласты гетерозисных генотипов обладают более эффективной системой генерации энергии по сравнению с негетерозис-ными гибридами и исходными формами.
Митохондрии наряду с хлоропластами являются ключевыми энергообразующими органеллами клетки. На гибридных комбинациях кукурузы показано, что митохондрии проростков Б1-гибридов по форме и размеру более гетерогенны, чем у исходных линий [45]. В клетках листьев гибридных генотипов помимо родительских обнаружен промежуточный тип митохондрий [46]. У Б1-гибридов с высоким эффектом гетерозиса по накоплению зеленой массы и урожаю зерна фосфорилирующая способность митохондрий выше, чем у родителей [47, 48]. Сравнительное изучение величин ИПЭМ в этиолированных проростках линейных и гибридных форм кукурузы выявило «положительное
сверхдоминирование» для признаков «содержание ATP» и «сумма адениловых нуклеотидов», что указывает на существенный вклад генетического материала митохондрий в реализацию гетерозисного преимущества [49]. Предполагается, что повышенная активность митохондрий гетерозисных F1 -гибридов реализуется не только за счет комплементации их генетического материала, но и за счет взаимодействия с ядерным геномом [14].
Основным продуктом окислительно-восстановительных реакций и непосредственным донором энергии для большинства энергопотребляющих процессов является ATP. Сопоставление уровней адениловых нуклеотидов в листьях сортов, линий и F1-гибридов томатов выявило превосходство гетерозисных генотипов по этим признакам, что свидетельствуют об энергообеспеченности последних, следствием которой, на наш взгляд, являются высокие величины сухой массы листьев. Полученные результаты показали, что активность биосинтетических процессов, направленных на накопление органических веществ в листьях растений томатов, определяется уровнем макроэргических соединений в клетке. Гетерозисные гибриды в отличие от родителей и негетерозисных форм томатов характеризовались высоким пулом ADP и ATP, что свидетельствует об их обеспеченности энергетическими эквивалентами, которая является необходимым условием активизации пластических биосинтезов. Оценка степени фенотипического доминирования физиолого-биохимических признаков выявила дифференциальный характер их наследования (таблица).
Таблица
Степень фенотипического доминирования величин морфофизиологических и биоэнергетических признаков в листьях гибридов томатов первого поколения
Признак Гибрид
Сон х Тропсон Кар х Тропсон Кар х Сон Сон х Премьер Премьер х Тропсон Сократ х Премьер
Продуктивно сть +++ — +++ + — +++
Сухая масса листа +++ +++ +++ +++ +++ +++
Сухая масса стебля +++ +++ — — — —
Площадь листа — + — — + —
УППЛ +++ +++ +++ +++ +++ +++
Хл а + в +++ +++ +++ +++ +++ +++
ATP +++ +++ — +++ ++ -
AMP+ADP+ATP ++ + - - +++ +++ -
Продолжение таблицы
Признак Гибрид
Сон х Тропсон Кар х Тропсон Кар х Сон Сон х Премьер Премьер х Тропсон Сократ х Премьер
АЭЗ +++ +++ +++ + +++ ++
NAD++NADP+ + + +++ +++ - +++
NADH+NADPH - - ++ +++ +++ + +++
NAD++NADP++ NADH+NADPH - - ++ +++ +++ - +++
NAD++NADH - - +++ +++ +++ - - +++
NADP++NADPH - - + +++ +++ + +++
Примечание. Знак (+++) - положительное сверхдоминирование; (++) - положительное доминирование; (+) - промежуточное наследование; (-) - отрицательное доминирование; (—) - отрицательное сверхдоминирование.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что эффект гибридизации наиболее благоприятно сказывается на накоплении биомассы, что предполагает высокую интенсивность процессов, направленных на обеспечение роста и развития. По содержанию ATP для большинства гибридов отмечено «положительное сверхдоминирование». По другим биоэнергетическим показателям (АЭЗ, содержание АН, сумма окисленных и восстановленных форм НК и др.) у большинства гибридных комбинаций обнаружено «положительное сверх- и доминирование». Эти данные свидетельствуют о том, что в листьях гибридных генотипов с высокой активностью протекают восстановительные биосинтезы (накопление эквивалентов в виде NADH и NADPH), в реакциях которых используются макроэргические соединения в виде ADP и ATP. Возможно, в гибридном организме складывается оптимальный уровень протекания биохимических реакций, который формирует тот или иной признак. Отмеченные особенности функционирования энергетического метаболизма и физиологических процессов у исследуемых гетерозиготных образцов дают основание полагать, что гетерозисные гибриды по сравнению с негетерозисными и родительскими формами обладают высоким энергетическим потенциалом и оптимумом его реализации, что обусловлено снятием генетического блокирования и устранением репрессирующих факторов.
4. У гетерозиготных организмов сбалансированность и комплементарное сочетание разнокачественных регуляторных аллелей, детерминирующих функционирова-
ние отдельных звеньев энергетического метаболизма, снимают ограничение скорости потока биохимических субстратов по метаболическим путям, что в конечном итоге приводит к гетерозису. Размер пула биоэнергетических эквивалентов является чувствительным индикатором активности биосинтетических процессов, которые коррелируют с урожайностью гетерозисных Fj-гибридов.
Интеграция систем энергетического метаболизма заключается в том, что скорость генерирующих энергию реакций зависит от интенсивности эндэргонических систем, составляющих молекулярную основу различных клеточных функций. Биохимические исследования, проведенные на начальных этапах прорастания семян кукурузы (стадия этиолированных проростков), показали, что высокогетерозисные F^ гибриды характеризуются более интенсивным функционированием энергообразующих систем по сравнению с низкогетерозисными [14]. Сравнительный анализ линейных и гибридных форм кукурузы выявил превышение по биомассе и величинам ИПЭМ, а именно содержанию ATP и суммы адениловых нуклеотидов, над лучшим родителем в этиолированных проростках тех гибридных комбинаций, где в качестве материнской линии выступала линия с высокими мощностью биоэнергетических процессов и комбинационной способностью [49].
Комплексное изучение интегральных показателей биоэнергетики в проростках гетерозис-ных и негетерозисных форм дало возможность охарактеризовать вклад отдельных энергообразующих процессов и особенности перестройки
их функционирования при гетерозисе в F1, а также выявить их депрессию у гибридов F2 при отсутствии гибридного преимущества по продуктивности [27]. Полученные результаты свидетельствуют о сложной полигенной генетической детерминации энергетических признаков, что, вероятно, обусловлено различным вкладом отдельных звеньев энергообразующей системы клеток этиолированных проростков в общий энергетический пул [50]. Поскольку гетерозис по продуктивности обеспечивается эффективным функционированием энергообразующих систем, можно полагать, что в зависимости от характера межгенных и ядерно-цитоплазматических взаимодействий могут возникать благоприятные условия для дискретного увеличения эффективности одной или нескольких энергообразующих систем. Это и обеспечивает высокую сбалансированность биоэнергетических и ростовых процессов, что в конечном итоге приводит к проявлению гетерозисного преимущества [22, 51]. Закономерности, отмеченные при сравнительном анализе изменчивости морфофизио-логических и биоэнергетических показателей на начальных этапах онтогенеза гибридных и родительских форм кукурузы, проявились при изучении этиолированных проростков сортов и F1-гибридов люпина желтого и льна-долгунца [213, 33, 52, 53, 54].
5. У гомозиготных линий величины зарядов никотинамидных коферментов и адениловых нуклеотидов отражают метаболическую ситуацию, характерную для накапливающей энергию системы, что обусловлено разобщением энергогенерации и ростовых процессов. Нарушение ре-гуляторного контроля энергообразующих и энергопотребляющих систем у инбред-ных форм вызывает высокую напряженность энергетического метаболизма, что отрицательно сказывается на степени накопления органических веществ и конечной продуктивности.
Одной из характеристик энергетического клеточного обмена является содержание отдельных форм никотинамидных коферментов (НК - NAD+, NADP+, NADH, NADPH). Однако активность функционирования метаболических процессов в клетке зависит не столько от абсолютного содержания отдельных форм
никотинамидных коферментов, сколько от молярной концентрации компонентов во всей системе пиридиновых нуклеотидов [28], т.е. от восстановительных зарядов - КВЗ, АВЗ, ОВЗ [20]. Результаты, полученные на зеленых листьях большинства исследуемых линий и сортов томатов и льна-долгунца, показали значительное превышение величины АВЗ над КВЗ, что свидетельствует о большей восста-новленности системы (КАБР+-КАБРН) по сравнению с (КАВ+-ЫАВН) и указывает на существенное накопление восстановительных эквивалентов в форме КАВРН [15]. У гибридных растений приблизительно равные значения КВЗ и АВЗ, отражающие равновесное протекание энергообразующих и энергопотребляющих процессов, могут быть обусловлены наличием более совершенной системы регуляции окислительно-восстановительных процессов. Сравнение средних значений ОВЗ по линиям, сортам и гибридам Б1 показало достоверное превышение величины этого показателя у последних. Это может свидетельствовать о том, что гибридные генотипы по сравнению с родительскими формами обладают более высокой степенью восстановленности метаболических систем клеток, что предполагает повышенную интенсивность различных биосинтетических процессов [15].
Анализ данных по активности физиолого-биохимических процессов в зеленых листьях линий и сортов томатов, полученных методом микроклонального размножения, и продуктивностью этих же образцов, выращенных в условиях закрытого грунта, выявили положительную связь между ними [17, 29]. Продуктивные формы, обладали достаточно высокой мощностью и эффективностью метаболических процессов и, как следствие, - быстрым накоплением биомассы растениями. Низкопродуктивные формы характеризовались пониженными величинами показателей биоэнергетики клетки и относительно невысокой урожайностью. Для этих линий и сортов отмечена высокая напряженность энергетического метаболизма, приводящая к нарушению регуляторного контроля энергообразующих и энергопотребляющих систем, что отрицательно сказывается как на степени накопления органических веществ у растений, выращенных в лабораторных условиях, так и на конечной продуктивности. Дисбаланс между генерацией
энергии и накоплением пластических веществ растениями может быть обусловлен повышенными энергозатратами на процессы обновления и поддержания клеточных структур в активном состоянии. Однако у низкопродуктивных линий и сортов не обнаружено нарушения всех функций организма, а имеет место обусловленная генотипическими особенностями исследуемых форм большая или меньшая степень депрессии одних метаболических процессов по отношению к другим. Аналогичная тенденция выявлена и для сортов льна-долгунца [53].
6. Гетерозис обусловлен биоэнергетическим балансом, возникающим в гетерозиготном состоянии при снятии генетического блокирования за счет компенсаторного действия геномов родительских форм, несущих сегрегированные локусы «узких мест» энергетического метаболизма. Положительная комплементация между фотосинтезом и различными звеньями дыхательного метаболизма способствует увеличению стабильности и эффективности энергообмена, что приводит к гетерозису.
Изучение гибридных форм кукурузы, полученных с участием линии, обладающей высокой мощностью биоэнергетических процессов, показало, что при ее скрещивании с неродственными линиями образуются гетерозисные гибриды, характеризующиеся уже на ранних этапах онтогенеза растений высоким содержанием адени-ловых нуклеотидов и никотинамидных кофер-ментов, а с близкородственной - негетерозисные
формы с низким уровнем макроэргических соединений и восстановительных эквивалентов [27, 49]. Это может быть связано с тем, что у близкородственных линий в системе энергетического метаболизма имеется так называемое «узкое место». По особенностям изменений в системе энергетического метаболизма в этиолированных проростках этих линий можно предположить, что инбредная депрессия затрагивает в первую очередь систему окислительного фосфорилиро-вания [55]. Причем, ингибирование активности этого процесса у линии, обладающей высоким биоэнергетическим потенциалом, менее выражено, чем у линии с низкой активностью энергетического метаболизма, что может быть обусловлено более высокой степенью инбредной депрессии у последней. У гетерозисных гибридов, по-видимому, благодаря комплементарному сочетанию разнокачественных регуляторных аллелей снимается ограничение скорости потока биохимических субстратов по метаболическим путям, что приводит к гетерозисному эффекту по продуктивности.
Известно, что величина АЭЗ через опосредованное влияние на активность функционирования различных метаболических систем может регулировать интенсивность процессов роста и развития растений [56-58]. Сравнительный анализ данных, полученных на сортах и гибридах льна-долгунца, показал, что гетерозисные комбинации на всех этапах онтогенеза превосходили по этому показателю родителей и негетерозис-ные формы, что указывает на их более высокую энергетическую обеспеченность (Рис. 4).
. . . . _ ■ ■ - - — -.
Т —«— Леорковский
—»--Леорковский х Свсто1!
■ - - -х- ■ - Светоч
—t— Л-41
-------Л-41 * Белинка
1 t 1 —*— Белинка ■ iitt
I II III IV v VI VII VIII
Стадии
Рис. 4. Динамика АЭЗ (отн. ед.) у родительских форм и Fj-гибридов льна-долгунца на стадиях: I - «покоящиеся семена», II - «этиолированные проростки», III - «зеленые проростки», IV - «елочка», V - «быстрый рост», VI - «бутонизация», VII - «цветение», VIII - «зеленая спелость».
Негетерозисные гибриды по величине АЭЗ занимали промежуточное положение между исходными сортами, за исключением фазы «цветение», на которой они превышали родителей. Относительно низкие значения АЭЗ у исходных сортов льна-долгунца на стадиях «елочка», обусловленные пониженной интенсивностью функционирования энергообразующих систем, могут являться результатом влияния так называемых «лимитирующих факторов», которые могут ограничивать взаимодействие и активность отдельных звеньев энергетического метаболизма. По-видимому, гетерозисный эффект по продуктивности у исследуемых гибридных комбинаций - следствие компенсаторного изменения активности биохимических реакций по сравнению с родителями. Это можно объяснить тем, что для скрещивания были использованы сорта льна-долгунца, имеющие «узкие места» на разных этапах биоэнергетического метаболизма (активность реакций гликолиза в хлоропластах и цитоплазме или окислительного фосфорили-
рования в митохондриях на стадии «елочка»). Соответственно, реализация генетического потенциала у -гибридов благодаря более сбалансированному метаболизму обеспечивает формирование повышенной продуктивности у растений, т.е. приводит к гетерозису.
Таким образом, использованный многотестовый физиолого-биохимический анализ наиболее эффективно может быть использован в селекционном процессе для отбора форм растений, характеризующихся значительной генетической вариабельностью по ключевым ферментным системам биоэнергетического метаболизма. Использование биоэнергетических маркеров в качестве критериев оценки исходного селекционного материала на гетерозис позволит осуществлять отбор генотипов, обладающих физиологической и биохимической комплементацией и балансом, что обеспечит эффективность общего метаболизма и, как следствие, высокую продуктивность гетерозисных Б1-гибридов сельскохозяйственных культур.
Список использованных источников
1. Турбин, Н.В. Диаллельный анализ в селекции растений / Н.В. Турбин, Л.В. Хотылева, Л. А. Тарутина. - Мшск: Навука i тэхшка, 1974. - 181 с.
2. Prediction of maize hybrid silage performance using marker data: Comparison of several models for specific combining ability / A. Charcosset [et al.] // Crop Sci. - 1998. - Vol. 38, № 1. - P. 38-44.
3. Jones, D.F. Heterosis resulting from degenerative changes / D.F. Jones // Genetics. - 1945. - Vol. 30, № 6. - P. 527-542.
4. East, E.H. Heterosis / E.H. East // Genetics. -1936. - Vol. 21, № 4. - P. 375-391.
5. Турбин, Н.В. Гетерозис и генетический баланс / Н.В. Турбин // Гетерозис: теория и методы практического использования / Н.В. Турбин [и др.]; под ред. Н.В. Турбина. - Минск, 1961. -С. 3-34.
6. Mather, K. The genetical basis of heterosis / K. Mather // Proc. Roy. Soc. Biol. Sci. Ser. B. -1995. - Vol. 144, № 915. - P. 143-150.
7. Tsaftaris, A. Molecular aspects of heterosis in plants / A. Tsaftaris // Physiol. Plant. - 1995. -Vol. 94, № 2. - P. 362-370.
8. Титок, В.В. Молекулярно-генетические и биохимические маркеры при гетерозисе (обзор) /
В.В. Титок // Вес. Нац. акад. навук Беларусь Сер. 61ял. навук. - 2004. - № 3. - С. 103-107.
9. Milborrow, B.V A biochemical mechanism for hybrid vigour / B.V. Milborrow // J. Exp. Botany. -1998. - Vol. 48, № 324. - P. 1063-1071.
10.Hollick, J.B. Epigenetic allelic states of a transcriptional regulatory locus exhibit overdominant gene action / J.B. Hollick, V.L. Chandler // Genetics. - 1998. - Vol. 150, № 6. - P. 891-899.
11.Differential gene expression patterns in leaves between hybrids and their parental inbreds are correlated with heterosis in a wheat diallel cross / Q. Sun [et al.] // Plant Science. - 2004. -Vol. 166, № 3. - P. 651-657.
12.Song, R. Gene expression of a gene family in maize based on noncollinear haplotypes / R. Song, J. Messing // PNAS. - 2003. - Vol. 100, № 15. - P. 9055-9060.
13.Bretting, P.K. Genetic markers and plant genetic resource management / P.K. Bretting, M P. Widrlechner // Plant Breed. Rev. - 1995. -Vol. 13. - P. 11-86.
14. Биоэнергетические процессы при гетерозисе / Л.В. Хотылева [ и др.]; под общей ред.
Л.В. Хотылевой. - Мшск: Навука i тэхшка, 1991. - 176 с.
15. Titok, VV Changes of nicotinamide coenzymes and adenylate energy charge in leaves of hybrid and parental tomato forms in an in vitro culture / V.V Titok, O.V Rusinova, L.V Khotyljova // Biologia Plantarum. - 1995. - Vol. 37, № 4. - P. 507-513.
16. Титок, В.В. Энергетический метаболизм в листьях сортов и Fj-гибридов томатов / В.В. Титок, С.И. Юренкова, Л.В. Хотылева // Вес. Нац. акад. навук Беларусь Сер. бiял. навук. - 1998. -№ 2. - С. 37-41.
17. Leaf area, chlorophyll content and biomass of tomato plants and their heterotic hybrids under in vitro culture / VV Titok [et al.] // Photosynthetica. -1994. - Vol. 30, № 2. - P. 255-260.
18. Юренкова, С.И. Онтогенетический полиморфизм изоферментных систем у льна-долгунца / С. И. Юренкова, В. В. Титок, Л. В. Хотылева // Доклады Нац. акад. наук Беларуси. - 2001. - Т. 45, № 1.- С. 79-82.
19. Atkinson, D.E. Adenosine triphosphate concentration in metabolic regulation / D.E. Atkinson, G.M. Walton // J. Biol. Chem. - 1967. - Vol. 242, № 137. - P. 3239-3242.
20. Quebedeaux, B. Adenylate and nicotinamide nucleotides in developing soybean seeds during seed-fill / B. Quebedeaux // Plant Physiol. - 1981. -Vol. 68, № 1. - P. 23-27.
21. Loewus, F.A. myo-Inositol metabolism in plants / F.A. Loewus, P.N. Murthy // Plant Sci. -2000. - Vol. 150, № 1. - P. 1-19.
22. Хотылева, Л.В. Динамика фосфорсодержащих компонентов при прорастании кукурузы в связи с гетерозисом / Л.В. Хотылева,
B.В. Титок // Физиол. раст. - 1994. - Т. 41, № 3. -
C. 92-96.
23. Физиолого-биохимические особенности проростков сортов и гибридов люпина желтого при селекции на кормовую ценность / Л.В. Хо -тылева [и др.] // С.-х. биол. Сер. биол. жив. -1993. - № 4. - С. 112-117.
24. Цтгок, УУ Колькасць фщну у спачываю-чым i прарастаючым зерш гетерозюных форм кукурузы / УУ Цток // Вес. Акад. навук БССР. Сер. бiял. навук. - 1986. - № 5. - С. 53-56.
25. Азаркович, М.И. Мобилизация белка и фитина в алейроновых зернах семян клещевины при прорастании / М.И. Азаркович, М.И. Дмитриева, А.М. Соболев // Физиол. раст. - 1999. -Т. 46, № 3. - С. 410-418.
26. Сравнительная оценка активности биоэнергетических процессов в проростках сортов льна-долгунца / В.В.Титок [и др.] // Доклады Нац. акад. наук Беларуси. - 1997. - Т. 41, № 2. -С. 84-87.
27. Хотылева, Л.В. Особенности проявления гетерозиса по продуктивности и интегральным показателям энергетического метаболизма у F1 и F2 гибридов кукурузы / Л.В. Хотылева, В.В. Ти-ток // Цитология и генетика. - 1994. - Т. 28, № 4. - С. 31-34.
28. Purine and pyrimidine nucleotide metabolism in higher plants / Stasolla C. [et al.] // J. Plant Physiol. - 2003. - Vol. 160, № 11. - P. 12711295.
29. Морфофизиологические признаки при гетерозисе у томатов в культуре in vitro / В.В. Титок [и др.] // Доклады Нац. акад. наук Белоруси. -1998. - Т. 42. - № 1. - С. 93-98.
30. Титок, В. В. Интегральные показатели энергетического метаболизма при формировании продуктивности льна-долгунца (Linum usitatissimum L.) / В.В. Титок, С.И. Юренкова // Вес. Нац. акад. навук Беларусь Сер. бiял. навук. -2005. - № 3. - C. 50-55.
31. Titok, V.V. Energy metabolism in fibre flax ontogenesis at heterosis / V.V. Titok, S.I. Yurenkova, L.V. Khotyljova // Agriculture. - 2004. - Vol. 86, № 2. - P. 76-85.
32. Титок, В.В. Дыхание и продукционный процесс у льна-долгунца / В.В. Титок, С.И. Юренкова, Л.В. Хотылева // Физиол. и биох. культ. раст. -2004. - Т. 36, № 5. - С. 403-409.
33. Titok, V.V. Dynamics of bioenergetic processes in early stages of flax growth / VV. Titok, S.I. Yurenkova // Horticulture Vegetable Growing. -2000. - Vol. 19, № 3. - P. 77-85.
34. Характеристика энергетического метаболизма в онтогенезе льна-долгунца при гетерозисе / В.В. Титок [и др.] // Генетика. - 2005. - Т. 41, № 2. - С. 1-7.
35. Юренкова, С.И. Изоферментный анализ генетического полиморфизма у льна-долгунца (Linum usitatissimum L.) / С.И. Юренкова // Вес. Акад. навук БССР. Сер. бiял. навук. - 2003. -№ 1. - С. 35-40.
36. Титок, В.В. Биоэнергетическая концепция гетерозиса / В.В. Титок // Доклады Нац. акад. наук Белоруси. - 2003. - Т. 47, № 4. - С. 84-89.
37. Birchler, J.A. In search of the molecular basis of heterosis / J.A. Birchler, D.L. Auger,
N.C. Riddle // The Plant Cell. - 2003. - Vol. 15, № 10. - P. 2236-2239.
38. Tsaftaris, A.S. Mechanisms of heterosis in crop plants / A.S. Tsaftaris, M. Kafka // J. Crop. Prod. -
1998. - Vol. 1, № 1. - P. 95-107.
39. Юренкова, С.И. Кинетические характеристики глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы у линий и гибридов кукурузы / С.И. Юренкова, А.Н. Разумович // Вес. Акад. навук БССР. Сер. бiял. навук. - 1986.- № 4.- С. 63-65.
40. Plant metabolism and heterosis / D.Rhodes [et al.] // Plant Breed. Rev. - 1992. - Vol. 10. -P. 53-91.
41. Genetically based differences in photochemical activities of isolated maiz (Zea mays L.) mesophyll chloroplasts / D. Hola [et al.] // Photosynthetica. -
1999. - Vol. 36, № 1/2. - P. 187-197.
42. Фотохимические реакции хлоропластов и активность рибулозодифосфаткарбоксилазы у гетерозисных проростков кукурузы и их родительских форм / Л.В. Хотылева [и др.] // Доклады Акад. наук БССР. - 1984. - Т. 28, № 8. -С. 756-759.
43. Kornerova, M. The effect of low growth temperature on hill reaction and photosystem 1 activities and pigment contents in maize inbred lines and their Fj hybrids / M. Kornerova, D. Hola // Photosynthetica. - 2000. - Vol. 37, № 3. -P. 477-488.
44. The development of chloroplast ultrastructure and Hill reaction activity during leaf ontogeny in different maize (Zea mays L.) genotypes / J. Kutik [et al.] // Photosynthetica. - 1999. - Vol. 36, № 4. -P. 497-507.
45. Показатели энергетического обмена у гибридной и инбредной кукурузы / А.П. Яковлев [и др.] // Науч. докл. высш. школы. Биол. науки. -1973. - № 11.- С. 105-109.
46. Яковлев, А.П. Фосфорный обмен в генеративных органах инбредной и гибридной кукурузы / А.П. Яковлев, М.Ф. Овчинникова // С.-х. биол. - 1972. - Т. 7, № 1. - С. 77-80.
47. Яковлев А.П. Окислительная и фосфори-лирующая активность митохондрий кукурузы в связи с гетерозисом / А.П. Яковлев, М.И. Тукее-ва, Н.В. Раськова // Физиол. раст.- 1971.- Т. 18, вып. 4.- С. 772-776.
48. McDaniel, R.G. Biochemical and physiological basis of heterosis / R.G. McDaniel // Crit. Rev. Plant Sci. - 1986. - Vol. 4, № 3. - P. 228-246.
49. Титок, В.В. Особенности наследования интегральных показателей энергетического метаболизма в проростках гибридных форм кукурузы / В.В. Титок, А.Н. Разумович, Л.В. Хотылева // Ге -нетика. - 1989. - Т. XXV, № 7. - С. 1223-1229.
50. Ц^ок, У.У. Асаблiвасцi наследаван-ня колькасщ АТФ у праростках кукурузы / УУ Цггок // Вес. Акад. навук Беларусь Сер. бiял. навук. - 1989. - № 4. - С. 35-37.
51. Титок, В. В. О наследовании интегральных показателей энергетического метаболизма в зерновках гибридов кукурузы Fj / В.В. Титок,
A.Н. Разумович, Л.В. Хотылева // С.-х. биол. Сер. биол. раст. - 1991. - № 1. - С. 105-111.
52. Титок, В.В. Содержание компонентов аде-ниловой системы в семенах льна-долгунца /
B.В. Титок, О.В. Русинова, Л.В. Хотылева // Доклады Акад. наук Беларуси. - 1994. - Т. 38, № 3. -
C. 63-66.
53. Титок, В.В. Активность дыхательного метаболизма в зеленых проростках льна-долгунца /
B.В. Титок, С.И. Юренкова, Л.В. Хотылева // Физиол. и биох. культ. раст. - 2000. - Т. 32, № 3. -
C.184-188.
54. Titok, V.V. Dynamics of energy metabolism parameters in fiber flax ontogenesis / V.V. Titok, S.I. Yurenkova, L.V. Khotyljova // Natural Fibres. -1998. - № 2. - P. 241-243.
55. Хотылева, Л. В. Интегральные показатели энергетического метаболизма в этиолированных проростках самоопыленных линий кукурузы / Л. В. Хотылева, А. Н. Разумович, В. В. Титок // Фи-зиол. раст. - 1987. - Т. 34, вып 2. - С. 101-308.
56. Титок, В.В. Биоэнергетические процессы в онтогенезе льна-долгунца (Linum usitatissimum) при гетерозисе / В.В. Титок // Вес. Нац. акад. навук Беларусь Сер. бiял. навук. - 2002. - № 3. -С. 45-49.
57. Титок, В. В. Использование биоэнергетических показателей для оценки селекционной ценности сортов льна-долгунца (Linum usitatissimum L.) / В.В. Титок, С.И. Юренкова, Л.В. Хотылева // Вес. Нац. акад. навук Беларусь Сер. бiял. навук. - 2002. - №4. - С. 37-41.
58. Титок, В. В. Использование интегральных показателей энергетического метаболизма для диагностики селекционной ценности льна-долгунца / В.В. Титок, С.И. Юренкова, Л.В. Хо -тылева // Вестник Фонда ФФИ. - 2005. - № 3. -С. 37-49.
Дата поступления статьи 4 декабря 2008 г.
