CC BY
909
Для корреспонденции
Гришин Дмитрий Викторович - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории медицинской биотехнологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича» Адрес: 119121, г. Москва, ул. Погодинская, д. 10, стр. 8 Телефон: (499) 246-33-80 E-mail: molbiol_ibm@inbox.ru
Гришин Д.В., Подобед О.В., Гладилина Ю.А., Покровская М.В., Александрова С.С., Покровский В.С., Соколов Н.Н.
Биоактивные белки и пептиды: современное состояние и новые тенденции практического применения в пищевой промышленности и кормопроизводстве
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича», Москва Institute of Biomedical Chemistry, Moscow
Белки и полипептиды играют ключевую роль в жизнедеятельности организма. Научно-практический интерес к веществам белковой природы объясняется многообразием их функций в метаболических процессах. Биологически активные вещества белкового происхождения имеют богатую историю применения в различных отраслях народного хозяйства. При этом прослеживается тесная связь между пищевой промышленностью, биомедициной и кормопроизводством, так как эффективная конверсия белков корма в организме продуктивных сельскохозяйственных животных обеспечивает в итоге необходимый уровень метаболизма человека как основного потребителя конечной продукции, получаемой от данных животных. Очевидно, что для нормального роста, развития и сопротивляемости инфекционным агентам как человеку, так и сельскохозяйственным животным необходимо постоянное поступление комплекса L-аминокислот в определенной пропорции и доступной для усвоения форме. В обзоре рассматриваются биологически активные полипептиды, используемые в питании и отраслях пищевой индустрии, основные тенденции и научно-практические подходы к получению белковой продукции с требуемыми характеристиками. Ключевые слова: биологически активные пептиды, функциональные белки, пищевая промышленность, кормопроизводство, незаменимые L-аминокислоты
Proteins and polypeptides play a key role in the life of a human body. Scientific and practical interest to the natural proteinaceous substances could be explained by the
Для цитирования: Гришин Д.В., Подобед О.В., Гладилина Ю.А., Покровская М.В., Александрова С.С., Покровский ВС., Соколов Н.Н. Биоактивные белки и пептиды: современное состояние и новые тенденции практического применения в пищевой промышленности и кормопроизводстве // Вопр. питания. 2017. Т. 86. № 3. С. 19-31. Статья поступила в редакцию 08.12.2016. Принята в печать 02.05.2017.
For citation: Grishin D.V., Podobed O.V., Gladilina Yu.A., Pokrovskaya M.V., Aleksandrova S.S., Pokrovsky V.S., Sokolov N.N. Bioactive proteins and peptides: current state and new trends of practical application in the food industry and feed production. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2017; 86 (3): 19-31. (in Russian)
Received 08.12.2016. Accepted for publication 02.05.2017.
Bioactive proteins and peptides: current state and new trends of practical application in the food industry and feed production
Grishin D.V., Podobed O.V., Gladilina Yu.A., Pokrovskaya M.V., Aleksandrova S.S., Pokrovsky V.S., Sokolov N.N.
diversity of their functions in metabolic processes. Biologically active substances of the protein origin have a rich history of applications in different sectors of the economy. In this case, the close relationship is observed between food industry, biomedicine and fodder production, because efficient conversion of feed protein in productive agricultural animals provides, as a result, the required level of metabolism in a human, as the main consumer of final products derived from these animals. Obviously, for normal growth, development and resistance to infectious agents, both people and farm animals need a constant consumption of L-amino acids in certain proportions and in available for absorption form. This review considers the bioactive polypeptides used in nutrition and food industry, main trends and practical approaches to generating protein products with the desired characteristics.
Keywords: bioactive peptides, functional proteins, food industry, fodder production, essential L-amino acids
Белки и пептиды растительного и животного происхождения широко применяются в пищевой промышленности, медицине, кормопроизводстве и косметологии. В настоящее время среди всего многообразия пищевых добавок, особое внимание уделяется именно белковым препаратам. Это и неудивительно, ведь белки являются важной частью каждой структурно-функциональной единицы клетки, занимая первое место среди всех содержащихся в живой клетке макромолекул. Так, в организме человека и животных белки составляют 14-20% по общей массовой доле и около 40% в пересчете на сухое вещество [1-3].
Среди основных функций, выполняемых белками, можно выделить каталитическую, структурную, регуля-торную, рецепторную, энергетическую, транспортную, защитную и дыхательную. Очевидно, что практически все функции живого организма в той или иной степени связаны с белковой составляющей. Грань между пептидами и полипептидами весьма условна [4], составляя, по данным IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry), в среднем порядка 50 аминокислотных остатков.
Биоактивные белки и пептиды отвечают за иммуно-модуляцию, поддержание нормального артериального давления, управление процессами воспаления и многими другими. Данные соединения могут поступать в организм в интактном виде, т.е. в виде структур, проявляющих свои свойства непосредственно в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ), а также в форме своеобразных белковых и пептидных предшественников [5]. Часто подобные соединения сначала подвергаются воздействию пищеварительных ферментов макроорганизма или обитающей в нем микрофлоры, а затем, попадая в кровоток в виде пептидов или даже отдельных незаменимых аминокислот, становятся структурными элементами биологически активных полипептидов организма.
К интактным белкам, например, могут быть отнесены иммуноглобулины молока, лактоферрин и эпидермаль-ный фактор роста (EGF) молозива. Они проявляют определенную резистентность к действию протеаз ЖКТ и реализуют свой биогенный потенциал непосредственно в пищеварительной системе, защищая организм
от размножения патогенной и условно-патогенной микрофлоры, а также стимулируя регенерацию и обновление слизистой оболочки ЖКТ [6].
К белкам-предшественникам может быть отнесен белок молока казеин, который не только является источником незаменимых для организма человека и животных аминокислот, но и в форме казеинфосфопепти-дов [саветорИоврИорерМев (СРР)] хелатирует кальций, улучшая показатели его растворимости и абсорбируе-мости энтероцитами кишечника [5].
В рамках данного обзора мы хотели бы затронуть преимущественно белковые и пептидные предшественники, которые чаще всего используются в пищевой промышленности и животноводстве. Однако, ввиду того что некоторые из них проявляют еще и высокую интакт-ную активность, этот момент также невозможно обойти стороной.
Для пищевой промышленности и кормопроизводства полипептиды интересны прежде всего своей энзима-тической и структурной функцией, т.е. как источники 1_-аминокислот. Полипептиды различной протяженности и степени сбалансированности являются, пожалуй, важнейшим элементом в стратегии рационального питания человека и ценных сельскохозяйственных животных.
Белок тела строится исключительно из белка пищи, с чем связана, например, его важнейшая роль в нормировании питания промышленно-ценных животных и птицы для создания основы для прижизненного формирования в конечном счете пищевой продукции с заданными технологическими и потребительскими свойствами [7].
Гидролиз белков до пептидов и свободных аминокислот, последующее их усвоение и детоксикация продуктов метаболизма происходят по схожей схеме у человека и большинства животных [8]. При этом значительная часть аминокислот направляется на биосинтез специфических белков, таких как альбумин, глобулины, фибриноген, различные ферменты и т.п.
Интересно, что наряду с отдельными аминокислотами энтероцитарный барьер стенки кишечника могут преодолевать некоторые короткоцепочечные пептиды. Попадая в кровь, они могут проявлять различную биологическую активность [9-14]. При этом ряд исследований
показывает, что эффективность усвоения аминокислот из неполных пептидных гидролизатов была порой выше, чем всасывание их эквивалентов из смесей свободных 1_-аминокислот [15-19].
Длительная нехватка белка в рационе или питание неполноценными по аминокислотному составу белками могут приводить к ряду тяжелых заболеваний, основным из которых является нарушение иммунного статуса, ввиду того что иммуноглобулины как основная структурно-функциональная единица иммунной системы по своей природе являются белками.
Таким образом, потребление с пищей полноценных по аминокислотному составу белков является ключевым фактором в поддержании необходимых показателей здоровья, работоспособности и продуктивности живого организма.
Источники получения биологически активных белков и пептидов
Очевидно, что пищевая промышленность тесно связана с сельским хозяйством, в частности с кормопроизводством. Именно поэтому задачи у данных отраслей общие - обеспечение поступления в организм человека и животных полноценных строительных и регуляторных белков, улучшающих усвоение других классов соединений, важных для жизнедеятельности организма.
Применение белковых препаратов позволяет интенсифицировать технологические процессы, улучшить качество готовой продукции, увеличить ее выход и сэкономить ценное пищевое сырье.
На сегодняшний день, в соответствии с источниками получения, подобные белки можно разделить на несколько основных групп.
Нативные белки и пептиды
К нативным (природным) белкам и пептидам,
используемым в пищевой промышленности и медицине, можно отнести лизоцим, альбумин куриного яйца (овальбумин) и целый спектр белков сыворотки молока (а-лактальбумин, р-лактоглобулин), иммуноглобулины, альбумин сыворотки крови человека и крупного рогатого скота и т.п. Многие из перечисленных белков являются эталонными, так как по аминокислотному составу приближены к составу компонентов крови и мышечной ткани человека и животных; они легко усваиваются, поэтому часто используются в качестве компонентов кле-точно-культуральных ростовых сред, а также вводятся в рационы лежачих пациентов, страдающих кахексией, заболеваниями паренхиматозных органов и онкологическими заболеваниями [20, 21]. По некоторым данным, такие белки, как альбумин и овальбумин, воздействуют на активность трипсина и уровень холестерина крови [22, 23].
В пищевой промышленности широкое применение также нашли сычужный фермент (химозин), который является эндопептидазой, гидролизующей пептидные
связи, образованные остатками гидрофобных аминокислот белков молока; нативный вариант а-амилазы солода, участвующей в разрушении крахмала и гликогена, расщепляющей а-(1-4)-связи в амилозе и ами-лопектине и катализирующей гидролиз сахарозы до фруктозы и глюкозы; низин - пептидный микробный антибиотик, природный консервант; соевый белок (совокупность белков соевых бобов) на основе комплекса исследований, проведенных Европейским агентством по безопасности продуктов питания, объявлен белком, способствующим уменьшению доли холестериновой фракции крови и риска развития заболеваний сердца; желатин, широко используемый в пищевой промышленности, - стромальный гидролизованный коллаген соединительной ткани животных; казеин - тяжелая белковая фракция молока, являющаяся основой твердой части сыров (таблица).
К нативным белковым продуктам, использующимся преимущественно в кормопроизводстве, можно отнести продукты переработки отходов мясной и рыбной промышленности, например мясо-костную и рыбную муку, гидролизаты казеина и т.д. (см. таблицу).
Рекомбинантные белки и пептиды
Современный уровень развития биотехнологий позволяет все чаще применять в пищевой промышленности и кормопроизводстве рекомбинантные аналоги натив-ных полипептидов, синтезируемые стандартизированными продуцентами. Так, в сельском хозяйстве для улучшения перевариваемости кормов создаются реком-бинантные ферменты. К таким энзимам можно отнести рекомбинантные а-амилазы, улучшающие усвоение крахмала, р-глюканазы, расщепляющие глюканы, термостабильные фитазы, влияющие на усвояемость фосфатов, протеазы, гидролизующие крупные белки корма и другие рекомбинантные энзимы [24-26].
В последнее время добавление в рационы сельскохозяйственных животных и птицы биологически активных короткоцепочечных пептидов также рассматривается в качестве перспективного способа иммуномодуляции, улучшения роста, эффективности усвоения некоторых компонентов пищи, улучшения работы ЖКТ и, как следствие, увеличения продуктивности [27-29].
Продуцентами рекомбинантных полипептидов могут быть как микро-, так и макроорганизмы. Например, большой интерес вызывает рекомбинантный антимикробный белок лактоферрин. Данный бактериоцин представляет собой белок молока и плазмы крови млекопитающих, выполняющий роль первичной защиты организма от проникновения патогенных микроорганизмов посредством хелатирования важных для их существования ионов металлов. В рамках реализации программы «Бел-РосТрансген-2» в Республике Беларусь и Российской Федерации созданы первые опытные стада трансгенных коз, которые продуцируют с молоком человеческий лактоферрин [30, 31].
Однако по-прежнему широкое использование технологии рекомбинантной ДНК в различных отраслях
Основные источники и область применения структурных и биологически активных белков и пептидов
Наименование белка или пептида EC number, Reference Sequence ID Основной источник получения Область применения
АФП AFL71128.1, ELS44431.1, 0EU10472.1, BAD02897.1 Triticum, D. carota, F. cylindrus, T. ishikariensis Кондитерская промышленность, молочная промышленность, медицина
Низин AAA88606.1, ALA14807.1 L. lactis, Str. lactis 42, E. faecalis Низин как консервант эффективен в сыроделии, в консервировании (мяса, рыбы, овощей), транспортировке молока и мяса, виноделии и пивоварении
Овальбумин AAB59956.1 Белок яйца Кондитерская промышленность, хлебопечение, молочная промышленность
Желатин - Гидролизованный коллаген соединительной ткани животных Кондитерская промышленность, фармацевтика, косметология
Казеин ACJ14317.1 Молоко, сливки, творог Молочная промышленность, изготовление искусственных волокон, фармацевтических продуктов (гидрогели для тканевой инженерии), специализированных пищевых продуктов
Мясо-костная и рыбная мука - Молотый и частично гидролизован-ный коллаген соединительной ткани животных и оссеин костной ткани Кормопроизводство
Рекомбинантные кормовые пептиды - Лабораторные штаммы-продуценты Кормопроизводство
а-Амилаза КФ 3.2.1.1 B. amyloliquefaciens, B. licheniformis, B. subtilis, B. stearothermophilus, A. oryzae Пищевая промышленность, кормопроизводство
Р-Фруктофуранозидаза КФ 3.2.1.26 Дрожжи (Saccharomyces cerevisiae), пчелы (Andrenidae), B. subtilis Кондитерская промышленность
1_-аспарагиназа КФ 3.5.1.1 E. coli, Erw. carotovora, E. chrysanthemi, F. equiseti, Th. thermophilus Пищевая промышленность, медицина
Химозин КФ 3.4.23.4 4-й отдел желудка жвачных животных (нативный), дрожжи (K. lactis) и промышленные штаммы E. coli (рекомби-нантный) Пищевая промышленность, медицина
Липаза КФ 3.1.1.3 Поджелудочная железа животных, семена растений, M. miehei, A. niger Пищевая промышленность, медицина
Лактаза КФ 3.2.1.108 E. coli, Th. ethanolicus, K. fragilis, K. lactis, A. niger, A. oryzae Пищевая промышленность, медицина
Глюкооксидаза КФ 1.1.3.4 P. chrysogenum, P. casei Кондитерская промышленность, пивоваренная промышленность, виноделие, соковая промышленность
Каталаза КФ 1.11.1.6 P. vitale, P. notatum, A. niger Кондитерская промышленность, пивоваренная промышленность, виноделие, соковая промышленность
Карбоксипептидаза КФ 3.4.17.1 Поджелудочная железа, желудок животных, плоды и побеги некоторых растений, A. niger, A. oryzae, Bacillus ssp. Мясная промышленность, фармацевтическая промышленность
Трипсин КФ 3.4.21.4 Поджелудочная железа, ЖКТ млекопитающих и рыб Мясная промышленность, фармацевтическая промышленность
Коллагеназа КФ 3.4.4.19 Поджелудочная железа млекопитающих Мясная промышленность, фармацевтическая промышленность
Папаин КФ 3.4.22.2 Млечный сок дынного дерева -Carica papaya Мясная промышленность, фармацевтическая промышленность
ДНК-полимераза КФ 2.7.7.7 Th. aquaticus, Th. thermophilus, P. furiosus Пищевая промышленность, сельское хозяйство, биомедицина (входят в состав ПЦР-наборов)
Ревертаза КФ 2.7.7.49 Murine leukemia virus Пищевая промышленность, сельское хозяйство, биомедицина
Пероксидаза КФ 1.11.1.7 A. rusticana, C. armoracia Пищевая промышленность, сельское хозяйство, биомедицина
Целлюлазы КФ 3.2.1.4 T. viridae, A. oryzae, F. culmorum Сельское хозяйство, кормопроизводство, винно-водочная промышленность
Пектиназа КФ 3.2.1.15 A. niger, A. oryzae, Penicillum ssp. Осветление вина и соков, увеличение сокоотделения
Фитаза КФ 3.1.1.8 Bacillus ssp., дрожжи Кормопроизводство
народного хозяйства ограничено из-за порой невысокой экспрессии целевых белков продуцентами и дороговизны ряда промежуточных процедур, таких как, например, тонкая хроматографическая очистка целевого продукта.
В рамках этого в нашей лаборатории разрабатывается принципиально новая стратегия создания балансирующих пептидов пищевого и кормового назначения, обладающих не только достаточным уровнем экспрессии, заданным стехиометрическим составом незаменимых L-аминокислот, но и термостабильностью в качестве свойства, направленного на значительное упрощение и удешевление процедуры очистки подобных полипептидов.
Синтетические пептиды
Твердофазный химический синтез - это, пожалуй, наиболее высокотехнологичный метод получения пептидов [32], основанный на сборке пептида на нерастворимой полимерной подложке последовательным присоединением остатков аминокислот с защищенными а-амино- и боковыми группами. Данная процедура, однако, практически не применяется в пищевой промышленности и кормопроизводстве ввиду ограничений по размеру синтезируемой аминокислотной цепи на уровне 50 аминокислотных остатков, а также вследствие малой рентабельности процесса. Например, если в клетках небольшой пептидный гормон инсулин образуется за считанные минуты, то на его химический синтез могут уйти многие месяцы.
Между тем следует отметить, что химический синтез все-таки оправдан, когда пептиды производятся в медицинских и диагностических целях, если, например, необходимо ввести специфическую метку или получить редкий олигопептид со сложной замкнутой конформа-цией [33, 34].
Общая характеристика и направления использования некоторых белков и пептидов
Антифризные пептиды (АФП) применяются в ре-комбинантной и нативной форме не только в сельском хозяйстве при хранении половых клеток и эмбрионов, но и в пищевой промышленности при хранении пищевых продуктов. Так, добавление в мороженое экстрактов, содержащих АФП из холодоустойчивой пшеницы, позволяет снизить уровень рекристаллизации более чем на 40% и добиться более однородной консистенции мороженого, которое подвергалось нагреву при хранении [35, 36]. Замороженное тесто при добавлении 15,4% АФП из дикой моркови (D. Carota) имеет более равномерную текстуру, так как в нем уменьшается количество замерзающей во время хранения воды. Подобное тесто получается более мягким, а объем выпекаемых изделий стабильным. При этом важно отметить, что добавка АФП абсолютно не влияет на аромат и вкусовые качества продукции [37].
Спектр пептидных антибиотиков не столь велик, однако те из них, что уже применяются в медицине и пищевой промышленности, прочно заняли свои позиции. К примеру, полимиксины - циклические пептидные антибиотики, выделяемые из микроорганизма P. polymyxa и действующие преимущественно на палочковидную грамотрицательную флору (кишечная и синегнойная палочка, энтеробактерии, сальмонеллы, шигеллы, бру-целлы). Бактерицидный эффект обусловлен прямым влиянием на ионную проницаемость цитоплазматичес-кой мембраны. Устойчивость к подобным препаратам развивается достаточно медленно. Вторым пептидным антибиотиком, о котором хотелось бы упомянуть, является низин, продуцируемый штаммами молочнокислых бактерий L. lactis. Он широко используется как биологический консервант в пищевой промышленности во многих странах, включая страны ЕС, и обладает статусом GRAS как безопасный консервант [38-40].
Сухой яичный белок (овальбумин) - хороший пенообразователь, способный удерживать дисахариды. Это обусловливает его использование в кондитерском производстве для создания стойкой однородной пены, эмульгирования жиров, а также обогащения кондитерских изделий незаменимыми аминокислотами [41].
Желатин - частично гидролизованный коллаген, продукт фрагментации и термической переработки соединительной ткани животных [42, 43]. Желатин является природным загустителем, препятствующим быстрой кристаллизации сахаров.
а-Амилазы (а-1,4-глюкан-4-глюканогидролаза; гли-когеназы) используются для осахаривания зернового и картофельного крахмала, а также для ускорения процесса созревания теста [44, 45]. Фермент способен гид-ролизовать а-1,4-гликозидную связь в полисахаридной цепи крахмала и других длинноцепочечных углеводах. В настоящее время для промышленного получения а-амилаз применяют продуценты B. amyloliquefaciens, B. licheniformis, B. subtilis, B. stearothermophilus, A. oryzae и т.д. [46-49] (см. таблицу).
ß-Фруктофуранозидаза (инвертаза) осуществляет медленный гидролиз сахарозы до фруктозы и глюкозы. Применяется в кондитерской промышленности для получения так называемого инвертного сахара [50, 51], при производстве конфет и жидких фруктовых начинок. Она необходима прежде всего для создания жидкой или полумягкой консистенции продукта при одновременно высоких концентрациях сахара.
L-аспарагиназа (L-аспарагин амидогидролаза) -фермент класса гидролаз, катализирующий гидролиз L-аспарагина. Применяется преимущественно как противоопухолевое цитостатическое средство в химиотерапии лейкозов [52, 53]. С недавних пор рекомбинант-ные термостабильные и мезофильные L-аспарагиназы начали использовать для предотвращения появления канцерогенов в конечном пищевом продукте. Цель их введения в продукцию - препятствование развитию нежелательной реакции Майяра. Она представляет собой высокотемпературную каталитическую трансформа-
цию свободного L-аспарагина в канцерогенный акрил-амид при участии реактивной карбонильной группы некоторых моносахаридов, присутствующих в пище. Подобная реакция также участвует в блокирующем гли-козилировании ценных пищевых белков и пептидов благодаря снижению их доступности для протеолитических ферментов организма [54]. Добавление же к пищевому сырью, подвергающемуся термической обработке, термостойкой L-аспарагиназы приводит к торможению развития реакции за счет удаления свободного L-аспара-гина - ключевого компонента данной реакции [55, 56].
Химозин (реннин) - фермент из класса гидролаз, который продуцируется желудочными железами млекопитающих, в том числе человека. У жвачных животных вырабатывается железами сычуга (4-го отдела желудка), отсюда одно из его тривиальных названий - сычужный фермент. Это первый фермент, который был выделен путем солевой экстракции, подробно охарактеризован и применен в пищевой промышленности для коагуляции молока [57]. Природным субстратом химозина является k-казеин, который специфически расщепляется между 105-м и 106-м остатками фенилаланина и метионина. При этом раскрывающиеся гидрофобные группы формируют между собой трехмерную сетку матрикса, которая собственно и становится основой для формирования текстуры сыра. В пищевой промышленности используются как нативные, так и рекомбинантные варианты данного фермента. При этом в качестве продуцентов рекомбинантного химозина выступают дрожжи (K. lactis) и промышленные штаммы E. coli [58].
Поджелудочные эстеразы и грибные липазы, выделяемые, например, из M. Miehei, ускоряют созревание сыра чеддер и улучшают образование букета и окраски сыров и масел [59]. Следует отметить, что развитие запаха в некоторых молочных продуктах значительно зависит от действия подобных ферментов на молочный жир [60, 61].
Казеин молока представляет собой смесь нескольких фосфопротеидов сходной структуры. Высушенный казеин - белый порошок без вкуса, запаха, нерастворимый в воде, органических соединениях, растворах солей и разбавленных щелочей. Используется для производства красок, клеев, некоторых пищевых продуктов [62]. По причине того, что казеин является белком, полноценным по составу незаменимых для человека аминокислот, его используют в составе специализированных пищевых продуктов при различных патологических состояниях, таких как тяжелые ожоги, лихорадка, других длительно протекающих заболеваниях. Следует отметить, что казеин расщепляется медленнее, чем сывороточные белки. Казеин также широко применяют для изготовления искусственных волокон, фармацевтических и диетических продуктов [63, 64].
Лактаза (ß-галактозидаза) применяется в пищевой промышленности для создания диетических безлак-тозных продуктов и в медицине для предотвращения развития синдрома мальабсорбции (СМА). Известно, что недостаточность фермента лактазы, расщепляю-
щей лактозу молока, имеет особое значение в раннем детстве, так как этот содержащийся в молоке дисахарид является основным источником галактозы. Последняя, в свою очередь, участвует в синтезе галактоцеребро-зидов, необходимых для нормального развития центральной нервной системы и сетчатки глаза, вследствие чего уменьшение количества лактозы и ее производных нежелательно, особенно в раннем возрасте. Между тем 15-20% населения Земли страдают от негативных проявлений СМА, который выражается, в частности, в непереносимости содержащих лактозу продуктов и сопряженных с этим последствиях [65].
Существует 2 основные стратегии профилактики СМА. Первая биомедицинская, или заместительная, сводится к приему фармацевтических препаратов ме-зофильных ферментов, способствующих расщеплению лактозы в ЖКТ. Этот способ имеет ограничения, прежде всего ввиду необходимости поддержания стабильной активности фермента и его защиты от агрессивной среды ЖКТ
Ко второй, принципиально новой, стратегии можно отнести биотехнологический подход получения препаратов лактаз с улучшенными характеристиками, основанный на активном внедрении методов генной инженерии. Используя эти методы, можно создавать различные ферменты, в том числе термостабильные лактазы, иммобилизованные на биологически совместимых субстратах, таких как декстран [66, 67]. Это призвано облегчить процесс очистки фермента и оптимизировать процессы динамической конверсии лактозы в пищевой промышленности для создания гипоаллергенных без-лактозных молочных продуктов [68].
Ферментные системы, используемые при производстве соков и алкогольных напитков, необходимы для повышения степени извлечения сока из сырья, осветления и стабилизации соков, а также вина и пива, предотвращения окислительно-восстановительных процессов, инверсии сахарозы при получении безалкогольных напитков. Для этих целей применяют пектолити-ческие и протеолитические ферменты, глюкооксидазы, каталазы, инвертазы, а-амилазы и пр.
При производстве спиртосодержащих напитков из зернового сырья для разжижения и осахаривания крахмала активно используют нативный солод, препараты на его основе и ферментные препараты микробного происхождения с амилолитическим, протеолитическим и цитолитическим действием [59].
Протеолитические ферменты класса гидролаз широко используются в мясной промышленности. В основном применяются энзимы, катализирующие реакцию гидролиза пептидной связи в молекулах белков и пептидов. Различают экзопептидазы, расщепляющие связи вблизи С- или Ы-конца цепи (соответственно карбокси-пептидазы и аминопептидазы), и эндопептидазы (проте-иназы), гидролизующие связи, удаленные от концевых остатков (трипсин). Следует подчеркнуть, что большинство протеолитических ферментов все-таки не обладает строгой субстратной специфичностью [69, 70].
В настоящее время обоснована целесообразность применения протеолитических ферментов животного (коллагеназа камчатского краба) и микробного (ме-гатерин Г10Х и протосубтилин Г10Х) происхождения для обработки низкосортного мясного сырья с высоким содержанием соединительнотканных белков. Показано, что при воздействии протеолитическими ферментными препаратами, такими как нейтральные протеазы, коллагеназы, папаин, протеазы из B. subtilis и A. oryzae, на низкосортную говядину происходит достоверное снижение содержания рыхлой соединительной ткани, что ведет к повышению сортности мясопродуктов [71].
Белки для молекулярной диагностики. Следует отметить, что в сфере мясной промышленности особенно остро стоит вопрос стандартизации и сертификации мясной продукции, ввиду того что данный тип изделий часто подвержен фальсификации или может быть контаминирован опасными для человека микробными или вирусными патогенами. Решить данную проблему также позволяют различного рода белки и пептиды, являющиеся, если так можно выразиться, основным инструментарием молекулярно-диагностических методов. К таким белкам можно отнести ДНК-полимеразы, ревер-тазы, галактозидазы, пероксидазы, фрагменты антител и антигенов и др.
Для целей стандартизации мясной продукции в настоящее время наиболее рационально сочетание двух методов: иммуноферментного (выявление целевого белка) и ДНК-идентификации посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) [72-77].
Комплексное применение данных методов с высокой степенью эффективности позволяет не только идентифицировать видовую принадлежность мяса, но и заблаговременно выявить в мясной продукции возбудителей опасных инфекций или инвазий.
Полипептиды, используемые в аграрном секторе
Пожалуй, наибольшую популярность применение белков и пептидов нашло в сельском хозяйстве, а именно в кормопроизводстве. Подобные полипептиды можно разделить на кормовые добавки (источники структурных L-аминокислот) и функциональные белки (ферменты и гормоны) (см. таблицу). Спектр ферментных препаратов богат энзимами, универсальными для пищевой промышленности и кормопроизводства, а также целым спектром аутентичных для сельского хозяйства препаратов. При этом большинство из них получены биотехнологическим путем.
Целлюлазы и р-глюканазы осуществляют гидролиз (1^4)-р^-гликозидных связей целлюлозы и глюкана. Они позволяют усваивать различные формы клетчатки и применяются для создания комплексных препаратов, нормализующих процесс пищеварения.
а-Амилазы (а-1,4-глюкан-4-глюканогидролаза; глико-геназы) вводятся в качестве добавок к кормам, содер-
жащим большую долю крахмала, с целью его лучшей перевариваемости и усвояемости организмом животных и птицы.
Пектиназы микробного происхождения представляют собой гетерогенную группу ферментов, катализирующих деградацию пектина (структурный компонент клеточной стенки растений). Применяются для увеличения пищевой ценности кормов за счет гидролиза сложных гликопротеидов. В составе пектиназ выделяют следующие группы ферментов:
- пектинлиазы катализируют негидролитическое расщепление пектина;
- пектинэстеразы (пектинметилгидролазы) катализируют отщепление метильных групп пектина с образованием пектиновой кислоты;
- полигалактуроназы осуществляют гидролиз а-1,4-гликозидных связей в цепи пектиновых веществ (действуют на пектиновую кислоту).
Термостабильные и мезофильные фитазы (фос-фомоноэстеразы) повышают усвоение фосфатов животными и птицей из фитатов комбикормов. Фитаты представляют собой комбинированные соли фитиновой кислоты (мио-инозитол гексафосфат), присутствующие во всех компонентах комбикормов растительного происхождения преимущественно в форме комплексных соединений с магнием.
Среди кормовых белковых добавок нельзя обойти стороной белковые субпродукты, такие как мясо-костная мука, соевый белок, рыбная мука, дрожжевой экстракт и т.п.
Мясо-костная и рыбная мука - наиболее доступное сырье для приготовления комбикормов. Этот продукт представляет собой белково-минеральный корм, приготовленный посредством сушки и размола отходов переработки рыбы, морских млекопитающих, ракообразных, отходов пищевой промышленности и туш павших животных, непригодных для использования в пищевой индустрии. Такой корм содержит белок (50%), золу (35%), жиры (8-12%) и воду (4-7%). Рыбную и мясо-костную муку часто включают в рационы птицы, свиней, молодняка сельскохозяйственных животных для нормализации белкового баланса рациона. Между тем существует мнение, что эпизоотия губчатой энцефалопатии сельскохозяйственных животных тесно связана с широкомасштабным использованием зараженной прионами мясо-костной муки с недостаточной степенью стандартизации и термической обработки [78, 79]. При этом следует отметить, что производители и потребители данного продукта, несомненно, попадают в экономическую ловушку, ведь усиление мер по стандартизации и дополнительной обработке муки приводит к резкому удорожанию конечной продукции.
Решением данной проблемы должен был стать соевый и дрожжевой белок, так как риск распространения инфекций и инвазий посредством таких кормов значительно снижен. Кроме того, эти белки по составу приближены к белкам некоторых сельскохозяйственных животных. Однако оказалось, что белок растительного
корма по ряду причин усваивается животными не полностью. Примерно 15% такого протеина недоступно для организма [80]. Это связано прежде всего с тем, что, например, соевые протеины и протеиды зачастую представлены крупномерными гликозилированными белками, которые обладают антигенными детерминантами, способными вызывать аллергическое поражение ЖКТ некоторых сельскохозяйственных животных и птицы. Другие варианты подобных белков являются избирательными ингибиторами трипсина, значительно ухудшающими показатели перевариваемости и усвояемости различных компонентов корма [81]. Таким образом, стало очевидно, что грубые корма, лежащие в основе рентабельности животноводства и птицеводства, содержат трудно усваиваемый растительный протеин, ключевые аминокислоты которого находятся в составе трудноусвояемых гликозилированных белков.
Введение в комбикорм легко перевариваемого белка за счет обработанных кормов животного и бактериального происхождения и балансирования содержания в рационе различных аминокислот, в том числе лизина и метионина, за счет добавок синтетических аминокислот обычно улучшает полноценность и усвояемость кормов [82, 83]. Все это свидетельствует о том, что в рацион для его сбалансирования обязательно должны вводиться ключевые для метаболизма и продуктивности 1_-аминокислоты либо в свободном, либо в связанном, но доступном виде.
Заключение и перспективы
Применение физиологически активных веществ белкового происхождения имеет давние традиции. На примере использования множества полипептидов в различных отраслях народного хозяйства видна тесная связь между пищевой промышленностью, биомедициной и кормопроизводством (см. таблицу). Приведенные факты указывают на то, что эффективность конверсии белков корма в организме сельскохозяйственных животных является залогом поддержания необходимого уровня метаболизма основного потребителя данной продукции - человека. Очевидно и то, что для нормальной жизнедеятельности как человеку, так и сельскохозяйственным животным необходимо постоянное поступление комплекса аминокислот в определенной пропорции и доступной для усвоения форме. Нельзя не отметить, что себестоимость сырья для пищевой промышленности напрямую зависит от себестоимости рационов, а стало быть, и от рентабельности производства белковых и аминокислотных добавок.
В настоящее время наиболее рациональным методом получения кормовых аминокислот считается биосинтез в почвенных микроорганизмах, что обеспечивает производство природных 1_-форм аминокислот. Способность аккумулировать аминокислоты в питательной среде обнаружена у целого ряда микроорганизмов, однако продуцентом свободных аминокислот может считаться
далеко не каждый микроорганизм. В основном используются культуры почвенных, метаногенных и ауксо-трофных микроорганизмов, не отличающиеся быстрым ростом, избирательно синтезирующие лишь какую-то одну аминокислоту и требовательные к условиям культивирования [84, 85]. Нельзя не отметить и тот факт, что практически все синтетические аминокислоты являются сложными 1_^-рацематами, требующими дорогостоящей процедуры разделения. Помимо этого большинство синтетических и биосинтетических кормовых аминокислот являются импортируемыми соединениями, что ставит российскую аграрную и пищевую отрасль в острую зависимость от закупки белковых и аминокислотных добавок за рубежом. Все это обусловливает поиск новых решений в производстве 1_-аминокислот в доступной для усвоения форме. Здесь необходимо подчеркнуть, что для аминокислотного балансирования рационов нет необходимости использовать исключительно свободные аминокислоты, так как организм многих животных способен усваивать связанные 1_-аминокислоты из пептидов [27, 86]. Задача сводится лишь к тому, чтобы пептид или полипептид сам был сбалансирован по ключевым аминокислотам. Однако получение данных пептидов из природных источников и их стандартизация являются не менее ресурсоемкими процедурами, требующими привлечения таких сложных методов исследования, как высокоэффективная жидкостная хроматография, 2D-гель-электрофорез, масс-спектрометрия и др.
Возникает вопрос о том, каким же образом можно использовать неоценимый потенциал олиго- и полипептидов в различных отраслях народного хозяйства, обеспечив при этом необходимый уровень рентабельности их получения.
В качестве решения данной проблемы авторами статьи предложена комплексная стратегия создания ре-комбинантных термостабильных пептидных кассет, сте-хиометрически сбалансированных по содержанию ряда незаменимых 1_-аминокислот.
Современный уровень развития биотехнологии позволяет эффективно создавать как мезофильные, так и термостабильные полипептиды различного размера и назначения, а также управлять их аминокислотным составом, на генно-инженерном уровне [52, 87-92]. Высокая степень рентабельности получения подобных белков дает возможность применить технологию реком-бинантных конструкций для создания кормовых пептидов заданного аминокислотного состава.
В рамках сказанного нами разрабатываются основы биотехнологического получения балансирующих кормовых полипептидов, обогащенных важными для метаболизма аминокислотными остатками, способными стать достойной альтернативой балансированию рационов сельскохозяйственных животных по свободным 1_-ами-нокислотам. В качестве основы для подобных кормовых «пептидных кассет» выбраны домены термостабильных белков некоторых растений и непатогенных термофильных микроорганизмов (Populus, Pentadiplandra, Dendrobium, Thermus, Sulfolobus, Pyrobaculum и др.).
Аминокислотный состав данных доменов оптимизируется на генно-инженерном уровне с целью соблюдения необходимой стехиометрической пропорции соответствующих аминокислот в конечном продукте. Выход целевых аминокислот в составе экспрессирующихся внутри клетки-продуцента рекомбинантных пептидных кассет не должен уступать таковому при экскреции свободных аминокислот в питательную среду.
Использование термостабильных доменов в качестве основы для «полипептидных кассет» позволит применить к ним дешевую малостадийную процедуру выделе-
ния и очистки, базирующуюся на термолизисе. Подобная стратегия должна стать залогом получения линейки кормовых «полипептидных кассет» для различных технологических групп животных сельскохозяйственного назначения. В конечном счете использование подобных пептидов призвано значительно оптимизировать и стандартизировать нормирование рационов по незаменимым 1_-аминокислотам.
Исследование выполнено при финансовой поддержке
Российского научного фонда (проект № 16-16-04086).
Сведения об авторах
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича» (Москва):
Гришин Дмитрий Викторович - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории медицинской
биотехнологии
E-mail: molbiol_ibm@inbox.ru
Подобед Ольга Владимировна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории медицинской биотехнологии E-mail: ovpodobed@gmail.com
Гладилина Юлия Алексеевна - кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории медицинской
биотехнологии
E-mail: leonova_y@mail.ru
Покровская Марина Владимировна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории медицинской биотехнологии E-mail: ivan1190@yandex.ru
Александрова Светлана Серебеджановна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории медицинской биотехнологии E-mail: mbt12@yandex.ru
Покровский Вадим Сергеевич - доктор медицинских наук, научный сотрудник лаборатории медицинской биотехнологии
E-mail: vadimpokrovsky@yandex.ru
Соколов Николай Николаевич - доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией медицинской биотехнологии
E-mail: sokolov2144@yandex.ru
Литература
Wang Z., Shen W., Kotler D.P. et al. Total body protein: a new cellular 9. level mass and distribution prediction model // Am. J. Clin. Nutr. 2003. Vol. 78, N 5. P. 979-984.
Mitchell H.H., Hamilton T.S., Steggerda F.R., Bean H.W. The chemi- 10. cal composition of the adult human body and its bearing on the biochemistry of growth // J. Biol. Chem. 1945. Vol. 158. P. 625-637. 11. Mellblom L, Enerback L. Protein content, dry mass and chemical composition of individual mast cells related to body growth // Histochemistry. 1979. Vol. 63, N 2. P. 129-143. 12. Zoe D.D. Cosmetic Dermatology: Products and Procedures. Wiley-Blackwell, 2011. 548 p. 13. Rutherfurd-Markwick K.J. Food proteins as a source of bioactive peptides with diverse functions // Br. J. Nutr. 2012. Vol. 108, N 2. P. 149-157. 14. Weaver L.T. Significance of bioactive substances in milk to the human neonate // Livest. Prod. Sci. 1997. Vol. 50, N 1. P. 139-146. Liu Y., Wang X., Wu H. et al. Glycine enhances muscle protein mass 15. associated with maintaining Akt-mTOR-FOXO1 signaling and suppressing TLR4 and NOD2 signaling in piglets challenged with LPS // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2016. Vol. 311, N 2. P. 365-373. 16. Rowland A., Miners J.O., Mackenzie P.I. The UDP-glucuronosyl-transferases: their role in drug metabolism and detoxification // Int. J. Biochem. Cell Biol. 2013. Vol. 45, N 6. P. 1121-1132.
Тутельян В.А., Хавинсон В.Х., Рыжак Г.А., Линькова Н.С. Короткие пептиды как компоненты питания: молекулярные основы регуляции гомеостаза // Успехи соврем. биол. 2014. Т. 134, № 3. С. 227-235. Gray G.M., Cooper H.L. Protein digestion and absorption // Gastroenterology. 1971. Vol. 61. P. 535-544.
Freeman H.J., Sleisinger M.H., Kim Y.S. Human protein digestion and
absorption: normal mechanisms and protein-energy malnutrition //
Clin. Gastroenterol. 1983. Vol. 12. P. 357-378.
Desnuelle P. Sjostrom H., Noren O. Molecular and Cellular Basis
of Digestion. Amsterdam : Elsevier, 1986. 558 p.
Jung E., Kim J., Kim M. et. al. Artificial neural network models for
prediction of intestinal permeability of oligopeptides // BMC Bioin-
formatics. 2007. Vol. 8, N 245. P. 1-9.
Тутельян В.А., Хавинсон В.Х., Малинин В.В. Физиологическая роль коротких пептидов в питании // Бюл. эксп. биол. и мед. 2003. Т. 135, N 1. P. 4-10.
Grimble G. K., Silk D.B.A. The optimum form of dietary nitrogen in gastrointestinal disease: proteins, peptides or amino acids // Verh. Dtsch. Ges. Inn. Med. 1986. Vol. 92. P. 674-685. Fairclough P.D., Hegarty J.E., Silk D.B.A., Clark M.L. A comparison of the absorption of two protein hydrolysates and their effects on water and electrolyte movements in the human jejunum // Gut. 1980. Vol. 21. P. 829-834.
2
3
4
5.
7
17. Silk D.B.A., Fairclough P.D., Clark M. L. et al. Uses of a peptide rather than a free amino acid nitrogen source in chemically defined elemental diets // JPEN J. Parenter. Enteral Nutr. 1980. Vol. 4. P. 548-553.
18. Grimble G.K., Keohane P.P., Higgins B.E. et al. Effect of peptide chain length on amino acid and nitrogen absorption from two lactalbumin hydrolysates in the normal human jejunum // Clin. Sci. 1986. Vol. 71. P. 65-69.
19. Rerat A., Vaissade P., Vaugelade P. Absorption kinetics of dietary hydrolysis products in conscious pigs given diets with different amounts of fish protein 1. Amino-nitrogen and glucose // Br. J. Nutr. 1988. Vol. 60, N 1. P. 91-104.
20. Пичугина И.О., Ветчинникова О.Н., Верещагина В.М., Гаппа-ров М.М., Ватазин А.В. Использование искусственных белковых смесей для нутритивной поддержки больных с хронической почечной недостаточностью, находящихся на перитонеальном диализе // Вопр. питания. 2008. Т. 77, № 2. С. 44-50.
21. Богатова О.В., Догарева Н.Г. Химия и физика молока. Оренбург : ГОУ ОГУ, 2004. 137 c.
22. Sankaranarayanan S., de la Llera-Moya M., Drazul-Schrader D., Phillips M.C, Kellner-Weibel G., Rothblat G.H. Serum albumin acts as a shuttle to enhance cholesterol efflux from cells // J. Lipid Res. 2013. Vol. 54, N 3. P. 671-676.
23. Takenawa T., Takahashi K., Sun L.-C., Okazaki E., Osako K. The effect of ovalbumin on the protease activity // KnE Life Sciences, Int. Symposium on Aquatic Product Processing (ISAPPROSH). 2013. P. 39-41.
24. Namkung H., Leeson S. Effect of phytase enzyme on dietary nitrogen-corrected apparent metabolizable energy and the ileal digestibility of nitrogen and amino acids in broiler chicks // Poult. Sci. 1999. Vol. 78, N 9. P. 1317-1319.
25. Amerah A.M., Gilbert C., Simmins P.H., Ravindran V. Influence of feed processing on the efficacy of exogenous enzymes in broiler diets // WPSJ. 2011. Vol. 67. P. 29-46.
26. Kocher A., Choct M., Ross G. et al. Effects of enzyme combinations on apparent metabolizable energy of corn-soybean meal-based diets in broilers // J. Appl. Poult. Res. 2003. Vol. 12. P. 275-283.
27. Feng X.Y., Cheng J., Jiang H. Relationship between amino acid availability and hydrolyzed peptide quantity in poultry feed // J. China Agricult. Univ. 2002. Vol. 7, N 1. P. 107-113.
28. Wang L., Ma Q., Cheng J., Guo B., Yue H. Portal absorption of feed oligo-peptides in chickens // Asian-Australasian J. Anim. Sci. 2004. Vol. 17, N 9. P. 1277-1280.
29. Ravindran V. Advances and future directions in poultry nutrition: an overview // Korean J. Poult. Sci. 2012. Vol. 39, N 1. P. 53-62.
30. Chernousov A.D., Nikonova M.F., Sharova N.I., Mitin A.N., Litvina M.M., Sadchikov P.E. et al. Neolactoferrin as a stimulator of innate and adaptive immunity // Acta Naturae. 2013. Vol. 5, N 4. P. 71-77.
31. Goldman I.L., Georgieva S.G., Gurskiy Y.G., Krasnov A.N., Deykin A.V., Popov A.N. et al. Production of human lactoferrin in animal milk // Biochem. Cell Biol. 2012. Vol. 90, N 3. P. 513-519.
32. Merrifield R.B., Gutte B. The synthesis of ribonuclease A // J. Biol. Chem. 1971. Vol. 246. P. 1922-1941.
33. Aldrich J.V., Kumar V., Dattachowdhury B. et al. Solid phase synthesis and application of labeled peptide derivatives: probes of recep-tor-opioid peptide interactions // Int. J. Pept. Res. Ther. 2008. Vol. 14, N 4. P. 315-321.
34. Olenina L.V., Kuzmina T.I., Sobolev B.N., Kuraeva T.E., Kolesanova E.F., Archakov A.I. Heparin binding sites of hepatitis C virus envelope proteins // J. Viral Hepat. 2005. Vol. 12, N 6. P. 584-593.
35. Гулевский, А.К., Релина, Л.И. Антифризные белки. Сообщение III: Регуляция, происхождение, стабильность и применение // Пробл. криобиологии. 2009. Т. 19, № 3. С. 273-282.
36. Regand A., Goff H.D. Ice recrystallization inhibition in ice cream as affected by ice structuring proteins from winter wheat grass // J. Dairy Sci. 2006. Vol. 89, N 1. P. 49-57.
37. Zhang C., Zhang H., Wang L. et al. Improvement of texture properties and flavor of frozen dough by carrot (Daucus carota) antifreeze protein supplementation // J. Agric. Food Chem. 2007. Vol. 55, N 23. P. 9620-9626.
38. Dixon R.A., Chopra I. Polymyxin B and polymyxin B nonapeptide alter cytoplasmic membrane permeability in Escherichia coli // J. Antimicrob. Chemother. 1986. Vol. 18, N 5. P. 557-563.
39. Попова Е.Ю., Минаева Л.П., Бирюков В.В. Влияние низина на кинетику термической инактивации споровых микроорганизмов // Биотехнология. 2008. № 2. С. 69-73.
40. Cheigh C.I., Pyun Y.R. Nisin biosynthesis and its properties // Bio-technol. Lett. 2005. Vol. 27, N 21. P. 1641-1648.
41. Nehete J.Y., Bhambar R.S., Narkhede M.R., Gawali S.R. Natural proteins: Sources, isolation, characterization and applications // Pharmacogn. Rev. 2013. Vol. 7, N 14. P. 107-116.
42. Mad-Ali S., Benjakul S., Prodpran T., Maqsood S. Characteristics and gel properties of gelatin from goat skin as influenced by alkaline-pre-treatment conditions // Asian-Australas J. Anim. Sci. 2016. Vol. 29, N 6. P. 845-854.
43. Bhat R., Karim A.A. Towards producing novel fish gelatin films by combination treatments of ultraviolet radiation and sugars (ribose and lactose) as cross-linking agents // J. Food Sci. Technol. 2014. Vol. 51, N 7. P. 1326-1333.
44. de Souza P.M., de Oliveira Magalhaes P. Application of microbial a-amylase in industry — A Review // Braz. J. Microbiol. 2010. Vol. 41, N 4. P. 850-861.
45. Sivaramakrishnan S., Gangadharan D., Nampoothiri K.M. et al. a-Amylases from microbial sources—an overview on recent developments // Food Technol. Biotechnol. 2006. Vol. 44. P. 173-184.
46. Reddy N.S., Nimmagada A., Sambasiva Rac R.S. An over view of the microbial alpha amylase minireview // Afr. J. Biotechnol. 2003. Vol. 2. P. 645-648.
47. Burhan A., Nisa U., Gokhan C. et al. Enzymatic properties of novel thermostable, thermophilic, alkaline and chelator resistant amylase from alkaliphilic Bacillus sp. isolate ANT-6 // Process Biochem. 2003. Vol. 38. P. 1397-1403.
48. Pandey A., Nigam P., Soccol C.R. et al. Advances in microbial amy-lases // Biotechnol. Appl. Biochem. 2000. Vol. 31. P. 135-152.
49. Yang H., Liu L., Li J. et. al. Heterologous expression, biochemical characterization, and overproduction of alkaline a-amylase from Bacillus alcalophilus in Bacillus subtilis // Microb. Cell Fact. 2011. Vol. 10. P. 77.
50. Fernandes P. Enzymes in food processing: A Condensed Overview on Strategies for Better Biocatalysts // Enzyme Res. 2010. Vol. 2010. Article ID 862537.
51. Thakur M.S., Ragavan K.V. Biosensors in food processing // J. Food Sci. Technol. 2013. Vol. 50, N 4. P. 625-641.
52. Pokrovskaya M.V., Aleksandrova S.S., PokrovskyV.S., Veselovs-ky A.V., Grishin D.V., Abakumova O.Y. et al. Identification of functional regions in the rhodospirillum rubrum L-asparaginase by site-directed mutagenesis // Mol. Biotechnol. 2015. Vol. 57, N 3. P. 251264.
53. Sokolov N.N., Eldarov M.A., Pokrovskaya M.V., Aleksandrova S.S., Abakumova O.Y., Podobed O.V. et al. Bacterial recombinant L-aspara-ginases: properties, structure and anti-proliferative activity // Biochemistry (Moscow). Supplement Series B: Biomedical Chemistry. 2015. Vol. 9, N 4. P. 325-338.
54. Бедных Б.С., Гаппаров М.М.-Г., Никольская Г.В., Соколов А.И., Раманаускас И.Р., Киселев А.Ю. Гликозилирование белков в продуктах детского питания // Мол. пром-сть. 2014. № 12. С. 68-69.
55. Zuo S., Zhang T., Jiang B., Mu W. Reduction of acrylamide level through blanching with treatment by an extremely thermostable L-asparaginase during French fries processing // Extremophiles. 2015. Vol. 19, N 4. P. 841-851.
56. Tamanna N., Mahmood N. Food processing and maillard reaction products: effect on human health and nutrition // Int. J. Food Sci. 2015. P. 1-6. Article ID 526762.
57. Johnson M.E., Lucey J.A. Major technological advances and trends in cheese // J. Dairy Sci. 2006. Vol. 89, N 4. P. 1174-1178.
58. Starovoitova V.V., Velichko T.I., Baratova L.A. et al. A comparative study of functional properties of calf chymosin and its recombinant forms // Biochemistry (Moscow). 2006. Vol. 71, N 3. P. 320-324.
59. Крахмалева Т. М., Манеева Э. Ш., Халитова Э. Ш. Ферментные препараты в пищевой промышленности // Материалы Всерос. науч.-метод. конф. «Университетский комплекс как региональный центр образования, науки и культуры», 29-31 янв. 2014 г. Оренбург, 2014. С. 1233-1238.
60. El-Hofi M., El-Tanboly E-S., Abd-Rabou N.S. Industrial application of lipases in cheese making: A Review // Internet J. Food Saf. 2011. Vol. 13. P. 293-302.
61. Degheidi M.A., Abd Rabou N.S., Ismail A.A. Improvement of Domiati cheese quality during pickling using jack fruit lipase // Egypt. J. Dairy Sci. 1998. Vol. 26. P. 103-115.
62. Penasa M., Toffanin V., Cologna N. et al. Effects of dairy factory, milk casein content and titratable acidity on coagulation properties in Trent-ingrana dairy industry // J. Dairy Res. 2016. Vol. 83, N 2. P. 242-248.
63. Audic J., Chaufer B., Daufin G. Non-food applications of milk components and dairy co-products: A Review // Lait. 2003. Vol. 83, N 6. P. 417-438.
64. Kinsella J.E., Whitehead D.M., Brady J., Bringe N.A. Milk proteins: possible relationships of structure and function // Developments in Dairy Chemistry-4-Functional Milk Proteins / ed. P.F. Fox. London : Elsevier Appl. Sci., 1989. P. 55-95.
65. Ладодо К.С. Руководство по лечебному питанию детей. М. : Медицина, 2000. 384 с.
66. Cavataio F., Guandalini S. Cow's milk allergy // Essential Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition. New York : McGraw-Hill, 2005. P. 175-192.
67. Гришин Д.В., Никитин А.В. Перспективы профилактики и лечения синдрома мальабсорбции // Антибиотики и химиотер. 2009. № 3-4. С. 49-51.
68. Heyman M.B. Lactose intolerance in infants, children, and adolescents // Pediatrics. 2006. Vol. 118, N 3. P. 1279-1286.
69. Mitrovic A., Mirkovic B., Sosic I., Gobec S., Kos J. Inhibition of endopeptidase and exopeptidase activity of cathepsin B impairs extracellular matrix degradation and tumour invasion // Biol. Chem. 2016. Vol. 397, N 2. P. 165-174.
70. Kaneko J., Harvey J.W., Bruss M.L. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. 6th ed. London: Academic Press, 2008. 916 p.
71. Мирошникова Е.П., Богатова О.В., Стадникова С.В. Физико-химические и биохимические основы производства мяса и мясных продуктов. Оренбург : ГОУ ОГУ, 2005. 246 c.
72. Datukishvili N., Kutateladze T., Gabriadze I. et al. New multiplex PCR methods for rapid screening of genetically modified organisms in foods // Front. Microbiol. 2015. Vol. 6. P. 757.
73. Spychaj A., Mozdziak P.E., Pospiech E. PCR methods in meat species identification as a tool for the verification of regional and traditional meat products // Acta Sci. Pol. Technol. Aliment. 2009. Vol. 8, N 2. P. 5-20.
74. Rodriguez-Lazaro D., Cook N., Hernandez M. Real-time PCR in food science: PCR diagnostics // Curr. Issues Mol. Biol. 2013. Vol. 15. P. 39-44.
75. Gaskin F.E., Taylor S.L. Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of cashew nut in foods // J. Food Sci. 2011. Vol. 76, N 9. P. 218-226.
76. Asensio L., Gonzalez I., Garcia T., Martin R. Determination of food authenticity by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) // Food Control. 2008. Vol. 19, N 1. P. 1-8.
77. Ansfield M., Reaney S.D., Jackman R. Production of a sensitive immunoassay for detection of ruminant and porcine proteins, heated to >130 C at 2.7 bar, in compound animal feedstuffs // Food Agric. Immunol. 2000. Vol. 12. P. 273-284.
78. Paul M., Abrial D., Jarrige N. et al. Bovine spongiform encephalopathy and spatial analysis of the feed industry // Emerg. Infect. Dis.
2007. Vol. 13, N 6. P. 867-872.
79. Morley R.S., Chen S., Rheault N. Assessment of the risk factors related to bovine spongiform encephalopathy // Rev. Sci. Tech. 2003. Vol. 22, N 1. P. 157-178.
80. Жиндамонгкон К. Как удешевить рацион птицы без потери ее продуктивности // Комбикорма. 2014. № 6. С. 72-73.
81. Кассамединов А.И., Разумовская Р.Г. Повышение питательной ценности кормов, применяемых в птицеводстве // Вестн. АГТУ.
2008. № 3 (44). С. 110-114.
82. Adedokun S.A., Adeola O., Parsons C.M., Lilburn M.S., Applegate T.J. Standardized ileal amino acid digestibility of plant feedstuffs in broiler chickens and turkey poults using a nitrogen-free or casein diet // Poult. Sci. 2008. Vol. 87, N 12. P. 2535-2548.
83. Тарасов Н.В. Эффективность использования разных уровней лизина в комбикормах для бройлеров : автореф. дис. ... канд. с.-х. наук. М., 2009.
84. Hermann T. Industrial production of amino acids by coryneform bacteria // J. Biotechnol. 2003. Vol. 104, N 1-3. P. 155-172.
85. Leuchtenberger W., Huthmacher K., Drauz K. Biotechnological production of amino acids and derivatives: current status and prospects // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005. Vol. 69, N 1. P. 1-8.
86. Wang L., Ma Q., Cheng J., Guo B., Yue H. Portal absorption of feed oligo-peptides in chickens // Asian-Australasian J. Anim. Sci. 2004. Vol. 17, N 9. P. 1277-1280.
87. Grishin D.V., Sokolov N.N. Defensins are natural peptide antibiotics of higher eukaryotes // Biochemistry (Moscow). Supplement Series B: Biomedical Chemistry. 2014. Vol. 8, N 1. P. 11-18.
88. Li Y. Carrier proteins for fusion expression of antimicrobial peptides in Escherichia coli // Biotechnol. Appl. Biochem. 2009. Vol. 54, N 1. P. 1-9.
89. Rao S., Xu Z., Su Y. et al. Cloning, soluble expression, and production of recombinant antihypertensive peptide multimer (AHPM-2) in Escherichia coli for bioactivity identification // Protein Pept. Lett. 2011. Vol. 18, N 7. P. 699-706.
90. Cavalli S., Albericio F., Kros A. Amphiphilic peptides and their cross-disciplinary role as building blocks for nanoscience // Chem. Soc. Rev. 2010. Vol. 39, N 1. P. 241-263.
91. Adrio J.L., Demain A.L. Recombinant organisms for production of industrial products // Bioeng. Bugs. 2010. Vol. 1, N 2. P. 116-131.
92. Ling Z., Kang Z., Liu Y. et al. Improvement of catalytic efficiency and thermostability of recombinant Streptomyces griseus trypsin by introducing artificial peptide // World J. Microbiol. Biotechnol. 2014. Vol. 30, N 6. P. 1819-1827.
References
1. Wang Z., Shen W., Kotler D.P., et al. Total body protein: a new cellular level mass and distribution prediction model. Am J Clin Nutr. 2003; 78 (5): 979-84.
2. Mitchell H.H., Hamilton T.S., Steggerda F.R., Bean H.W. The chemical composition of the adult human body and its bearing on the biochemistry of growth. J Biol Chem. 1945; 158: 625-37.
3. Mellblom L., Enerback L. Protein content, dry mass and chemical composition of individual mast cells related to body growth. Histochemistry. 1979; 63 (2): 129-43.
4. Zoe D.D. Cosmetic Dermatology: Products and Procedures. Wiley-Blackwell, 2011: 548 p.
5. Rutherfurd-Markwick K.J. Food proteins as a source of bioactive peptides with diverse functions. Br J Nutr. 2012; 108 (2): 149-57.
6. Weaver L.T. Significance of bioactive substances in milk to the human neonate. Livest Prod Sci. 1997; 50 (1): 139-46.
7. Liu Y., Wang X., Wu H., et al. Glycine enhances muscle protein mass associated with maintaining Akt-mTOR-FOXO1 signaling and suppressing TLR4 and NOD2 signaling in piglets challenged with LPS. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2016; 311 (2): 365-73.
8. Rowland A., Miners J.O., Mackenzie P.I. The UDP-glucuronosyl-transferases: their role in drug metabolism and detoxification. Int J Biochem Cell Biol. 2013; 45 (6): 1121-32.
9. Tutelyan V.A., Khavinson V.K., Ryzhak G.A., Linkova N.S. Short peptides as food ingredients: Molecular Basis of the Regulation of Homeostasis. Uspekhi Sovremennoy Biologii [Advances in Current Biology]. 2014; 134 (3): 227-35. (in Russian)
10. Gray G.M., Cooper H.L. Protein digestion and absorption. Gastroenterology. 1971; 61: 535-44.
11. Freeman H.J., Sleisinger M.H., Kim Y.S. Human protein digestion and absorption: normal mechanisms and protein-energy malnutrition. Clin Gastroenterol. 1983; 12: 357-78.
12. Desnuelle P. Sjostrom H., Noren O. Molecular and cellular basis of digestion. Amsterdam: Elsevier, 1986: 558 p.
13. Jung E., Kim J., Kim M. et al. Artificial neural network models for prediction of intestinal permeability of oligopeptides. BMC Bioinfor-matics. 2007; 8 (245): 1-9.
14. Tutelyan V.A., Khavinson V. Kh., Malinin V.V. Physiological role of short peptides in nutrition. Byulleten' eksperimental'noy biologii i meditsiny [Bulletin of Experimental Biology and Medicine]. 2003; 135 (1): 4-10.
15. Grimble G. K., Silk D.B.A. The optimum form of dietary nitrogen in gastrointestinal disease: proteins, peptides or amino acids. Verh Dtsch Ges Inn Med. 1986; 92: 674-85.
16. Fairclough P.D., Hegarty J.E., Silk D.B.A., Clark M.L. A comparison of the absorption of two protein hydrolysates and their effects on water and electrolyte movements in the human jejunum. Gut. 1980; 21: 829-34.
17. Silk D.B.A., Fairclough P.D., Clark M. L., et al. Uses of a peptide rather than a free amino acid nitrogen source in chemically defined elemental diets. JPEN J Parenter Enteral Nutr. 1980; 4: 548-53.
18. Grimble G.K., Keohane P.P., Higgins B.E., et al. Effect of peptide chain length on amino acid and nitrogen absorption from two lactalbumin hydrolysates in the normal human jejunum. Clin Sci. 1986; 71: 65-9.
19. Rerat A, Vaissade P, Vaugelade P. Absorption kinetics of dietary hydrolysis products in conscious pigs given diets with different amounts of fish protein 1. Amino-nitrogen and glucose. Br J Nutr. 1988; 60 (1): 91-104.
20. Pichugina I.S., Vetchinnikova O.N., Vereshchagina V.M., Gapparov M.M., Vatazin A.V. The application of artificial protein premixes for nutritive support of patients with chronic renal insufficiency, being treated by perinateal dialysis. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2008; 77 (2): 44-50. (in Russian)
21. Bogatova O.V., Dogareva N.G. Dairy chemistry and physics. Orenburg: Orenburg State University (OGU), 2004: 137 p. (in Russian)
22. Sankaranarayanan S., de la Llera-Moya M., Drazul-Schrader D., Phillips M.C, Kellner-Weibel G., Rothblat G.H. Serum albumin acts as a shuttle to enhance cholesterol efflux from cells. J Lipid Res. 2013; 54 (3): 671-6.
23. Takenawa T., Takahashi K., Sun L.-C., Okazaki E., Osako K. The effect of ovalbumin on the protease activity. In: KnE Life Sciences, Int. Symposium on Aquatic Product Processing (ISAPPROSH). 2013: 39-41.
24. Namkung H., Leeson S. Effect of phytase enzyme on dietary nitrogen-corrected apparent metabolizable energy and the ileal digestibility of nitrogen and amino acids in broiler chicks. Poult Sci. 1999; 78 (9): 1317-19.
25. Amerah A.M., Gilbert C., Simmins P.H., Ravindran V. Influence of feed processing on the efficacy of exogenous enzymes in broiler diets. WPSJ. 2011; 67: 29-46.
26. Kocher A., Choct M., Ross G., et al. Effects of enzyme combinations on apparent metabolizable energy of corn-soybean meal-based diets in broilers. J Appl Poult Res. 2003; 12: 275-83.
27. Feng X.Y., Cheng J., Jiang H. Relationship between amino acid availability and hydrolyzed peptide quantity in poultry feed. J China Agricult. Univ. 2002; 7 (1): 107-13.
28. Wang L., Ma Q., Cheng J., Guo B., Yue H. Portal absorption of feed oligo-peptides in chickens. Asian-Australasian J Anim Sci. 2004; 17 (9): 1277-80.
29. Ravindran V. Advances and future directions in poultry nutrition: An Overview. Korean J Poult Sci. 2012; 39 (1): 53-62.
30. Chernousov A.D., Nikonova M.F., Sharova N.I., Mitin A.N., Litvina M.M., Sadchikov P.E., et al. Neolactoferrin as a stimulator of innate and adaptive immunity. Acta Naturae. 2013; 5 (4): 71-7.
31. Goldman I.L., Georgieva S.G., Gurskiy Y.G., Krasnov A.N., Deykin A.V., Popov A.N., et al. Production of human lactoferrin in animal milk. Biochem Cell Biol. 2012; 90 (3): 513-9.
32. Merrifield R.B., Gutte B. The synthesis of ribonuclease A. J Biol Chem. 1971; 246: 1922-41.
33. Aldrich J.V., Kumar V., Dattachowdhury B. et al. Solid phase synthesis and application of labeled peptide derivatives: probes of receptor-opi-oid peptide interactions. Int J Pept Res Ther. 2008; 14 (4): 315-21.
34. Olenina L.V., Kuzmina T.I., Sobolev B.N., Kuraeva T.E., Kolesanova E.F., et al. Heparin binding sites of hepatitis C virus envelope proteins. J Viral Hepatit. 2005; 12 (6): 584-93.
35. Gulevsky A.K., Relina L.I. Antifreeze proteins. Report III: Regulation, Origin, Stability and Application. Problemy Kriobiologii [Problems of Cryobiology]. 2009; 19 (3): 273-82. (in Russian)
36. Regand A., Goff H.D. Ice recrystallization inhibition in ice cream as affected by ice structuring proteins from winter wheat grass. J Dairy Sci. 2006; 89 (1): 49-57.
37. Zhang C., Zhang H., Wang L. et al. Improvement of texture properties and flavor of frozen dough by carrot (Daucus carota) antifreeze protein supplementation. J Agric Food Chem. 2007; 55 (23): 9620-26.
38. Dixon R.A., Chopra I. Polymyxin B and polymyxin B nonapep-tide alter cytoplasmic membrane permeability in Escherichia coli. J. Antimicrob. Chemother. 1986; 18 (5): 557-63.
39. Popova E.Yu., Minaeva L.P., Biryukov V.V. Effect of nisin on kinetics of heat inactivation of spore-forming microorganisms. Biotech-nologiya [Biotechnology]. 2008; (2): 98-104. (in Russian)
40. Cheigh C.I., Pyun Y.R. Nisin biosynthesis and its properties. Biotechnol Lett. 2005; 27 (21): 1641-48.
41. Nehete J.Y., Bhambar R.S., Narkhede M.R., Gawali S.R. Natural proteins: Sources, isolation, characterization and applications. Phar-macogn Rev. 2013; 7 (14): 107-16.
42. Mad-Ali S., Benjakul S., Prodpran T., Maqsood S. Characteristics and Gel properties of gelatin from goat skin as influenced by alkaline-pretreatment Conditions. Asian-Australas J Anim Sci. 2016; 29 (6): 845-54.
43. Bhat R., Karim A.A. Towards producing novel fish gelatin films by combination treatments of ultraviolet radiation and sugars (ribose and lactose) as cross-linking agents. J Food Sci Technol. 2014; 51 (7): 1326-33.
44. de Souza P.M., de Oliveira Magalhaes P. Application of microbial a-amylase in industry - A review. Braz J Microbiol. 2010; 41 (4): 850-61.
45. Sivaramakrishnan S., Gangadharan D., Nampoothiri K.M., et al. a-Amylases from microbial sources — an overview on recent developments. Food Technol Biotechnol. 2006; 44: 173-84.
46. Reddy N.S., Nimmagada A., Sambasiva Rac R.S. An over view of the microbial alpha amylase minireview. Afr J Biotechnol. 2003; 2: 645-48.
47. Burhan A., Nisa U., Gokhan C., et al. Enzymatic properties of novel thermostable, thermophilic, alkaline and chelator resistant amylase from alkaliphilic Bacillus sp. isolate ANT-6. Process Biochem. 2003; 38: 1397-403.
48. Pandey A., Nigam P., Soccol C.R., et al. Advances in microbial amylases. Biotechnol Appl Biochem. 2000; 31: 135-52.
49. Yang H., Liu L., Li J., et al. Heterologous expression, biochemical characterization, and overproduction of alkaline a-amylase from Bacillus alcalophilus in Bacillus subtilis. Microb Cell Fact. 2011; Vol 10: 77.
50. Fernandes P. Enzymes in food processing: A Condensed Overview on Strategies for Better Biocatalysts. Enzyme Res. 2010; 2010: 862537.
51. Thakur M.S., Ragavan K.V. Biosensors in food processing. J Food Sci Technol. 2013; 50 (4): 625-41.
52. Pokrovskaya M.V., Aleksandrova S.S., PokrovskyV.S., Veselovsky A.V., Grishin D.V., Abakumova O.Y., et al. Identification of functional regions in the rhodospirillum rubrum L-asparaginase by site-directed mutagenesis. Mol Biotechnol. 2015; 57 (3): 251-64.
53. Sokolov N.N., Eldarov M.A., Pokrovskaya M.V., Aleksandrova S.S., Abakumova O.Y., Podobed O.V., et al. Bacterial recombinant L-asparaginases: properties, structure and anti-proliferative activity. Biochemistry (Moscow) Supplement Series B: Biomedical Chemistry. 2015; 9 (4): 325-38.
54. Bednykh B.S., Gapparov M.M.-G., Nikolskaya G.V., et al. Glycolising of proteins in the baby foods. Molochnaya promyshlennost' [Dairy Industry]. 2014; (12): 68-9. (in Russian).
55. Zuo S., Zhang T., Jiang B, Mu W. Reduction of acrylamide level through blanching with treatment by an extremely thermostable L-asparaginase during French fries processing. Extremophiles. 2015; 19 (4): 841-51.
56. Tamanna N., Mahmood N. Food Processing and Maillard Reaction Products: Effect on Human Health and Nutrition. Int J Food Sci. 2015; 525762: 1-6.
57. Johnson M.E., Lucey J.A. Major technological advances and trends in cheese. J Dairy Sci. 2006; 89 (4): 1174-78.
58. Starovoitova V.V., Velichko T.I., Baratova L.A., et al. A comparative study of functional properties of calf chymosin and its recombinant forms. Biochemistry (Moscow). 2006; 71 (3): 320-24.
59. Krakhmalyova T.M., Maneeva E.S., Khalitova E.S. Enzyme preparations in the food industry. Materialy Vserossiyskoy konferentsii «Universitetskii complex kak regionalnii centr obrasovania, nauki
I kulturi». Orenburg, 2014: 1233-38. (in Russian)
60. El-Hofi M., El-Tanboly E-S., Abd-Rabou N.S. Industrial application of lipases in cheese making: A Review. Internet J Food Saf. 2011; 13: 293-302.
61. Degheidi M.A., Abd Rabou N.S., Ismail A.A. Improvement of Domiati cheese quality during pickling using jack fruit lipase. Egypt J Dairy Sci. 1998; 26: 103-15.
62. Penasa M., Toffanin V., Cologna N., et al. Effects of dairy factory, milk casein content and titratable acidity on coagulation properties in Trentingrana dairy industry. J Dairy Res. 2016; 83 (2): 242-8.
63. Audic J., Chaufer B., Daufin G. Non-food applications of milk components and dairy co-products: A Review. Lait. 2003; 83 (6): 417-38.
64. Kinsella J.E., Whitehead D.M., Brady J., Bringe N.A. Milk proteins: possible relationships of structure and function, In: Fox P.F. (ed.). Developments in Dairy Chemistry-4-Functional Milk Proteins. London: Elsevier Appl. Sci., 1989: 55-95.
65. Ladodo K.S. Manual of pediatric nutrition. Moscow, 2000: 384 p. (in Russian)
66. Cavataio F., Guandalini S. Cow's milk allergy. In: Essential Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition. New York: McGraw-Hill, 2005: 175-92.
67. Grishin D.V, Nikitin A.V. Prospects of malabsorption syndrome prophylaxis and therapy. Antibiotiki i khimioterapiya [Antibiotics and Chemotherapy]. 2009; 54 (3-4): 49-51. (in Russian)
68. Heyman M.B. Lactose intolerance in infants, children, and adolescents. Pediatrics. 2006; 118 (3): 1279-86.
69. Mitrovic A., Mirkovic B., Sosic I., Gobec S., Kos J. Inhibition of endo-peptidase and exopeptidase activity of cathepsin B impairs extracellular matrix degradation and tumour invasion. Biol Chem. 2016; 397 (2): 165-74.
70. Kaneko J., Harvey J.W., Bruss M.L. Clinical biochemistry of domestic animals. 6th ed. London: Academic Press, 2008: 916 p.
71. Miroshnikova E.P., Bogatova O.V., Stadnikova S.V. Physico-chemical and biochemical basis of production of meat and meat products. Orenburg: Orenburg State University (OGU), 2005: 246 p. (in Russian).
72. Datukishvili N., Kutateladze T., Gabriadze I., et al. New multiplex PCR methods for rapid screening of genetically modified organisms in foods. Front Microbiol. 2015; 6: 757.
73. Spychaj A., Mozdziak P.E., Pospiech E. PCR methods in meat species identification as a tool for the verification of regional and traditional meat products. Acta Sci Pol Technol Aliment. 2009; 8 (2): 5-20.
74. Rodriguez-Lazaro D., Cook N., Hernandez M. Real-time PCR in food science: PCR diagnostics. Curr Issues Mol Biol. 2013; 15: 39-44.
75. Gaskin F.E., Taylor S.L. Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of cashew nut in foods. J Food Sci. 2011; 76 (9): 218-26.
76. Asensio L., Gonzalez I., Garcia T., Martin R. Determination of food authenticity by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Food Control. 2008; 19 (1): 1-8.
77. Ansfield M., Reaney S. D., Jackman R. Production of a sensitive immunoassay for detection of ruminant and porcine proteins, heated to >130 C at 2.7 bar, in compound animal feedstuffs. Food Agricult Immunol. 2000; 12: 273-84.
78. Paul M., Abrial D., Jarrige N., et al. Bovine spongiform encephalopathy and spatial analysis of the feed industry. Emerg Infect Dis. 2007; 13 (6): 867-72.
79. Morley R.S., Chen S., Rheault N. Assessment of the risk factors related to bovine spongiform encephalopathy. Rev Sci Tech. 2003; 22 (1): 157-78.
80. Zhindamongkon K. How to reduce the cost of poultry feeds without loss of productivity. Kombikorma [Compound Feeds Magazine]. 2014; (6): 72-3. (in Russian)
81. Kassamedinov A.I., Razumovskaya R.G. Increase of nutritional value of the fodder used in poultry farming. Vestnik Astrakhanskogo gosu-darstvennogo tekhnicheskogo universiteta [Annals of Astrakhan State Technical University]. 2008; 3 (44): 110-14. (in Russian)
82. Adedokun S.A., Adeola O., Parsons C.M., Lilburn M.S., Applegate T.J. Standardized ileal amino acid digestibility of plant feed-stuffs in broiler chickens and turkey poults using a nitrogen-free or casein diet. Poult Sci. 2008; 87 (12): 2535-48.
83. Tarasov N.V. The effectiveness of different levels of lysine in compound feeds for broilers : Diss. Moscow, 2009: 163 p. (in Russian).
84. Hermann T. Industrial production of amino acids by coryneform bacteria. J Biotechnol. 2003; 104 (1-3): 155-72.
85. Leuchtenberger W, Huthmacher K, Drauz K. Biotechnological production of amino acids and derivatives: current status and prospects. Appl Microbiol Biotechnol. 2005; 69 (1): 1-8.
86. Wang L., Ma Q., Cheng J., Guo B., Yue H. Portal absorption of feed oligo-peptides in chickens. Asian-Australasian J Anim Sci. 2004; 17 (9): 1277-80.
87. Grishin D.V., Sokolov N.N. Defensins are natural peptide antibiotics of higher eukaryotes. Biochemistry (Moscow) Supplement Series B: Biomedical Chemistry. 2014; 8 (1): 11-8.
88. Li Y. Carrier proteins for fusion expression of antimicrobial pep-tides in Escherichia coli. Biotechnol Appl Biochem. 2009; 54 (1): 1-9.
89. Rao S., Xu Z., Su Y., et al. Cloning, soluble expression, and production of recombinant antihypertensive peptide multimer (AHPM-2) in Escherichia coli for bioactivity identification. Protein Pept Lett. 2011; 18 (7): 699-706.
90. Cavalli S., Albericio F., Kros A. Amphiphilic peptides and their cross-disciplinary role as building blocks for nanoscience. Chem Soc Rev. 2010; 39(1): 241-63.
91. Adrio J.L., Demain A.L. Recombinant organisms for production of industrial products. Bioeng Bugs. 2010; 1 (2): 116-31.
92. Ling Z., Kang Z., Liu Y., et al. Improvement of catalytic efficiency and thermostability of recombinant Streptomyces griseus trypsin by introducing artificial peptide. World J Microbiol Biotechnol. 2014; 30 (6): 1819-27.
