CC BY
45
УДК «32.937.15:576.8 О. Л. ХРАБРЫХ
Г. В. БАРАЙЩУК A.KOLLAR W.JELKMANN
Омский государственный аграрный университет
Федеральный биологический исследовательский центр сельскою юзяйова и леса
Институт защиты плодовы* культур.
г. Доэзеихайм, Германия
БАКТЕРИИ РОДА PSEUDOMONAS И BACILLUS — АНТАГОНИСТЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ СЕРАЯ ГНИЛЬ BOTRYTIS CINEREA__
Была выявлена способность штаммов бактерий рода Pseudomonas и BetiUus подавлять рост и развитие возбудителя серой гнили Botrytis cinerea /л vitro при сосуществовании микроорганизмов на различных средах. Бактерия Р. fluorescens Pf 1543 в концентрации З'Ю' иопоний/«п. В. lubtitis QST713 и В. iubfilii FDK21 в концентрации 340' колоний/ мл ингибируют рост и развитие В. стссз на пгпризовамной и жидкой средах при однопрс менной инокуляции патогеном и бактериями.
Введение
ВЫ/уИ.ч ппегеа — возбудитель серой шили, имеющий огромный Н1>1МЛ распространения, который характеризуется высокой вирулентностью и способ-ноегью инфицировать более 200 видов растений (13), включая землянику садовую. При благоприятных для гриба условиях ¡повышенная относительная влажность воздуха, составляющая 70-80%, и температура в пределах от 5 до ЗО'С) у земляники, например. можег погибнуть 50 и более процентов урожая {3. 4|. Важным резервом сохранения урожайности сельскохозяйственных культур, увеличения производства, а также повышения качества является замыта от возбудителя ССрОЙ гнили
Одной из характеристик П а'пегеа на землянике ежовой является способность инфицировать растение на ранних стадиях росга и развития, сохраняя при этом латентную форму до момента созревания я юл что затрудняет борьбу с ним |9|. Использование химических средств обеспечивает защиту культуры на начальных этапах применения и причина тому — появление резистентных штаммов Я. сШегеа к применяемым фунгицидам |0]. Более того, отмечено накопление средств химизации в зрелой продукции, что ухудшает пищевую ценность ягод и изменяет содержание микроэлементов. На фоне перечисленных негативных последствий от применения фунгицидов биологический контроль выступает многообещающей альтернативой
Одним из методов биологической защиты растений от болезней является использование бактериальных препаратов, созданных па основе живых культур бактерий-антагонистов. среди которых осо-
бое внимание заслуживают представители родов Pieudoinojiûs Migula 189'. и Bacillus Cohn [2|.
Почвенная бактерия Pseudomonas на основании своих полезных свойств прогни фитонагогенов, включающих способносгьсшггезировать вторичные метаболиты (антибиотики), хнтинолитическоя и цел-люлозолитическая активность, а также способность индуцировать системную резистентность растений прошв многообразия патогенных ммкрооргани ьмон |?|, завоевала особое внимание. Явление антагонизма ко многим михромицетам сиойствепнотакже и для бактерий рода Bacillus, которое обеспечивается синтезом широкоюснектра соединений антибиотической природы |5|.
Цель эксперимента заключалась в выявлении способности различных штаммов бактерий P&vudo-mo-nas (luorescens. Pseudomonas brassicacca/um. Da cillus subtHis подавлять рост и развитие триба-воз будителя серой гнили Я. cinerea в лабораторных условиях vi vitio с целью их дальнейшей апробации в качестве биологических агентов в полевых условиях для защиты сельскохозяйственных культур от серой гнили.
Материалы и методы
В. cinerea
В опытах использовался штамм В. cinerea 63375 Чашки Петри размером 80 мм с картофеле — деке-грозным агаром, содержащие мицелий В. et ne ¡en. выращивались в термостате при температуре 23Т до момента образования обильного спороношения Сбор спор H cincrea осуществлялся добавлением в чашку Петри 5 мл дистиллированной воды с содер-
жапием 0.05% раствора Tween 80. но мелодике, использованной Сансоне и коллег (10|. Д\я этого 100 % раствор Tween 80 п ропускался через фнльф диаметром 0.02 рм (Minisart, Single u.<vc liller »nil, SARTORI-US). разбавлялся дистиллированной подон ,\ля получения нужной концентрации. Собранные споры отделялись от мицелии при помощи сепаратора Sterile Cell Strainer "FALCON" (40 цго Nylon). Двукратным центрифугированием в течение 5 мннуг при 6000об/ мин был получен чистый споровый осадок, з который добавлялся очищенный через фильтр глюцерол с целью длительного хранения. В таком виде споры Я. riñeren хранились в морозильной камере при — SO'С в течение экспериментального периода. Для инокуляции концентрация спор в рабочем растпорс доводилась до З'Ю"' спор/мл добавлением стерильной деонизнрованной поды. Количество спор и растворе определялось гемоцнгометром.
Штаммы бактерий
Объектами лабораторных исследований являлись малоизученны еш таммы Р. (luoresccns PÍI543. Р bras-sicacearam 1112. В. sabiilis SI.U3, В subUlis FDK21 Также в эксперимент были включены более изученные штаммы P. (iuorcsccns А506 и СИЛО, которые сиктезируюг антимикробные вещества, в частности антибиотик 2'1-Диацетилфлорглюцин Более того, объектом исследований являлся В. sub Ulis штамм OS 1713. па основе которого производится препарат Серенада, демонстрирующий эффективность против ряда фкгонатогенов. включая В. eine/ra Отсутствие научных публикаций, отражающих результаты экспериментальных исследовании взаимоотношений Д subtí/is OS1713 и U. cinerea |15], повлияло на желание включить данный штамм и работу по выявлению способности бактерий подавлять рост и развитие Н. cinerea
Для осуществлении экспериментов бактерии пе-реноеилисьнаагаризованную среду Standart 1 (Мег-ck. Darmstadt. Cermanyl для чего 25 гсреды Standar: I смешивалось с 15 гагарагара |Agor Agar SERVA high-gel-strcngthl Компоненгы среды разводились 1 лде-онизнровонной воды и стерилизовались притемпе-ратуре 120'С в течение 2 ч. При достижении температуры 60'С среда разливалась в чашки Петри размером СО мм. После застывания среды агаризоиан-ные чашки Петри инокулировались бактерией, используя метод штрихов« и помещались ягермосгат, где выдерживались и течение 2-1 часов при температуре 27*С. Чашки Петри с инокулюмом запаивались парафиновой лентой и в таком состоянии хранились з течение месяца в морозильной камере при температуре + 2"С По истечении срока хранения иноку-аюм переносился на свежеприготовленную питательную среду Standar! I. полученную методом, описанным выше.
Для приготовления рабочей бактериальной суспензии бактерии культивировались в жидхой среде Standait I па ротационном шейкере в течение 12 ч при температуре 274: и 2СО об/мин. Стерильные колбы объемом 100 мл заполнялись стерильной средой Standart I з объеме 20 мл. В колбы бактериальный инокулюм переносился лабораторной петлей из чашек Петри, хранящихся запаянными парафиновой лентой в холодильной камере.
После культивирования на ротационном шейкере культуральная жидкость, содержащая колонии бактерий. промыволасьбуфернымраствором KP |рН 7.11. содержащим К.НРО,|1 235г/л) и КИ,РО, |0.595г/л). путем центрифугирования. Для этого полученная
культу рольная жидкость в объеме 20 мл переливалась а капроновые стерильные колбы и це»прифутк-рооаласьдля получения осадка, содержащего колонии бакгерий. Процесс центрифугирования состав-лял 30 мин при й(КХ) об/мин, Полученный осадок разбавляло! бччрерным раствором КРвобъеме 10 мл. основательно взбалтывался и процедура центрифугирования повторялась для финального промыва ним осадка. В полученный осадок добавлялось 5 мл буферного раствора
Для подсчета колоний бактерий I мл растиоро помещался в кювету и анализировался при 600 nrn. используя спектрофотометер SPECORD 200 Полученная концентрация доводилась до желаемой В нч-риантос применением бактерии рода Pseudomonas концентрация рабочей суспензии составлял 3" 10' ко-лоний/мл и 3' I О'колон и и/мл. тогда кок в варианте с применением бактерии рода Bacillus концентрация рабочей суспензии составляла З'Ю' колонии/мл к З'Ю* колоний/мл.
Инокуляция агарнзованной среды бактериями н Ji. fine/га
Для анализа сосуществования бактерией рода Pseudomonas. Bacillus и 8. cinerea каргофолыго-дскс-т роз пая среда в чашках Петри размером НО мм ино-кулировалась бактериальной суспензией и объеме 0 02 мл Рядом с бактерией был нанесен инокулюм 1) cinerea в объеме 0.02 мл и концентрации З'Ю1, спор/мл. В качестве контроля вместо бактерий использовался буферный раствор KP. Инокулирован-ные чашки помещались и термостат при температуре 23"С на экспериментальный период Наблюдения за ростом и развитием в cinerea и бактерий про-водилигь после шести и двенадцати ,v«eft инкубации. Опыт повторялся три раза, в двукратной noirrop-нссгн.
Инокуляция жидкой среды
Стерильные стеклянные пробирки объемом 10 мл наполнялись картофельно-декстрозным бульоном |24 г на 1 л деонизированной воды) в объеме 5 мл. Среда в пробирках мкокулироволосьО. I мл ß. с in ел» в концентрации 3" 10' спор/мл. После чегоследонала инокуляция жидкой среды в объеме 0.1 мл бактерией рода Pseudomonas в концентрации З'Ю"или З'Ю" колоний/мл,бактерией рода Bacillus в концентрации 3' 10' или 3" 10'' колоний/мл. Колбы помещались на ротационный шейкер на 20 ч при температуре 25"С и SO об/мин |14), Наличие антагонизма между В. einen?« и бактериями определялось микроскопически, используя микроскоп марки Leika DM4000B.
Содержимся! пробирок перед началом микроскопического анализа взбалтывалось для получения однородной массы без осадка. 0.01 мл суспензии наносилось на предметное стекло и анализировалось под микроскопом Исследование заключалось в визуальном осмотре образцов путем их сравнении с контрольным вариантом, где вместо бактерии использовался буферный раствор KP При анализе существенным являлось, имеет ли анализируемый раствор споры гриба-патогена и в каком они состо-пнии. Эксперимент повторялся три раза в двукратной повторности.
Результа ты и обсуждении
Сосуществование бактерий рода Pseudomonas, Bacillus и гриба-патогена В.cinerea на агаризодопной среде.
Контроль Pií-utíonianj« Pseudomonas Ptcudamonas P*im<tonu>nn
Huoicsccns Д500 (luorcseent Fi IЫЗ Поогелссп» CHAO hr-miVrfi-MrtinilM?
Pur. 1. Pot г и p.iiaiiixi' 11. cinerea u npiir> inriHii Гинтсркн родл RwudoiiomTg после шест ,vitii кулмивмроианнп,
Контроль Becitla) sobUilt OSI13 BjcíJIa» »uM/lii SLU3 BirWli»»iiJilJlnFT>K2l
Рис 2 Рост и рлзпитис Ь. cinerea n присутствии бактерии родл Haclllu* поел« шести Л"СЙ клмнвнрованп*.
Цель эксперимента заключалась и выявлении списибпосш бактерии рода Pseudo.To/ißs и Bacillus ингибироваггь рост и развитие В. cinerea приоднопре-менной инокуляции агаризованной среды микроорганизмами
Одновременная инокуляция центрам.ной части чашек Петри с картофельно-декстрояной агаризо-ванной средой осуществляласьбактерией и грибом-патогеном в равном объеме, равном 0.02 мл Титр спорового инокулюма Н cinerea, использований для инокуляции среды. составляет^' 10'спор/мл и равен концентрации бактт-рии рода Pseudomonas, состав-ляющей 3" 10" колоний/мл. Концентрация бактерии Bacillus sublllis составляет 3' 10'* колоний/мл.
Визуальный обзор чашек Петри в контрольном вариант? после шестидневного культивировании свидетели1тюиал об интенсивном росте И. cinerea с обильным снороношения |рнс !J.
Подобный рост гриба-патогена обнаружен и вариантах с использованием бактерий Iluorescens Л506 и Р. Uniircscrr.s СНЛО. Куль7ивируяск образуя пушистый белый мицелий. В. cinerea заполнил емкости полностью, достигая краев чашек Петри Данные публикций [II] свидетельствуют о том, ч то оба микроорганизма обладают способностью синтезировать антибиотики или вещество-токсины, обладающие антимикробными свойствами. Однако наличие антагонизма поогношениюкВ. cinerea в конкретных случаях замечено не было Возможное обт.нспение этого наблюдения заключается в том. что бактерия. в силу своего медленного роста и развития но сровнениюс В. cinerea, при одновременной инокуляции в равном объеме и концентрации, не способна достигнуть той концентрации, при которой начинает синтезироваться токсичноенсшесгво, способное ип-1 ибировать рост гриба-патогена Подобное явление, когда дл'-: синтеза того или иного вещества микроорганизму нужно достичь определенной концентрации. носит название Ouorum-sensiruj ||| и играет огромную роль при биологической защите растений. Предположительно, приданной концентрации бактерий Р. Ilaorcsccns A50G и Р. tluorcscens С НЛО. а именноЗ'Ю''колонии/мл. концентрация сигнальных
молекул не достигает уровня, при хогоромактшшру етсясинтезантибиотика.
Сосуществуя с бактерией Р brassicacearum 1112, В. cinerea демонстрирует признаки роста только со стороны инокулюма гриба-патогена. Возможно, бактерия при данной концентрации синтезирует токсин, выделяет его в агар, предотвращая рост В. а-.-»■т.- Однако на рисунке I едва заметны признаки роста гриба вокруг бактериального инокулюма Можно предположить, что бактерии Р. íirwsi сасеагит 1112 обладает способностью активно синтезировать токсин.тем самым сдерживать рост и развитие В. cinerea, ио-голькодо определенного момента, а именно момента активации защитного механизма. Доказано, чго В cinerea обладает несколькими защитными механизмами прошв токсичных веществ, такими как лакказа и ЛТП-соединяющая кассета ЛВС-переносчиков (транспортеров)|12|
Если допустить, что Р. brassicacearum 4 12 синтс зирует антибиотик, выдели я его и среду, тогда кок данный штамм В. стегеа обладает лак казой или ЛВС-переносчиками (или же штамму свойственны оба механизма защиты) для активации любого механизма защиты потребуется время только по истечении которого гриб способен колонизирован., что и было замечено в опыте
'Интересный характер роста В. cincrca отмечен в варианте при использовании бактерии Р fluoresceins Píl 543 в качестве антагониста Хорошо заметно, чго росг В стегее. имеетогибательный характер, колони• эируя вокруг бактериальной суспензии, заполняя пространство. Возможно, бактерия данного пггамма синтезирует вещество, токсичное для гриба-патогена. выделяя его к агар. Таким образом. 8. cinerea культивируется только на свободном от токсине участке.
Дуя вариантов с применением бактерии Bacillus в качестве биологического агента также свойственен огибательный характер роста В cinerea |рис. 2
Бактерии В. subtllis OST713. В sublills SLU3 и if? subiilis FDK21. предположительно, имеют свойства синтезировать антибиотик, задерживая рост гриба-патогена.
Дли проверки способ ноет В. cinerea колони .тропой. на участках без признаков роста погле шеста-дневной инкубации в вариантах с использованием Р. Iluorescens PI 1543 и Р brassicaceanim 11 12. а также В. suíHi/isQST7I3, ß SUÖK/is SLIÍ3 и П. sublilis 1-UK21 было принмти решение о пролонгации инкубирования чашек Петри с микроорганизмами. Таким образом, антагонизм между бактерией рода Pseudo monas и грибом •патогеном наблюдался через 12 дней культивирования, между бактерией О. AL'brííís и li. cinerea наблюдался через девять дней культивирования.
Присутствие бактерий Р. Iluorescens А506, Р. flu-omsccnsCllM, а также P. brcssicacearum 1112 не ин-гнбнрует рост и развитие О cinerea, сравнивая с контрольным вариантом, демонстрируя обильное спороношение после 12 дней культивирования на агарнзованной среде Основываясь па этом наблюдении. можно сделать вывод что перечисленные микроорганизмы при одновременной инокуляции с грибом-патогеном и ровном объеме и концентрации, не способны задерживать рост в cincrca.
Интересный результат и в то же время оправдывающий ожидания был получен и вариактес использованием Р. Iluorescens PI 1543. Как ноле шести дней культивирования, так и после 12 дней инкубации, В. cinerea успешно развивался только вокруг бокте-риального инохулюма. ')и> наблюдение еще раз подтверждает теорию о способности Р. Iluorescens Pi 1543 синтезировать токсин {антибиотик}, который, выделяясь в среду, ишибирует рост В. cinerea
íi граонении с контрольным вариантом рост ß. cinerea не ннгибировален Я. subttlis SLIJ3, тогда как после девятидневного культивирования и вариантах с применением Ji. sublilis OST713 H В. sublilis FDK21 в качестве антагонистов замечена область без признаков роста патогена. Как и в варианте с использованием Р. íluorescens PI1543. яеронтнее всего, причин.! такого роста Я, cinerea заключается в способности перечисленных штаммов В. sublilis синтезировать антибиотик.
Очевидно, что при концентрации 3' 10'' колоний/ мл бактерия Р. Duorescens PI 1543, также как В. subit-lzsQST7i3 и /I sublilis I-JJK2I при концентрации ЗМО1 колоний/мл, способна синтезировать вещество. которое выделяется в среду, диффундируя. O^vmkoстепень распространения антибиотика не стольвелика, гак как В. cinerea колонизирует, оставляя без признаков роста только участок вокруг инокулюма бактерий. Можно предположить, что, во-первых, быстрый темп роста и развития гриба опережает темп распространения аигнбнотка. Во-вторых, предполагая, что антибиотик обладает быстрым темпом распространения. находясь в среде не препя тствует росту и развитию Я, cinerea благодаря наличию у гриба защитного механизма Третье предположение заключается и том. что агар в силу своих свойств тормозит распространение антибиотика, в результате чего антибиотик концогтрируется только а области бактериального инокулюма.
Для того, чтобы подтвердить или опровергнуть вышеизложенные предположения, был проведен эксперимент по выявлению антагонистических свойств бактерий по отношению :< 8. cinerea в жидкой среде.
Проявление антагонистических свойств бактерий но отношению к ß.cinerea в жидкой среде
Цель эксперимента заключалась в анализе влияния различных концентраций бактерий рода Pseudomo-
nas и Bacillus на росг и развитие В cinerea в жидкой среде при одновременной инокуляции среды акта* гон истом и патогеном.
Для реализации эксперимента картофельно-декстрозный бульон в объеме i мл инокулировался О 1 мл 8 cinerea и концентрации З'Ю" спор/мл. После чего следовала инокуляция жидкой треды в объеме 0 1 мл бактерией рода Pseudomonas в концентрации .3' 10" или 3" 101 колоний/мл. бактерией рода Bacillus в концентрации 3*10'или ЗМО^колоний/мл. После 20 часового культивирования на ртп-ациоином шейкере при 50 об/мин и 25UC наличие антагонизма между íi. có3i?reci и бактериями определялось микроскопи чески. При анализе сущег-шейным являлось, имеет ли анализируемый раствор споры В. cinerea и и каком состоянии они находятся.
Ii контрольном варианте после 20часов культивирования отмечено скопление проросших спор, которые образовывают большие кластеры. Подобное скопление проросших спор ß. cinerea с хорошо развитым мицелием, образующих кластеры, характерно доя вариантов при одновременном культ ивировании гриба-патогена и бактерий I'. Iluorescens АМН и Р. litas-sicaciarum 1112 в концентрации З'Ю' колоний/мл
При увеличении концентрации Р. Iluorescens A50G, раиной З'Ю' колоний/мл. в анализируемом растворе были обнаружены только единичные споры В. cinerea, находящиеся в непророс тем и проросшем состоянии. Увеличение же концентрации бактерии /'. brassicacictrum 1112, равной З'Ю1 колоний/мл. не оказало ингибирующего эффекта на прорастание спор В. cinerea, сравнивая с контрольным вариантом. Обильный мицелий в вариантах с примененном brasslcac/amm II12 н различной концеп-•цмции и í*. fluoiesccns A50G в концентрации З'Ю' кн-лоний/мл свидетельствует о неспособности этих микроорганизмов пнгибировать прорастание спор íi cinerea при условии одновременной инокуляции жидкой среды патогеном и антагонистом Наличие же единичных спор íi. clneteo. находящихся в непро-росшем и проросшем состоянии после 20 часового культивирования в присутствии бактерии Р. fíuore-scens А506 в концентрации 3*10' колоний/мл, позволяет иыекаэагмфедположение о способности бактерии приданной концентрации синтезировать и выделять в жидкую среду вещество г токсичными свой гтами для гриба-патогена.
Подобное наблюдение, где при увеличении концентрации бактерии существенно снижается коли-чествоспор В, cinerea в анализируемом растноре, характерно и д'.я вариантов при использовании Р. Ни-oresceas CHAO. В. sublilis QSI7I3. ti svblihs FDK2I
I Ipn концентрации инокулюма 3* 10' колоний/мл бактерии Р Iluorescens CHAO в анализируемом растворе а основном зафиксировано наличие непрорех-ших спор 8. cinerea. В вариантах при использовании В. siilXtüsQSni'J В. subtilis Р1Ж21 в концентрации 3' 10" колоний/мл в качестве антагонистов в борьбе i ii cinerea были обнаружены только единичные проросшие споры патогена Предположительно, данные бактерии при высокой концентрации бактериального инокулюма при условии одновременной инокуляции и культивирования с патогеном в жидкой среде синтезируют токсин, действующий негативно на прорастание спор В. ciñeren. Более того, сравнивая с контрольным вариантом, даже при низкой концентрации бактериального инокулюма р. fia-oresceas CHAO, tí. sublilis QST713 и ß. sublilis TDK21 присугевие бактерий негативно влияет на рост и развитие В. cinerea
При использовании п качестве антагониста П sublilis SI.U3 также отмечено закономерное снижение количества спор В cinerea в растворе ири увеличении концен грации бактериального иноку-люма. Однако в данном варианте в отличие or вариантов с использованием В. sublilis OS17I3 и в. sublilis 1-DK21 при концентрациях бактерии ЗМО' колоний/мл и ЗМО' колоний/мл отмеченьг большие и малые кластеры проросших спор В. cinerea с хорошо развитым мицелием, соответственно. Возможно, данная бактерия все же синтезирует вещество, которое ингибирует прорастание спор iiaroiena, поскольку их количество в растворе после 20 часов хультивиро-1МНИЯ значительно меньше. Сравнивая с контрольным вариантом, но степень токсичности вещества не столь значительна,
Культнвируясь при одновременной пнокуляцик э жидкой среде, замечен положительный эффект /'. fluorescens Pf 1543 в концентрации ЗМО" колоний/мл на рост и разви гие В. cinerea. Количество пророс ших спор гриба, (группированных и небольшие кластеры, значительно меньше по сравнению с контрольным вариантом, вероятнее всего, благодаря синтезуаш-и-биогика. Данное наблюдение можетслужить еще одним подтверждением теории, полученной ранее, при сосуществовании бактерии и В. cinerea на агариэо-ианной среде.
Выводы
I. Г*1ктерии Р fluorcsccns Pf 1543 в концентрации ЗМО' колоний/мл, В sublilis OST7I3 и В. sublilis ГПК21 и концеш-рации ЗМО' колоний/мл ингибируют рост и развитие В cinerea на агарнзованной и жидкой средах при одновременной инокуляции патогеном и бактериями
2 Огнбательный характер роста 8. cinerea на агарнзованной среде после 12 дней культивирования и присутствии /'. fluorescens Pf 1513, а также после девяти дней культивирования и присутствии В. sublilis O.VI713 и Я. subUlis TDK21 свидетельствует оспособ-НОСТИ данных микроорганизмов синтезировать гоксин |л1ггиСиогик)
3 Пактерии Р fluorescens .-Ч506. Р brasslcaclatum 1112 при концентрации ЗМО1 колоний/мл не ингибирует рост и развитие fl cinerea на агарнзованной и жидкой средах при одновременной инокуляции среды патогеном и бактериями.
4. Пактерии Р fluorescens Л500, !'. liuorescens СИЛО при более высокой концентрации, равной ЗМО' ко-лонпй/мл. подобно бактериям В sublilis OST713 и В sublilts£DK2l в концентрации ЗМО' колоний/мл при условии одновременной инокуляции и культивирования с патогеном в жидкой среде. предположительно, синтезируют токсин, действующий негативно на прорастание спор В cinerea.
Библиографический список
1 В ve (\\ов a M Л. Ouo.-un tenting ряуляцки у почвеивих 1:севлоип:|д.\ / М Л Псгеловл, В А Диилсова. О Ь Астаурапа. Э.Э. Лтамова. M, А Процеико. H Л Бум. A3. Метлицмя. H H Данилова, Л С Чериин. ИЛ Хмель И Микробиологии. 200fi - T 75 - N» 4. - Июль-Август. - С. <55167
2 Кузьмина ЛIO Эффективность бактериальны* препарате» при )а:;;кте растений *ропой пшеницы err тдердой го-
ловни / A Kl. Ky.ihMHU-t, O H Aoiwio». T <J> RoAko. P <J> Hcae®, F.B c("? .ihiih>m. a n meaenibe»// ce.wckoxowhcreeioia* öMUAOni« Cepa* üüI'.vjimü pacreiutfi. 2003 - Ni 5 - C. 69-73 3. HardAbima O. D baue ihm jo-o.vimko» /Ob harn/UJina // M Kaxoc. - 245 c.
4 lliiuiK.ii: 11 14. 30mmiihik.j n koaxohiom c.v.y/ HM Ulani kj-.ii // V. : Ka\oc, 1956 - 0? c
A. UlTepsiEHC. M B BHOAanmecK.in l.iinm.i p-irr.-ii.ifi/
M.B lUrepuuroc. <t> C.-V. ,Vkaailvjd. h.h. AiiApce na, Ol". To hm aod.1 // !Ioa F<\\ M.B lUiepumicc |V\eOioir.K ¡1 ywß nocoOtu A/m CT/AjC-IITOB IlUCIll yrCfl. l.iae.\Oli;iii| - M„ KoaocC:. 2004. -■JIM C
o Brem, K J. Fungiert« resutanc«: Hie ,Msewmeiii <>'■ r.sv. / K.I Bront. DW Hollomon // FR/VC Monoytapli. ■ N0. 2. RnmeU.
7. Ca.-beva P AwCSimoM Ol llie divcnily. and antaqonum lowards fchizccfonic so/an/ AG3. ol i'.tr^iomonai ipecK-s in soll Iroir. diilerent agncultiirol regimc-t / I', Garbcvn. J A. van Veen, J IX van I-Uai // 2004. Vol 47. RAI ö4.
3 PauIiW, T. C. Biologlcal conlrol in greenhoute »ysterm / T C. Pauli». R R Belanger // Ann» Rev Phyiopathology. 2001 -Vol 39 - P. 103-133.
9 So'ülenörolcli H.-J. Botrytis cnir-iea hiMory ol chemical rontrol jnd novel rungicides (or iii inanageniont / II -J Routenbrolch. D Siviebler // - 2000 -Vol, 19 - P SS7-55I
10. Soiwone. C. Conlrol o) ffo!ryft» ci'nrrra »liair.i rcsislant lo IpioOiono In apple wilh iliodotorulic aod and ycjiU / G Sainone, I, Rc-iM. V Calvent«. D Benuwi. M. I San? de Toielll // Po»Üian«l Bloiogy and Tcihrxjlojy. 2XI.S. Vol. 3S I' J4i-2.ll II Schnldcr-Kccl. U Auioinducüon of 2,4 Ul.ice:yIphV)r<K)lii ciaal biDiynthci..i in Ihe Dlorontrol aqenl Kiemtomo/xii Cnait^cem CHA0 and rop:e«ion hy Ihe Ij.icierl.il m. l.ibollt^. MllCytM« an-J pyolulc-3nr. / U. Schnlder Keel. A StflMHW, M NUurhOfer. C Blumer. B IXifty. er. Ctgll-Ronnelo^1. C Reiin/naBn. R Ni.^;. G Vc de Faso, 13. Hat*. C K.vl //Journal ol bacleriotofry, 2COO - Vol l»2 Mi P I715-I23A
1?. Schnuten. A Rcsverairol acls a» .1 natural piotunijicidc arvU induct-t «ll-intoxication öy a ipccüic lacc.11? / A Sctioutcn L WaociraXr». F L Slcianato, K.M V.in de.- Kitij, .1AI- van K,m // Mo^cuUi Microbloiogy. 20CKI. Vol 43 N« 4 P iw3-894
13 Wubbeo j.p. cic.ninci and clMracterisaiic« of endup-.'i-,u<i iarl'.irrr.-.ie grnet froir. Botrytis cinerea/ J.P. Wubben. W. Mulder A. Ten H.ive, j A I, van Kön. .1 Vlsv?t // Applied and Unviron mental Miere,bioloqy. 1999. ■ Vol 65 -N»4 • P.ISS6-1602
14. Xiandong Zlieng Ellecl» ol Cryplococcui .'auffnin |Ku.'№ralh) .Skmner on bloconltol o< p««lharvesl dcciy ol aiöutus borrte» BS! Bull / Z Xwodunt}. Z Hongyin. X Yulany // Acori Sin . 2*>< - Vol 15 - P 5S-60.
ХР.-ЧБРЫХ Олеся Леонидовна, аспирант xai|4\\pi i лесоводства и защиты растений Омского государственного аграрного университета ЬЛРЛЙЩУК Галина Васильевна, кандидат биологических наук, доценг, заведующая кафе,\ройлесовол-стна и защиты растений Омского государственного аграрного университета.
KOI.I.AR Andreas, доктор, Федера.\М1ЫЙ биологический исследовательский центр сельского хозяйства и леса, Институт защиты плодовых культур, т. Доз-зенхайм. Германия
JELKMAN'N Wilhclm, доктор, профессор, Федердл!.-ный биологический исследовательский центр сель ского хозяйства и леса. Институт защиты плодовых культур. г.Доззенхайм. Германия
Стати поп)пил.i к редакцию 20.11.00 г. в Храбрых О. Л.. Бара ft щук Г. В.. Kollar ,V. JelKmínn W
