CC BY
135
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 10 (19), 2015 | ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
161
УДК
БАКТЕРИАЛЬНЫЙ СПЕКТР ВОЗБУДИТЕЛЕЙ В ПАРАЗИТОЦЕНОЗАХ СОБАК ПРИ ВИРУСНО-БАКТЕРИАЛЬНЫХ
ПАРАЗИТОЦЕНОЗХ СОБАК
Марченко Элла Викторовна Луганский национальный аграрный университет Ассистент кафедры заразных болезней, патанатомии
и судебной ветеринарии, г. Луганск
Ключевые слова: микробоценоз, парвовироз, условно патогенная микрофлора, бактерии.
Аннотации: проведение анализа эпизоотической ситуации по желудочно-кишечным инфекциям собак в г. Луганске и установления роли ассоциаций микроорганизмов в механизмах возникновения и развития парвовироза у собак.
Key words: microbiocenosis, parvovirus, conditionally pathogenic microflora, bacteria.
Annotation: the analysis of the epizootic situation on gastrointestinal infections of dogs in Lugansk and establishing the role of associations of microorganisms in the mechanisms of occurrence and development ofparvovirosis in dogs.
Анализ литературных источников свидетельствует о том, что парвовирусный энтерит собак является высококонтагиозным вирусным заболеванием собак, которое характеризуется острым геморрагическим энтеритом, миокардитом, лейкопенией и прогрессирующим обезвоживанием организма [1, 2, 4]. Болезнь также характеризуется высокой летальностью, значительными затратами на проведение лечебных и профилактических мероприятий и причиняет множество огорчений владельцам собак [1, 3, 4, 5].
Роль условно патогенных бактерий в этиологии желудочно-кишечных паразитоценозов собак практически не изучена. Отдельные авторы изолировали одну или несколько бактерий, а изучение полного микробного пейзажа кишечника больных собак не проводили [1, 5].
Естественно, условно патогенные бактерии осложняют течение инфекционных гастроэнтеритов собак и недооценка их влияния на больной организм отрицательно сказывается на эффективности проводимых лечебно-профилактических и других противоэпизоотических мероприятий.
Поэтому, нами были поставлены следующие задачи:
• провести анализ эпизоотической ситуации по заболеваниям собак, инфекционной природы в г. Луганске;
• изучить бактериальный спектр возбудителей в паразитоценозах собак при парвовирусном энтерите и определить этиологическое значение условно патогенных бактерий в указанной патологии.
Материалы и методы. От павших вследствие парво-вирусного энтерита собак отбирали кусочки внутренних органов (селезенка, сердце, легкие, печень, почки, мезентеральные и медиастинальные лимфоузлы), а от клинически больных собак - фекалии, которые подвергали бактериологическому и микологическому исследованию путем высевов в питательные среды (МПА, МПБ, глюкозо-сывороточный бульон и агар Сабуро). Парвовирусный энтерит подтвержден с помощью иммунохроматографических экспресс-тестов VetExpert Rapid CVP Ag (BioNote Inc., Корея).
После инкубации пробирок, из колоний различного типа делали пересев на чашки Петри с МПА, Эндо, кровяным МПА.
Критерием этиологической роли условно патогенных бактерий при парвовирусном энтерите у собак были титры КОЕ/мл (колониеобразующих единиц. Этиологически значимыми патогенами считались те, для которых титры составляли 5 lg КОЕ/мл и больше. В наших исследованиях титры для условно патогенных бактерий, выделенных в монокультуре, составляли 7-8 lg КОЕ/мл. При смешанной инфекции титры изолированных бактерий составляли 5-7 lg КОЕ/мл. Бактерии, изолированные в титрах менее 5 lg КОЕ/ мл (4 lg и ниже) расценивались как контаминационные.
При проведении статистических расчетов предварительно оценивали нормальность распределения при помощи теста Шапиро-Уилкса. При нормальном типе распределения количественных переменных для сравнения двух групп использовали t-тест Стьюдента для независимых выборок. При сравнении двух групп, цифровые показатели которых не соответствовали нормальному распределению признаков, использовали непараметрический U-критерий Манна-Уитни. При сравнении нескольких групп с ненормальным распределением исследуемых признаков использовали непараметрический критерий Крускала-Уоллиса, который представляет собой ранговый анализ вариаций. При сравнении нескольких групп с нормальным распределением исследуемых признаков использовали однофакторный дисперсионный анализ. Зависимость между двумя переменными проводили методами корреляционного анализа по Пирсону при нормальном типе распределении, по Спирмену - при ненормальном распределении.
Для сравнения групп по частоте наличия признака (качественные переменные) использовали критерий c2, при необходимости - с поправкой Йейтса. Все расчеты проводили на персональном компьютере при помощи статистической программы STATISTICA 7.0 (StatSoft, USA).
Всего из клиник ветеринарной медицины г. Луганска нами для бактериологических исследований были отобраны кусочки внутренних органов от 31 собаки, погибшей вследствие парвовирусного энтерита, и 36 проб фекалий от больных животных. Эймериоз, цистоизоспороз, а также кишечные гельминтозы исключали при помощи исследования
162
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 10 (19), 2015 | ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
фекалий по методу Дарлинга при слабом увеличении микроскопа (х56).
Морфологию бактерий определяли в мазках, окрашенных по Грамму, Михину и Бури-Гинсу. Дальнейшую идентификацию проводили соответственно «Определителю бактерий Берджи».
Все изолированные культуры высевали на среды Гисса с сахарозой, мальтозой, лактозой, манозой, манитом и дуль-цитом, кроме этого определяли каталазную активность.
У грамнегативных палочкоподобных бактерий при помощи систем индикаторных бумажных (г. Н. Новгород) дополнительно определяли ферментацию таких углеводов, как инозит и сорбит; наличие ферментов орнитиндекарбок-силазы, лизиндекарбоксилазы, фенилаланиндезаминазы и Р-галактозидазы; продукцию сероводорода, индола и ацетилметилкарбинола; утилизацию цитрата и малоната натрия. Грамположительные кокки проверяли на коагулазную и гемолитическую активность, а также проводили тест на способность расти при температуре 10 ° и 45 °С, рН 9,6, в присутствии 6,5 % NaCl и 40,0 % желчи. Для дифференциации рода Staphylococcus от рода Micrococcus использовали тест на окисление-ферментацию глюкозы (среда Хью-Лейфсона).
Патогенные особенности выделенных изолятов бактерий изучали путем биологической пробы на белых мышах.
Чувствительность культур условно патогенных бактерий, изолированных от больных парвовирусный энтерит собак, определяли в соответствии со стандартами Национального комитета по клиническим и лабораторным стандартам США (NCCLS).
Результаты исследований. Анализом ветеринарной отчетности государственных и частных клиник ветеринарной медицины г. Луганска на протяжении 2009-2015 гг. установлено, что самой распространенной инфекционной болезнью собак оказался парвовироз. Так, в течение 2009-2015 гг. В различных регионах г. Луганска зарегистрировано 1138 случаев парвовироза у собак, что составило 43,1% от общего
количества инфекционных болезней. Также установлен динамичный рост количества случаев заболевания собак пар-вовирозом на протяжении исследуемого периода.
Чаще всего заболевания собак парвовирозом наблюдали в мае (21,1%) и ноябре (18,4%). Неоходимо отметить, что половой предрасположенности собак к парвовирозу не установлено.
Установлена возрастная склонность собак к парвовирозу. Заболевание чаще встречается у щенков в возрасте 1,5-6 месяцев. Относительно щенков этой возрастной группы, зарегистрированы высокие показатели заболеваемости, смертности и летальности.
Реже и в более легкой форме болели павровирозом взрослые собаки в возрасте старше 1,5 лет. В группе взрослых собак в возрасте старше 7 лет зарегистрированы еще меньшие показатели заболеваемости, смертности и летальности. Надо отметить, что болезнь практически не встречалась у щенков в возрасте до 45 суток, что можно объяснить наличием у них колострального иммунитета.
Анализ породной предрасположенности показал, что по сравнению с беспородными, болезнь чаще всего встречается у собак породы ротвейлер, немецкая овчарка, американский питбультерьер, среднеазиатская овчарка. Очень редко болеют английский мастиф, бульмастиф, цвергшнауцер.
С целью установления роли ассоциаций микроорганизмов в механизмах возникновения и развития парвовироза у собак мы провели бактериологические исследования (Табл 1).
Из внутренних органов 31 щенка, павших в результате парвовироза, изолированно 228 культур 14 видов условно патогенных бактерий.
Из изолированных культур микроорганизмов 98 были грамположительными, а 130 - грамотрицательными. Чаще всего изолировали Staphylococcus aureus (68) и Escherichia coli (35); реже - Streptococcus faecalis (18) и редко -Acinetobacter calcoaceticus (3 культуры).
Таблица 1
Видовой состав условно патогенных бактерий, изолированных из внутренних органов больных парвовироз собак
Вид возбудителя Количество штаммов
абс. число в проц.
Грамположительные
Staphylococcus aureus 68 29,8
Staphylococcus epidermidis 12 5,3
Streptococcus faecalis 18 7,9
Грамотрицательные
Escherichia coli 35 15,4
Proteus vulgaris 10 4,3
Proteus mirabilis 7 3,1
Morganella morganii 18 7,9
Enterobacter aerogenes 12 5,3
Enterobacter cloacae 7 3,1
Klebsiella pneumoniae 7 3,1
Citrobacter freundii 9 3,9
Citrobacter koseri 7 3,1
Pseudomonas aeruginosa 15 6,6
Acinetobacter calcoaceticus 3 1,2
Всего 228 100,0
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 10 (19), 2015 | ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
163
Особенно интересны, с практической точки зрения, оказались результаты исследования частоты изоляции монокультур и ассоциаций бактерий из внутренних органов больных парвовирозом собак (табл. 2)
Из внутренних органов щенков, погибших в результате парвовироза, нами выделены 228 культур условно патоген-
ных бактерий, из них 137 были в составе ассоциаций и 91 -как монокультуры. В составе практически всех ассоциаций изолировали Staphylococcus aureus (36,5%) и Escherichia coli (21,2%). А вот Proteus vulgaris и Proteus mirabilis в составе ассоциаций нами не изолированы.
Таблица 2
Структура ассоциаций условно патогенных бактерий у больных парвовирозом собак
Количество ассоциантов Количество ассоциаций Видовой состав ассоциаций
i Staphylococcus aureus + Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae
3 i Staphylococcus aureus + Escherichia coli + Citrobacter koseri
i Staphylococcus aureus + Morganella morganii + Citrobacter koseri
13 Staphylococcus aureus + Escherichia coli
7 Staphylococcus aureus + Streptococcus faecalis
6 Staphylococcus aureus + Enterobacter aerogenes
5 Staphylococcus aureus + Staphylococcus epidermidis
4 Staphylococcus aureus + Morganella morganii
2 Escherichia coli + Staphylococcus epidermidis
2 2 Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae
2 Escherichia coli + Citrobacter freundii
2 Staphylococcus aureus + Citrobacter koseri
2 Staphylococcus aureus + Citrobacter freundii
1 Escherichia coli + Pseudomonas aeruginosa
1 Enterobacter aerogenes + Streptococcus faecalis
1 Escherichia coli + Enterobacter cloacae
1 Escherichia coli + Citrobacter koseri
Из данных, приведенных в таблице 3, следует, что, из подвергнутых тестированию средств наибольшей активностью обладали амикацин, левофлоксацин и энрофлоксацин.
Наиболее широким спектром антибактериального действия на ассоциации условно-патогенных бактерий, ослож-
няющих течение парвовироза у собак, оказался левофлокса-цин. Полученные результаты исследований необходимо учитывать при диагностике и лечении больных животных, а также при разработке эффективных мер борьбы с парво-вирозом собак.
164
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 10 (19), 2015 | ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
Таблица 3
Чувствительность эпизоотических изолятов условно патогенных бактерий, изолированных от больных парвовирозом собак, к антибактериальным средствам
Антимикробные средства
Вид микроорганизма n Показатели X s X 5 X" X X CD X X s CO X CL) VO X s X CL) X' s X s c3 c3 X s X о со сЗ -€н CD Х' X о CD сЗ S Он н -€н CD Х' гентамицин X S Х' сЗ 3 S сЗ X S н CD Х' 3 S о CQ CD X X S Х' сЗ CD О & о CQ CD X X S Х' сЗ CD О & о Он X о
S.aureus 41 MIC50 17,1 27,2 31,1 2,5 15,6 0,3 5,8 0,3 1,3
MIC90 42,7 60,4 73,8 7,5 68,2 2,8 12 1,6 4,0
S.epider-midis 11 MIC50 22,3 25,0 1,3 2,5 2,9 0,5 4,5 1,7 6,6
MIC90 152,4 48,6 7,5 10,8 8,1 6,8 12,1 4,8 12,9
S. faecalis 16 MIC50 12,6 8,2 7,2 1,5 1,2 0,9 6,1 1,5 8,0
MIC90 64,8 42,5 16,8 5,3 15,7 5,3 14,4 2,7 17,3
E. coli 29 MIC50 38,3 30,0 12,5 2,0 3,2 2,0 1,1 1,1 2,2
MIC90 103,6 89,9 38,4 5,5 7,7 3,8 2,6 2,0 3,7
P.vulgaris 10 MIC50 21,1 28,7 27,7 4,7 3,2 7,6 10,5 0,2 5,3
MIC90 130,1 86,4 99,4 16,7 17,4 16,7 37,4 2,4 10,3
P.mirabilis 7 MIC50 17,2 11,3 13,9 2,1 4,2 6,4 2,6 0,9 0,6
MIC90 129,4 54,1 41,3 16,2 18,5 14,5 19,3 3,7 4,8
M.morganii 17 MIC50 37,7 26,2 28,7 23,2 7,7 2,1 8,6 0,1 0,7
MIC90 101,0 78,2 75,3 49,0 16,6 10,5 27,3 0,8 4,4
E.aeroge-nes 12 MIC50 14,5 7,5 5 4,2 15,7 0,6 0,2 0,3 7,1
MIC90 185,3 76,4 21,7 12,6 29,3 7,9 3,3 1,6 21,3
E. cloacae 7 MIC50 17,1 8,6 7,6 1,6 1,3 0,9 8,8 0,3 6,4
MIC90 129,4 64,7 23,2 17,6 9,7 3,7 26,8 2,4 18,4
K.pneumo-ni- 7 MIC50 10,4 2,6 4,4 3,9 1,6 4,3 4,3 1,3 2,5
ae MIC90 23,7 19,3 23,3 16,9 17,6 32,3 18,2 9,6 10,3
C. freundii 9 MIC50 10,7 3,4 0,8 2,9 1,3 1,2 1,8 0,1 0,3
MIC90 104,4 27,0 17,6 8,1 13,0 3,6 9,2 0,7 2,9
C. koseri 7 MIC50 20,9 10,5 11,5 4,3 2,4 5,2 7,2 4,7 2,4
MIC90 85,3 42,7 26,3 18,5 32,3 21,3 29,3 10,7 32,3
P.aerugino-sa 15 MIC50 37,7 27,4 24,7 26,0 1,1 2,7 11,6 0,2 27,2
MIC90 587,2 99,9 54,4 68,0 9,6 11,3 48,3 3,7 48,9
A.calco-ace- 3 MIC50 нр нр нр нр нр нр нр нр нр
ticus MIC90 нр нр нр нр нр нр нр нр нр
Примечание: нр - не рассчитано.
Евразийский Союз Ученых (ЕСУ) # 10 (19), 2015 | ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
165
Выводы:
1. Течение парвовирусного энтерита собак в г. Луганске характеризуется поражением органов желудочно-кишечного тракта и протекает в ассоциации с другими бактериозами. В организме собак при парвовирус-ном энтерите нами выделены 14 видов условно патогенных бактерий, а именно: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus epidermidis, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris, Citrobacter freundii, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter koseri и Acinetobacter calcoaceticus. При этом количество ас-социантов условно патогенных бактерий колеблется от 2 до 3.
2. При бактериологическом исследовании патологи-
ческого материала от погибших вследствие пар-вовирусного энтерита собак выделено 68 культур Staphylococcus aureus, 35 Escherichia coli, 18 Streptococcus faecalis, 18 Morganella morganii,
15 Pseudomonas aeruginosa, 12 Staphylococcus
epidermidis, 12 Enterobacter aerogenes, 10 Proteus vulgaris, 9 Citrobacter freundii, 7 Proteus mirabilis, 7 Enterobacter cloacae, 7 Klebsiella pneumoniae, 7 Citrobacter koseri и 3 культуры Acinetobacter calcoaceticus.
3. В организме больных парвовирусным энтеритом собак формируется устойчивые бактериальные ценозы, состоящие из ассоциаций Staphylococcus aureus + Escherichia coli; Staphylococcus aureus + Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus + Enterobacter aerogenes, Staphylococcus aureus + Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus + Morganella morganii, Escherichia coli + Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae,
Escherichia coli + Citrobacter freundii, Staphylococcus aureus + Citrobacter koseri, Staphylococcus aureus + Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus + Escherichia coli + Citrobacter koseri, Staphylococcus aureus + Morganella morganii + Citrobacter koseri, Escherichia coli + Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter aerogenes + Streptococcus faecalis, Escherichia coli + Enterobacter cloacae и Escherichia coli + Citrobacter koseri.
Список литературы:
1. Апатенко В. М. Проблема паразитоценозов и задачи паразитоценологии / В. М. Апатенко // Проблемы и перспективы паразитоценологии: Материалы 5 межсъездовской конференции паразитоценологов Украины (29-30 октября 1997 г.). - Харьков-Луганск. - 1997. - С. 4-10.
2. Ардатская М.Д. Дисбактериоз кишечника: эволюция взглядов. Современные принципы диагностики и фармакологической коррекции // Consilium medicum / Приложение Гастроэнтерология. - 2006. - № 2. -
C. 4-18.
3. Дисбактериоз кишечника. Руководство по диагностике и лечению / Под ред. Е.И. Ткаченко. - СПб.: Спецлит,2007. - 238с.
4. Зубарева И.М. Паразитоценоз собак питомника УВД г. Новосибирска / Зубарева И.М. Ростова Н.А. //Ак-туал. вопр. ветеринарии. - Новосибирск, 1997. - С. 113-114.
5. Antimicrobial resistance of Escherichia coli isolates from canine urinary tract infections / Chang S.K., Lo
D. Y., Wei H.W., Kuo H.C. // J. Vet. Med. Sci. - 2015. Vol. 77(1). - P. 59-65.
