Бактериальные ферменты как потенциальные кормовые добавки в птицеводстве

Корягина Анастасия Олеговна; Бульмакова Дарья Сергеевна; Сулейманова Алия Дамировна; Рудакова Наталья Леонидовна; Марданова Айслу Миркасымовна; Смоленцев Сергей Юрьевич; Шарипова Маргарита Рашидовна

2019, Т. 161, кн. 3 С. 459-471

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ КАЗАНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА. СЕРИЯ ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ

ISSN 2542-064X (Print) ISSN 2500-218X (Online)

УДК 636.52/.58:591.1 doi: 10.26907/2542-064X.2019.3.459-471

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ФЕРМЕНТЫ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ КОРМОВЫЕ ДОБАВКИ В ПТИЦЕВОДСТВЕ

А.О. Корягина1, Д.С. Бульмакова1, А.Д. Сулейманова1, Н.Л. Рудакова1, А.М. Марданова1, С.Ю. Смоленцев2, М.Р. Шарипова1

1 Казанский (Приволжский) федеральный университет, г. Казань, 420008, Россия 2Марийский государственный университет, г. Йошкар-Ола, 424000, Россия

Аннотация

Проведен анализ потенциала микробных ферментов гистидиновой кислой фитазы Pantoea sp. 3.5.1 и субтилизиноподобной протеиназы B. pumilus для использования в качестве кормовых добавок. При исследовании активности протеиназы B. pumilus при значениях pH, соответствующих различным отделам пищеварительного тракта кур, фермент оставался в активном состоянии. В присутствии желчи в концентрациях 0.010.25% и 0.01-5% фитаза и протеиназа сохраняли более 50% активности. Фитаза Pantoea sp. 3.5.1 эффективно гидролизовала фитат, находящийся в составе кормов для кур. Исследования влияния микробных ферментов на продуктивность, переваривае-мость и усвояемость питательных веществ цыплятами-бройлерами показали увеличение абсолютного прироста птицы, а также повышение усвоения кальция, фосфора и азота. Полученные данные позволяют сделать заключение о перспективах применения фитазы Pantoea sp. 3.5.1 и субтилизиноподобной протеиназы B. pumilus в качестве добавок в птицеводстве.

Ключевые слова: фитаза, фитат, протеиназа, кормовые добавки, микроорганизмы

Введение

Антимикробные препараты широко используются для профилактики заболеваний домашней птицы и улучшения производственных показателей сельскохозяйственных животных [1]. Однако глобальные тенденции в производстве птицы направлены на снижение использования антибиотиков из-за их накопления в молоке, яйцах и мясе птиц. Регулярное потребление таких продуктов приводит к появлению устойчивых форм микроорганизмов. Использование бактериальных ферментов в качестве альтернативы антимикробным препаратам привлекает все больше внимания. Ферменты играют важную роль в процессе переваривания корма и определяют такой важный показатель рациона, как усвояемость питательных пищевых веществ и, как следствие, способствуют снижению стоимости рациона. Наиболее распространенным ферментом в качестве кормовой добавки является фитаза, используемая для увеличения гидролиза фитата, входящего в состав зерновых кормов, и, таким образом, для высвобождения фосфора, что уменьшает необходимость добавления в рацион дорогостоящих неорганических источников фосфора [2]. Добавление фитазы в рацион для бройлеров

повышает выход мяса, уменьшает конверсию корма и улучшает прирост массы тела из-за восстановления баланса между минералами, уменьшения эндогенных потерь, вызванных фитатом [3].

Второй распространенной группой ферментов, применяющихся в качестве пищевых добавок, являются протеазы. Протеазы катализируют гидролиз белков. Считается, что экзогенные протеазы не только дополняют пищеварительные ферменты животных, такие как пепсин и трипсин, но и уничтожают антипитательные вещества, такие как лектины и ингибиторы трипсина [4]. Многочисленные исследования показали, что добавка протеаз в корма сельскохозяйственной птицы имеет различные эффекты, включая улучшение показателей роста и усвояемости аминокислот [5, 6]. Кроме того, экзогенные протеазы служат профилактическим средством, обеспечивая снижение уровня непереваренного белка, который является фактором колонизации кишечника патогенными бактериями [7, 8]. Мы оценивали эффект добавления бактериальных протеазы и фитазы в корма цыплят-бройлеров на показатели роста и усвояемость питательных веществ.

Целью настоящего исследования - оценить в опытах in vitro и in vivo потенциальную возможность использования ферментов (субтилизиноподобной протеиназы B. pumilus и фитазы Pantoea sp. 3.5.1) в качестве кормовых добавок цыплятам-бройлерам.

1. Материалы и методы исследования

1.1. Препараты микробных ферментов. Для работы использовали препараты бактериальной фитазы Pantoea sp. 3.5.1 (AgpP), продуцируемой рекомби-нантным штаммом дрожжей Pichia pastoris pPINK-HC/AgpP [9], и субтилизиноподобной протеиназы B. pumilus (AprBp), синтезируемой рекомбинантным штаммом B. subtilis pCS9 [10].

1.2. Определение ферментативной активности фитазы и протеиназы.

Активность фитазы определяли по количеству высвободившегося фосфора при гидролизе субстрата фитата натрия (Sigma Aldrich, США) по методу Грейнера [11]. За единицу активности фитазы принимали количество фермента, которое необходимо для расщепления фитата натрия с образованием 1 мкМ неорганического фосфата за 1 мин.

Активность протеазы определяли по гидролизу азоказеина (Sigma, США) по методу, описанному в работе [12]. За единицу активности принимали количество фермента, гидролизующего в условиях эксперимента 1 мкг субстрата за 1 мин.

1.3. Изучение стабильности протеиназы в средах, показатели которых приближены к условиям в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) кур. В экспериментах использовали буферные системы со значениями pH, соответствующими различным отделам ЖКТ кур: зоб - 0.1 М ацетат натрия (pH 5.5), желудок - 0.1 М глицин-HCl (рН 3.0), тонкий кишечник - 0.1 M трис-ацетат (pH 6.5), толстый кишечник - 0.1 M трис-HCl (pH 8.0). Раствор фермента переносили последовательно из одного буфера в другой путем разведения и инкубировали при 40 °С

по следующей схеме: рН 5.5 - 50 мин, рН 2.9 - 90 мин, рН 6.5 - 30 мин, рН 8 -70 мин. Каждые 10 мин проводили отбор проб и измеряли активность ферментов по стандартной методике.

1.4. Влияние желчи на стабильность фитазы и протеиназы. В настоящей работе была использована желчь, полученная от цыплят-бройлеров кросса Cobb-500 10-дневного возраста. Раствор фермента с содержанием желчи 0.015% инкубировали при 40 °С в течение 1 ч. Каждые 15 мин проводили отбор проб и измеряли активность ферментов по стандартной методике. Параллельно проводили контрольный эксперимент, в котором раствор фермента инкубировали при 40 °С в течение 1 ч в отсутствие желчи.

1.5.Оценка способности фитазы к увеличению питательной ценности кормов птиц. Метод основан на определении количества неорганического фосфора, образующегося в результате обработки кормов фитазой [13]. Для работы использовали комбикорма для бройлеров «Старт ПК-5.0» (37% кукуруза; 30% соевый шрот; 20% пшеница; 6% рапсовый жмых и масло; 4% добавки треонина, фосфатов, жиров, пищевой соды, лизина, мела; 2% кукурузный глю-тен) и «Рост ПК-5.1-3» (46% пшеница; 23% кукуруза; 15% соевый шрот; 6% подсолнечный жмых; 5% подсолнечное масло; 5% рыбная мука; 5% поваренная соль и известковая мука). Навески кормов обрабатывали раствором фермента в концентрации 1000 ед./кг корма и инкубировали в течение 3 ч при 37 °С. Корма измельчали в ступке, добавляли 0.1 М ацетат натрия (рН 4.5), после чего смесь центрифугировали в течение 10 мин при 10000 об ./мин. Активность фитазы в полученном супернатанте оценивали по количеству высвободившегося неорганического фосфора, который измеряли колориметрически.

1.6. Влияние микробных ферментов на продуктивность и усвояемость питательных веществ цыплятами. Эксперименты проводили на цыплятах-бройлерах породы Хабборд в условиях вивария фермерского хозяйства КФК Алимчуевой З.И. (Россия, Республика Марий Эл, Медведевский р-н, д. Среднее Азяково). Кормление птицы осуществляли сухими комбикормами с параметрами питательной ценности, соответствующими рекомендуемым нормам кормления. Были сформированы экспериментальные группы, в каждую из которых входило по 15 цыплят-бройлеров. Первая группа - контрольная, вторая группа дополнительно к рациону получала протеиназу из расчета 10 ед./кг корма, третья группа - фитазу в концентрации 1000 ед./кг корма. До пятидневного возраста цыплята всех групп получали основной рацион, с шестидневного -опытные кормосмеси. Продолжительность эксперимента - 5 недель. Для изучения динамики роста птиц проводили еженедельное взвешивание. Для исследования влияния изучаемой кормовой добавки на усвояемость питательных веществ проводили балансовый опыт. В экспериментах учитывали количество и химический состав потребленного корма и выделенного помета.

1.7. Статистическая обработка данных. Математическую обработку результатов проводили в программе GraphPad Prism, GraphPad Software (LA Jolla,

CA, США) с использованием двухстороннего дисперсионного анализа Two-way ANOVA и критерия Тьюки для множественного парного сравнения количественных показателей разных групп. Статистический анализ полученных результатов проводили, руководствуясь рекомендациями [14].

2. Результаты и их обсуждение

На протяжении последних десятилетий микробные ферменты активно применяются в различных сферах деятельности человека. Фитазы нашли широкое применение в сельском хозяйстве, где используются в качестве пищевых добавок в кормах многих сельскохозяйственных животных [15]. Применение фитаз позволяет улучшать усвояемость фитатного фосфора и снижать загрязнение окружающей среды пометом с неусвоенными птицей питательными элементами [16]. Фитаза AgpP Pantoea sp. 3.5.1 принадлежит к семейству гисти-диновых кислых фитаз, успешно использующихся в качестве кормовых добавок [17]. Низкие значения pH, при которых поддерживается активность и стабильность фермента [18], позволяют ему работать в кислой среде желудка животных, что перспективно для использования фитазы Pantoea sp. 3.5.1 в качестве добавки в корма животных.

Другой группой ферментов, применяющихся в качестве пищевых добавок, являются протеиназы. Субтилизиноподобная протеиназа B. pumilus - фермент с широкой субстратной специфичностью, расщепляющий связи, образованные гидрофобными аминокислотами. Поскольку фитаты образуют комплексы с белками, становится все более актуальной проблема расщепления белкового компонента кормов, включая белки и пептиды, образующие комплексы с фитатом.

На сегодняшний день не существует «идеального» биопрепарата, способного удовлетворить все практические нужды. Поэтому ведется активный поиск новых эффективных ферментов для расширения арсенала уже используемых на рынке коммерческих препаратов. В связи с этим представляло интерес оценить полученные нами микробные ферменты (фитазу и протеиназу) в качестве потенциальных кормовых добавок.

2.1. Стабильность протеиназы в условиях ЖКТ кур. Важной характеристикой ферментов с точки зрения их практического применения в качестве кормовых добавок в птицеводстве является способность сохранять свою стабильность в условиях практического применения. По мере того, как ферменты продвигаются по ЖКТ птицы, на них влияют повышенная внутренняя температура тела и кислотность, значения которой в разных отделах ЖКТ отличаются. Мы исследовали активность протеиназы при различных значениях рН среды по аналогии с ЖКТ. В слабокислой среде при рН 5.5 (зоб) протеиназа полностью сохраняла активность. При переходе в кислую среду при рН 2.9 (желудок) активность фермента снижалась на 40%, а при переходе в щелочные условия в диапазоне рН 6.5-8 (тонкий кишечник и толстый кишечник) активность фермента возрастала относительно контроля на 10-13% (рис. 1). Полученные данные показали, что протеиназа будет активна на всем протяжении ЖКТ цыплят-бройлеров. Таким образом, при значениях рН, аналогичных значениям рН ЖКТ птицы, протеиназа полностью сохраняла стабильность.

10 40

Зоб (pH 5.5)

70 100 130

Желудок (pH 2.9)

160 190 220

Кишечник (pH 6.5-8.0)

Время, мин

Рис. 1. Исследование стабильности протеиназы в ЖКТ цыплят-бройлеров

а)

б)

Рис. 2. Влияние желчи на стабильность фитазы AgpP (а) и протеазы АргВр (б)

2.2. Влияние желчи на стабильность фитазы и протеиназы. Исследовали влияние желчи на стабильность микробных ферментов. При концентрациях желчи в ферментном растворе от 0.01% до 0.25% в течение 1 ч фитаза сохраняла более 50% своей активности (р < 0.05). При увеличении концентрации желчи до 0.5-1% и 5% остаточная активность фермента составила около 40% и 35% (р < 0.05) соответственно (рис. 2, а). Уменьшение активности фермента при более

Рис. 3. Высвобождение фосфора при гидролизе фитазой кормов птиц

высоких концентрациях желчи, по-видимому, связано с влиянием щелочной реакции желчи, в то время как фитаза AgpP относится к семейству гистидиновых кислых фитаз, проявляющих активность при низких значениях рН [19]. При концентрациях желчи от 0.01% до 0.05% в течение 1 ч активность протеиназы оставалась на уровне контроля. При увеличении концентрации до 1% наблюдали снижение активности фермента на 10%. При концентрации желчи 5% остаточная активность фермента составила 60% (рис. 2, б). Полученные данные указывают, что микробные ферменты в условиях ЖКТ кур будут сохранять каталитическую активность.

2.3. Оценка способности ферментов к увеличению питательной ценности кормов птиц. Исследовали способность фитазы AgpP гидролизовать фитат в составе кормов. Используемые в работе корма «Старт ПК-5.0» и «Рост ПК-5.1-3» применяют для кормления кур разного возраста. Корм «Старт ПК-5.0» является полноценным рационом для птиц с первых дней жизни. Его используют для кормления цыплят-бройлеров в возрасте от 0 до 7 сут. Кормом «Рост ПК-5.1-3» кормят кур в возрасте от 7 до 28 сут. Установили, что фитаза способна высвобождать фосфор из компонентов корма «Рост ПК-5.1-3» в среднем на 57% больше, чем из компонентов корма «Старт ПК-5.1-3» (рис. 3). Поэтому фитаза AgpP будет более эффективна в диетах растущих куриц, чем цыплят.

2.4. Влияние фитазы и протеиназы на продуктивность и усвояемость питательных веществ цыплятами. Исследовали влияние микробных ферментов на продуктивность, перевариваемость и усвояемость питательных веществ цыплятами-бройлерами породы Хабборд. Для экспериментов были сформированы три экспериментальные группы цыплят: контрольная группа получала только комбикорм, 1-я и 2-я опытные группы - комбикорм с добавлением протеиназы и фитазы в концентрации 10 и 1000 ед./кг корма соответственно.

Живая биомасса и среднесуточный прирост являются важным зоотехническим показателем производственной деятельности любой отрасли животноводства и птицеводства. Для изучения динамики роста птиц в течение всего учетного периода проводили еженедельное взвешивание. Полученные изменения живой массы бройлеров показали увеличение абсолютного прироста биомассы в экспериментальных группах по сравнению с контролем: для 1 -й опытной группы она составила 1528.7 ± 42 г, для 2-й опытной - 1469.4 ± 33.5 г, а для контрольной -1465.9 ± 37.4 г; сохранность птицы во всех группах составила 100% (табл. 1).

Табл. 1

Изменение живой массы и сохранности цыплят-бройлеров за период опыта (среднее ±

¿0.05^, п = 30)

Показатели Экспериментальные группы

Контрольная 1 2

1 сут (живая масса цыплят в г) 22.1 ± 0.21 22.0±0.18 22.5±0.20

8 сут (живая масса цыплят в г) 306.8 ± 0.36 295.8±0.31 297.6±0.35

15 сут (живая масса цыплят в г) 373.6 ± 1.02 382.9±0.98 370.8±1.14

22 сут (живая масса цыплят в г) 591.1 ± 2.20 580.5±2.14 572.3±1.80

28 сут (живая масса цыплят в г) 926.0 ± 4.55 985.1±3.61 978.5±3.44

35 сут (живая масса цыплят в г) 1488.3 ± 8.67 1550.7±6.52 1491.9±7.98

Абсолютный прирост, г 1465.9 ± 37.4 1528.7±42.0 1469.4±33.5

Сохранность поголовья, % 100 100 100

Примечание: р < 0.05.

За первые семь дней учетного периода самый высокий среднесуточный прирост живой массы бройлеров наблюдался в контрольной группе и составил 11.25 г, что выше, чем в 1-й и 2-й опытных группах, на 1.3% и 1.4% соответственно. Однако в последующий возрастной период (8-14 дней) наибольший среднесуточный прирост живой массы имели бройлеры 1 -й опытной группы, что превосходило значения данного показателя контрольной и 2-й опытной групп на 3.5% и 2.8% соответственно. Аналогичная закономерность наблюдается при выращивании бройлеров с 15-го по 21-й день. К 35-му дню 1-я опытная группа имела среднесуточный прирост живой массы 71.7 г, что превышает значения в контрольной и 2-й опытной группах на 2.21 и 1.52 г соответственно (табл. 1).

Влияние изучаемой кормовой добавки на усвоение кальция, фосфора и азота исследовали с помощью балансового опыта, в ходе которого учитывалось количество каждого элемента в среднесуточной дозе корма и в помете. Переваримость поступающих в организм питательных веществ во многом зависит от ферментативной активности желёз внутренней секреции, секреторной функции отделов ЖКТ и отдельных органов. Повышение переваримости органического вещества рациона цыплят-бройлеров опытных групп произошло в основном за счт переваримости жира и протеина. Самая высокая переваримость протеина наблюдалась в 1-й опытной группе и составила 81.1 ± 0.5%, затем во 2-й -76.8 ± 0.4%, что выше по сравнению с контрольной группой на 7.1 и 2.8% соответственно. Переваримость клетчатки находилась в пределах от 10.3 ± 0.4% у бройлеров контрольной группы до 13.0 ± 0.3% во 2-й группе. Переваримость жира составила в контрольной группе 58.5 ± 0.9%, в 1-й группе - 60.1 ± 1.1% и во 2-й группе - 59.8 ± 0.7% (табл. 2).

В ходе балансового опыта кроме переваримости органических веществ определены баланс и коэффициенты усвоения азота, кальция и фосфора (табл. 3). Азотистые вещества корма, попадая в ЖКТ животного, подвергаются гидролизу до свободных аминокислот, которые используются для роста и развития растущего организма, восстановления изношенных тканей, роста и развития плода. Поэтому об эффективности использования протеина корма в различные возрастные периоды у сельскохозяйственных животных и птицы можно судить по балансу азота корма. Баланс азота показал, что в 1-й группе отмечался наибольший

Табл. 2

Коэффициенты переваримости питательных веществ комбикорма, %

Показатели переваримости Экспериментальные группы

Контрольная 1-я 2-я

Протеин 74 ± 0.6 81.1 ± 0.5 76.8 ± 0.4

Сухое вещество 72.6 ± 0.9 75.5 ± 1.1 74.9 ± 0.6

Клетчатк 10.3 ± 0.4 12.4 ± 0.2 13.0 ± 0.3

Жир 58.5 ± 0.9 60.1 ± 1.1 59.8 ± 0.7

Примечание: р < 0.05.

Табл. 3

Баланс кальция, фосфора и азота при введении в рацион ферментных препаратов

Показатели Экспериментальные группы

Контрольная 1-я 2-я

Кальций

Принято с кормом, г 1.20 ± 0.01 1.21 ± 0.008 1.20 ± 0.006

Выделено с пометом, г 0.52 ± 0.007 0.49 ± 0.004 0.49 ± 0.003

Переварено, г 0.68 ± 0.005 0.72 ± 0.01 0.71 ± 0.008

Коэффициент переваримости, % 56.6 59.5 59.1

Фосфор

Принято с кормом, г 0.75 ± 0.003 0.71 ± 0.004 0.74 ± 0.003

Выделено с пометом, г 0.53 ± 0.002 0.53 ± 0.005 0.44 ± 0.002

Переварено, г 0.22 ± 0.006 0.18 ± 0.007 0.30 ± 0.004

Коэффициент переваримости, % 29.3 25.3 40.5

Азот

Принято с кормом, г 3.17 ± 0.04 3.10 ± 0.02 3.12 ± 0.03

Выделено с пометом, г 1.48 ± 0.005 1.35 ± 0.008 1.44 ± 0.005

Переварено, г 1.69 ± 0.008 1.75 ± 0.01 1.68 ± 0.006

Коэффициент переваримости, % 53.3 56.4 53.8

Примечание: р < 0.05.

коэффициент переваримости, который составил 56.4%, что больше на 3.1% и 2.6% по сравнению с показателем контрольной и 2-й группы соответственно. По-видимому, это связано с тем, что во 2-й группе применялась протеаза, которая повысила усвоение белка и соответственно баланс азота. Наибольший коэффициент переваримости кальция отмечался в 1-й группе, где составил 59.5%, а наименьший (56.6%) - в контрольной группе. Применение фитазы во 2-й группе оказало существенное влияние на усвоение фосфора - коэффициент переваримости составил 40.5% (0.30 г). В контрольной группе данный показатель составил 29.3% (0.22 г). Во 2-й группе количество переваренного фосфора было на 18.1% меньше, чем в контрольной.

Заключение

Результаты настоящего исследования показали, что введение в рацион ферментных препаратов фитазы AgpP РаШова 8р. 3.5.1 и протеиназы АргВр В. ришйш улучшает переваримость и усвоение питательных веществ корма. Опытным путем установлено, что принятый с кормом белок достаточно рационально использовался организмом птицы, о чем свидетельствуют высокие ко-

эффициенты переваримости в опытных группах относительно контрольной. Увеличение переваримости и использования питательных веществ корма связано с замедлением скорости прохождения пищевых масс по кишечнику и более длительной обработкой их пищеварительными ферментами, что свидетельствует об улучшении жирового обмена в организме. Таким образом, in vitro и in vivo было показано, что фитаза AgpP Pantoea sp. 3.5.1 и субтилизиноподоб-ная протеиназа AprBp B. pumilus обладают потенциалом для применения в качестве кормовых добавок в птицеводстве.

Благодарности. Работа выполнена за счет средств субсидии, выделенной в рамках государственной поддержки Казанского (Приволжского) федерального университета в целях повышения его конкурентоспособности среди ведущих мировых научно-образовательных центров, и при финансовой поддержке РНФ (проект № 16-16-04062).

Литература

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

1. Hume M.E. Historic perspective: Prebiotics, probiotics, and other alternatives to antibiotics // Poult. Sci. - 2011. - V. 90, No 11. - P. 2663-2669. - doi: 10.3382/ps.2010-01030.

2. dos Santos T.T., O'NeillM., Gonzalez-Ortiz G., Camacho-Fernandez D., Lopez-Coello C. Xylanase, protease and superdosing phytase interactions in broiler performance, carcass yield and digesta transit time // Anim. Nutr. - 2017. - V. 3, No 2. - P. 121-126. - doi: 10.1016/j.aninu.2017.02.001.

3. Cowieson A.J., Wilcocock P., Bedford M.R. Super-dosing effects of phytase in poultry and other monogastrics // World's Poult. Sci. - 2011. - V. 67, No 2. - P. 225-235. - doi: 10.1017/S0043933911000250.

4. Ghazi S., Rooke J.A., Galbraith H., Bedford M.R. The potential for the improvement of the nutritive value of soya-bean meal by different proteases in broiler chicks and broiler cockerels // Br. Poult. Sci. - 2002. - V. 43, No 1. - P. 70-77. - doi: 10.1080/00071660120109935.

5. Dozier W.A., Corzo A., KiddM.T., Tillman P.B., McMurtry J.P., Branton S.L. Digestible lysine requirements of male broilers from 28 to 42 days of age // Poult. Sci. - 2010. -V. 89, No 10. - P. 2173-2182. - doi: 10.3382/ps.2010-00710.

6. Angel C.R., Saylor W., Viera S.L., Ward N. Effects of a mono component protease on performance and protein utilization in seven- to twenty-two-day-old broiler chickens // Poult. Sci. - 2011. - V. 90, No 10. - P. 2281-2286. - doi: 10.3382/ps.2011-01482.

7. Timbermont L., Lanckriet A., Dewulf J., Nollet N., Schwarzer K., Haesebrouck F., Ducatelle R., Van Immerseel F. Control of Clostridium perfringens-induced necrotic enteritis in broilers by target-released butyric acid, fatty acids and essential oils // Avian Pathol. - 2010. - V. 39, No 2. - P. 117-121. - doi: 10.1080/03079451003610586.

8. Yan W., Sun C., Yuan J., Yang N. Gut metagenomic analysis reveals prominent roles of Lactobacillus and cecal microbiota in chicken feed efficiency // Sci. Rep. - 2017. - V. 7. -Art. 45308, P. 1-11. - doi: 10.1038/srep45308.

9. Troshagina D.S., Suleimanova A.D., Itkina D.L., Sharipova M.R. Cloning of phytase genes from Pantoea sp. 3.5.1 and Bacillusginsengihumi M2.11 in Pichiapastoris // BioNanoSci-ence. - 2018. - V. 8. - P. 1045-1053. - doi: 10.1007/s12668-018-0563-y.

10. Koryagina A., Rudakova N., Toymentseva A., Sharipova M. Selection of the optimal strain-producer of subtilisin-like proteinase of Bacillus pumilus // FEBS Open Bio. -2017. - V. 8, Suppl. 1. - P. 192-193. - doi: 10.1002/2211-5463.12453.

11. Greiner R. Degradation of myo-inositol hexakisphosphate by a phytate-degrading enzyme from Pantoea agglomerans // Protein J. - 2004. - V. 23, No 8. - P. 577-585. - doi: 10.1007/s10930-004-7884-0.

12. Demidyuk I.V., Romanova D.V., Nosovskaya I.V., Demidyuk E.A., Chestukhina G.G., Kuranova I.P., Kostrov S.V. Modification of substrate-binding site of glutamyl endopep-tidase from Bacillus intermedius // Prot. Eng. Des. Sel. - 2004. - V. 17, No 5. - P. 411416. - doi: 10.1093/protein/gzh050.

13. Синицына O.A., Федорова Е.А., Гусаков А.В., Упоров И.В., Соколова Л.М., Бубнова Т.М., Окунев О.Н., Чулкин А.М., Винецкий Ю.П., Синицын А.П. Выделение и свойства внеклеточной фитазы A Penicillium canescens // Биохимия. - 2006. - Т. 71, Вып. 9. - С. 1260-1268.

14. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.

15. Abd-Alhadi R., Sumainah G., AlBalaa B. Production of extracellular phytase from Bacillus subtilis isolated from Syrian soil // Int. J. Pharm. Tech. Res. - 2015. - V. 8, No 1 -P. 154-159.

16. Wang W., Wang Z., Yang H., Cao Y., Zhu X., Zhao Y. Effects of phytase supplementation on growth performance, slaughter performance, growth of internal organs and small intestine, and serum biochemical parameters of broilers // Open J. Anim. Sci. - 2011. - V. 3, No 3. - P. 236-241. - doi:10.4236/ojas.2013.33035.

17. Lee J., Choi Y., Lee P., Kang S. Bok J., Cho J. Recombinant production of Penicillium oxalicum PJ3 phytase in Pichia pastoris // World J. Microbiol. Biotechnol. - 2007. - V. 23, No 3. - P. 443-446. - doi: 10.1007/s11274-006-9236-z.

18. Suleimanova A.D., Beinhauer A., Valeeva L.R., Chastukhina I.B., Balaban N.P., Shaki-rovE.V., GreinerR., SharipovaM.R. Novel glucose-1phosphatase with high phytase activity and unusual metal ion activation from soil bacterium Pantoea sp. strain 3.5.1 // Appl. Environ. Microbiol. - 2015. - V. 81, No 19. - P. 6790-6799. - doi: 10.1128/AEM.01384-15.

19. Yao M.-Z., Zhang Y.-H., Lu W.-L., Hu M.-Q. W., Wang A.-H. Phytases: Crystal structures, protein engineering and potential biotechnological applications // J. Appl. Microbiol. -2011. - V. 112, No 1. - P. 1-14. - doi: 10.1111/j.1365-2672.2011.05181.x.

Поступила в редакцию 28.01.19

Корягина Анастасия Олеговна, младший научный сотрудник НИЛ «Микробные биотехнологии»