CC BY
82
Раздел
02.00.10 Биоорганическая химия
УДК 579.66
DOI: 10.17122/bcj-2019-1-105-111
С. А. Колобова (асп.), Д. З. Назмутдинов (студ.), Н. И. Петухова (к. биол. н., доц.), Л. Х. Халимова (к. т. н., доц.)
БАКТЕРИАЛЬНАЯ ЦЕЛЛЮЛОЗА - ПЕРСПЕКТИВНЫЙ НОСИТЕЛЬ ДЛЯ ИММОБИЛИЗАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ - ДЕСТРУКТОРОВ ФЕНОЛА
Уфимский государственный нефтяной технический университет, кафедра биохимии и технологии микробиологических производств 450062, г. Уфа, ул. Космонавтов, 1; тел. (347) 2431935, е mail: Ь1оса1МР@уапс1ех.ги
S. A. Kolobova, D. Z. Nazmutdinov, N. I. Petukhova, L. Kh. Khalimova
BACTERIAL CELLULOSE - PROMISING CARRIER FOR IMMOBILIZATION OF PHENOL-DESTRUCTING
MICROORGANISMS
Ufa State Petroleum Technological University I, Kosmonavtov Str, 450062 Ufa, Russia; ph. (347) 2431935, e mail: biocatNP@yandex.ru
Показано, что бактериальная целлюлоза является перспективным материалом для иммобилизации микроорганизмов — деструкторов фенола. В присутствии иммобилизованных на бакте-риальной целлюлозе клеток дрожжей ПеЪатуотусез Напзепы Д-43-1 происходит практически полная деградация фенола при начальной концентрации субстрата 1300 мг/л. В тоже время при использовании свободных клеток в аналогичных условиях степень деградации ксенобиотика составляет не более 27%. Обнаружено, что биокатализаторы, полученные на основе бактериальной целлюлозы и дрожжей ПеЪатуотусез Напзепп Д-43-1, можно использовать повторно, в том числе при более высокой концентрации фенола (1500 мг/л).
Ключевые слова: бактериальная целлюлоза; биодеградация; иммобилизация; фенол; ПеЪатуотусез Натепп.
Работа выполнена при финансовой поддержке Минобрнауки России в рамках базовой части государственного задания в сфере научной деятельности (№ 4.6451.2017/8.9 ).
Фенол является одним из наиболее часто встречающихся техногенных загрязнителей окружающей среды. Сточные воды, содержащие фенол, образуются во многих промышленных процессах, в том числе при производстве нефтепродуктов, бумаги, пластиков, ле-
It is shown that bacterial cellulose is a promising material for immobilization of phenol-destructing microorganisms. In presence of immobilized cells of yeasts Debaryomyces hansenii ^-43-1 on bacterial cellulose phenol is degraded almost completely from initial concentration of 1300 mg/L. In compare free cells decrease xenobiotic concentration only on 27% under the same conditions. It is established that biocatalysts based on bacterial cellulose and yeasts Debaryomyces hansenii ^-43-1 could be used repeatedly and work with even higher concentration of phenol (1500 mg/L).
Key words: bacterial cellulose; biodegradation; immobilization; phenol; Debaryomyces hansenii.
The work was carried out with the financial support of the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation within the framework of the basic part of the state assignment to the sphere of science (No. 4.6451.2017/8.9).
карственных соединений, красителей, пестицидов, резины, лаков, кокса, стали, взрывчатых веществ 1-3. Концентрация фенола в стоках может варьировать от 10 до 300 мг/л, но в ряде случаев, в сильно загрязненных сточных водах, она может превышать 4.5 г/л 3.
Дата поступления 28.01.19
Для очистки стоков от фенола широко используются биологические методы с применением микроорганизмов 1 3-5. Известны многие микроорганизмы (бактерии, дрожжи, мицели-альные грибы), способные расти в жидких средах с фенолом и полностью деградировать это соединение в лабораторных условиях 3' 4. Однако скорость деградации фенола суспензионными культурами в реальных условиях, как правило, не высока, поскольку в присутствии фенола и сопутствующих токсичных соединений клетки плохо размножаются, что может привести даже к их вымыванию из проточного реактора 3' 4.
Перспективным подходом к достижению высокой концентрации биомассы в реакторе и увеличению эффективности очистки стоков от фенола является иммобилизация микроорганизмов на твердых частицах или мембранах. Показано, что биокатализаторы, полученные иммобилизацией микроорганизмов-деструкторов на различных носителях (альгинате кальция, полиак-риламиде, хитозане, диатомовой земле, активированном угле, поливиниловом спирте, полиэти-леноксиде, оксиде титана и др.) значительно быстрее деградируют фенол по сравнению со свободными клетками и могут работать при более высоких концентрациях ксенобиотика 5-11.
В последние годы в качестве перспективного носителя для иммобилизации микроорганизмов рассматривается бактериальная целлюлоза — внеклеточный полимер глюкозы с /И,4-гликозидной связью, синтезируемый уксуснокислыми бактериями, который благодаря своим свойствам (механической прочности, пористости, влагоудерживающей способности, пластичности, отсутствию токсичности) уже нашел широкое применение в электротехнике, медицине, сельском хозяйстве, биотехнологии, фармацевтической, текстильной, бумажной и пищевой промышленности 12-16.
На примере процесса биологической денит
рификации показана перспективность примене
ния этого полимера для создания биокатализато
17
ров, использующихся в очистке сточных вод
Целью настоящей работы являлось иссле дование возможности использования бактери альной целлюлозы как носителя для иммоби лизации микроорганизмов-деструкторов в про цессах деградации фенола.
В качестве деструктора фенола использовали новый галотолерантный штамм дрожжей Debaryomyces hansenii Д-43-1, который способен расти при концентрации ксенобиотика 500—1000 мг/л, окисляя его до пирокатехина, предположительно, метаболизирующегося в дальнейшем по пути оршо-расщепления ароматического кольца 18. При более высокой концентрации фенола (1300 мг/мл) микроорга-
18
низм в суспензионной культуре не растет .
Для синтеза бактериальной целлюлозы использовали уксуснокислые бактерии Komagataeibacter sp. НЦ-12 19.
Исследовали два способа иммобилизации дрожжей на бактериальной целлюлозе. В первом способе (in situ) осуществляли включение дрожжей в полимер в процессе его биосинтеза уксуснокислыми бактериями, тогда как во втором способе (ex situ) для иммобилизации дрожжевых клеток использовали уже готовую пленку целлюлозы.
В экспериментах in situ осуществляли совместное культивирование уксуснокислых бактерий и дрожжей в течение 14 сут при 30 °С на среде, благоприятной для синтеза целлюлозы (среде Хестрина-Шрамма, содержащей 1% этанола) 19' 20. Однако было обнаружено, что в присутствии дрожжей целлюлозная пленка не образуется (рис. 1а). Это делает невозможным иммобилизацию дрожжей в процессе биосинтеза целлюлозы.
Рис. 1. Синтез бактериальной целлюлозы уксуснокислыми бактериями в присутствии (А) и в отсутствие (Б) дрожжей
В экспериментах ex situ осуществляли последовательное культивирование микроорганизмов. На первой стадии с помощью уксуснокислых бактерий на среде Хестрина-Шрам-ма, содержащей 1% этанола, синтезировали целлюлозу (рис. 1б). На второй стадии выращивали культуру Debaryomyces hansenii Д-43-1 на поверхности целлюлозных пленок, помещенных в чашки Петри и пропитанных питательной средой для культивирования дрожжей. Для пропитки пленок целлюлозы использовали две питательные среды (СР-1 и
СР-2), отличающиеся друг от друга источниками углерода (глюкозой и фенолом). Глюкозо-содержащая среда СР-1 обеспечивала более хороший рост дрожжей, нежели среда СР-2 с фенолом (рис. 2). В то же время фенол содержащая среда СР-2 позволяла получать культуру, обладающую фенолокисляющей способностью, тогда как на среде СР-1 с глюкозой вырастала не активная биомасса (рис. 3).
9
8
7
щ 6 с
<0
I 4
s ,
о 3 £ 2
1 о
-о
-о
О 20 40 60 30 100
Время, Ч
—О—среда СР-1 -О-среда СР-2
Рис. 2. Рост дрожжей на средах с различными источниками углерода. 1200
1000
с 300 5 SOO
400
200
лученных ферментативным гидролизом биокатализаторов с помощью препарата «Целло-люкс F», установило, что иммобилизация Debaryomyces hansenii Д-43-1 более эффективно протекает на глюкозосодержащей среде СР-1, обеспечивающей более хороший рост микроорганизмов. Содержание клеток в биокатализаторе БК-1 было почти в 200 раз больше, чем в биокатализаторе БК-2, приготовленном на фенолсодержащей среде СР-2 (табл. 1).
Таблица 1
Численность дрожжей, включившихся в бактериальную целлюлозу в экспериментах ex situ
Биокатализатор Среда Концентрация клеток в 1 мл гидр олизата Содержание клеток в 1 г биокатализатора (асв)
БК-1 СР-1 7.5-10° 4.3-108
БК-2 СР-2 3.8-10ь 2.1 -107
При изучении способности полученных биокатализаторов окислять фенол в концентрации 1300 мг/л в среде СР-2 в сравнении со свободными клетками ОвЬагуотусвз Натвпп Д-43-1 было установлено, что, в отличие от суспензионной культуры, оба биокатализатора практически полностью деградируют субстрат (рис. 4). В то же время свободные клетки в этих условиях деградируют субстрат только на 27%, после чего процесс деградации прекращается, вероятно, из-за гибели микроорганизмов.
Время, ч
—Л— двухсуточная культура на среде СР-2
—О—трехсуточная культура на среде СР-2
—О— четырехсуточная культура на среде СР-2
- Л - двухсуточная культура на среде СР-1
- О - трехсуточная культура на среде СР-1
- О - четырехсуточная культура на среде СР-1
Рис. 3. Трансформация фенола в 0.1 М фосфатном буфере с помощью биомассы дрожжей (300 мг/ мл), полученной на среде СР-1 с глюкозой и среде СР-2 с фенолом.
Культивирование дрожжей на целлюлозных пленках, пропитанных указанными средами, осуществляли при 30 оС в течение 3 сут.
Реализация этого способа иммобилизации позволила получить биокатализаторы БК-1 (на среде с глюкозой) и БК-2 (на среде с фенолом), содержащие дрожжевые клетки.
Определение численности дрожжей, включившихся в целлюлозные пленки, путем прямого подсчета клеток в гидролизатах, по-
1400
1200
1000
SOO
600
400
200
v\ 4%
- -С--- --CSV ---о- -----&
т
20
40
60 Время, ч
80
100
120
- свободные клет
- бнокатализатор
-би о ката л и затор БК-1
БК-2
Рис. 4. Деградация фенола в среде СР-2 в присутствии свободных и иммобилизованных в различных условиях клеток дрожжей
Наиболее быстро субстрат исчезает в присутствии биокатализатора БК-2 (рис. 4), полученного на среде СР-2 с фенолом в качестве источника углерода, несмотря на то, что в нем содержится значительно меньше клеток, чем в
БК-1 (табл. 1). В присутствии же биокатализатора БК-1, изготовленного на среде СР-1 с глюкозой, фаза активного снижения концентрации фенола в среде СР-2 наступает только после 72-х часовой задержки (рис. 4). Это может быть объяснено тем, что микроорганизмы в БК-2 уже были адаптированы к утилизации фенола в процессе их иммобилизации, тогда, как дрожжи в БК-1 должны еще пройти адаптацию, вызванную заменой одного источника углерода на другой (глюкозы на фенол). Учитывая тот факт, что в отсутствие фенола на среде СР-1 с глюкозой получается неактивная биомасса (рис. 3), можно полагать, что в период адаптации происходит индукция синтеза ферментов деградации ксенобиотика. Нельзя также исключить, что глюкоза, оставшаяся в целлюлозной пленке после стадии иммобилизации внутри биокатализатора БК-1, подавляет экспрессию генов деградации фенола. В пользу такого предположения свидетельствуют результаты эксперимента по деградации фенола с помощью этого биокатализатора, в котором в среду СР-2 наряду с 1300 мг/л субстрата добавляется 1% глюкозы. В этом случае продолжительность периода задержки активной фазы деградации фенола увеличивается почти в 2 раза и достигает 120 ч (рис. 4, 5).
1400
биотик уже через 48 ч практически отсутствовал в среде (рис. 4). Напротив, биокатализатор БК-1, прошедший адаптацию в первом цикле деградации, стал работать более эффективно во втором (рис. 4 и 6). При этом по скорости деградации фенола биокатализатор БК-1 даже превзошел биокатализатор БК-2: через 72 ч концентрация фенола в присутствии биокатализатора БК-1 снизилась практически до нулевого значения (рис. 6).
1400 1200 1000 г аоо
х 600
О) в
400
200
20
40 Время, ч
50
80
-би □ катал и затор БК-1
- би о катал и зато р БК-2
Рис. 5. Деградация фенола в среде СР-2, содержащей 1% глюкозы, в присутствии биокатализатора БК-1.
Таким образом, полученные результаты указывают на то, что для иммобилизации дрожжей более эффективной должна быть среда СР-2 с фенолом. Однако при повторном использовании биокатализаторов было обнаружено, что биокатализатор БК-2, полученный на такой среде, стал работать значительно медленнее. Во втором цикле деградации в присутствии этого биокатализатора концентрация фенола в среде за 72 ч снизилась менее, чем на 50% (рис. 6), тогда как в первом цикле ксено-
Рис. 6. Второй цикл деградации фенола в среде СР-2 в присутствии биокатализаторов БК-1 и БК-2.
Вероятно, при низком начальном содержании клеток в биокатализаторе БК-2 происходит существенное сокращение их численности из-за гибели или вымывания из целлюлозной пленки уже в первом цикле деградации. При высокой начальной концентрации клеток в БК-1 эти негативные процессы, по-видимому, могут компенсироваться более быстрым размножением микроорганизмов внутри целлюлозы, что обеспечивает возможность повторного использования биокатализатора.
Показано, что в третьем цикле деградации биокатализатор БК-1 способен эффективно работать даже при более высокой начальной концентрации фенола (1500 мг/л), снижая концентрацию субстрата до 150 мг/л за 96 ч. Следует отметить, что в этих условиях свободные клетки практически не снижают концентрацию фенола в среде (рис. 7).
Таким образом, бактериальная целлюлоза является перспективным носителем для иммобилизации дрожжей — деструкторов фенола. В присутствии иммобилизованных на бактериальной целлюлозе клеток дрожжей ОеЬатуошусез катепи Д-43-1 происходит практически полная деградация фенола при начальной концентрации субстрата 1300 мг/л. В тоже время при использовании свободных клеток в аналогичных условиях степень деградации ксенобиотика составляет не более 27%.
Биокатализаторы, полученные на основе бактериальной целлюлозы и дрожжей ОвЬатуотусвз Натвпп Д-43-1, можно использовать повторно, в том числе при более высокой концентрации фенола (1500 мг/л).
Рис. 7. Третий цикл деградации фенола в среде СР-2 в присутствии биокатализатора БК-1 (контроль — свободные клетки)
В процессе иммобилизации дрожжей на бактериальной целлюлозе предпочтительно использовать питательную среду, обеспечивающую высокую численность включенных микроорганизмов, даже если при этом их фено-локисляющая активность будет низкой. В процессе первого цикла деградации микроорганизмы адаптируются к новым условиям и будут активно работать в последующих циклах. Можно полагать, что замена глюкозы на альтернативный источник углерода позволит избежать или существенно сократить период адаптации дрожжей к фенолсодержащим стокам.
Полученные результаты могут быть использованы не только при разработке новых методов очистки сточных вод от фенола и сопутствующих соединений. Пленки бактериальной целлюлозы с иммобилизованными дрожжами ОвЬагуотусвз катвпп могут найти применение при создании БПК-биосенсоров, предназначенных для экспресс-мониторинга загрязнения окружающей среды, путем контроля биохимического потребления кислорода
(БПК), характеризующего суммарное содер-
21 22
жание в воде органических веществ .
Экспериментальная часть
Объектом исследования являлись галото-лерантные дрожжи ОвЬагуотусвз катвпп Д-43-1, выделенные из почвы, загрязненной нефтепродуктами 19. Дрожжи хранили путем периодического пересева на агаризованной среде
СР-1, содержащей глюкозу — 10 г/л, дрожжевой автолизат — 5 г/л, NaCl — 0.5 г/л, MgSO4
— 0.4 г/л, (NH4)2SO4 - 3 г/л, KH2PO4 - 1 г/ л, K2HPO4 — 0.1 г/л, агар микробиологический — 15 г/л.
В качестве продуцента целлюлозы использовали штамм уксуснокислых бактерий Komagataeibacter sp. НЦ-12 19. Бактерии поддерживали на среде Хестрина-Шрамма (глюкоза
— 2%, пептон — 0.5%, дрожжевой экстракт — 0.5%, натрий фосфорнокислый двухзамещен-ный — 0.27%, лимонная кислота — 0.15%) 20.
Для исследования возможности иммобилизации дрожжей in situ осуществляли совместное культивирование Debaryomyces hansenii Д-43-1 и Komagataeibacter sp. НЦ-12 в статических условиях при 30 оС в колбах объемом 250 мл, содержащих 100 мл среды Хестрина-Шрамма с 1% этанола, в течение 14 сут.
Для иммобилизации дрожжей ex situ на первой стадии осуществляли синтез целлюлозы с помощью Komagataeibacter sp. НЦ-12 на среде Хестрина-Шрамма, содержащей 1% этанола. По окончании синтеза полимер извлекали из культуральной жидкости, слегка отжимали, помещали в чашки Петри и стерилизовали автоклавированием. Стерильные пленки пропитывали в течение 24 ч питательной средой для культивирования дрожжей (10 мл), после чего избыток среды декантировали. Для пропитки пленок использовали среду СР-1 с глюкозой (глюкоза — 10 г/л, дрожжевой автолизат — 5 г/л, NaCl — 0.5 г/л, MgSO4 — 0.4 г/л, (NH4)2SO4
— 3 г/л, KH2PO4 — 1 г/л, K2HPO4 — 0.1 г/л) и среду СР-2 с фенолом (фенол — 500 мг/л, дрожжевой автолизат — 5 г/л, NaCl — 0.5 г/л, MgSO4 — 0.4 г/л, (NH4)2SO4 — 3 г/л, KH2PO4 — 1 г/л, K2HPO4 — 0.1 г/л). Поверхность пленок засевали 1 мл дрожжевой суспензии и выращивали культуру при 30 оС в течение 3 сут.
Численность дрожжей, выросших на бактериальной целлюлозе, оценивали путем прямого подсчета клеток, высвободившихся из пленок в процессе ферментативного гидролиза, в камере Горяева. Гидролиз целлюлозы осуществляли с помощью целлюлолитическо-го препарата Целлолюкс F (НПО «Сиббио-фарм», Россия) в 0.2 М ацетатного буфера (рН 5) при 30 оС.
Исследование деградации фенола с помощью биокатализаторов БК-1 и БК-2, а также суспензионной культуры Debaryomyces hansenii Д-43-1 осуществляли в конических колбах объемом 250 мл, содержащих 50 мл среды СР-2 (начальные концентрации ксенобиотика — 1300 и 1500 мг/л), при 30 оС и пере-
мешивании (180 об./мин) в ротационно-орби-тальном шейкере Environmental Shaker-Incubator ES 20/60. В эксперименте по изучению влияния глюкозы на продолжительность задержки фазы активной деградации фенола в присутствии биокатализатора БК-1 в среду СР-2, содержащую 1300 мг/л ксенобиотика, вносили 1% углевода.
Фенолокисляющую способность биомассы дрожжей определяли в процессе биотрансформации фенола в 0.1 М фосфатном буфере (рН 7.0), содержащем 1000 мг/л субстрата и 300 мг/мл биомассы дрожжей (по сырому весу), при 30 оС и перемешивании (180 об./ мин) на ротационно-орбитальном шейкере
Литература
1. Krastanov A., Alexieva Z., Yemendzhiev H. Microbial degradation of phenol and phenolic derivatives // Eng. Life Sci.- 2013.- V.13.-Pp.76-87.
2. Singh N., Balomajumder C. Simultaneous removal of phenol and cyanide from aqueous solution by adsorption onto surface modified activated carbon prepared from coconut shell // J. Water Process Engineering.- 2016.- V.9.-Pp. 26136-26152.
3. Al-Khalid T., El-Naas M.H. Aerobic Biodegradation of Phenols: A Comprehensive Review // Critical Reviews in Environmental Science and Technology.- 2012.- V.42.-Pp.1631-1690.
4. Van Schie P.M., Young L.Y. Biodegradation of Phenol: Mechanisms and Applications // Bioremediation Journal.- 2000.- V.4.- №1.-Pp. 1-18.
5. Abubakar A., Shukor M. Y. Phenol Removal Via Cellular Immobilization: A Review // Bioremediation science and technology reseach.-2017.- V.5, №2.- Pp.1-7.
6. Jiang Y., Deng T., Shang Y., Yang K., Wang H. Biodegradation of phenol by entrapped cell of Debaryomyces sp. with nano-Fe3O4 under hypersaline conditions // Int. Biodeter. & Biodeg.- 2017.- V.123.- Pp.37-45.
7. Satchanska G., TopalovaY., Dimkov R., Groudeva V., PetrovP., Tsvetanov C., Selenska-Pobell S., Golovinsky E. Phenol degradation by environmental bacteria entrapped in cryogels // Biotechnology & Biotechnological Equipment.-2015.- V.29, №3.- Pp.514-521.
8. Park M-R., Kim D-J., Choi J-W., LimD-S. Influence of Immobilization of Bacterial Cells and TiO2 on Phenol Degradation // Water Air Soil Pollut.- 2013.- Pp.224-1473.
9. Mohanty S.S., Jena H.M. Biodegradation of phenol by free and immobilized cells of a novel Pseudomonas sp. NBM11 // Brazilian Journal of Chemical Engineering.- 2017.- V.34, №1.- Pp. 75-84.
10. Ismail Z.Z., Khudhair H.A. Aerobic biodegradation of phenol by Immobilized Pseudomonas sp. cells in two different bio-carrier
Environmental Shaker-Incubator ES 20/60. Биомассу для трансформации получали культивированием дрожжей в чашках Петри на агаризованных средах СР-1 и СР-2. Выращенную биомассу собирали в центрифужные стаканчики и дважды промывали фосфатным буфером.
Остаточную концентрацию фенола определяли в супернатантах, полученных после центрифугирования проб при 5000 об./мин в течение 10 мин, фотометрическим методом с использованием 4-аминоантипирина 23.
Рост дрожжей в жидких культурах оценивали турбометрически на фотоэлектроколори-метре КФК-2 при длине волны 540 нм.
References
1. Krastanov A., Alexieva Z., Yemendzhiev H. [Microbial degradation of phenol and phenolic derivatives]. Eng. Life Sci., 2013, vol.13, pp.76-87.
2. Singh N., Balomajumder C. [Simultaneous removal of phenol and cyanide from aqueous solution by adsorption onto surface modified activated carbon prepared from coconut shell]. J. Water Process Engineering, 2016, vol.9, pp.26136-26152.
3. Al-Khalid T., El-Naas M.H. [Aerobic Biodegradation of Phenols: A Comprehensive Review]. Critical Reviews in Environmental Science and Technology, 2012, vol.42, pp.1631-1690.
4. Van Schie P.M., Young L.Y. [Biodegradation of Phenol: Mechanisms and Applications]. Biore-mediation Journal, 2000, vol.4, no.1, pp.1-18.
5. Abubakar A., Shukor M. Y. [Phenol Removal Via Cellular Immobilization: A Review]. Bioreme-diation science and technology research, 2017, vol.5, no.2, pp.1-7.
6. Jiang Y., Deng T., Shang Y., Yang K., Wang H. [Biodegradation of phenol by entrapped cell of Debaryomyces sp. with nano-Fe3O4 under hypersaline conditions]. Int. Biodeter. & Biodeg., 2017, vol.123, pp.37-45.
7. Satchanska G., TopalovaY., Dimkov R., Groudeva V., Petrov P., Tsvetanov C., Selenska-Pobell S., Golovinsky E. [Phenol degradation by environmental bacteria entrapped in cryogels]. Biotechnology & Biotechnological Equipment, 2015, vol.29, no.3, pp.514-521.
8. Park M-R., Kim D-J., Choi J-W., Lim D-S. [Influence of Immobilization of Bacterial Cells and TiO2 on Phenol Degradation]. Water Air Soil Pollut, 2013, pp.224-1473.
9. Mohanty S.S., Jena H.M. [Biodegradation of phenol by free and immobilized cells of a novel Pseudomonas sp. NBM11]. Brazilian Journal of Chemical Engineering, 2017, vol.34, no.1, pp.75-84.
10. Ismail Z.Z., Khudhair H.A. [Aerobic biodegradation of phenol by Immobilized Pseudomonas sp. cells in two different bio-carrier matrices]. Journal of Engineering, 2016, vol.22, no.4, pp.68-78.
11. Nardi A., Avrahami R., Zussman E., Rokem J.S., GreenblattC.L. [Phenol Biodegradation by
matrices // Journal of Engineering.— 2016.— V.22, №4.- Pp.68-78.
11. Nardi A., Avrahami R., Zussman E., Rokem J.S., GreenblattC.L. Phenol Biodegradation by Corynebacterium glutamicum Encapsulated in Electrospun Fibers // Journal of Environmental Protection.- 2012.- V.3.- Pp.164-168.
12. Chawla P.R., Bajaj I.B., Survase S.A., Singhal R.S. Microbial cellulose: fermentative production and applications // Food Technology and Biotechnology.- 2009.- V.47, №2.- Pp.107-124.
13. Lee K-Y., Buldum G., Mantalaris A., Bismarck
A. More Than Meets the Eye in Bacterial Cellulose: Biosynthesis, Bioprocessing, and Applications in Advanced Fiber Composites // Macromol. Biosci.- 2014.- V.14.- Pp.10-32.
14. Shah N., Ul-Islam M., Khattak W.A., Park J.IK Overview of bacterial cellulose composites: A multipurpose advanced Material // Carbohydrate Polymers.- 2013.- V.98.- Pp.1585-1598.
15. Mohite B.V., Patil S.V. A novel biomaterial: bacterial cellulose and its new era applications // Biotechnology and Applied Biochemistry.-2014.- V.61, №2.- Pp.101-110.
16. Keshk S.M. Bacterial Cellulose Production and its Industrial Applications // J. Bioprocess Biotech.- 2014.- V.4, №2.- doi: 10.4172/21559821.1000150.
17. Rezaee A., Godini H., Bakhtou H. Microbial cellulose as support material for the immobilization of denitrifying bacteria // Environmental Engineering and Management Journal.- 2008.- V.7, №5.- Pp.589-594.
18. Назмутдинов Д.З., Порошина H.H., Петухова Н.И. Debaryomyces hansenii Д-43-1 - новый га-лотолерантный деструктор фенола // Баш. хим. ж.- 2018.- Т.25, №2.- С.57-63.
19. Петухова Н.И., Колобова С.А., Назмутдинова P.P., Зорин В.В. Синтез целлюлозы изолятами уксуснокислых бактерий из «чайного гриба» // Баш. хим. ж.- 2016.- Т.23, №1.- С.7-13.
20. Hestrin S., Schramm M. Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum: preparation of freeze dried cells capable of polymerizing glucose to cellulose // Biochem. J.- 1954.- V.58.- Pp.345-352.
21. Понаморева О.H., Афонина Е.Л., Каманина О.А., Лаврова Д.Г., Арляпов В.А., Алферов
B. А., Боронин А.М. Дрожжи Debaryamyces hansenii в органосиликатной оболочке как основа гетерогенного биокатализатора // Биотехнология.- 2017.- Т.33, №4.- С.44-53.
22. Юдина Н.Ю., Зайцева А.С., Козлова Т.Н., Ар-ляпов В.А. БПК-биосенсор на основе дрожжей Debaryamyces hansenii и медиатора нейтральный красный // Известия Тульского государственного университета. Естественные науки.-2013.- Вып. 2.- Ч.1.- С.289-297
23. Лурье Ю.Ю. Аналитическая химия промышленных сточных вод.- М.: Химия, 1984.- 448 с.
Corynebacterium glutamicum Encapsulated in Electrospun Fibers]. Journal of Environmental Protection, 2012, vol.3, pp.164-168.
12. Chawla P.R., Bajaj I.B., Survase S.A., Singhal R.S. [Microbial cellulose: fermentative production and applications]. Food Technology and Biotechnology, 2009, vol.47, no.2, pp.107-124.
13. Lee K-Y., Buldum G., Mantalaris A., Bismarck A. [More Than Meets the Eye in Bacterial Cellulose: Biosynthesis, Bioprocessing, and Applications in Advanced Fiber Composites]. Macromol. Biosci., 2014, vol.14, pp.10-32.
14. Shah N., Ul-Islam M., Khattak W.A., Park J.IK [Overview of bacterial cellulose composites: A multipurpose advanced Material]. Carbohydrate Polymers, 2013, vol.98, pp.1585-1598.
15. Mohite B.V., Patil S.V. [A novel biomaterial: bacterial cellulose and its new era applications]. Biotechnology and Applied Biochemistry, 2014, vol.61, no.2, pp.101-110.
16. Keshk S.M. [Bacterial Cellulose Production and its Industrial Applications]. J. Bioprocess Biotech., 2014, vol.4, no.2, doi: 10.4172/21559821.1000150.
17. Rezaee A., Godini H., Bakhtou H. [Microbial cellulose as support material for the immobilization of denitrifying bacteria]. Environmental Engineering and Management Journal, 2008, vol.7, no.5, pp.589-594.
18. Nazmutdinov D.Z., Poroshina N.N., Petukhova N.I. Debaryomyces hansenii D-43-1 — novyi ga-lotolerantnyi destruktor fenola [Debaryomyces hansenii D-43-1 — new halotolerant phenol's destructor]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir Chemical Journal], 2018, vol.25, no.2, pp.57-63.
19. Petukhova N.I., Kolobova S.A., Nazmutdinova R.R., Zorin V.V. Cintez tsellyulozy izolyatami uksusnokislykh bakterii iz «chainogo griba» [Synthesis of cellulose by isolates of acetic acid bacteria from «Kombucha»]. Bashkirskii khimicheskii zhurnal [Bashkir Chemical Journal], 2016, vol. 23, no. 1, pp. 7-13.
20. Hestrin S., Schramm M. [Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum: preparation of freeze dried cells capable of polymerizing glucose to cellulose]. Biochem. J., 1954, vol.58, pp.345-352.
21. Ponamoreva O.N., Afonina E.L., Kamanina O.A., Lavrova D.G., Arlyapov V.A., Alferov V.A., Boronin A.M. Drozhzhi Debaryamyces hansenii v organosilikatnoi obolochke kak osno-va geterogennogo biokatalizatora [The yeast Debaryomyces hansenii in the silica-organic shell as the basis for the heterogeneous biocatalyst]. Biotekhnologiya, 2017, vol.33, no.4, pp.44-53.
22. Yudina N.Yu., Zaitseva A.S., Kozlova T.N., Arlyapov V.A. BPK-biosensor na osnove drozhzhej Debaryamyces hansenii i mediatora neitral'nyi krasnyi [BPC biosensor based on yeast Debaryamyces hansenii and neutral red mediator]. Izvestiya Tul' skogo gosudarst-vennogo universiteta. Estestvennye nauki, 2013, vol.2, no. 1, pp.289-297.
23. Lurye Yu.Yu., Analiticheskaya khimia promyshlenykh stochnykh vod [Analytical chemistry of industrial wastewater]. Moscow, Khimia Publ., 1984. 448 p.
