АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМА RS2569190 ГЕНА CD14 С АНКИЛОЗИРУЮЩИМ СПОНДИЛИТОМ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



ш

®

This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

RESEARCH ARTICLE | НАУЧНАЯ СТАТЬЯ

© Mordovskii V.S., Kapustina E.V., Nikulina S.Yu., Aksyutina N.V., Bolshakova T.Yu., Pelipetskaya

ЩЯ - s http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-2-60-68

ы Поступила 11.01.2021 / Принята 20.02.2021 | Received 11.01.2021 / Accepted 20.01.2021

УДК 575.174.015.3:616.711-002

ASSOCIATION OF POLYMORPHISM rs2569190 OF THE GENE CD14 WITH ANKYLOSING SPONDILITIS

Mordovskii V.S., Kapustina E.V., Nikulina S.Yu., Aksyutina N.V., Bolshakova T.Yu., Pelipetskaya E.Yu.

Krasnoyarsk State Medical University named after Professor V. F. Voino-Yasenetsky, Krasnoyarsk, Russian Federation

АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМА rs2569190 ГЕНА CD14 С АНКИЛОЗИРУЮЩИМ СПОНДИЛИТОМ

Мордовский В.С., Капустина Е.В., Никулина С.Ю., Аксютина Н.В., Большакова Т.Ю., Пелипецкая Е.Ю.

ФГБОУ ВО "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого", г. Красноярск, Российская Федерация

Abstract. Ankylosing spondylitis is a chronic rheumatological disease of unknown etiology. The search for new genetic associations will improve understanding of pathogenesis. Objective: to study the association of the rs2569190 polymorphism of the CD14 gene with ankylosing spondylitis in the European population of the Krasnoyarsk region. The study recruited 3 groups of patients: the first - with ankylosing spondylitis (AS) (n = 150), the second group - patients with the rest of seronegative spondyloarthritis (SPA) (n = 66), the third group included conditionally healthy patients (control group) (n = 226). The clinical assessment of patients with SPA was based on Russian federal clinical guidelines, including the calculation of the BASDAI, BASFI and HAQ indices. DNA isolation was performed using the standard phenol-chloroform method. Genotyping for the CD14 gene was performed by PCR (polymerase chain reaction) -RFLP (restriction fragment length polymorphism) analysis. PCR was performed with a set of primers (forward GCTGAGGTTCGGAGAAGTTGC; reverse GGTGCCAACAGATGAGGTTCAC) followed by restriction with Bme18I. PCR products were analyzed by

Аннотация. Анкилозирующий спондилит -хроническое ревматологическое заболевание, не ясной этиологии. Поиск новых генетических ассоциаций позволит улучшить понимание патогенеза. Цель исследования: изучить ассоциацию полиморфизма гу2569190 гена CD14 с анкилозирующим спондилитом в европейской популяции Красноярского края. В исследование было набрано 3 группы пациентов: первая - с анкилозирующим спондилитом (АС) (п=150), вторая группа - пациенты с остальными серонегативными спондилоартритами (СПА) (п=66), в третью группу включили условно-здоровых пациентов (группа контроля) (п=226). Клиническая оценка пациентов со спондилоартритами основывалась на российских федеральных клинических рекомендациях, включая также подсчет индексов BASDAl, BASFl и HAQ. Выделение ДНК проводили стандартным фенол-хлороформным методом. Генотипирование по гену CD14 выполнялось методом ПЦР-ПДРФ анализа (полимеразная цепная реакция — полиморфизм

electrophoresis in 4% polyacrylamide gel followed by staining with ethidium bromide. Comparative analysis of the group of patients with AS and the control group revealed a statistically significant prevalence of the TT genotype rs2569190 in the main group (34.7% versus 23.9%) (p = 0.0236; OR 1.6901; 95% CI OR 1.07282.6625). Patients with seronegative SPA did not demonstrate the significant disparities in rs2569190. In Krasnoyarsk region europids, the TT genotype of the rs2569190 polymorphism was associated with ankylosing spondylitis but not with seronegative SPA. The identification of a new association confirms the influence of other genetic factors on the predisposition to AS. It is likely that some of the genetic factors play a role in the pathogenesis under the influence of the external environment. Identification of these associations will make it possible to adjust the lifestyle of patients and their relatives to reduce the risk of exacerbation or development of AS.

Keywords: ankylosing spondylitis, seronegative spondylitis, HLA-B27, CD-14, rs2569190.

REFERENCES

[1] Sieper J., Poddubnyy D. Axial spondylarthritis. Lancet. 2017. vol. 390. no. 10089. P. 73-84. DOI: 10.1016/S0140-6736(16)31591-4

[2] Li Z., Brown M.A. Progress of genome-wide association studies of ankylosing spondylitis. Clinical & translational immunology. 2017. vol. 6. no. 12. P. e163. DOI: 10.1038/cti.2017.49

[3] Sode J., Bank S., Vogel U., Andersen P.S., S0rensen S.B., Bojesen A.B., Andersen M.R., Brandslund I., Dessau R.B., Hoffmann H.J., Glintborg B., Hetland M.L., Locht H., Heegaard N.H., Andersen V. Genetically determined high activities of the TNF-alpha, IL23/IL17, and NFkB pathways were associated with increased risk of ankylosing spondylitis. BMC Medical Genetics. 2018. vol. 19. no. 1. P. 165. DOI: 10.1186/s12881-018-0680-z

[4] Colbert R.A., Navid F., Gill T. The role of HLA-B*27 in spondylarthritis. Best Practice & Research Clinical Rheumatology. 2017. vol. 31. no. 6. P. 797815. DOI: 10.1016/j.berh.2018.07.012

[5] Lin H., Gong Y.-Z. Association of HLA-B27 with ankylosing spondylitis and clinical features of the

длин рестрикционных фрагментов). ПЦР проводилась с набором праймеров (прямой GCTGAGGTTCGGAGAAGTTGC; обратный

GGTGCCAACAGATGAGGTTCAC) с последующей рестрикцией с помощью Bme18I. Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 4% полиакриламидном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием.

Сравнительный анализ группы пациентов с АС и контрольной группы выявил статическое значимое преобладание генотипа ТТ гъ2569190 в основной группе (34,7% относительно 23,9%) (р = 0,0236; ОШ 1,6901; 95%ДИ ОШ 1,0728-2,6625). В группе других серонегативных СПА в сравнение с контрольной группой статически значимых различий не выявлено. В результате нашего исследования мы подтвердили наличие ассоциации между генотипом ТТ ОНП гъ2569190 гена Сй14 с АС в европейской популяции Красноярского края, но не выявили статически значимых различий с другими серонегативными СПА. Выявление новой ассоциации подтверждает влияние других генетических факторов на предрасположенность к АС. Вероятно, что часть генетических факторов играют роль в патогенезе при влияние внешней среды. Выявление данных ассоциаций позволит корректировать образ жизни пациентам и их родственникам для снижения риска обострения или развития АС.

Ключевые слова: анкилозирующий спондилит, серонегативный спондилит, HLA-B27, Сй-14, гъ2569190.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

[1] Sieper J., Poddubnyy D. Axial spondyloarthritis. Lancet. 2017. vol. 390. no. 10089. P. 73-84. DOI: 10.1016/S0140-6736(16)31591-4

[2] Li Z., Brown M.A. Progress of genome-wide association studies of ankylosing spondylitis. Clinical & translational immunology. 2017. vol. 6. no. 12. P. e163. DOI: 10.1038/cti.2017.49

[3] Sode J., Bank S., Vogel U., Andersen P.S., S0rensen S.B., Bojesen A.B., Andersen M.R., Brandslund I., Dessau R.B., Hoffmann H.J., Glintborg B., Hetland M.L., Locht H., Heegaard N.H., Andersen V. Genetically determined high activities of the TNF-alpha, IL23/IL17, and NFkB pathways were associated with increased risk of ankylosing spondylitis. BMC Medical Genetics. 2018. vol. 19. no. 1. P. 165. DOI: 10.1186/s12881-018-0680-z

[4] Colbert R.A., Navid F., Gill T. The role of HLA-B*27 in spondyloarthritis. Best Practice & Research Clinical Rheumatology. 2017. vol. 31. no. 6. P. 797-815. DOI: 10.1016/j.berh.2018.07.012

[5] Lin H., Gong Y.-Z. Association of HLA-B27 with ankylosing spondylitis and clinical features of the

HLA-B27-associated ankylosing spondylitis: a meta-analysis. Rheumatology International. 2017. vol. 37. no. 8. P. 1267-1280. DOI: 10.1007/s00296-017-3741-2

[6] Baygozina E.A., Sovalkin V.I. Influence of cd14 gene polymorhism on clinic al course and outcome of nosocomial pneumonia. Medical Immunology (Russia). 2010. vol. 12. no. 1-2. P. 95-102. (In Russ.) DOI: 10.15789/1563-0625-2010-1-2-95-102

[7] Bisyuk Yu. A. The influence of polymorphism (C159T) of CD14 receptor gene onanti-endotoxinimmunity inadult patients with bronchialasthma. Tavricheskiy Mediko-Biologicheskiy Vestnik. 2013. vol. 16. no. 24. P. 2933.

[8] Ishaan D., Parthasarathy H., Ponnaiyan D., Tadepalli A. The CD14 rs2569190 TT Genotype is Associated with Chronic Periodontitis. Genetic testing and molecular biomarkers. 2017. vol. 21, no. 9. P. 1-5. DOI: 10.1089/gtmb.2017.0029

[9] Wang Z., Hu J., Fan R., Zhou J., Zhong J. Association between CD14 gene C-260T polymorphism and inflammatory bowel disease: a meta-analysis. PLoS One. 2012. vol. 7. no. 9. P. e45144.

[10] Van der Paardt M., Crusius J.B., de Koning M.H., Morré S.A., van de Stadt R.J., Dijkmans B.A., Peña A.S., van der Horst-Bruinsma I.E. No evidence for involvement of the Toll-like receptor 4 (TLR4) A896G and CD14-C260T polymorphisms in susceptibility to ankylosing spondylitis. Annals of the Rheumatic Diseases. 2005. vol. 64. no. 2. P. 235238. DOI: 10.1136/ard.2004.021105

[11] Pointon J.J., Chapman K., Harvey D., Sims A-M., Bradbury L., Laiho K., Kauppi M., Kaarela K., Tuomilehto J., Brown M.A., Wordsworth B.P. Tolllike Receptor 4 and CD14 Polymorphisms in Ankylosing Spondylitis: Evidence of a Weak Association in Finns. The Journal of Rheumatology. 2011. vol. 38. no. 4. P. 788.

[12] Han W., Meng J., Wang J. Study on the Correlation between CD14 Gene Polymorphism and Ankylosing Spondylitis. Journal of Beihua University (Natural Science). 2016. vol. 17. no. 4. P. 477-480.

HLA-B27-associated ankylosing spondylitis: a meta-analysis. Rheumatology International. 2017. vol. 37. no. 8. P. 1267-1280. DOI: 10.1007/s00296-017-3741-2

[6] Байгозина Е.А., Совалкин В.И. Влияние полиморфизма гена cd14 на течение и исход нозокомиальной пневмонии // Медицинская иммунология. 2010. Т. 12, № 1-2. С. 95-102.

[7] Бисюк Ю.А. Влияние полиморфизма C159T гена рецептора CD14 на антиэндотоксиновый иммунитет у взрослых больных бронхиальной астмой // Таврический медико-биологический вестник. 2013. Т. 16, № 24. С. 29-33.

[8] Ishaan D., Parthasarathy H., Ponnaiyan D., Tadepalli A. The CD14 rs2569190 TT Genotype is Associated with Chronic Periodontitis. Genetic testing and molecular biomarkers. 2017. vol. 21. no. 9. P. 1-5. DOI: 10.1089/gtmb.2017.0029

[9] Wang Z., Hu J., Fan R., Zhou J., Zhong J. Association between CD14 gene C-260T polymorphism and inflammatory bowel disease: a meta-analysis. PLoS One. 2012. vol. 7. no. 9. P. e45144.

[10] Van der Paardt M., Crusius J.B., de Koning M.H., Morré S.A., van de Stadt R.J., Dijkmans B.A., Peña A.S., van der Horst-Bruinsma I.E. No evidence for involvement of the Toll-like receptor 4 (TLR4J A896G and CD14-C260T polymorphisms in susceptibility to ankylosing spondylitis. Annals of the Rheumatic Diseases. 2005. vol. 64. no. 2. P. 235-238. DOI: 10.1136/ard.2004.021105

[11] Pointon J.J., Chapman K., Harvey D., Sims A-M., Bradbury L., Laiho K., Kauppi M., Kaarela K., Tuomilehto J., Brown M.A., Wordsworth B.P. Tolllike Receptor 4 and CD14 Polymorphisms in Ankylosing Spondylitis: Evidence of a Weak Association in Finns. The Journal of Rheumatology. 2011. vol. 38. no. 4. P. 788.

[12] Han W., Meng J., Wang J. Study on the Correlation between CD14 Gene Polymorphism and Ankylosing Spondylitis. Journal of Beihua University (Natural Science). 2016. vol. 17. no. 4. P. 477-480.

Conflict of Interest Statement. The authors declare no conflict of interest.

Author сontributions. Mordovskii V.S. - writing a text; Nikulina S.Yu. - research concept and design; Kapustina E.V. - collection of materials (main group); Aksyutina N.V. - statistical data processing, formation of a database, translation of the text into English; Bolshakova T.Yu. - formation of a control group, processing of materials; Pelipetskaya E.Yu. - literature review.

Mordovskii V.S. — SPIN ID: 4476-9548; ORCID ID: 0000-0001-9666-2487

Research interests, number of main publications: Study of genetic predictors of atrial fibrillation, ankylosing spondylitis, more than 32 publications were published, 3 in WoS, 2 monographs, 9 in the Higher Attestation Commission and 18 in conference proceedings.

Kapustina E.V. — SPIN ID: 3716-9832, ORCID ID: 0000-0001-9528-2781

Research interests, number of main publications: Study of genetic predictors of atrial fibrillation, ankylosing spondylitis, more than 43 publications were published, 2 in WoS, 2 monographs, 21 in the Higher Attestation Commission and 18 in conference proceedings.

Nikulina S.Yu. — SPIN ID: 1789-3359; ORCID ID: 0000-0002-6968-7627

Research interests, number of main publications: Study of genetic predictors of atrial fibrillation, ankylosing spondylitis, more than 345 publications were published, 10 of them in SCOPUS, 23 in WoS, 11 monographs, 143 in the Higher Attestation Commission and 158 in conference proceedings.

Aksyutina N.V. — SPIN ID:5028-3792; ORCID ID: 0000-0002-4856-2729

Research interests, number of main publications: Study of genetic predictors of atrial fibrillation, ankylosing spondylitis, more than 54 publications were published, 2 of them in SCOPUS, 9 in WoS, 1 monograph, 29 in the Higher Attestation Commission and 13 in conference proceedings.

Bolshakova T.Yu. — SPIN ID: 4934-1577, ORCID: 0000-0001-9653-6026

Research interests, number of main publications: Study of genetic predictors of rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, more than 51 publications were published, 11 of them in SCOPUS, 2 in WoS, 2 monograph, 17 in the Higher Attestation Commission and 19 in conference proceedings.

Pelipetskaya E.Yu. — SPIN ID: 9961-5164, ORCID: 0000-0001-5078-2504

Research interests, number of main publications: Study of genetic predictors of ankylosing spondylitis, myocardial infarction, more than 45 publications were published, 2 of them in SCOPUS, 1 in WoS, 11 in the Higher Attestation Commission and 31 in conference proceedings.

Заявление о конфликте интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Вклад авторов. Мордовский В.С. - написание текста, Никулина С.Ю. - концепция и дизайн исследования, Капустина Е.В. - сбор материала (основной группы), Аксютина Н.В. - статистическая обработка данных, формирование базы данных, англоязычный перевод текста, Большакова Т.Ю. - формирование группы контроля, обработка материалов, Пелипецкая Е.Ю. - обзор литературы.

Мордовский В.С. — SPIN ID: 4476-9548; ORCID ID: 0000-0001-9666-2487

Область научных интересов, количество основных публикаций: Исследование генетических предикторов фибрилляции предсердий, анкилозирующего спондилита, опубликовано более 32 публикаций, 3 в WoS, 2 монографии, 9 в ВАК и 18 в материалах конференций.

Капустина Е.В. — SPIN ID: 3716-9832, ORCID ID: 0000-0001-9528-2781

Область научных интересов, количество основных публикаций: Исследование генетических предикторов фибрилляции предсердий, анкилозирующего спондилита, опубликовано более 43 публикаций, 2 в WoS, 2 монографии, 21 в ВАК и 18 в материалах конференций.

Никулина С.Ю. — SPIN ID: 1789-3359; ORCID ID: 0000-0002-6968-7627

Область научных интересов, количество основных публикаций: Изучение генетических предикторов фибрилляции предсердий, анкилозирующего спондилита, опубликовано более 345 публикаций, из них 10 в SCOPUS, 23 в WoS, 11 монографий, 143 в ВАК и 158 в трудах конференций.

Аксютина Н.В. — SPIN ID:5028-3792; ORCID ID: 0000-0002-4856-2729

Сфера научных интересов, количество основных публикаций: Изучение генетических предикторов фибрилляции предсердий, анкилозирующего спондилита, опубликованы более 54 публикаций, из них 2 в SCOPUS, 9 в WoS, 1 монография, 29 в ВАК, 13 в материалах конференций.

Большакова Т.Ю. — SPIN ID: 4934-1577, ORCID ID: 0000-0001-9653-6026

Сфера научных интересов, количество основных публикаций: Изучение генетических предикторов ревматоидного артрита, анкилозирующего спондилита, опубликовано более 51 публикации, из них 11 в SCOPUS, 2 в WoS, 2 монография, 17 в ВАК, 19 в материалах конференций.

Пелипецкая Е.Ю. — SPIN ID: 9961-5164, ORCID: 0000-0001-5078-2504

Сфера научных интересов, количество основных публикаций: Изучение генетических предикторов анкилозирующего спондилита, инфаркта миокарда, опубликовано более 45 публикации, из них 2 в SCOPUS, 1 в WoS, 11 в ВАК, 31 в материалах конференций.

For citation: Mordovskii V.S., Kapustina E.V., Nikulina S.Yu., Aksyutina N.V., Bolshakova T.Yu., Pelipetskaya E.Yu. ASSOCIATION OF POLYMORPHISM rs2569190 OF THE GENE CD14 WITH ANKYLOSING SPONDILITIS // Medical

& pharmaceutical journal "Pulse". 2021. Vol.23. №2. С. 60-68. http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-2-60-68.

Для цитирования: Мордовский В.С., Капустина Е.В., Никулина С.Ю., Аксютина Н.В., Большакова Т.Ю., Пелипецкая Е.Ю. АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМА ^2569190 ГЕНА CD14 С АНКИЛОЗИРУЮЩИМ СПОНДИЛИТОМ // Медико-фармацевтический журнал "Пульс". 2021. Т.23. №2. С. 60-68. http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-2-60-68.

Введение. Анкилозирующий спондилит (АС) - хроническое ревматологическое

заболевание, с высокой степенью наследования, характеризующиеся

иммуноопосредованным артритом, с преимущественным поражением

позвоночника и крестцово-подвздошных сочленений [1-3]. Существенную роль в патогенезе АС играет генетический фактор. Одним из первых был исследован антиген HLA-B27. Несмотря на то, что с момента открытия ассоциации антигена HLA-B27 с АС прошло более 40 лет, до сих пор не до конца изучен патогенез этого заболевания. Имея доказанную ассоциацию антигена HLA-B27 с АС, известно, что только лишь 80% больных с АС являются носителями антигена HLA-B27, причем лишь у 1-5% носителей данного антигена развивается АС. В связи с чем следует предполагать наличие влияния других генетических факторов на восприимчивость к АС [4-5].

В настоящее время особый научный интерес направлен на изучение влияния гена CD14 на развитие АС. Ген CD14 (Cluster of differentiation 14 - кластер дифференцировки 14) расположен на 5 хромосоме и синтезирует 2 белковые формы: мембранную CD14 и растворимую CD14 (soluble (англ. растворимый) CD14 - sCD14). Белки CD14 участвуют в регуляции воспаления, выполняя роль паттерн-рецепторов. Повышение концентрации sCD14 показано при многих заболеваниях инфекционного, так и аутоиммунного характера [6-7]. Байгозина Е.А. совместно с Совалкиным В.И. показали, что генотип ТТ гена CD14 ассоциируется c гиперсекрецией провоспалительных

цитокинов, тем самым принимая ключевую роль в иммунопатогенезе нозокомиальных пневмоний [6]. Также генотип TT ОНП rs2569190 гена CD14 был ассоциирован с высоким риском развития бруцеллеза [8], более высокой степенью активности

хронического воспаления при бронхиальной астме по сравнению с другими генотипами (CC„ CT) [7], с развитием хронического периодонтита [8] и повышенным риском развития язвенного колита у азиатов [9]. Роль ОНП rs2569190 гена CD14 в развитие АС на сегодняшний день остается неоднозначной. В 2005 году авторы из Нидерландов не выявили каких-либо доказательств причастности CD14 C-260T к развитию АС [10]. В 2011 году Pointon J.J. совместно с соавторами в результате проведенного мета-анализа подтвердили наличие ассоциации с риском развития спондилоартрита после реактивного артрита среди финских женщин, но не нашли подтверждения среди пациентов из Великобритании [11]. В 2016 году китайские авторы выявили ассоциацию между ОНП rs256919 и АС [12]. Возможно, такие противоречивые данные обусловлены популяционными различиями и

преобладанием других генетических и средовых факторов.

Целью нашего исследования явилось изучение ассоциации ОНП rs2569190 гена CD14 с АС в европейской популяции Красноярского края.

Материалы и методы. Исследование одобрено локальным этическим комитетом КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого. Набор пациентов осуществлялся на базе стационара и ревматологических кабинетов КГБУЗ КМКБ №20 им. И.С. Берзона и Краевой клинической больницы №1 г. Красноярска. В основную группу с АС включено 150 пациентов (118 мужчин, 32 женщины), во вторую группу с остальными серонегативными спондилоартритами (СПА) -66 пациентов (32 мужчин, 34 женщин) и в группу контроля - 226 человек (125 мужчин, 101 женщина). Медиана возраста больных с АС (42,2 года [34,7; 52,0]), статистически значимо не отличалась от медианы возраста пациентов

с остальными серонегативными СПА (39,96 лет [29,7; 49,2]), и от медианы возраста лиц контрольной группы (41,2 года [30,6; 50,9]), р>0,05. Критерии включения в основную группу с АС: а) соответствие Нью-Йоркским критериям АС 1984 года; б) принадлежность к европейской популяции; в) подписанное информированное добровольное согласие. Критерии включения во вторую группу с остальными серонегативными СПА: а) соответствие критериям соответствующей нозологии; б) отсутствие кровных связей с другими группами; в) подписанное информированное добровольное согласие. Лица контрольной группы (условно-здоровые пациенты) сопоставимы по полу и возрасту с пациентами основных групп и не имеют кровных связей. Вторая группа пациентов с остальными серонегативными СПА была набрана как группа сравнения с больными АС для более точного выявления специфичного генотипа, ассоциированного с АС.

У всех исследуемых были взяты образцы венозной крови для молекулярно-генетического исследования, которое выполнялось на базе Российско-итальянской лаборатории медицинской генетики «MAGI» КрасГМУ. Выделение ДНК проводили стандартным фенол-хлороформным методом. Для амплификации использовали следующие праймеры («СибЭнзим», г. Новосибирск, РФ): прямой GCTGAGGTTCGGAGAAGTTGC; обратный GGTGCCAACAGATGAGGTTCAC. Каждые 25 мкл ПЦР продукта содержало: 30-50 нг ДНК, 10 мкМ каждого праймера, 2,5 мкл буфера 10X для ПЦР, 0,5 мМ каждого дезоксинуклеотида, 1,5 мМ MgCl2 и 0,75 U Taq -полимеразы («СибЭнзим», г. Новосибирск, РФ). Реакции проводили в амплификаторе (Амплификатор с градиентом Life ECO, BIOER, Биньцзян, Китай). Для ПЦР использовали следующий профиль

циклов: 95° C в течение 5 мин (начальная денатурация), затем 33 цикла при 95° C в течение 15 сек. (денатурация), 58 ° C в течение 30 сек. (отжиг) и 72° C в течение 40 сек. (элонгация) с последующим окончательная элонгация при 72° C в течение 5 мин. Рестрикция проводилась в c 10 ед. акт. рестриктазы Bme18I («СибЭнзим», г. Новосибирск, РФ) при 37° C в течение 12 часов. Продукты рестрикции оценивали с помощью электрофореза в 4% полиакриламидном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием.

Статистический анализ проводился с использованием критерия х2 для оценки различия между пациентами и контрольной группой в распределении аллелей и генотипов rs2569190, а также отношение шансов (ОШ) для измерения связи между АС и наблюдаемыми частотами генотипов в качестве меры риска АС. Считалось, что статистическая значимость представлена значениями р<0,05 для критерия х2 и ОШ (MedCalc Software, Бельгия). Использовался точный тест Фишера для расчета разницы между пациентами и контрольной группой в распределении аллелей и генотипов rs2569190. Значения р<0,05 считались статистически значимыми (программное обеспечение MedCalc). Контрольная группа проверялась на соответствие распределения частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга с помощью программного обеспечения «EQUILIBRIUM HARDY-WEINBERG»

(https://wpcalc.com/en/equilibrium-hardy-weinberg/).

Результаты и обсуждение. Клиническая характеристика пациентов исследуемых групп представлена в таблице 1.

Таблица 1

Клиническая характеристика пациентов

Критерий Пациенты АС (n=150) Пациенты с другими СПА (n=66)

Индекс BASDAI (баллы) 4,99±1,73 4,3±1,6

Индекс ASDAS (баллы) 2,85±0,81 2,6±0,8

Тест Шобера (см) 9,24±4,62 13,4+1,61

Расстояние затылок стена 5,71±7,79 0,4±1,57

(см)

HAQ (баллы) 8±4 5,2±2,98

Примечание. BASDAI (Bath AS Disease Activity Index] - Батский индекс активности АС; ASDAS (AS Disease Activity Score] - счет индекса активности АС; HAQ (Health Assessment Questionnaire] - опросник состояния здоровья.

Table 1

Clinical characteristics of patients

Criterion Patients with the AS Patients with seronegative SPA

(n=150) (n=66)

Index BASDAI (scores) 4.99±1.73 4.3±1.6

Index ASDAS (scores) 2.85±0.81 2.6±0.8

Shober test (cm) 9.24±4.62 13.4+1.61

Distance occipute wall 5.71±7.79 0.4±1.57

(cm)

HAQ (scores) 8±4 5.2±2.98

Note. BASDAI - Bath AS Disease Activity Index; ASDAS -Questionnaire.

AS Disease Activity Score; HAQ - Health Assessment

В исследовании большая часть пациентов с АС и с другими СПА была с высокой степенью активностью по АББАБ (от 2,1 до 3,5): в первой группе 2,85±0,81, во второй группе 2,6±0,8 (табл. 1). Контрольная группа соответствует равновесию Харди-Вайнберга (р=0,902). Результат рестрикции ОНП гэ2569190 показал следующие генотипы: СС содержит один фрагмент 830 п.н., гетерозиготный генотип СТ - три фрагмента: 830, 474 и 376 п.н., гомозиготный ТТ содержит 2 фрагмента: 474 и 376 п.н.

Сравнительный анализ группы пациентов с АС и контрольной группы выявил статическое значимое

преобладание генотипа ТТ гэ2569190 в основной группе (34,7% относительно 23,9%) (р = 0,0236; ОШ 1,6901; 95%ДИ ОШ

1,0728-2,6625) встречаемости статистически пациентов с контрольной

(табл. 2). Частота аллеля Т выявлена значимо чаще в группе АС при сравнении с группой (54,3%

относительно 48,7%) (р = 0,1286; ОШ 0,7970; 95%ДИ ОШ 0,5948-1,068) (табл. 2).

Таблица 2

Распределение частот генотипов и аллелей C/Tполиморфизма гз2569190 гена CD14 среди больных с АС и лиц контрольной группы

Генотип АС (n=1S0) Контроль (n=226) р ОШ; 95%ДИ ОШ

абс. % ±m абс. % ±m

CC 39 26,0 3,6 60 26,5 2,9 р = 0,9749 0,9908; 0,5563-1,7645

CT S9 39,3 4,0 112 49,6 3,3 р = 0.0517 0,6599; 0,4342-1,0031

TT S2 34,7 3,9 S4 23,9 2,8 р = 0,0236 1,6901; 1,0728-2,6625

Аллель АС Контроль р ОШ; 95%ДИ ОШ

абс. % ±m абс. % ±m

Аллель C 137 45,7 2,9 232 S1,3 2,4 р = 0,1286 0,7970; 0,5948-1,068

Аллель T 163 S4,3 2,9 220 48,7 2,4

Итого 300 100 4S2 100

Примечание. ОШ- отношение шансов; ДИ- доверительный интервал.

Table 2

Frequency distribution of genotypes and C/Talleles of the rs2569190 polymorphism of the CD14 gene among patients with AS and the control group

Genotype AS (n=150) Control (n=226) P OR; 95% CI OR

abs. % ±m abs. % ±m

CC 39 26.0 3.6 60 26.5 2.9 р = 0.9749 0.9908; 0.5563-1.7645

CT 59 39.3 4.0 112 49.6 3.3 р = 0.0517 0.6599; 0.4342-1.0031

TT 52 34.7 3.9 54 23.9 2.8 р = 0.0236 1.6901; 1.0728-2.6625

Allele AS Control P OR; 95% CI OR

abs. % ±m abs. % ±m

Allele C 137 45.7 2.9 232 51.3 2.4 р = 0.1286 0.7970; 0.5948-1.068

Allele T 163 54.3 2.9 220 48.7 2.4

Total 300 100 452 100

Note. OR - odds ratio; CI - confidence interval.

При сравнении частоты встречаемости генотипов и аллелей ОНП rs256919 гена CD14 пациентов с другими серонегативными СПА с

лицами контрольной группы статистически значимых различий не было выявлено (табл. 3).

Таблица 3

Распределение частот генотипов и аллелей C/Tполиморфизма ю2569190 гена CD14 среди больных с другими серонегативными СПА и лиц контрольной группы

Генотип Другие СПА (n=66) Контроль (n=226) р ОШ; 95%ДИ ОШ

абс. % ±m абс. % ±m

CC 12 18,2 4,7 60 26,5 2,9 р = 0,1681 0,6148; 0,3079-1,2278

CT 38 57,6 6,1 112 49,6 3,3 р = 0,2525 1,3814; 0,7943-2,4025

TT 16 24,2 5,3 54 23,9 2,8 р = 0,9535 1,0193; 0,5371-1,9342

Аллель АС Контроль р ОШ; 95%ДИ ОШ

абс. % ±m абс. % ±m

Аллель C 62 47,0 4,3 232 51,3 2,4 р = 0,3786 1,4414; 1,0602-1,9597

Аллель T 70 53,0 4,3 220 48,7 2,4

Итого 132 100 452 100

Примечание. ОШ- отношение шансов; ДИ- доверительный интервал.

Table 3

Frequency distribution of genotypes and C/T alleles of the rs2569190 polymorphism of the CD14 gene among patients with the rest of SPA and the control group

Genotype Other SPA (n=66) Control (n=226) р OR; 95% CI OR

abs. % ±m abs. % ±m

CC 12 18.2 4.7 60 26.5 2.9 р = 0.1681

0.6148; 0.3079-1.2278

CT 38 57.6 6.1 112 49.6 3.3 р = 0.2525 1.3814; 0.7943-2.402S

TT 16 24.2 S.3 S4 23.9 2.8 р = 0.9535 1.0193; 0.5371-1.9342

Allele Other SPA Control р OR; 95% CI OR

abs. % ±m abs. % ±m

Allele C 62 47.0 4.3 232 S1.3 2.4 р = 0.3786 1.4414; 1.0602-1.9597

Allele T 70 S3.0 4.3 220 48.7 2.4

Total 132 100 4S2 100

Note. OR - odds ratio; CI - confidence interval.

Выводы. В ходе исследования выявлена ассоциация между генотипом ТТ ОНП rs2569190 гена CD14 с АС в европейской популяции красноярского края, но не получено статически значимых различий с другими серонегативными СПА. Выявление новой ассоциации подтверждает влияние других генетических факторов на

предрасположенность к АС. Не исключается вероятность, что часть генетических факторов играют роль в патогенезе АС при влиянии определенных средовых факторов. Выявление данных ассоциаций позволит корректировать образ жизни пациентам и их родственникам для снижения риска обострения или развития АС.

Corresponding Author: Mordovskii Vasilii Sergeevich - postgraduate student of the Department of faculty therapy with a course of PE Professor V.F. Voino-Yasenetsky Krasnoyarsk State Medical University, Krasnoyarsk, Russian Federation

E-mail: [email protected]

Ответственный за переписку: Мордовский Василий Сергеевич - аспирант кафедры факультетской терапии с курсом ПО с курсом ПО ФГБОУ ВО "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого" Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Красноярск, Российская Федерация

E-mail: [email protected]