Ассоциация полиморфизма генов воспалительных цитокинов с уровнями биохимических маркеров в сыворотке крови при коронарном атеросклерозе Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Meditsinskaya Immunologiya/ Медицинская иммунология ОрЫгиНаЛЬНЫС СШаШЬЫ Medical Immunology 2014, Т. 16, № 4, стр. 333-344 * ^ . . . . . 2014, Vol. 16, No 4, pp. 333-344

© 2014, спб ро рааки Original articles © 2014, spb raaci

АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ С УРОВНЯМИ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПРИ КОРОНАРНОМ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ

Шевченко А.В.1, Прокофьев В.Ф.1, Рагино Ю.И.2, Чернявский А.М.3, Воевода М.И.2, Коненков В.И.1

1ФГБУ«Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Новосибирск, Россия

2 ФГБУ «Научно-исследовательский институт терапии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Новосибирск, Россия

3 ФГБУ «Новосибирский Научно-исследовательский институт патологии кровообращения имени академика Е.Н. Мешалкина» Минздрава России, г. Новосибирск, Россия

Резюме. Мы предположили, что сывороточная продукция биологических маркеров, значимо отражающая степень риска развития атеросклеротического процесса и риска развития острого коронарного случая опосредована функциональным полиморфизмом комплекса генов, вовлеченных в процесс воспаления и активно влияющих на процесс взаимного регулирования продукции. Исходя из этого, нами проведен анализ частоты распределения комбинаций генотипов промоторных регионов генов цитокинов TNF-A863C; TNF-A308G; TNF-A238G; IL1B C-31T; IL1B-C511T; IL4-C590T; IL6-C174G; IL10A-1082G, IL10-A592C, регуляторных сайтов фактора роста сосудистого эндотелия VEGF-A2578C, VEGF+T936с сывороточным уровнем цитокинов TNFa, IL-1ß, IL-6, IL-8, рецептор-ного антагониста IL-1 (IL-1ra), вчСРП, растворимого лиганда рецептора CD40 (sCD40L) у пациентов с атеросклерозом.

Нами показано, что вклад моногенотипов в ассоциированность с уровнем продукции значительно ниже, чем отношения шансов наличия определенного уровня белковой продукции, ассоциированного со сложным генотипом.

Ключевые слова: атеросклероз, полиморфизм генов цитокинов, биохимические показатели атеросклероза

Авторы:

Шевченко А.В. — к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории клинической иммуногенетики ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Новосибирск, Россия

Прокофьев В.Ф. — к.м.н., ведущий научный сотрудник лаборатории клинической иммуногенетики ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Новосибирск, Россия

Рагино Ю.И. — д.м.н., профессор, руководитель лаборатории клинических биохимических и гормональных исследований терапевтических заболеваний ФГБУ «Научно-исследовательский институт терапии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Новосибирск, Россия

Чернявский А.М. — д.м.н., профессор, руководитель Центра хирургии аорты, коронарных и периферических артерий ФГБУ «Новосибирский Научно-исследовательский институт патологии кровообращения имени академика Е.Н. Мешалкина» Минздрава России, г. Новосибирск, Россия

Воевода М.И. — д.м.н., профессор, член-корр. РАМН, директор ФГБУ «Научно-исследовательский институт терапии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Новосибирск, Россия Коненков В.И. — д.м.н., профессор, академик РАМН, директор ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Новосибирск, Россия

Адрес для переписки:

Шевченко Алла Владимировна

к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории клинической иммуногенетики ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук 630117, Россия, г. Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2. Тел.: 8 (383) 311-05-40. E-mail: shalla64@mail.ru

Поступила 05.06.2013 Отправлена на доработку 02.08.2013 Принята к печати 22.08.2013

© Шевченко А.В. и соавт., 2014

Введение Воспаление играет ключевую роль в развитии и прогрессировании процесса атеросклероза [26]. Такие провоспалительные ци-токины, как интерлейкины 1Ъ-1, ^-6, фактор некроза опухоли альфа (TNFa) рассматриваются как активные участники процесса атеро-генеза. Активная роль цитокинов в атерогенезе и его клинических проявлениях подтверждается и увеличением более чем в 2,5 раза концентрации таких цитокинов, как макрофаг колонии стимулирующий фактор (M-CSF), ^-6, ^-1р, в крови у больных с нестабильной стенокардией напряжения и острым инфарктом миокарда и повышением уровня фибриногена и высоко чувствительного С-реактивного протеина (вчСРП), тесно коррелирующих с уровнем TNFa, и ^-6 [18]. Причем пик концен-

трации вчСРП ассоциирован с максимальным увеличением концентрации ^-6 [2]. Сывороточные уровни TNFa и ^-6 коррелируют с тяжестью коронарного атеросклероза и связаны как с количеством пораженных атеросклероти-ческими бляшками сосудов, так и со степенью стеноза артерий [12, 17]. Показан повышенный уровень mRNA ^-1р в атеросклеротических бляшках и высказано предположение, что ^-1р может усиливать местную иммунореактивность [22]. Кроме того, полиморфизм гена ^-1 также влияет на уровни в крови вчСРП [14, 23]. В противовес этому такие цитокины с условно противовоспалительной активностью, как ^-4 и ^-10, тормозят экспрессию тканевого фактора, вызывая гипокоагуляцию и усиление секреции активатора плазминогена. Кроме того, ^-4 и ^-10 подавляют действие ^-1р, ^-6 и TNFa на эндотелиальные клетки и макрофаги, являющиеся основными триггерами гиперкоагуляции [28]. Другой немаловажный биологический маркер — фактор роста эндотелия сосудов (VEGF-А) — оценивают как основной стимулятор клеток эндотелия сосудов, играющий двоякую роль в развитии атеросклероза. С одной стороны, VEGF может выступать определенным фактором защиты, активирующим неоваскуляризацию при ишемии тканей атеро-склерозированных сосудов, с другой стороны, ангиогенез, активированный VEGF может приводить к росту атеросклеротических бляшек, которые могут быть нестабильны и способствовать развитию острых коронарных событий [15, 27]. Исследования последних лет показали, что на сывороточные уровни продукции цитокинов влияет множество факторов. Уровень экспрессии контролируется индивидуальным набором

аллельных ассоциаций регуляторных регионов генов, ответственных за белковую продукцию конкретного цитокина. Не менее важен каскад плейотропных эффектов, стимулирующих или ингибирующих продукцию того или иного цитокина в воспалительном процессе.

Мы предположили, что сывороточная продукция биологических маркеров, значимо отражающая степень риска развития атероскле-ротического процесса и риска развития острого коронарного случая опосредована функциональным полиморфизмом комплекса генов, вовлеченных в процесс воспаления и активно влияющих на процесс взаимного регулирования продукции. Исходя из этого, нами проведен анализ частоты распределения комбинаций генотипов промоторных регионов генов цитокинов TNF-A863C; TNF-A308G; TNF-A238G; IL1B C-31T; IL1B-C511T; IL4-C590T; IL6-C174G; IL10A-1082G, IL10-A592C, регуляторных сайтов фактора роста сосудистого эндотелия VEGF-A2578C, VEGF+T936 с сывороточным уровнем цитокинов TNFa, IL-ip, IL6, IL-8, рецепторного антагониста IL-1 (IL-1ra), вчСРП, растворимого лиганда рецептора CD40 (sCD40L) у пациентов с атеросклерозом.

Материалы и методы

В исследование было включено 83 мужчины в возрасте 42-70 лет (в среднем 56,1±1,2 лет) со стенозирующим коронарным атеросклерозом, верифицированным при проведении селективной коронароангиографии (КАГ) на ангиогра-фической установке «Advantex LC/LP» (General Electric, США), без острого коронарного синдрома (ОКС) со стабильной стенокардией напряжения II-IV ФК — жителей Западной Сибири (г. Новосибирск, г. Омск, г. Тюмень, г. Барнаул, г. Томск, г. Красноярск, г. Кемерово), поступивших в Клинику на операцию коронарного шунтирования (КШ). Всеми пациентами заполнялась форма Информированного согласия на участие в исследовании. Критериями исключения пациентов из исследования были инфаркт миокарда (ИМ) давностью менее 6 месяцев, острые воспалительные заболевания, обострение хронических воспалительных заболеваний, активные заболевания печени, почечная недостаточность, онкологические заболевания.

У 75% мужчин с коронарным атеросклерозом в анамнезе с давностью не менее 6 месяцев был перенесенный ИМ, причем у 30% из них было несколько перенесенных ИМ. У 25% мужчин в анамнезе не было ИМ, но была нестабильная стенокардия: у 10% — впервые возникшая стено-

Гены цитокинов и биохимические маркеры атеросклероза Cytokine genes and atherosclerosis markers

кардия, у 15% — прогрессирующая стенокардия. Длительность ИБС у пациентов была от 1 до 40 лет, в среднем 7,1±1,3 лет. Перед операцией КШ у всех мужчин (100%) была стабильная стенокардия напряжения: у 14% пациентов II ФК, у 70% — III ФК и у 16% мужчин — IV ФК. Таким образом, перед операцией КШ у большинства мужчин был III ФК стенокардии напряжения. Распределение пациентов в зависимости от стадии хронической сердечной недостаточности (ХСН) показало, что более чем у половины из них — у 58% определялась IIA стадия, у 30% мужчин — I стадия и у 12% — ПБ стадия ХСН. В зависимости от функционального класса ХСН распределение обследованных пациентов было следующим: I ФК определялся у 9% человек, II ФК - у 20%, III ФК - у 57% человек и IV ФК — у 14% мужчин.

При оценке наличия факторов риска ише-мической болезни сердца (ИБС) у обследуемых мужчин оказалось, что у 88% из них была артериальная гипертензия (АГ). Уровень общего холестерина (ХС) крови был повышенным (< 5 ммоль/л согласно Рекомендациям ВНОК, 2012 г.) у 73% мужчин, уровень холестерина ли-попротеинов низкой плотности (ЛНП-ХС) выше 3 ммоль/л был у 78% обследованных. У 22% мужчин был сахарный диабет (СД) II типа. Средний индекс массы тела (ИМТ) в целом у всех обследованных пациентов был 30,2±2,5 кг/м2. Из 83 мужчин курили 43% и не курили 57%.

Биохимические методы исследования

У всех мужчин до операции однократно забирали кровь из локтевой вены утром натощак через 12 ч после приема пищи. Концентрации воспалительных цитокинов и вчСРП в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) на ИФА анализаторе Multiscan EX (ThermoFisher, Финляндия) с использованием стандартизованных наборов ELISAs: TNFa (пг/мл), IL-1p (пг/мл), IL-1ra (пг/мл) — Biosource наборы (USA), IL-6 (пг/мл), IL-8 (пг/мл) — Cytimmune наборы (USA), sCD40L (нг/мл) — Bender MedSystems наборы (USA), вчСРП (мг/л) — Biosource набор (USA) .

Генотипирование

Исследовали однонуклеотидный полиморфизм (SNP — single nucleotide polymorphism) промоторного региона генов TNFa -863 C^A, TNFa -308G^A, TNFa -238G^A, IL1p -511 T^C, ILie -31 C^T, IL-2 -330 T ^ G, IL-4 -590 C^T, IL-6 -174 G^C, IL-10 -1082 G^A и IL-10 -592 А^С, VEGF+936 C^T, VEGF -2578 C^A. Гено-типирование осуществляли методом рестрикт-ного анализа продуктов амплификации (RFLP— restriction fragment length polymorphism). Участки

промоторного региона генов амплифицировали с использованием пары специфичных прайме-ров [9, 13, 20, 21], затем продукты амплификации подвергали гидролизу эндонуклеазами рестрикции («СибЭнзим», Новосибирск). Электрофорез проводили в 2% агарозном геле.

Статистическая обработка

При статистическом анализе результатов исследований использовали такие показатели как частота встречаемости генов, генотипов и их комбинаций, отношение шансов (OR, odds ratio) с расчетом 95% доверительного интервала (95% Confidence Interval - 95%CI) [3, 6, 7].

Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга [3].

Расчет величины OR проводили по методу Вульфа-Холдейна, который допускает рассчитывать ORs по таблице 2x2 для случаев, когда хотя бы одна из ячеек таблицы имеет значение ноль. [1, 8].

Математическую обработку связи генетических признаков с количественными лабораторными показателями (оптимальная концентрация, ее высокие или низкие значения) проводили в соответствии с методическими и аналитическими подходами квантильного (квартильного) анализа. При данном подходе, диапазон оптимума ограничивается значениями квантилей Q25 (нижний квартиль) и Q75 (верхний квартиль). В качестве параметров повышенной концентрации показателей принимаются диапазоны выше Q75, а сниженной — ниже Q25 [4, 10].

Достоверность различий частот распределения изучаемых признаков в альтернативных группах определяли по критерию х2 с поправкой Йетса на непрерывность и двустороннему варианту точного метода Фишера для четырехпольных таблиц [4].

Для оценки диагностической значимости генетических и генетико-лабораторных признаков использовали такие показатели как диагностический коэффициент и специфичность, расчеты которых осуществляли с использованием общепринятых методов медико-биологической статистики [5]. При OR > 1 специфичность рассчитывалась как доля отрицательных результатов генетического теста в контрольной группе, а при OR < 1 — как доля отрицательных результатов генетического теста в опытной группе [11].

Результаты

При анализе данных полученных в проведенном исследовании мы применили квантильный

ТАБЛИЦА 1. ПАРАМЕТРЫ КОНЦЕНТРАЦИИ ИССЛЕДУЕМЫХ БЕЛКОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПАЦИЕНТОВ С КОРОНАРНЫМ АТЕРОСКЛЕРОЗОМ

Показатели TNFa (пг/мл) IL-1P (пг/мл) IL-6 (пг/мл) IL-8 (пг/мл) IL-1ra (пг/мл) вчСРП (мг/л) SCD40L (нг/мл)

Количество обследованных 82 73 83 77 57 83 81

Средние значения 3,28±0,55 1,94±0,30 11,32±1,37 30,29±5,24 897,36±93,41 6,06±0,49 3,26±0,29

Медиана 0,91 1,32 9,00 14,41 680,00 5,66 2,44

Процентили:

25 (нижний квартиль) 0,40 0,03 4,77 8,39 380,00 1,82 1,49

50 0,91 1,32 9,00 14,41 680,00 5,66 2,44

75 (верхний квартиль) 4,00 2,86 14,00 27.00 1110,00 8,65 4,22

подход, при котором сравниваются распределение комплекса генотипов регуляторных регионов анализируемых генов в группах с максимальными значениями концентрации лабораторных показателей TNFa, ^-1р, ^-1га, ^-6, ^-8, sCD40L, вчСРП ^75 и выше), с их минимальными значениями ^25 и ниже). Статистический анализ данных по уровню воспалительных цито-кинов в крови представлен в таблице 1.

Нами выявлено 23 комплексные генетические комбинации анализируемых полиморфных позиций, позитивно ассоциированные с высокой продукцией TNFa (табл. 2). В состав 13 из этих генотипов входит TNFa -238 GG, в 12 генотипах ^-2 -330 ТТ, в состав 9 генотипов входит ^-10 -1082АА и только в одном случае гетерозиготный вариант этой полиморфной позиции, в 10 генотипах VEGF-2578 СС, в 15 генотипах VEGF+936 СС, причем выявлена ассоциированность с высоким уровнем в крови TNFa генотипа VEGF -2578 СС как самостоятельно, так и совместно с VEGF+936 СС. Присутствие в составе сложного генотипа ^10-1082 АА приводит к повышению отношения шансов у данного пациента на высокий уровень в крови TNFa (OR = 9,60; р = 0,0365). Максимальные значения отношения шансов наличия высокой продукции TNFa у этих пациентов достигаются при сочетании в генотипе Д2 ТТ -330/^10-1082 AA/VEGF+936CC (OR = 21,39; р = 0,0058). Два генотипа достоверно ассоциированы с высокими значениями в крови ^-1р. Наличие в генотипе TNFa -308 GG/ ^1В 31ТТ, является достоверным фактором наличия у пациентов высокой продукции ^-6 (OR = 10,00 р = 0,0448). Данное сочетание присутствует во всех трех комплексных генотипах, достоверно ассоциированных с высокими значениями. С регуляцией высокого уровня ^-8 достоверно ассоциированы 13 сложных генотипов. Примечательно то, что ни в одном из генотипов,

ассоциированных с высоким уровнем анализируемых белковых продуктов, за исключением именно ^-8 не встречается какой либо из генотипов ^-6 -174. Из 13 генотипов, достоверно ассоциированных с высокой продукцией ^-8 низкопродуцирующий генотип ^-6 ^ входит в состав 4 генотипов, причем именно ^-6 ^ ассоциирован с высокой продукцией ^-8 и в виде моногенотипа (OR = 10,50; р = 0,0422). Во все сложные генотипы, ассоциированные с высокой продукцией ^-8 входят полиморфные позиции TNFa: в десяти генотипах TNF-238GG, в одиннадцати генетических комбинациях TNF-863СС, в трех комбинациях TNF-308GG. Причем наличие в этих генотипах ^-6 TNF-238GG значительно увеличивает вероятность высокой продукции ^-8 в этой группе пациентов (OR = 23,40; р = 0,0080). Нами показано, что высокий уровень вчСРП также ассоциирован с рядом комплексных генотипов. Максимальный уровень вероятности высокой продукции вчСРП обеспечивается у пациентов с генотипами IL2-330TG/ VEGF-2578CA/VEGF+936CC и TNF-238GG/IL2-330TT/IL10-1082AG ДО = 10,86; р = 0,0221). Показана ассоциированность высокой продукции CD40 с рядом генотипов. Так, вероятность высокой продукции sCD40L в сыворотке крови у пациента достоверно возрастает при наличии в генотипе Л2-330Ш ДО = 6,93; р = 0,0187). При наличии в генотипе IL2-330TG/ ТТ эта

вероятность возрастает (OR = 12,67; р = 0,0197), а наличие более сложного генотипа IL2-330TG/ ТТ/ TNF-863СС приводит к еще более чем двукратному увеличению вероятности высокой продукции sCD40L ДО = 27,88; р = 0,0033).

Комплексные генетические комбинации, достоверно ассоциированные с низким уровнем белкового продукта TNFa, ^-1р, ^-1га, ^-8, sCD40L и вчСРП представлены в таблице 3.

ТАБЛИЦА 2. ГЕНОТИПЫ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С ВЫСОКИМ УРОВНЕМ ЛАБОРАТОРНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ (ОТСОРТИРОВАННЫЕ ВНУТРИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПО ВЕЛИЧИНЕ 01?)

Показатель Полиморфизм Генотип Высокие Низкие OR OR's 95%CI Р (tmF2) Sp

TNFa И2-330:11_10-1082:УЕСР-936 ТТ-АА-СС 28,57 0,00 21,39 1,13-406,56 0,0058 100,0

TNFa ТМР-238:11.2-330:11.10-1082:УЕСР-936 GG-TT-AA-CC 28,57 0,00 21,39 1,13-406,56 0,0058 100,0

TNFa ТМР-863:1Ь2-330:0-1082:УЕСР-936 СС-ТТ-АА-СС 28,57 0,00 21,39 1,13-406,56 0,0058 100,0

TNFa ТМР-863:ТМР-238:11.2-330:11.10-1082:УЕСР-936 CC-GG-TT-AA-CC 28,57 0,00 21,39 1,13-406,56 0,0058 100,0

TNFa 11_10-1082: \ZEGF2578 АА-СС 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa 11_1В-31:11_4-590:11_10-1082 ТТ-СС-АА 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa 11_2-330:УЕСР2578:УЕСР-936 ТТ-СС-СС 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa ТЫР-238:0-1082: УЕСР2578 GG-AA-CC 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa ТЫР-238:1Ь1 В-31:11_10-1082:11.10-592 GG-TC-AG-CC 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa ТМР-238:11.1В-31:11-10-592:УЕСР-936 GG-TC-CC-CC 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa ТЫР-238:1Ь2-330:1Ь10-1082 GG-TT-AA 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa TNF-238:IL2-330:VEGF2578:VEGF-936 GG-TT-CC-CC 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa TNF-308:TNF-238:VEGF2578:VEGF-936 GG-GG-CC-CC 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa TNF-308:VEGF2578:VEGF-936 GG-CC-CC 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa ТМР-863:ТМР-238: ^2-330: 0-1082 CC-GG-TT-AA 28,57 4,00 9,60 1,05-87,79 0,0365 96,00

TNFa TNF-238:VEGF2578:VEGF-936 GG-CC-CC 42,86 8,00 8,63 1,60-46,45 0,0128 92,00

TNFa УЕСР2578:УЕСР-936 СС-СС 42,86 8,00 8,63 1,60-46,45 0,0128 92,00

TNFa 11.2-330:11_4-590:УЕСР-936 ТТ-СС-СС 38,10 8,00 7,08 1,30-38,44 0,0282 92,00

TNFa TNF-238:IL2-330:IL4-590:VEGF-936 GG-TT-CC-CC 38,10 8,00 7,08 1,30-38,44 0,0282 92,00

TNFa TNF-238:VEGF2578 GG-CC 47,62 16,00 4,77 1,21-18,78 0,0274 84,00

TNFa \ZEGF2578 СС 47,62 16,00 4,77 1,21-18,78 0,0274 84,00

TNFa 11_2-330:УЕСР-936 ТТ-СС 52,38 20,00 4,40 1,20-16,17 0,0312 80,00

TNFa TNF-238:IL2-330:VEGF-936 GG-TT-CC 52,38 20,00 4,40 1,20-16,17 0,0312 80,00

IL-ip TNF-308:IL2-330 GG-TT 44,44 10,53 6,80 1,20-38,56 0,0293 89,47

IL-ip TNF-308:IL4-590 GG-CC 61,11 26,32 4,40 1,09-17,72 0,0489 73,68

IL-6 ТМР-308:11.1 В-31: УЕСР-936 GG-TT-CC 33,33 4,76 10,00 1,10-90,60 0,0448 95,24

IL-6 ТЫР-308:1Ь1 В-31 :УЕСР2578 GG-TT-CA 33,33 4,76 10,00 1,10-90,60 0,0448 95,24

IL-6 ТМР-308: В-31 :УЕСР2578:УЕСР-936 GG-TT-CA-CC 33,33 4,76 10,00 1,10-90,60 0,0448 95,24

SCD40L ТЫР-863:1Ь1 В-31: 11.2-330 CC-TT-TG 40,00 0,00 27,88 1,48-526,14 0,0033 100,00

ISO ISO

-Л ^

^ ,Р\

S, ¡о>

&

Ж £ л

R

3

о «

R Ж

0

01

R §

I

R Л Л О ?! R Л

UJ UJ -J

$

&

S'

л §

Is

II

3 ^

0 о*

йо

G, а 3 3

1

й- £ з §

й л

Таблица 2 (окончание)

Показатель Полиморфизм Генотип Высокие Низкие СЖ СЖ'э 95%С1 Р ^тР2) Эр

БС0401_ 11_ 1В-31:11_2-330 тт-те 40,00 5,00 12,67 1,40-114,42 0,0197 95,00

БС0401_ ТМР-863:ТЫР-238:11_2-330 сс-сс-те 40,00 5,00 12,67 1,40-114,42 0,0197 95,00

БС0401_ ТЫР-863:ТЫР-308:11.2-330 сс-сс-те 40,00 5,00 12,67 1,40-114,42 0,0197 95,00

БС0401_ ТЫР-863:11.2-330 сс-те 55,00 10,00 11,00 2,00-60,57 0,0057 90,00

БС0401_ ТЫР-863:11_2-330:УЕСР-936 сс-те-сс 35,00 5,00 10,23 1,12-93,35 0,0436 95,00

БС0401_ ТЫР-863:ТЫР-238:\/ЕСР2578:\/ЕСР-936 СС-СС-СА-СС 35,00 5,00 10,23 1,12-93,35 0,0436 95,00

БС0401_ 11.2-330 те 55,00 15,00 6,93 1,53-31,38 0,0187 85,00

вчСРП 11_2-330:УЕСР2578:УЕСР-936 те-сд-сс 36,36 5,00 10,86 1,21-97,06 0,0221 95,00

вчСРП ТЫР-238:11.2-330:11.10-1082 СС-ТТ-АС 36,36 5,00 10,86 1,21-97,06 0,0221 95,00

вчСРП ТМР-308:ТМР-238:11_10-1082:УЕСР-936 СС-СС-АС-СС 31,82 4,76 9,33 1,03-84,21 0,0459 95,24

вчСРП ТМР-863:ТМР-238:11_1В-31:УЕСР2578:УЕСР-936 СС-СС-ТТ-СА-СС 31,82 4,76 9,33 1,03-84,21 0,0459 95,24

вчСРП ТМР-863:ТЫР-238:УЕСР2578:УЕСР-936 СС-СС-СА-СС 45,45 14,29 5,00 1,14-22,02 0,0452 85,71

11_-8 ТЫР-238:11_6-174 сс-сс 36,84 0,00 23,40 1,23-446,87 0,0080 100,00

11.-8 ТЫР-863:ТЫР-238:11.6-174 сс-сс-сс 36,84 0,00 23,40 1,23-446,87 0,0080 100,00

11.-8 ТЫР-863:1Ь1 В-31:11_4-590 сс-тт-сс 42,11 5,26 13,09 1,44-119,34 0,0188 94,74

11.-8 ТЫР-863:ТЫР-238: 11.1 В-31:11_4-590 сс-сс-тт-сс 42,11 5,26 13,09 1,44-119,34 0,0188 94,74

11.-8 11.6-174 СС 36,84 5,26 10,50 1,14-96,58 0,0422 94,74

11.-8 ТЫР-863:11_6-174 сс-сс 36,84 5,26 10,50 1,14-96,58 0,0422 94,74

11_-8 ТМР-863:ТМР-238:11_1В-31:11_10-592 сс-сс-тт-сс 36,84 5,26 10,50 1,14-96,58 0,0422 94,74

11.-8 ТМР-863:ТМР-308:ТЫР-238:11.1 В-31 сс-сс-сс-тт 36,84 5,26 10,50 1,14-96,58 0,0422 94,74

11.-8 ТМР-863:ТМР-308:ТЫР-238:\/ЕСР-936 сс-сс-сс-сс 36,84 5,26 10,50 1,14-96,58 0,0422 94,74

11.-8 ТМР-863:ТЫР-238:11_1В-31 сс-сс-тт 63,16 21,05 6,43 1,52-27,24 0,0201 78,95

11.-8 ТЫР-863:ТЫР-238 сс-сс 84,21 47,37 5,93 1,29-27,28 0,0382 52,63

11.-8 ТЫР-863:ТЫР-238:11.4-590 сс-сс-сс 52,63 15,79 5,93 1,29-27,28 0,0382 84,21

11.-8 ТМР-863:ТМР-308:ТЫР-238 сс-сс-сс 52,63 15,79 5,93 1,29-27,28 0,0382 84,21

Ьо

к

л а

(V й-8-'

а' &

а Ь

§ о

гй

V к .а л

о §

Примечание. Здесь и в таблице 3: в столбцах «высокие» и «низкие» приведена частота (в %) встречаемости генотипа среди пациентов, значения лабораторного показателя у которых соответствуют высоким или низким уровням (диапазоны верхнего или нижнего квартилей);

013 - отношение шансов; ОР'э 95%С1 - 95%-й доверительный интервал для 013; Р (1:тР2) - значения Р разности частот встречаемости комбинаций генотипов в группах сравнения по двустороннему варианту точного метода Фишера; Бр - специфичность в %.

(V

й-

<У а

Ь

3 5

с ®

§ §

о

о^ Л;

ТАБЛИЦА 3. ГЕНОТИПЫ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С НИЗКИМ УРОВНЕМ ЛАБОРАТОРНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ (ОТСОРТИРОВАННЫЕ ВНУТРИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПО ВЕЛИЧИНЕ 01*)

Показатель Полиморфизм Генотип Высокие Низкие сж СЖ'э 95% СI Р ^тР2) Эр

ТЫ Ра 11.10-1082 СС 4,76 32,00 0,11 0,01-0,94 0,0274 95,24

ТЫ Ра 11.10-1082:11.10-592 СС-СС 4,76 32,00 0,11 0,01-0,94 0,0274 95,24

ТЫРа ТЫР-308:11.2-330:11.10-592 сс-тс-сс 4,76 32,00 0,11 0,01-0,94 0,0274 95,24

ТЫРа ТЫР-863:11.10-1082 сс-сс 4,76 32,00 0,11 0,01-0,94 0,0274 95,24

ТЫРа ТЫР-863:11.10-1082:11.10-592 сс-сс-сс 4,76 32,00 0,11 0,01-0,94 0,0274 95,24

ТЫРа ТЫР-863:11.10-592: УЕСР-936 сс-сс-ст 4,76 32,00 0,11 0,01-0,94 0,0274 95,24

ТЫРа ТЫР-863:ТЫР-238:11.2-330 сс-сс-тс 4,76 32,00 0,11 0,01-0,94 0,0274 95,24

ТЫРа 11_2-330:УЕСР2578 ТС-СА 9,52 36,00 0,19 0,04-0,99 0,0449 90,48

ТЫРа ТЫР-308:11.2-330 сс-тс 9,52 36,00 0,19 0,04-0,99 0,0449 90,48

И-1Р ТМР-863:ТМР-238:11_4-590:УЕСР-936 сс-сс-ст-сс 5,56 36,84 0,10 0,01-0,93 0,0422 94,44

БС0401_ 11.10-1082:11.10-592:УЕСР2578 АА-СА-СС 0,00 35,00 0,04 0,00-0,83 0,0083 100,0

БС0401_ 11_10-1082: \ZEGF2578 АА-СС 0,00 35,00 0,04 0,00-0,83 0,0083 100,0

БС0401_ 11_10-592:\/ЕСР2578 СА-СС 0,00 35,00 0,04 0,00-0,83 0,0083 100,0

БС0401_ I1.2-330:11.10-1082:11_10-592 ТТ-АА-СА 0,00 35,00 0,04 0,00-0,83 0,0083 100,0

БС0401_ ТЫР-238:11.10-1082:11.10-592:УЕСР2578 СС-АА-СА-СС 0,00 35,00 0,04 0,00-0,83 0,0083 100,0

БС0401_ ТЫР-238:11.10-1082: УЕСР2578 СС-АА-СС 0,00 35,00 0,04 0,00-0,83 0,0083 100,0

БС0401_ ТЫР-238:11.10-592:УЕСР2578 СС-СА-СС 0,00 35,00 0,04 0,00-0,83 0,0083 100,0

БС0401_ ТЫР-238:11.2-330:11.10-1082:11.1 0-592 СС-ТТ-АА-СА 0,00 35,00 0,04 0,00-0,83 0,0083 100,0

БС0401_ 11.6-174:11.10-1082:11.10-592:УЕСР2578 СС-АА-СА-СС 0,00 31,58 0,05 0,00-0,98 0,0083 100,0

БС0401_ 11.6-174:11.10-1082:УЕСР2578 СС-АА-СС 0,00 31,58 0,05 0,00-0,98 0,0083 100,0

БС0401_ 11.6-174:11.10-592: УЕСР2578 СС-СА-СС 0,00 31,58 0,05 0,00-0,98 0,0083 100,0

БС0401_ ТЫР-238:11.6-174:11.10-1082:11.10-592: УЕСР2578 СС-СС-АА-СА-СС 0,00 31,58 0,05 0,00-0,98 0,0083 100,0

БС0401_ ТЫР-238:11.6-174:11.10-1082:УЕСР2578 СС-СС-АА-СС 0,00 31,58 0,05 0,00-0,98 0,0083 100,0

БС0401_ ТЫР-238:11.6-174:11.10-592: УЕСР2578 СС-СС-СА-СС 0,00 31,58 0,05 0,00-0,98 0,0083 100,0

БС0401_ ТЫР-238:11.2-330:11.10-1082 СС-ТТ-АА 5,00 40,00 0,08 0,01-0,71 0,0197 95,00

БС0401_ ТЫР-238:11.1 В-31:11.10-1082:11.10-592 СС-ТТ-АА-СА 5,00 35,00 0,10 0,01-0,89 0,0436 95,00

БС0401_ ТЫР-238:11.10-1082:11.10-592 СС-АА-СА 10,00 45,00 0,14 0,02-0,75 0,0310 90,00

вчСРП 11.2-330:11.10-1082:11.10-592 ТТ-АА-СА 0,00 30,00 0,05 0,00-0,95 0,0074 100,0

вчСРП 11.10-1082:11.10-592 АА-СА 9,09 38,10 0,16 0,03-0,89 0,0339 90,91

11_-1га ТЫР-863:11.4-590:11.10-592 СС-СС-СС 0,00 50,00 0,03 0,00-0,69 0,0058 100,0

ьо ьо -Л ^

^ ,Р\

>> ¡о>

•и

&

Ж £ л

К

3 о ?! К Ж

0

04

К §

1

К

л л о ?! К Л

ил ил чо

$

&

а'

л §

£ II

3 ^

0 о*

йо

й, а 3 3

1

й- £ 3 §

а л

ф з i <в

I

о

О

(С 3

¿3 £

Sp 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 92,86 92,86 85,71 85,71 100,0 94,74 89,47 73,68 63,16

uT Е Ql 0,0159 0,0159 0,0159 0,0159 0,0159 0,0128 0,0329 0,0183 0,0461 0,0080 0,0078 0,0128 0,0489 0,0489

OR's 95%CI 0,00-0,90 06'0-00'0 06'0-00'0 0,00-0,90 06'0-00'0 0,01-0,57 0,01-0,76 0,01-0,59 0,02-0,78 0,00-0,82 0,01-0,56 0,02-0,59 0,05-0,83 0,05-0,83

OR 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,06 0,08 0,09 0,13 0,04 0,06 0, 0,21 0,21

Низкие 42,86 42,86 42,86 42,86 42,86 57,14 50,00 64,29 57,14 36,84 47,37 52,63 63,16 73,68

Высокие 0,00 ОО'О ОО'О ОО'О ОО'О 7,14 7,14 14,29 14,29 0,00 5,26 10,53 26,32 36,84

Генотип CC-GG-TG-CC CC-GG-CC-CC CC-GG-CC-CC CC-GG-GG-CC CC-GG-GG-CC-CC CC-GG-CC CC-TG-CC CC-CC CC-GG-GG CC-GC-CA GC-CA CC-GC GC CA

Полиморфизм TNF-863:TNF-238:IL2-330:IL10-592 TNF-863:TNF-238:IL4-590:IL10-592 TNF-863:TNF-308:IL4-590:IL10-592 TNF-863:TNF-308:TNF-238:IL10-592 TNF-863:TNF-308:TNF-238:IL4-590:IL10-592 TNF-863:TNF-238:IL10-592 TNF-863:IL2-330:IL10-592 TNF-863:IL10-592 TNF-863:TNF-308:TNF-238 TNF-863:IL6-174:VEGF2578 IL6-174:VEGF2578 TNF-863:IL6-174 IL6-174 VEGF2578

Показатель IL-1ra IL-1ra IL-1ra IL-1ra IL-1ra IL-1ra IL-1ra IL-1ra IL-1ra IL-8 IL-8 IL-8 IL-8 IL-8

Девять комплексных генетических комбинаций анализируемых нами полиморфных позиций позитивно ассоциированны с низкой продукцией TNFa. В составе 4 генотипов выявляется ^-2 -330 TG, в 4 генотипах ^-10 -592СС, в 4 генотипах

10-1082 GG, в 1 генотипе VEGF-2578 СA и в 1 генотипе VEGF+936 CТ. Связь низкой продукции показана только с генотипом TNFa -863СС/ TNFa -238СС/114-590СТ/ VEGF+936ОС. Напротив, низкая продукция ^-1га ассоциирована с 10 генотипами, в девяти из которых присутствует Л10-592 ОС генотип. Из пяти достоверно ассоциированных с низкой продукцией ^-8 два являются моногенотипами VEСF-2578 СА (OR = 0,21; р = 0,0489), Ш-174 СС ДО = 0,21; р = 0,0489), три генотипа содержат ^6-174 СС. Высокая вероятность низкой продукции у пациентов ^-8, в чьих генотипах выявляется носительство и VEСF-2578 СА и 11,6-174 СС: VEСF-2578 СА / Ш-174 СС ДО = 0,06; р = 0,0078) и Т^-863 CC/VEСF-2578 СА /П.6-174 СС ДО = 0,04; р = 0,0080). Оба генотипа, ассоциированных с низкой продукцией вчСРП содержат две полиморфные позиции гена ^10, причем данная ассоциированность усиливается практически в три раза при наличии ^2-330ТТ: 1Ы0-1082АА/ Ш0-592СА и И..2-330ТТ/ Ш0-1082АА/ 1Ы0-592СА ДО = 0,16; р = 0,0339 и OR = 0,05; р = 0,0074 соответственно). В составе каждой из 17 генетических комбинаций, достоверно ассоциированных с низкой продукцией sCD40L содержатся ^-10 -1082АА, либо а-10-592АС генотипы.

Обсуждение

В настоящее время существует множество данных относительно ассоциированности отдельных генотипов с развитием атеросклероза и не меньшее данных относительно связи продукции цитокинов, вчСРП и ряда других лабораторных показателей с риском развития, тяжестью течения и вероятностью острого коронарного случая у этих пациентов. Меньше работ, касающихся связи SNP цитокинов с уровнем транскрипции или сывороточной продукции при заболеваниях, причем, зачастую, информация противоречивая. Например, в одной из первых подобных работ авторами сообщается, что С аллель С^6- 174 С связан с низкой транскрипционной активностью в LPS- или ^-1-стимулированных HeLA клетках и с сниженными плазменными уровнями ^-6 [16]. В более поздних исследования показано, что С вариант связан с высокой промоторной активностью гена [19], в то же время, в проведенном недавно мета-анализе пока-

Гены цитокинов и биохимические маркеры атеросклероза Cytokine genes and atherosclerosis markers

зано отсутствие ассоциации между этим SNP и сывороточными уровнями IL-6 [24]. На здоровой группе из 200 мужчин было показано отсутствие связи между отдельными полиморфизмами (TLR-4299, TLR-4399, TNF-308, IL-18-137, IL-18-607, IFN-g+874, IL-6-174, IL-10-592 и IL-10-1082), продукты которых принимают участие в воспалительном ответе и изменениях в плазменных уровнях TNFa, IL-6 и IL-10. IL-18, вызванных внутривенным введением низкой дозой Escherichia coli эндотоксина [29]. Нами, тем не менее, выявлен ряд моногенотипов, ассоциированных с уровнем лабораторных показателей в группе мужчин с атеросклерозом. Показана ассоциированность высокой продукции TNFa с VEGF-2578 CC генотипом, sCD40L c IL2-330 TG генотипом, IL-8 c IL6-174CC генотипом, а низкой продукции TNFa с IL10-1082GG генотипом, IL-8 c IL6-174GC и VEGF-2578 CA генотипами. Эксперименты in vitro показали, что экспрессия IL-10 в L/W—стимулированных моноцитах связана с TNFa по типу отрицательной обратной связи и свидетельствует о том, что IL-10 вызывает по принципу отрицательной обратной связи замедление продукции воспалительных цитокинов. Заслуживает внимания то, что IL-10 оказывает эти противовоспалительные

эффекты при локальной продукции в сосудистой стенке [30]. В нашем исследовании именно высокоэкспрессирующий генотип IL10-1082GG [25] ассоциирован с низкой продукцией TNFa, что может быть элементом процесса обратного регулирования, упомянутого выше. Однако слабые ассоциации между SNP полиморфизмом помоторных регионов цитокинов и сывороточными или плазменными уровнями белковой продукции могут отражать вклад других факторов, таких, как общее состояние организма, образ жизни. Кроме того, нельзя не учитывать и влияние каскадных реакций на уровень сывороточной продукции. Нами показано, что вклад моногенотипов в ассоциированность с уровнем продукции значительно ниже, чем отношения шансов наличия определенного уровня белковой продукции, ассоциированного со сложным генотипом. Полученные данные позволяют сделать выводы о сложных генных сетях как основе регуляции цитокиновой активности. При этом можно предположить, что вовлеченная в воспалительный ответ единая генетическая сеть регулирует уровни каскада различных активных молекул, участвующих в процессе, тем самым, создавая определенный уровень и направленность иммунного ответа.

Список литературы / References

1. Бабич П.Н., Чубенко А.В., Лапач С.Н. Применение современных статистических методов в практике клинических исследований. Сообщение третье. Отношение шансов: понятия, вычисление и интерпретация // Украинский медицинский журнал. 2005. Т. 46, № 2. С. 113-119. [Babich P.N., Chubenko A.V, Lapach S.N. Primenenie sovremennykh statisticheskikh metodov v praktike klinicheskikh issledovaniy. Soobshchenie trefe. Otnoshenie shansov: ponyatiya, vychislenie i interpretatsiya [Application of modern statistical methods in practice of clinical researches. The third message. Odds rations: concepts, calculation and interpretation]. Ukrainskiy meditsinskiy zhurnal = Ukrainian Medical Journal, 2005, Vol. 46, no. 2, pp. 113-119.]

2. Богова О.Т., Чукаева И.И. Инфаркт миокарда. Воспаление и прогноз // Российский кардиологический журнал. 2003, Т. 4. C. 18-23. [Bogova O.T., Chukaeva I.I. Infarkt miokarda. Vospalenie i prognoz [Myocardium infarct. Inflammation and prognosis]. Rossiyskiy kardiologicheskiy zhurnal = Russian Cardiological Journal, 2003, Vol. 4, pp. 18-23.]

3. Вейр Б. Анализ генетических данных: Дискретные генетические признаки. Пер. с англ. М.: Мир, 1995. 400 с. [Veyr B. Analiz geneticheskikh dannykh: Diskretnye geneticheskiepriznaki. Per. s angl. [The analysis of the genetic data: Discrete genetic attributes. Engl. Transl]. Moscow: World, 1995. 400 p.]

4. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. М.: Практика, 1998, 459 с. [Glants S. Mediko-biologicheskayastatistika:Per. sangl. [Medical and biologic statistics. Engl. Transl]. Moscow: Practice, 1998. 459 p.]

5. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л.: Медицина, 1983. 296 с. [Gubler E.V Vychislitelnye metody analiza i raspoznavaniya patologicheskikh protsessov [Computing methods of the analysis and recognition of pathological processes]. Leningrad: Medicine, 1983. 296 p.]

6. Животовский Л.А. Популяционная биометрия. М.: Наука, 1991. 271 с. [Zhivotovskiy L.A. Populyatsionnaya biometriya [Biometry of population]. Moscow: Science, 1991. 271 р.]

7. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ. Statistica. М.: Медиасфера, 2002. 312 с. [Rebrova O.Yu. Statisticheskiy analiz meditsinskikh dannykh. Primenenie paketa prikladnykh programm. Statistica [Statistical analysis of the medical data. Application of a package of applied programs Statistica]. Moscow: Mediasfera, 2002, 312 p.]

8. Певницкий Л.А. Статистическая оценка ассоциаций HLA-антигенов с заболеваниями // Вестник АМН СССР. 1998. № 7. С. 48-51. [Pevnitskiy L.A. Statisticheskaya otsenka assotsiatsiy HLA-antigenov s zabolevaniyami [Statistical assessment of HlA-antigen associations with diseases]. VestnikAMNSSSR = Bulletin of the Academy of Medical Sciences of the USSR, 1998, no. 7, pp. 48-51.]

9. Шевченко А.В., Голованова О.В., Коненков В.И. Особенности полиморфизма промоторных регионов генов цитокинов IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 и TNFa европеоидного населения Западной Сибири // Иммунология. 2010. T. 4. С. 176-181. [Shevchenko A.V, Golovanova O.V., Konenkov VI. Osobennosti polimorfizma promotornykh regionov genov tsitokinov IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 i TNFa evropeoidnogo naseleniya Zapadnoy Sibiri [Feature of promoter polymorphism of cytokines genes IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 and TNFa at Western Siberia Caucasoid]. Immunologiya = Immunology, 2010, Vol. 4, pp. 176-181.]

10. Шорников Б.С. Классификация и диагностика в биологическом эксперименте. Проблема оценки и классификации интерьерных признаков человека М.: Наука, 1979. 142 с. [Shornikov B.S. Klassifikatsiya idiagnostika v biologicheskom eksperimente. Problema otsenki iklassifikatsii interernykhpriznakov cheloveka [Classification and diagnostics in biological experiment. A problem of an estimation and classification humans interior attributes]. Moscow: Science, 1979. 142 p.]

11. Юнкеров В.И., Григорьев С.Г. Математико-статистическая обработка данных медицинских исследований. СПб., ВМедА, 2002. 266 с. [Yunkerov V.I., Grigorev S.G. Matematiko-statisticheskaya obrabotka dannykh meditsinskikh issledovaniy [Mathematican-statistical data processing of medical researches]. St. Petersburg: ВМеёА, 2002. 266 p.]

12. Armstrong E.J., Morrow D.A., Sabatine M.S. Inflammatory biomarkers in acute coronary syndromes part i: introduction and cytokines. Circulation., 2006, Vol. 113, pp. e72-e75.

13. Banyasz I., Szabo S., Bokodi G., Vannay A., Visarhelyi B., Szabo A., Tulassay T., Jr J.R. Genetic polymorphisms of vascular endothelial growth factor in severe preeclampsia. Mol. Hum. Reprod., 2006, Vol. 12, pp. 233-236.

14. Berger P., Mcconnell J.P., Nunn M., Kornman K.S., Sorrell J., Stephenson K., Duff G.W C-reactive protein levels are influenced by common IL-1 gene variations. Cytokine, 2002, Vol. 17, pp. 171-174.

15. Ferrara N., Gerber H.P., Le Couter J. The biology of VEGF and its receptors. Nat. Med., 2003, Vol. 9, pp. 669-676.

16. Fishman D., Faulds G., Jeffery R., Mohamed-Ali V, Yudkin J. S., Humphries S., Woo P. The effect of novel polymorphisms in the interleukin-6 (IL-6) gene on IL-6 transcription and plasma IL-6 levels, and an association with systemic-onset juvenile chronic arthritis. J. Clin. Invest., 1998, Vol. 102, pp. 1369-1376.

17. Gotsman I., Stabholz A., Planer D., Pugatsch T., Lapidus L., Novikov Y., Masrawa S., Soskolne A., Lotan C. Serum cytokine tumor necrosis factor-alpha and interleukin-6 associated with the severity of coronary artery disease: indicators of an active inflammatory burden? IMAJ, 2008, Vol. 10, pp. 494-498.

18. Hazelzet J.A., van der Voort E., J. Lindemans, Heerdt P.G., Neijens H.J. Relation between cytokines and routine laboratory data in children with septic shock and purpura. Intensive Care Med., 1994, Vol. 20, pp. 371-374.

19. Heesen M., Bloemeke B., Heussen N., Kunz D. Can the interleukin-6 response to endotoxin be predicted? Studies of the influence of a promoter polymorphism of the interleukin-6 gene, gender, the density of the endotoxin receptor CD14, and inflammatory cytokines. Crit Care Med., 2002, Vol. 30, pp. 664-669.

20. John S., Turner D., Donn R., Sinnott P., Worthington J., Ollier WE.R., Hutchinson I.V., Hajeer, A.H., Two novel biallelic polymorphisms in the IL-2 gene. Eur. J. Immunogenet., 1998, Vol. 25, pp. 419-420.

21. Kim J.K., Oh D., Kwak S.Y, Han J. H., Chung Y. S., Kim N.K. Genetic polymorphism of vascular endothelial growth factor (VEGF C936T) in the korean population. Korean J. Biol. Sci., 2003, Vol. 7, pp. 261-264.

2014, Т. 16, № 4 Гены цитокинов и биохимические маркеры атеросклероза

2014, Vol. 16, No 4 Cytokine genes and atherosclerosis markers

22. Lai J., Zhou D., Xia S., Shang Y., Zhu J., Pan J., Hua B., Zhu Y., Cui L. Association of interleukin-1 gene cluster polymorphisms with ischemic stroke in a Chinese population. Neurol. India, 2006, Vol. 54, pp. 366369.

23. Latkovskis G., Licis N., Kalnins U. C-reactive protein levels and common polymorphisms of the interleukin-1 gene cluster and interleukin-6 gene in patients with coronary heart disease. Eur. J. Immunogenet., 2004, Vol. 31, pp. 207-213.

24. Qi L., van Dam R.M., Meigs J.B., Manson J.E., Hunter D., Hu F.B. Genetic variation in IL6 gene and type 2 diabetes: tagging-SNP haplotype analysis in large-scale case-control study and meta-analysis. Hum. Mol. Genet., 2006, Vol. 15, pp. 1914-1920.

25. Rees L., Wood N., Gillespie K., Lai K., Gaston K., Mathieson P. The interleukin-10-1082 G/A polymorphism: allele frequency in different populations and functional significance.Cell. Mol. Life Sci., 2002,Vol. 59, pp. 560-569.

26. Ross R. Atherosclerosis — an inflammatory disease. N. Engl. J. Med., 1999, Vol. 340, pp. 115-126.

27. Roy H., Bhardwaj S., Yla-Herttuala S. Biology of vascular endothelial growth factors. FEBS Lett., 2006, Vol. 580, pp. 2879-2887.

28. Smith B.M., Irving S., Sheldon J., Cole D., Kaski J.C. Serum levels of the anti-inflammatory cytokine interleukin-10 are decreased in patients with unstable. Circulation , 2001, Vol. 104, p. 746.

29. Taudorf S., Krabbe K.S., Berg R.M.G., M0ller K.,. Pedersen B.K., Bruunsgaard H. Common studied polymorphisms do not affect plasma cytokine levels upon endotoxin exposure in humans. Clin. Exp. Imm., 2008, Vol. 152, pp. 147-152.

30. Tedgui A., Mallat Z. Anti-inflammatory mechanisms in the vascular wall. Review Circ. Res., 2001, Vol. 88, pp. 877-887.

Meditsinskaya Immunologiya/ Medical Immunology 2014, Vol. 16, No 4, pp. 333-344

ORIGINAL ARTICLES

INFLAMMATORY CYTOCINES GENES POLYMORPHISM ASSOCIATION WITH SERUM LEVELS OF BIOCHEMICAL MARKERS AT THE CORONARY ATHEROSCLEROSIS

Shevchenko A.V.a, Prokofyev V.F.a, Ragino Yu.I.b, Chernjavski A.M.c, Voevoda M.I.b, Konenkov V.I.a

a Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology, Siberian Branch of RAMS, Novosibirsk, Russian Federation

b Research Institute of Therapy, Siberian Branch of RAMS, Novosibirsk, Russian Federation

c E.N. Meshalkin State Research Institute of Circulation Pathology, Russian Ministry of Health Care, Novosibirsk, Russian Federation

Abstract. We have assumed, that serum production of biological markers that are significantly reflecting a risk degree for atherosclerotic process and acute coronary events may be modified by functional polymorphisms of a functional complex of genes that may be involved into inflammatory process and influence mutual regulation of their production. Therefore, we have assayed a number of appropriate gene polymorphisms and assessed frequency distribution for several promoter genotypes and their combinations, e.c., TNF-A863C; TNF-A308G; TNF-A238G;IL1BC-31T;IL1B-C511T;IL4-C590T; IL6-C174G; IL10A-1082G, IL10-A592Cgenes, regulatory sites of VEGF-A2578C, VEGF+T936gene variants. We have also measured serum levels of TNFa, IL-ip, IL-6, IL-8, IL-1 receptor antagonist (IL-1ra), C-reactive protein, soluble CD40 ligand receptor (sCD40L) in the patients with atherosclerosis. In general, it has been shown that contribution of single cytokine genotypes to the association with level of their production is much lower, than odds ratio of changed protein production associated with a compound genotype. (Med. Immunol., 2014, vol. 16, N 4, pp 333-344)

Keywords: atherosclerosis, cytokine genes, polymorphism, biochemical parameters

Authors:

Shevchenko A.V, PhD (Biology), Senior Research Associate, Laboratory of Clinical Immunogenetics, Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology, Siberian Branch of RAMS, Novosibirsk, Russian Federation Prokofyev VF., PhD (Medicine), Leading Researh Associate, Laboratory of Clinical Immunogenetics, Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology Siberian Branch of RAMS, Novosibirsk, Russian Federation Ragino Yu.I., PhD, MD (Medicine), Professor, Head, Laboratory of Clinical Biochemical and Hormonal Studies of Therapeutic Diseases, Research Institute of Therapy, Siberian Branch of RAMS, Novosibirsk, Russian Federation Chernjavski A.M., PhD, MD (Medicine), Professor, Head, Center for Surgery of Aorta, Coronary and Peripheral Arteries, E.N.Meshalkin State Research Institute of Circulation Pathology, Russian Ministry of Health Care, Novosibirsk, Russian Federation

Voevoda M.I., PhD, MD (Medicine), Professor, RAMS Corresponding Member, Director, Research Institute of Therapy, Siberian Branch of RAMS, Novosibirsk, Russian Federation

Konenkov VI., PhD, MD (Medicine), Professor, Full Member of RAMS, Director, Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology, Siberian Branch of RAMS, Novosibirsk, Russian Federation

Address for correspondence:

Shevchenko Alla V.

PhD, Senior Research Associate, Laboratory of Clinical Immunogenetics, Research Institute of Clinical and

Experimental Lymphology, Siberian Branch of RAMS

630117, Russian Federation, Novosibirsk, Timakova str., 2.

Phone: 7 (383) 311-05-40.

E-mail: shalla64@mail.ru

Received 05.06.2013

Revision received 02.08.2013

Accepted 22.08.2013