CC BY
40
№ 5 - 2012 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки
УДК 611.013.85:618.3-008.6
АССОЦИАЦИИ МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ С МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ ХАРАКТЕРИСТИКАМИ ПЛАЦЕНТЫ У БЕРЕМЕННЫХ С ПРЕЭКЛАМПСИЕЙ
А.В. Елыкова
ФГОУВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ») (г. Белгород)
В статье приведены некоторые результаты ассоциаций молекулярно-генетических маркеров с морфологическими характеристиками плаценты у беременных с преэклампсией русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России. Проведен комплексный анализ частот аллелей и генотипов у беременных с преэклампсией и беременных с нормально протекающей беременностью.
Ключевые слова: преэклампсия, степень тяжести преэклампсии, плацента в стадии компенсации, декомпенсации, субкомпенсациию.
Елыкова Анна Владимировна — аспирант кафедры медико-биологических дисциплин ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», контактный телефон: 8 (4722) 301-383, e-mail: elykova@rambler.ru
Введение. До настоящего времени преэклампсия остается одним из самых тяжелых осложнений беременности. В России частота преэклампсии из года в год увеличивается и достигает 16-21 % [2]. По данным И. С. Сидоровой [3], частота развития преэклампсии в последнее десятилетие возросла в 2,3 раза. Преэклампсия является одним из наиболее тяжелых осложнений беременности, которое приводит к хронической внутриутробной гипоксии плода, которая нередко приводит к его анте- и интранатальной гибели. На сегодняшний день определен широкий спектр генов, неблагоприятные варианты которых могут опосредовать возникновение преэклампсии [1]. По современным представлениям, преэклампсия является мультифакториальным заболеванием. Важную роль в патогенезе некоторых мультифакториальных заболеваний играет полиморфизм генов вазоактивных гормонов. В соответствии с этим нами проведено изучение ассоциации генетических полиморфизмов альдостеронсинтазы (-344C/T CYP11B2) и химазы (-1903G/A СМА) с морфологическими характеристиками плаценты у родильниц с преэклампсией.
Материалы и методы. Выборка беременных была сформирована на базе перинатального центра областной клинической больницы г. Белгорода (общий объем выборки составил 456 беременных). В выборку включены женщины русской национальности, являющиеся уроженками Центрального Черноземья России. Клинико-лабораторное и инструментальное обследование женщин проводилось на базе Перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. Среди беременных 209 пациенток было с физиологическим течением гестации и 250 женщин с беременностью, осложнённой преэклампсией: 94 беременных с преэклампсией легкой степени тяжести, 100 — с преэклампсией средней степени тяжести и 55 — с тяжелым течением преэклампсии.
Среди беременных (n = 330) проведена оценка маточно-плацентарного и плодовоплацентарного кровотока на аппарате «Aloka а10». В исследуемой выборке у 77-ми (23,55 %) женщин плацента находилась в стадии компенсации, у 192-х (58,10 %) — в стадии субкомпенсации, а у 61-й (18,35 %) — в стадии декомпенсации. Материалом для исследования послужила венозная кровь в объеме 8-9 мл, взятая из локтевой вены пробанда. Забор венозной крови производили в пробирки с консервантом, содержащим
0,5М раствор ЭДТА (рН = 8,0). Выделение геномной ДНК из периферической крови проведено методом фенольно-хлороформной экстракции. Выделенную ДНК использовали для проведения полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации проводили в 2 % агарозном геле, предварительно окрашенном бромистым этидием.
Результаты исследований. Результаты анализировали в проходящем ультрафиолетовом свете в темном боксе с трансиллюминатором. Полученные данные представлены в табл. 1.
Таблица 1
Распределение генотипов, наблюдаемой и ожидаемой гетерозиготности, индекса фиксации полиморфных маркеров гена альдостеронсинтазы (-344C/T CYP11B2) и гена химазы (-1903G/A СМА) среди женщин с преэклампсией и у женщин с нормально протекающей беременностью
Локусы, показатели Женщины с нормально протекающей беременностью (n = 209) Беременные с преэклампсией (n = 250)
IN 209 250
-344СС 42 (38,76) 50 (56,64)
-344T/C CYP11B2 No(Ne) -344ТС 96 (102.49) 138 (124,71)
-344ТТ 71 (67.76) 62 (68,64)
X2(HWE)(p) 0,84 (> 0,05) 2.84 (> 0,05)
No(Ne) 0,46 (0,49) 0,55 (0,50)
D(t) -0,06 (0,88) +0,11 (1.68)
EN 207 249
-1903 GG 42 (39,13) 46 (46,84)
No(Ne) -1903 GA 96 (101,74) 124 (122,31)
-1903 G/А CMA -1903 AA 69 (66,13) 79 (79,84)
X2(HWE)(p) 0,65 (> 0,05) 0,05 (> 0,05)
No(Ne) 0,46 (0,49) 0,50 (0,49)
D (t) -0,06 (0,79) +0,01 (0,21)
Примечание: EN — объем выборки; No — наблюдаемое распределение фенотипов; Ne — ожидаемое распределение фенотипов; x2(HWE) — показатель соответствия наблюдаемого распределения ожидаемому, исходя из равновесия Харди-Вайнберга; p — достигнутый уровень значимости для x2(HWE); Ho — наблюдаемая гетерозиготность; He — ожидаемая гетерозиготность; D — индекс фиксации Райта; t — критерий Стьюдента, характеризующий индекс фиксации
Расчет фенотипических и генных частот проводили стандартными методами. Для сравнения частот аллелей и генотипов между различными группами использовали критерий х с поправкой Иетса на непрерывность. Вычисления производили в таблицах сопряженности 2^2. С целью оценки соответствия наблюдаемого распределения ожидаемому, исходя из равновесия Харди-Вайнберга, использовали критерий х .
Обсуждение результатов. В результате исследования беременных с преэклампсией легкой степени тяжести частота гомозигот -1903 GG СМА составила 18,09 %, гетерозигот -1903 GA — 48,94 %, гомозигот -1903 AA — 32,97 %, частоты аллелей -1903 G и -1903 A равны 42,55 и 57,45 % соответственно. У женщин со средней степенью тяжести преэклампсии частота гомозигот -1903 GG СМА составила 20,00 %, гетерозигот -1903 GA — 51,00 %, гомозигот -1903 AA — 29,00 %, частоты аллелей -1903 G и -1903 A равны 45,50 и 54,50 % соответственно. У беременных с тяжелой степенью частота гомозигот -1903 GG составила 16,36 %, гетерозигот -1903 GA — 49,09%, гомозигот -1903 AA — 34,55 %, частоты аллелей -1903 G и -1903 A равны 40,91 и 59,09 % соответственно. В результате проведенного комплексного анализа частот аллелей и генотипов беременных с преэклампсией и беременных без преэклампсии статистически достоверных отличий выявлено не было (р > 0,05).
При оценке исследования беременных, имеющих плаценту в стадии компенсации, частота гомозигот -1903 GG СМА составила 20,78 %, гетерозигот -1903 GA — 49,35 %, гомозигот -1903 AA — 29,87 %, частоты аллелей -1903 G и -1903 A равны 45,55 и 54,55 % соответственно. У женщин, имеющих плаценту в стадии субкомпенсации, частота гомозигот -1903 GG СМА составила 18,85 %, гетерозигот -1903 GA — 50,26 %, гомозигот -1903 AA — 30,89 %, частоты аллелей -1903 G и -1903 A равны 43,98 и 56,02 % соответственно. У беременных, имеющих плаценту в стадии декомпенсации, частота гомозигот -1903 GG составила 11,67 %, гетерозигот -1903 GA — 48,33 %,
гомозигот -1903 AA — 40,00 %, частоты аллелей -1903 G и -1903 A равны 35,83 и 64,17 % соответственно.
Aналогичной направленности результаты получены для гена CYP11B2: частота гомозигот -344СС беременных с преэклампсией легкой степени тяжести составила 18,95 %, гетерозигот -344ТС — 60,00 %, гомозигот -344ТТ — 21,05 %, частоты аллелей -344С и -344T равны 48,95 и 51,05 % соответственно. У женщин со средней степенью тяжести преэклампсии частота гомозигот -344СС CYP11B2 составила 19,00 %, гетерозигот -344ТС — 55,00 %, гомозигот -344ТТ — 26,00 %, частоты аллелей -344С и -344T равны 46,50 и 53,50 % соответственно. У беременных с тяжелой степенью тяжести частота гомозигот -344СС составила 23,64 %, гетерозигот -344ТС — 47,27 %, гомозигот
-344ТТ — 29,09 %, частоты аллелей -344С и -344T равны 47,27 и 52,73 %
соответственно. При сравнительном анализе частот аллелей и генотипов беременных с преэклампсией и беременных без преэклампсии статистически достоверных отличий выявлено не было (p > 0,05).
При проведении анализа беременных, имеющих плаценту в стадии компенсации, частота гомозигот -344СС CYP11B2 составила 19,23 %, гетерозигот -344ТС — 61,54 %,
гомозигот -344ТТ — 19,23 %, частоты аллелей -344С и -344T равны 50,00 и 50,00 % соответственно. У женщин имеющих плаценту в стадии субкомпенсации частота
гомозигот -344СС составила19,79 %, гетерозигот -344ТС — 48,96 %, гомозигот
-344ТТ — 31,25 %, частоты аллелей -344С и -344T равны 44,27 и 55,73 %
соответственно. У беременных, имеющих плаценту в стадии декомпенсации, частота гомозигот -344СС составила 19,67 %, гетерозигот -344ТС — 57,38 %, гомозигот
-344ТТ — 22,95 %, частоты аллелей -344С и -344T равны 48,36 и 51,64 %
соответственно.
Выводы. Таким образом, в результате проведённого исследования было установлено, что фактором риска развития легкой степени тяжести преэклампсии является генотип -344TT CYP11B2 (OR = 1,77), а протективным фактором является генотип -344ТС CYP11B2 (OR = 0,52). Не выявлено ассоциаций молекулярно-генетических маркеров гена химазы (1903G/A СМA) и гена альдостеронсинтазы (-344C/T CYP11B2) с морфологическими изменениями плаценты у беременных с преэклампсией.
Список литературы
1. Возможности современной генетики в определении наследственной предрасположенности к гестозу / Е. В. Мозговая [и др.] // Материалы XI Всероссийского научного форума «Мать и дитя». — М. : 2010. —151 с.
2. Эндотелиальная дисфункция при гестозе. Патогенез, генетическая предрасположенность, диагностика и профилактика : методич. рекомендации / Е. В. Мозговая [и др.]. — СПб., 2003.
3. Сидорова И. С. Гестоз / И. С. Сидорова. — М. : Медицина, 2003. — 416 с.
ASSOCIATIONS OF MOLECULAR AND GENETIC MARKERS WITH MORPHOLOGICAL CHARACTERISTICS OF PLACENTA AT PREGNANT WOMEN WITH PREECLAMPSIA
A.V. Elykova
FSAEIHPE «Belgorod State National Research University» (NRU «BelSU») (Belgorod c.)
The results of associations of molecular and genetic markers with morphological characteristics of placenta at Russian pregnant women with preeclampsia are given in article. These women are natives of Central Black Earth region of Russia. The complex analysis of frequencies of alleles and genotypes at pregnant women with preeclampsia and at pregnant women with normally proceeding pregnancy is performed.
Keywords: preeclampsia, preeclampsia severity level, placenta in stage of compensation, decompensation, subcompensation.
About authors:
Elykova Anna Vladimirovna — post-graduate student of medicobiological disciplines chair at FSAEI HPE «Belgorod State National Research University», contact phone: 8 (4722) 301 -383, e-mail: elykova@rambler.ru
List of the Literature:
1. Possibilities of modern genetics in definition of genetic predisposition to gestosis / E. V. Mozgovaya [etc.] // Materials of the XI All-Russia scientific forum «Mother and child». — M: 2010.—151 P.
2. Endothelial dysfunction at gestosis. Pathogenesis, genetic predisposition, diagnostics and prophylaxis: methodological references / E. V. Mozgovaya [etc.]. — SPb., 2003.
3. Sidorova I. S. Gestosis / I. S. Sidorov. — M: Medicine, 2003. — 416 P.
