CC BY
58
УДК 616.34.008.87-006.5-81-018.73
Е.Л. Кичигина, И.Ю. Сафронова, С.М. Попкова, А.Г. Леонтьева, Е.Б. Ракова, И.В. Мыльникова'
АРХИТЕКТОНИКА СИМБИОНТОЙ МИКРОФЛОРЫ У ДЕТЕЙ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ
Институт эпидемиологии и микробиологии ГУ НЦ МЭ ВСНЦ СО РАМН (Иркутск) 1НИИ медицины труда и экологии человека АФ ГУ НЦ МЭ ВСНЦ СО РАМН (Ангарск)
В статье представлены материалы об особенностях формирования естественных микробиоценозов у детей г. Ангарск. Применена рейтинговая, система оценки исследуемых биотопов.
Ключевые слова: микробная экология, кишечник, носоглотка, дисбактериозы
SYMBIOTIC MICROFLORA ARCHITECTONICS IN CHILDREN UNDER BAD ENVIRONMENT
E.L. Kichigina, I.Yu. Safronova, S.M. Popkova, A.G. Leontjeva, E.B. Rakova, I.V. Milnikova'
Institute of Epidemiology and Microbiology SCME ESSC SD RAMS, Irkutsk 1Scientific Research Institute of Labour Medicine and Human EcologyAF SCME ESSC SD RAMS,
Angarsk
Data concerning peculiarities of natural intestinal microbiocenosis forming in children of Angarsk town are presented in the article. Assessment rating system of biotopes examined was applied.
Key words: microbial ecology, intestine, nasopharynx, intestuinal dysebacteriosis
Нормальная микрофлора рассматривается с современных позиций как качественное и количественное соотношение популяций микробов отдельных органов и систем, поддерживающих биохимическое, метаболическое и иммунное равновесие организма хозяина, необходимое для сохранения здоровья человека [2, 3]. Бактерии нормоф-лоры являются одной из основных составляющих устойчивости организма к неблагоприятным факторам окружающей среды [5]. При превышении некоторой пороговой величины отрицательно воздействующих на организм токсических факторов микробиоценозы выходят из состояния равновесия, что вызывает микроэкологические и иммунные нарушения.
Создание крупных промышленных комплексов, многокомпонентное загрязнение окружающей среды приводят к росту экопатологии в структуре заболеваемости на территории отдельных регионов нашей страны, в том числе Иркутской области.
В научной литературе представлены многочисленные убедительные факты изменения состояния симбиотической микрофлоры при воздействии на организм человека неблагоприятных факторов внешней среды. Нарушению микрофлоры предшествует селекция как симбионтов, так и условно-патогенных микроорганизмов (УПМ), обладающих высокими персистентными характеристиками [1, 2].
Перечисленное диктует необходимость расширения и углубления исследований в области микробной экологии, направленных на выяснение закономерностей саморегуляции биоценозов и их оценки.
Цель исследования — оценить разнообразие симбионтной микрофлоры и рейтинг высевае-мости условно-патогенных микроорганизмов из кишечника и носоглотки у детей различных возрастных групп в городе с повышенным уровнем техногенного загрязнения (г. Ангарск Иркутской области).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Проведено бактериологическое обследование двух групп детей: 1-я группа — 26 детей в возрасте 6 лет , 2-я группа — 31 школьник в возрасте 12 — 13 лет. По критериям здоровья дети относились к группе II — Б.
Для исследования микрофлоры кишечника и слизистых оболочек носа и зева использовали стандартный комплекс микробиологических методов [4]. Первичный посев материала и идентификацию изолятов осуществляли общепринятыми методами, согласно Методическим указаниям [6]. Степень об-семененности образца выражали Ьд числом колониеобразующих единиц (Ьд КОЕ/г) на 1 г фекальной массы. Чувствительность выделенных штаммов стафилококков к антибактериальным препаратам определяли с помощью диско-диффузионного метода в соответствии с рекомендациями ЫССЬ8 [7]. Использовали диски с препаратами: ампициллин, оксациллин, канамицин, гентамицин, рифампицин, цефалексин, клиндомицин, норфлоксацин. Кроме того, все штаммы стафилококка были проверены на чувствительность к жидкому стафилококковому бактериофагу производства «Микроген», г. Пермь.
Обработку бактериологических показателей на дисбактериоз кишечника проводили с исполь-
зованием разработанных нами балльных оценок. Каждое количественное отклонение того или иного микроорганизма от физиологической нормы регистрировали значением — «1», а отсутствие отклонений — «0».Таким образом, теоретически индивид, имея отклонения от нормы по 8-и основным показателям, мог получить суммарный балл равный 8-и единицам. Таким образом, анализ архитектоники различных биотопов был оценен с помощью данного приема.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
При анализе полученных бактериологических материалов на дисбактериоз кишечника в первую очередь было обращено внимание на содержание бифидобактерий и лактобактерий, как основных симбионтов кишечного микробиоценоза. У 18 человек дошкольников, что составило почти 70 %, уровень бифидобактерий был в пределах нормы. На нижней границе нормы этот показатель был у 26,92 % детей в этой группе, и только у одного ребенка отмечена концентрация бифидобактерий ниже нормы. В отношении лактобактерий ситуация в этой группе была более устойчивая: у всех обследованных детей этой возрастной группы их концентрация была высокой и составила 8 1д КОЕ/г.
Из таблицы 1 видно, что у школьников отмечаются изменения этих показателей в сторону их снижения относительно нормативных.
Так, у обследованных школьников в 10 раз снизилась частота встречаемости случаев с физиологичным уровнем бифидобактерий и преобладали
дети с низким содержанием лактобактерий в исследуемом материале. Даже оценивая только рассмотренные нами основные показатели симбион-тной микрофлоры можно полагать, что за 6 лет у детей г. Ангарска с возрастом происходит формирование кишечного дисбактериоза 1 — 11 степени.
Как было показано нашими предыдущими исследованиями [5], немаловажную роль в возникновении устойчивого дисбактериоза кишечника играет появление атипичных форм кишечной палочки: со слабыми ферментативными свойствами, лактозонегативной, гемолитической. Следует отметить, что возможно различное процентное соотношение этих форм. И, как правило, даже в случаях, когда количественное содержание бифидо- и лактобактерий в норме, но при этом выделенные изоляты E. сoli в 100 % случаев являются неферментирующими, то клинические проявления дисбактериоза более значимы.
Так, при проведенном нами обследовании было установлено, что у детей 1-й группы только в 2-х случаях была идентифицирована лактозонегативная кишечная палочка. У школьников процент таких проб увеличился в 8 раз, что составило 61,29 %. Причем, следует отметить, что во всех выявленных случаях титр этого вида кишечной палочки был высоким и составлял 8 1д КОЕ/г. Также было установлено, что во второй группе у 41,9 % детей титры типичной кишечной палочки были ниже нормы и составляли всего 5 1д КОЕ/г.
Условно-патогенная микрофлора (УПМ) в обеих группах была представлена в единичных слу-
Таблица 1
Соотношение симбионтных микроорганизмов кишечного микробиоценоза в разных возрастных
группах детей
М/о Бифидобактерии Лактобактерии
Показатель норма (12-9 1д), % нижняя граница нормы (8 1д), % ниже нормы (7 1д),% норма (8 1д), % нижняя граница нормы (6 1д), % ниже нормы (5 1д), %
1 группа 69,23 ± 9,05 26,92 ± 8,69 3,84 ± 8,76 100 0 0
2 группа 6,45 ± 4,41 38,72 ± 8,74 54,83 ± 8,93 0 19,35 ± 7,09 80,6 ± 7,10
Рис. 1. Архитектоника микроэкологических нарушений у детей г Ангарска в рейтинговой оценке.
чаях клебсиеллой, цитробактером, протеем, энтерококком. Но что характерно, ни в одном случае не был выделен золотистый стафилококк. Однако обращает на себя внимание тот факт, что с возрастом у детей в 2 раза чаще выделяются патогенные грибы р. Candida, определяемые в диагностически значимых титрах: в 1-й группе число их составляло 7,4 % от числа обследованных, а во 2-й — уже 16,12 %. Неблагоприятным и настораживающим обстоятельством можно считать факт выделения у большинства детей в 1-й группе (77,7 %) и во 2-й группе (90,32 %) дрожжеподобных грибов.
Как уже было сказано ранее, интерес представлял балльный анализ архитектоники выявленных нарушений в изучаемых группах. В рейтинговой оценке мы использовали следующие критерии: «0» — физиологичное, или нормальное, содержание бифидобактерий, лактобактерий, нормальной кишечной палочки, отсутствие ее атипичных и гемолитических форм; «1» — дефицит симбионтых микроорганизмов, наличие лактозонегативной гемолитической кишечной палочки и других УПМ. Результаты проведенного анализа представлены на рисунке 1.
Как видно из представленных материалов в обеих группах одинаково часто встречаются мик-роэкологические нарушения с двумя видами отклонений от нормативных показателей. Причем у младших детей значительный процент составили те, у кого не было выявлено никаких нарушений или таковое было только одно. В то же время для 2-й, более старшей группы, характерны отклонения от нормы по трем и даже четырем показателям, т.е. с возрастом у детей данного города происходит ухудшение микробной экологии кишечного биотопа, что, конечно нуждается в специфической корректировке.
На следующем этапе изучали частоту встречаемости индигенных микроорганизмов в носоглоточном биотопе. Из выделенных культур были идентифицированы грампозитивные кокки родов Staphуlococcus и Streptococcus. У детей различных возрастных групп в носоглотке преобладал золотистый стафилококк (от 55,5 до 64,0 %). На втором месте — зеленящий стрептококк. В мазках из зева в 1-й группе число проб с этим видом стрептококка составило 34,0 %, а у старших детей — только 9,6 %. Со слизистой носа стрептококк выделялся практически одинаково в обеих группах (18,5 и 22,0 %). Грибы р. Candida во всех выявленных случаях ассоциировались со стафилококком. Процентное со-
отношение этих грибов было точно такое же, как и в анализах на дисбактериоз. Все выделенные аутоштаммы стафилококков были проверены на чувствительность к антибактериальным препаратам. Было установлено, что все изоляты устойчивы к ампициллину и оксациллину. В единичных случаях отмечалась умеренная устойчивость к канами-цину и гентамицину, к остальным использованным антибиотикам в 100 % случаев выявлена высокая чувствительность. С точки зрения коррекции микробного дисбаланса, положительным моментом можно считать тот факт, что все выделенные аутоштаммы стафилококков оказались высокочувствительны к стафилококковому бактериофагу.
Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что у детей Ангарска к 12—13 годам происходит формирование устойчивого дисбиоза кишечника.
ЛИТЕРАТУРА
1. Крамарь Л.В. Лабораторная диагностика и специфическая профилактика стафилококковых инфекций: Учебное пособие для студентов, аспирантов и врачей. — Волгоград, 2000. — С. 44.
2. Крамарь Л.В. Микробиологическая характеристика стафилококков: Учебное пособие для студентов, аспирантов и врачей / Л.В. Крамарь, С.А. Калашникова. — Волгоград, 2000. — С. 166 — 167.
3. Микрофлора носоглотки больных крапивницей / А.П. Батуро, А.П. Давыдова, М.А. Мокро-носова и др. // Клиническая лабораторная диагностика. — 2001. — № 11. — С. 31.
4. Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждениях: Приказ № 535 МЗ СССР. - М., 1985.
5. Попкова С.М. Иммуноэкологическая концепция развития кишечных дисбактериозов / С.М. Попкова, Е.Л. Кичигина // Журн. инфекционной патологии. — Иркутск, 1999. — №2-3. — С. 13—15.
6. Правила и техника работы с материалом, поступающим для исследования в микробиологическую (клинической микробиологии) лабораторию: Метод. указания / К.И. Савицкая, Ю.Б. Аваш, М.В. Нестерова и др. — 1999.
7. Perforance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests, Approved Sdandard — Seventh Edition: NCCLS, New Jersey. — 2000. — N 20 (1).
