CC BY
20
BiCHHK Украгнсъког медичног стоматологгчног акадежш
желудок не обнаружено. Через 3 и 6 месяцев функция культи желудка удовлетворительная: эвакуация из желудка порционная, кислотность . снижена, заброс дуоденального содержимого отсутствует, рецидива язвенной болезни и эзо-фагита нет. 3
Выводы.
1. Использование предложенного нами способа позволяет исключить рефлюкс-гастритов, хо- 4 лангитов, эзофагитов, язвы и рак оперированного желудка. 5
2. Способ является простым в выполнении, безопасным и позволяет значительно снизить затраты на лечение. 6.
Литература.
1. Мясоедов С.Д., Чорна И.С., Фурманенко О.Д. Диагностика и хирургическое лечение рефлюксной болезни пище-
Реферат.
АНТИРЕФЛЮКСНА ЗАГЛУШКА ЯК СПОС1Б ПОПЕРЕДЖЕННЯ РОЗВИТКУ РЕФЛЮКСНИХ ЗАХВОРЮВАНЬ.
Хаджиев О.Ч, Безруков В.О., Безруков О.Ф., Шестопалов Д.В., Трофимов П.С., ДреветнякА.А., Татарчук П.А., Резшченко A.M.
Ключов1слова, кишковазаглушка, рефлюкс, виразкова хвороба, ерозивний езофапт.
Робота присвячена проблем! рефлюксних захворювань шлунка й стравоходу. Експериментальне дослщження показало, що при накладенш гастросюноанастомоз1в вщбуваеться постшний nepeTiK лужного BMicTy в шлунок i стравохщ, що е причиною розвитку рефлюксних захворювань - гастрилв, виразки оперованого шлунка, ерозивних езофагтв. Накладення в такм ситуацп антиреф-люксноТ заглушки за запропонованою методикою е Mipoio профгпактики зазначених ускпаднень. Автори за даною методикою оперували 116 чоловк при операщях на шлунку й бгтарному тракл з гарними найближчими та вщдаленими результатами.
вода с нарушением моторики// Клиническая хирургия. -2000. -№3. - С. 9 - 12.
Пути улучшения качества жизни пациентов после гаст-рэктомии и субтотальной резекции желудка / Г.К. Жер-лов , А.П. Кошель, А.В. Максимов и др.// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2000. - №3. - С. 83 - 85.
Старостин Б.Д. Фармакоэкономические аспекты лечения гастроэзофагальной болезни.// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопрокторлогии. - 2000. -№5. - С. 50 - 55.
Сумин В.В., Торопчев Д.А., Жижин Ф.С. Хирургическая коррекция и профилактика рефлюкс-гастрита// Хирургия. - 1998. - №10. - С. 30 - 33.
Хирургия поджелудочной железы / А.А. Шалимов, С.А. Шалимов, М.Е. Нечитайло и др.- Симферополь: Таврида, 1997. - 560 с.
Castell D.O. Overview of the clinical spectrum of gastroesophageal reflux disease // Pract. Gastroenterol. - 1999. -Vol. 23, № 10. - P.43- 62.
De Vault K.R., Castell D.O. The Practice Parameters Committee of American College of Gastroenterology // Amer. J. Gastroenterolgy. - 1999. - Vol. 94, № 6. - P. 1434-1442.
УДК 616-089.576.371
АРГУМЕНТЫ К ПЕРСПЕКТИВАМ РАЗРАБОТКИ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОКУЛЬТУРАЛЬНЫХ ТРАНСПЛАНТАТОВ -ГЕРМЕТИК0В НА ОСНОВЕ 3D МАТЕРИАЛОВ - МАТРИКСОВ В БИЛИАРНОЙ ХИРУРГИИ
Киевский медицинский институтУАНМ Хмельницкий С.И.
В работе приведены результаты испытания в экспериментах in vitro полимера поливинилового спирта в качестве 3D матрикса для клеточной культуры эмбриональной печени человека. Аргументированы перспективы применения биокультуральных трансплантатов - герметиков на основе биосовместимых каркасных 3D материалов - матриксов в билиарной хирургии.
Ключевые слова: желчные протоки, полимеры поливинилового спирта, эксперимент in vitro, биокультуральный трансплантат.
званных факторами первичной или вторичной
Введение.
Структурная и функциональная организация морфологических компонентов стенок протоко-вой системы желчных путей является высокоспецифичной и особенной. Структурные элементы протоковой стенки и, прежде всего слизистая оболочка, обладают высокими протек-тивными свойствами в отношении желчи, как фактора агрессии. В тоже время, другие компоненты протоковой стенки, являясь морфострук-турными элементами соединительной ткани со специфическими функциями, имеют дефицит прочности в плане процессов ремодулирования в рамках физиологической регенерации. Возможно, это обусловлено особенностями кровоснабжения протоковой стенки, которое анатомически является слабовариантным и осуществляется только за счет коротких мелких перпендикулярных веточек системы печеночной артерии. В результате структурных поражений, вы-
альтерации, в зависимости от их объема, в протоковой стенке чаще заполнение дефекта поврежденной ткани происходит за счет его замещения соединительнотканными элементами без специфических функций, т.е. рубцовой тканью. В этой плоскости находится сущность большинства патологических процессов, связанных с желчными протоками и неудачи многих органо-протезирующих и органозамещающих оперативных вмешательств на желчных протоках. Поэтому, перспективным направлением является разработка и использование биокультуральных трансплантатов герметиков на основе биосовместимых каркасных 3й материалов - матриксов, которые было бы возможным включить в технологию управляемого репаративного процесса при хирургических коррекциях на гепато-билиарном комплексе.
При образовании тканевого дефицита вслед-
ствие травмы или хирургического вмешательства, а также замещение функционально неадекватной ткани перспективно использование стволовых клеток (СК). В то же время, из анализа литературы, очевидно, что непосредственное их введение в зону поражения не приводит к ожидаемому терапевтическому эффекту. Очевидно, что частично это обусловлено отсутствием соответственно организованного пространства. Искусственная организация такого пространства будет более эффективной, если используемый материал нетоксичен для интактной ткани и для трансплантируемых СК, обладает адгезивными свойствами и не препятствует их локомоции. Существенным вкладом в разработку новейших технологий в хирургической гастроэнтерологии стала реальная возможность использования последних достижений полимерной и медицинской химии. Среди таковых особое место занимают новые препараты и композиции, представляющие собой биосовместимые каркасные 3D материалы - матриксы. Путем радикального сшивания водорастворимого поливинилового спирта, модифицированного глицидилметакрилатом, в вводно-замороженных системах получены низкотоксичные пористые гидрогели пригодные для медико-биологического использования. Гидрогели представляют собой по сути 3D системы с развитой пористой структурой и размером открытых пор от единиц до сотен микрометров. Синтезированные макропористые полимерные гидрогели характеризуются высоким значением равновесной набухаемости. Высокая степень биосовместимости полученных полимерных систем дала возможность их применения в качестве имплантатов и герметиков [1,2].
Использование нетоксичных, биосовместимых каркасных 3D структур для СК на основе поливинилового спирта, которые могли бы обеспечивать оптимальные условия для адгезии, экспансии иммобилизованных клеток и способствовать полной интеграции имплантата с окружающими тканями, в определенной мере могут решить проблему интеграции технологии имплантации и как герметика и как клеточного матрикса для ремоделирования повреждение желчных протоков. Исходя из этого, разработка 3D материалов - матриксов для клеточных культур (в том числе, стволовых) является своевременной и актуальной задачей.
Известно, что ткань эмбриональной печени первого триместра беременности содержит 11,4+7,5% СК, которые характеризуются иммунным фенотипом CD34+ и HLA- ткань 9. Другие типы клеток присутствующие в ней (бластные формы гемопоэтических клеток гепатобласты, миофибриллы) так же сохраняют способность к делению [3].
Цель исследования - испытания в экспериментах in vitro полимера поливинилового спирта в качестве 3D матрикса для клеточной культуры эмбриональной печени человека (КЭПЧ).
Материалы и методы.
Для исследований использовали эмбриональную ткань печени человека 9 недель гестации, полученную в результате аборта. В качестве Эй матрикса использовали стерильные пластинки поливинилового спирта размером 5X5X1 мм.
Культуральная смесь состояла из среды Игла (Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов, Россия), раствора Хенкса (Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов, Россия) и сыворотки крупного рогатого скота (ПО «Коно-топмясо», Украина). После промывки физраствором и выделения ткани печени ее механическим способом суспензировали в растворе Хенкса и центрифугировали для удаления не-суспвизированных кусочков. После осаждения КЭПЧ ресуспензировали в культуральной среде, начальная концентрация клеток составляла 4,0 млн/мл. Затем в суспензию помещали пластинку стерильного поливинилового спирта размером 5X5X1 мм. Через 15 минут поливиниловая матрица полностью набухала, поглощая 150+ 20 мкл жидкости.
Культивирование проводили на протяжении 14 дней с заменой питательной среды каждые 5 суток. По истечении сроков культивирования матрикс извлекали и помещали в жидкий азот. Для исследований криоконсервированный матрикс нарезали на криостате, толщина срезов -0,1мм.
Изучение флотации клеток при набухании замораживание производили немедленно после набухания, оценку острой токсичности материала ПВС проводили через 24 часа культивирования, а его матриксных качеств после 7 и 14 суток культивирования. Для исследования распределения клеток в Эй матриксе в динамике культивирования производили подсчет клеток после стандартного гистохимического окрашивания метиленовым синим [4].
Результаты и их обсуждение.
Через 10 минут после помещения Эй ПВС матрикса в суспензию клеток пластинка ПВС набухала и удваивалась в размерах во всех направлениях. Подсчет клеток показывает, что при набухании в матрикс клетки флотируют пропорционально их количеству в жидкости ушедшей на набухание. Исследование криосрезов показало, что количество клеток на этом этапе в ПВС матриксе неоднородно. Через 10 минут они сконцентрированы в основном в слое 2мм по краям пластинки (Рис 1а), однако одиночные клетки встречаются и в глубине матрикса (Рис 16). Можно предположить, что стенки ячеек Эй структур являются механическим препятствием на пути продвижения клеток, создают фильтр, способствующий концентрированию клеток в верхних слоях матрикса.
В1СНИК Украгнсъког медичног стоматологгчног акадежш
Рис. 1. Через 10 минут клетки эмбриональной печени сконцентрированы в основном в слое 2мм по краю пластинки (1а: 10X10), одиночные клетки встречаются и в глубине матрикса (26: 40X10).
Через 24 часа культивирования КЭПЧ прикрепляются ко дну чашки Петри, а также к поверхности ПВС матрикса, наблюдается также концентрирование клеток на поверхности ПВС матрикса и культуральной среды, что указывает на его адгезивные свойства и отсутствие токсичности материала. Кроме того, количество клеток в культуральной среде с ПВС матриксом близко к таковому в культуральных образцах свободных от ПВС матрикса. Исследование срезов через 24 часа культивирования также показывает, что основная масса клеток все еще сосредоточена в верхних слоях и на поверхности пластинки (Рис.2а). По мере продвижения в центральные участки матрикса плотность клеток значительно ниже (Рис.2б). Проникшие в гель клетки характеризуются фенотипом свойственным недифференцированным клеткам - крупное ядро окружено узким ободком цитоплазмы.
- , Ш
Рис. 2. Культивирование 24 часа. Окрашивание метиленовым синим. Основная масса клетоксосредоточена в верхних слоях матрикса (2 а: 10X10). Наблюдаются скопления клеток на границе матрикса и культуральной среды (26: 10X10). Клетки имеют эмбриональный фенотип (2в: 40X10), некоторые образуют скопления (2 г: 40X10).
На протяжении последующего срока культивирования - 7 суток ЭКП мигрируют вглубь матрикса (Рис.Эа), при этом их количество в центральных участках значительно возрастает. Наблюдаемые на 7е сутки КЭПЧ сохраняют фенотип недифференцированных клеток (Рис.36), а, следовательно, и способность к делению и дифференцированию.
Рис. 3. На седьмые сутки культивирования плотность клеток в поверхностном слое несколько снижается (3 а: 10X10), а количество в глубине матрикса возрастает (3 б: 40X10, 3 в: 40X10)
К 14 суткам (Рис. 4а, б) культивирования структура матрикса начинает изменяться: ячейки увеличиваются в размерах трехмерная структура, теряет свои параметры. Клетки в плоско-
46 '1
Рис. 4. К 14 суткам культивирования клетки обнаруживаются во всех частях матрикса (4 а: 40X10). Структура матрикса меняется: ячейки теряют стенки, увеличиваются в размере (4 б: 10X10).
В результате проведенного исследования обнаружено, что 3й ПВС является нетоксичным и обладает выраженными матриксными свойствами для КЭПЧ. Клетки активно прикрепляются к стенкам ячеек матрикса, которые являются адекватным субстратом для их адгезии и локо-моции.
Параллельно с расселением клеток идут процессы резорбции биоматериала, что позволяет рассматривать синтетический 3й ПВС матрикс как перспективный для иммобилизации и направленной доставки КЭПЧ при замещении тканевых дефицитов и дефектов.
Выводы.
Перспективы дальнейшей разработки и использования биокультуральных трансплантатов - герметиков на основе биосовместимых каркасных 3й материалов - матриксов в настоящее время становятся реальными. Благодаря этому также становится возможным применение технологии управляемого репаративного процесса при хирургических коррекциях на гепатобилиар-ном комплексе, что, несомненно, улучшит технологические возможности и качественно изменит результаты в билиарной хирургии в целом.
Литература
1. Артюхов A.A., Штильман М.И., Тсатсакис A.M., Козлов B.C., Остаева Г.Ю. Эпоксидсодержащие пористые гидрогели акриламида: исследование физико-химических характеристик // Пластические массы. - 2002. - № 9. - С. 32 - 37.
2. Артюхов A.A., Штильман М.И., Золотайкина Т.С., Горчаков A.B. Разработка технологии синтеза новых макропористых гидрогелей для медицины и биотехнологии // Ус-
пехи в химии и биотехнологии. - М.: РХТУ. - 2005. - Т. 19, № 2(50). - С. 93 - 95.
3. Зозуля Ю.А., Лисяный Н.И., Цимбалюк В.И., Васильева И.Г. и др. Нейрогенная дифференцировка стволовых клеток// ООО УИПК «ЕксОб» К., 2005. - 368 с.
4. Кухарчук А.Л., Радченко В.В., Сирман В.М. Стволовые клетки: эксперимент, теория, клиника. Эмбриональные мезенхимальные, нейральные и гемопоэтические стволовые клетки. - Черновцы.: Золол литаври, 2004. - 505 с.
Реферат.
АРГУМЕНТИ ДО ПЕРСПЕКТИВ РОЗРОБКИ I ВИКОРИСТАННЯ БЮКУЛЬТУРАЛЬНИХ ТРАНСПЛАНТАТ1В - ГЕРМЕТИК1В НА OCHOBI 3D МАТЕР1АП1В - МАТРИКС1В В Б1Л1АРН1Й Х1РУРГ11 . Хмельницький С.Й.
Ключов1 слова: жовчы протоки, пол1мери пол1вЫтового спирту, експеримент in vitro, бюкультуральний трансплантат.
В po6oTi наведен! результати випробувань в експериментах in vitro пол1мера пол1вЫтового спирту в якосл 3D матрикса для кл1тинноТ культури ембрюнально!' печЫки людини. Наведен! аргументи до перспективи використання бюкультуральних транс -планталв - герметигав на основ! 6iocyMicHnx каркасних 3D матер1ал1в - матрикав в 6miapHM xipypriT.
УДК 616.367-089.84-06-084:615.462:678.049.16
0С0БЛИВ0СТ1 РЕПАРАТИВНИХ ПР0ЦЕС1В В CTIHKAX Ж0ВЧН0Г0 М1ХУРА В ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬШЙ М0ДЕЛ1 СТВОРЕННЯ I ЗАКРИТТЯ И ДЕФЕКТ1В МЕТ0Д0МИ УШИВАННЯ I П0ШАР0В01 АДГЕЗП.
КиТвський медичний ¡нститутУАНМ. Хмельницький С.Й.
В po6omi наведет результати морфолог1чного досл1дження стток жовчного Mixypa з оцткою особливостей регенераторног реакцп при створенш експериментальног мoделi операцшног си-туацп у тварин - 8 безпopiдниx свиней piзнoг стaтi та вжу. Пopiвнювaлись результати тра-дицшног технологи ушивання змодельованого дефекту та технологи пошаровог адгезгг з пери-тотзащею вшьним аутотрансплантатом. Показано, що для шовного з'еднання була властива неповна репаративна регенеращя (substitutio ad integrum), а в випадках використання технологи пошаровог адгезгг з перитотзащею вшьним аутотрансплантатом мopфoлoгiя в препаратах i макроскотчно вiдпoвiдaлa кpитеpiям повног репаративног регенерацп (restitutio ad integrum).
Ключов1 слова: експериментальна операцшна модель, жовчш протоки, регенеращя, метод пошаровоТ адгезп, аутотрансплантат.
люеюнальних анастомозах - 8-17,6%. За дани-
Вступ
Результати оперативних втручань на жовчних протоках великою мфою залежать вщ викорис-таноТ технологи з'еднання протоковоТ стнки як у вигляд1 накладеного на не!' шва, так \ в вар1антах формування бтюдигестивних анастомоз^. Причинами незадовтьних результат^ таких оперативних втручань в першу чергу е неспроможнють \ негерметичысть з'еднання, що призводить в пн сляоперацмному перюд1 до розвитку трапчних ускладнень \ ывелювання тимчасового устху в вигляд1 вдало виконаноТ операци на жовчних шляхах. За останню четверть стол1ття прогреси-вного розвитку бт1арноТ х1рурги досягнув вра-жаюч1 устхи в цтому, але залишаються актуа-льними проблеми, яю знаходяться в площиы ре-гулювання регенераторними процесами в стн-ках жовчних протоюв як в безпосередньому, так \ в вщдаленому тсляоперацмному перюдк За-стосування синтетичного шовного матер1алу \ прецизмних технологм оперативного втручання значно покращило ситуац1ю, але не дало змогу досягнути оптимального результату. Вщсоток незадовтьних результат^ теля таких операци залишасться недопустимо високим, зокрема т-сля холедоходуоденостоми 14-36,3%, трансдуо-денальнм паптосфнктеропластиц1 - 7,2 %, 61-
ми Л1тератури летальн1сть теля таких операц1и на жовчних протоках у трич1 вища в пороняны з холецистектом1ею. Причинами смерт1 в тсляоперацмному перюд1 являються внутршньопе-чшков1 та пщд1афрагмальы гнояки, неспромож-ысть шв1в загальноТ жовчноТ протоки сформова-них анастомоз^, холангюгенний сепсис. Пере-важна бтьшють причин, як1 обумовили розвиток таких ускладнень в тсляоперацмному перюд1 е недостатня герметичнють зашитоТ рани протоки або неспроможнють шв1в сформованих бтюди-гестивних анастомоз!в, як1 були пов'язаы з технь кою накладання шв1в та вибором шовного ма-тер1алу. Найбтьш типовим та небезпечним уекпадненням е неспроможнють шв1в накпаде-них на стмку протоки, яка за даними л1тератури зустрнаеться у 6,7- 16,2% випадюв [1,2,3,4].
Метою дослщження було вивчення адгезивних технолопй з бтьш оптимальними \ сприятливи-ми умовами для регенераторних процеав в стм-ках жовчних протоюв в пороняны з традицмним ушиваниям протоковоТ стЫки. Визначити мож-ливост1 прогнозування результат^ застосування шовних \ безшовних технологм при виконаны органопротезуючих \ органовщновлювальних оперативних втручань на жовчних шляхах.
