Антиоксидантные свойства серотонина адипината, пролонгина, мексидола и их комбинации в экстренной хирургии Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

8. Louie B.E., Noseworthy T., Hailey D., Gramlich L.M. // Can. J. Surg. - 2005. - V.48, №4. - P.298-306.

9. Matos C., Coppens E. // J. Radiol. - 2005. — V.86, №6 (Pt.2). - P.749-757.

10. Pitchumoni C.S., Patel N.M., Shah P. // Clin. Gastroenterol. - 2005. — V. 39, №9. - P.798-814.

АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА СЕРОТОНИНА АДИПИНАТА, ПРОЛОНГИНА, МЕКСИДОЛА И ИХ КОМБИНАЦИИ В ЭКСТРЕННОЙ ХИРУРГИИ

В.Г. Ширинский, О.Б. Любицкий, С.Е. Ильина, Ю.В. Климов, М.Ю. Лебедева, Д.В. Кривихин, И.Ю. Кулешов

МГМСУ

В последние годы в литературе всё чаще появляются сообщения о применении антиоксидантов в экстренной и неотложной хирургии, в частности, при лечении диабетической стопы при сахарном диабете [2]. В связи с этим представляется перспективным поиск новых препаратов, обладающих антиоксидантными свойствами для применении в клинике. Нами были изучены антиоксидантные свойства 5-окситриптамина (серотонина) адипината в комбинации с биологически активной добавкой - пролонгином и другим ранее изученным антиоксидантом - мексидолом [1].

В работе использовали следующие реактивы: 2,2’-азобис (2-метилпропио-намидин) дигидрохлорид (АБАП) («Aldrich, США), люминол (ЛМ) (“Serva”, Германия), КН2Р04, («Реахим», Россия), 1 % раствор серотонина адипината, пролонгин, мексидол.

Перед работой готовились исходные растворы исследуемых веществ в дистиллированной воде (0,01% раствор серотонина адипината, отфильтрованный через бумажный фильтр, раствор пролонгина с концентрацией 10 мг/мл и раствор мексидола с концентрацией 10 мМ).

Антиоксидантные свойства серотонина адипината, пролонгина и мексидола изучали в модельной системе окисления. Использовали хемилюминесцентную модельную систему окисления люминола, инициированного пероксильными радикалами, генерирующимися с постоянной скоростью, зависящей от температуры, водорастворимым азосоединением 2,2’-азобис(2-метилпропионамидин) дигидрохлоридом (система АБАП-ЛМ) [1].

Измерение хемилюминесценции проводили на хемилюминометре ХЛМ-3 («БИКАП», Россия). Для измерения хемилюминесценции в кювету хемилюмино-метра общим объёмом 5 мл последовательно добавляли фосфатный буфер (50 мМ КН2Р04, pH 7,4), 10 мкМ ЛМ, 10 мМ АБАП и при постоянном перемешивании и температуре 37°С измеряли контрольную хемилюминограмму. Далее при тех же условиях измерялись кинетики хемилюминесценции (ХЛ) в присутствии исследуемых веществ, определённый объём которых добавляли в реакционную среду перед вводом АБАП.

Полученные данные представлены в виде значений средней величины ± стандартное отклонение по данным трёх измерений.

В качестве модельной системы для исследования антиоксидантных свойств серотонина адипината, пролонгина, мексидола и их комбинации мы использовали водную гомогенную систему на основе АБАП. В данной модельной системе происходит термоиндуцированная деградация АБАП в водной среде с образованием

пероксильных радикалов (130-2). Пероксильные радикалы взаимодействуют с лю-минолом, приводя к его окислению с образованием хемилюминесценции.

На рисунке показаны кинетики ХЛ системы АБАП-люминол в присутствии различных концентраций серотонина адипината. Видно, что примерно через 1 мин после добавления АБАП к реакционной среде, содержащей ЛМ, развивалось свечение ХЛ, которое достигало максимальных значений на 3 минуте и далее постепенно уменьшалось. Время от момента введения АБАП до начала развития свечения (латентный период, I) было выбрано в качестве измеряемого параметра.

Ранее было показано, что длительность латентного периода ХЛ определется наличием в модельной системе перехватчиков пероксильных радикалов [3]. Чем больше концентрация перехватчика и чем больше эффективность перехвата, тем длиннее латентный период ХЛ. Так, из рисунка видно, что с увеличением концентрации серотонина адипината происходит прямо пропорциональное увеличение латентного периода ХЛ. Такое действие препарата на данную модельную систему говорит о том, что этот препарат перехватывает пероксильные радикалы АБАП.

Рис. Кинетики хемилюминесценции системы АБАП-ЛМ без и в присутствии серотонина адипината. Цифры у кривых - концентрация серотонина адипината (% * 10-6). Стрелкой показан момент времени, в который добавлялся АБАП. По оси абсцисс - время (мин). По оси ординат - интенсивность ХЛ (уел. ед.). Состав реакционной среды: люминол (10 мкМ), АБАП (10 мМ)

в 50 мМ КН2Р04 буфере, pH 7,4.

Действие серотонина адипината было сопоставлено с влиянием на модельную систему АБАП-ЛМ других антиоксидантов. Оказалось, что серотонин адипинат обладает наибольшей антиоксидантной активностью (АОА) среди исследуемых препаратов, имея значения, сопоставимые с АОА таких известных перехватчиков пероксильных радикалов, как тролокс или дигидрокверцетин. Пролонгин обладал небольшой антиоксидантной активностью в используемой модельной системе, его активность была в 140 раз ниже, чем у тролокса, и почти в 220 раз ниже, чем у серотонина адипината. Такое слабое действие можно объяснить тем, что в состав данного препарата входят, в основном, нерастворимые в воде компоненты, такие как бетакаротин и витамин Е, действие которых проявляется, в основном, на гидрофобные липидные пероксильные радикалы.

Антиоксидантная активность исследуемых препаратов в системе АБАП-люминол:

Серотонина адипинат.........................0,16 мкг/мл

Тролокс..................................... 0,25 - « -

Дигидрокверцетин............................0,27 - « -

ADF-37......................................4,41 - « -

Аскорбат....................................5,28 -«-

Пролонгин...................................34,98 - « -

Для смесей пролонгина с серотонином и мексидолом экспериментальное значение латентного периода ХЛ оказалось ниже, чем расчётное, то есть их совместное использование не приводит к усилению эффекта. Для смеси серотонина и мексидола, а также тройной смеси был получен эффект синергизма (экспериментальные значения больше, чем расчётные).

Экспериментальные и расчётные значения латентного периода ХЛ смесей исследуемых веществ в системе АБАП-люминол

Вещество/смесь t-tn (эксперимент) t-tn (расчётное)

Серотонина адипинат 5,77 -

Пролонгин 5,27 -

Мексидол 0,60 -

Серотонина адипинат + пролонгин 10,06 11,04

Серотонина адипинат + мексидол 8,81 6,37

Пролонгин + мексидол 4,99 5,87

Серотонина адипинат + пролонгин + мексидол 14,81 11,64

Примечание: расчётные значения для смеси представляют собой сумму экспериментальных значений для отдельных компонентов смеси; tQ и t - латентные периоды ХЛ без и в присутствии исследуемых веществ.

Таким образом, была исследована антиоксидантная активность серотонина адипината в модельной системе окисления АБАП-ЛМ. Обнаружено, что серотонин адипинат увеличивает латентный период ХЛ в модельной системе, что определяется перехватом водных пероксильных радикалов АБАП. Антиоксидантная активность исследуемых препаратов была сравнена с активностью других известных антиоксидантов. Исследована антиоксидантная активность серотонина адипината, пролонгина и мексидола при их совместном действии. Обнаружено, что в смеси серотонина адипината и мексидола, а также в тройной смеси (серотонин адипинат, пролонгин и мексидол) наблюдается эффект усиления активности по сравнению с действием отдельных компонентов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Клебанов Г.И., Любицкий О.Б., Васильева О.В. и др. // Вопр. мед. химии. - 2001. - №3. - С. 288-300.

2. Толстых М.П., Ахметов Б.А., Атаев А.Р., ШинФ.Е., Парфёнов А.Н. Лечение ран антиоксидантами. - Махачкала, 2004. - 172 с.

3. Lissi E., Salim-Hanna М., Pascual С. et al. // Free Radie. Biol. Med. - 1995. - V. 18. - P. 153-158.