CC BY
31
Pharmacological properties of the agent monezin against nematodes and cestodes of cattle and sheep. Haibrachmanova S.Sh., Saveljev A.A., Nedereva O.N. Nizhegorodsk State Agricultural Academy.
Summary. One showed the high anthelmintic efficacy of monezin against nematodoses and cestodoses of cattle and sheep.
АНТИГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ БЕЛКОВЫХ ФРАКЦИЙ СОМАТИЧЕСКОГО ЭКСТРАКТА ИЗ СЕТАРИЙ (SETARIA LABIATO-PAPILLOSA)
Хайдаров К.А., Бережко В.К., Написанова Л.А. *,
Дахно И.С., Шкурка Е.П.**
*ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина ** Сумской НАУ
Введение. Дирофиляриоз - трансмиссивное заболевание, возбудителем которого являются нематоды семейства Filariidae, характеризуется медленным развитием и длительным течением.
За последние годы наблюдается тенденция роста этой инвазии в различных регионах мира, включая и Россию, причем отмечается также рост числа случаев дирофиляриоза человека (Горохов, Москвин, 2001; Гуськов и др., 2001; Бронштейн и др., 2003; Авдюхина и др., 2003; Супряга, 2004; Архипов, Архипова, 2004; Г аркави, Медведев, 2004; Ястреб, 2006).
Имеются данные об увеличении числа выявляемых случаев дирофиляриоза у людей в Италии, Испании, Франции (Simon, Genchi, 2001).
Прижизненная диагностика дирофиляриоза базируется в основном на обнаружении микрофилярий в крови, что, однако, не всегда возможно при латентной форме и низкой интенсивности инвазии. С этих позиций целесообразно иметь на вооружении иммунодиагностические тесты, значительно расширяющие возможности прижизненной диагностики заболевания. Разработана иммуноферментная реакция (ИФР) для выявления сывороточных антител Dirofilaria immitis у собак на основе фракционированного соматического экстракта паразита (Медведев, 2006), а также аналогичная реакция с очищенным антигеном из D. repens для диагностики инвазии у человека (Бескровная, 2009).
Однако, учитывая определенные трудности в приобретении гельминтов, была поставлена цель - выделить диагностически эффективный антиген при дирофиляриозе из близкородственного вида - S.labiato-papillosa,
относящегося к тому же семейству, что и дирофилярии.
Предварительными иммунохимическими исследованиями было установлено антигенное родство между этими паразитами (Хайдаров, Бережко, 2009).
492
Материалы и методы. Материалом исследования служили свежезамороженные половозрелые сетарии (Setaria labiato-papillosa), выделенные от естественно зараженного крупного рогатого скота на убойных пунктах Украины и Кабардино-Балкарской Республики.
Из выделенных гельминтов готовили экстракт по методу Бережко с соавт. (2008). После определения белка на спектрофотометре при 280 нм по методу Layne (1957) с калибровочной кривой на основе бычьего сывороточного альбумина (фракция 5) провели фракционирование цельного экстракта из сетарий гель-фильтрацией в Superose 12 Prep Grade при скорости протока 30 мл/час. Фракции собирали по 3 мл в пробирку, а содержание белка в них определяли на спектрофотометре Ultrospec II при 280 нм в 1 см.
Антигенную активность полученных белковых фракций устанавливали иммуноферментной реакцией (ИФР) с референс-положительными и отрицательными сыворотками, в качестве которых служили сыворотки крови собак с подтвержденным диагнозом дирофиляриоза и условно здоровых.
Результаты. Концентрация белка в цельном экстракте из половозрелых сетарий, использованном для фракционирования, составляла не менее 11,5 мг/мл. В процессе фракционирования было получено 40 белковых фракций с различным содержанием белка (от 0,009 до 1,545 мг/мл). Антигенную активность каждой фракции проверяли в ИФР по разнице оптической плотности (ОП) между положительной и отрицательной контрольной сывороткой (таблица).
Представленные в таблице данные показали, что из 40 белковых фракций в 11 (27,5%) разница в ОП между контрольными сыворотками в ИФР была минимальной и составила от 0,001 до 0,064. Эти фракции не могли иметь диагностического значения, поскольку при такой разнице в показателях дифференцировать результаты реакции больных животных от здоровых практически невозможно. Что касается остальных белковых фракций, то их аналогичная оценка в ИФР с теми же сыворотками показала, что 22 (55,0%) из них не содержали антигенные компоненты, способные распознавать сывороточные антитела класса IgG у больных дирофиляриозом животных. Такое заключение было сделано на основании того, что показатели ОП в ИФР с отрицательным контролем были выше, чем с положительной контрольной сывороткой, а разница между ними нулевой и даже отрицательной.
Из общего числа исследованных фракций только 7 (17,5%), судя по разнице ОП (от 0,150 до 0,388) между контрольными сыворотками в ИФР, могли быть выбраны для дальнейших испытаний. Несмотря на то, что в этих белковых фракциях были определены антигенные компоненты, имеющие диагностическое значение при дирофиляриозе, необходимо было охарактеризовать каждый из них в плане специфичности с сыворотками собак, инвазированных другими гельминтами, что и стало предметом наших дальнейших исследований.
493
Антигенная активность белковых фракций экстракта Setaria labiato-papillosa
Таблица
№ п/п Положительная сыворотка «+» Отрицательная сыворотка «-» Разница между «+» и «-»
1 0,133 0,124 0,009
2 0,639 0,251 0,388
3 0,537 0,245 0,292
4 0,668 0,309 0,359
5 0,562 0,306 0,256
6 0,535 0,240 0,295
7 0,528 0,303 0,226
8 0,479 0,328 0,151
9 0,360 0,296 0,064
10 0,311 0,296 0,015
11 0,217 0,247 -0,003
12 0,213 0,262 -0,049
13 0,224 0,278 -0,054
14 0,202 0,206 -0,004
15 0,171 0,184 -0,012
16 0,135 0,161 -0,025
17 0,123 0,138 -0,015
18 0,113 0,131 -0,018
19 0,169 0,143 0,026
20 0,175 0,132 0,043
21 0,169 0,150 0,019
22 0,128 0,131 -0,002
23 0,100 0,228 -0,128
24 0,147 0,135 0,012
25 0,143 0,172 -0,029
26 0,193 0,186 0,007
27 0,122 0,132 -0,010
28 0,095 0,100 -0,005
29 0,136 0,186 -0,050
30 0,141 0,161 -0,019
31 0,144 0,146 -0,002
32 0,116 0,133 -0,017
33 0,138 0,171 -0,033
34 0,146 0,158 -0,012
35 0,140 0,159 -0,019
36 0,103 0,101 0,002
37 0,185 0,184 0,001
38 0,121 0,143 -0,022
494
39 0,115 0,089 0,026
40 0,086 0,087 -0,001
Литература: 1. Авдюхина Т.И., Постнова В.Ф., Абрасимова Л.М. и др. // Мед. паразитол. и паразитарные болезни. - 2003. - №1. - С. 44-48. 2. Архипов И.А., Архипова Д.Р. Дирофиляриоз. - Москва. - 2004. - 194с. 3. Бережко В.К., Хайдаров К.А., Дахно И.С., Шкурка Е. П. //Сб.мат. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2008. - вып. № 9. - С.69-73. 4. Бескровная Ю.Г. Дирофиляриоз на юге России (распространение и диагностика) // Дис. канд. биол. наук. - Ростов-на-Дону. - 2009. - 139с. 5. Бронштейн А.М., Супряга В.Г., Стовровский Б.И. и др. // Мед. паразирол. и паразитарные болезни. - 2003. - № 3. - С.51-55. 6. Гаркави Б.Л., Медведев А.Ю. // Материалы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2004. - С. 111-112. 7. Горохов В.В., Москвин А.С. // Ветеринария. - 2001. - № 8. - С. 6-8. 8. Гуськов В.В., Горшкова Е.В., Постнова В.Ф., Агарунов А.В.// Лечащий врач. - 2001. - № 1. - С. 55-56. 9. Медведев А.Ю. // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - 2006. - Т. 43. - С.196 - 202. 10. Супряга В.Г.// Качество жизни. Медицина. - 2004. - №1. - С. 23-27. 11. Хайдаров К.А., Бережко В.К. // Российский паразитологический журнал. - 2009. - № 1. - С. 68 - 74. 12. Ястреб В.Б. //Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - 2006. - Т. 42. -С. 457-467. 13. Layne E. // Methods Enzymol. - 1957. - V. 3. - P. 447-454. 14. Simon F., Genchi C. // Ediciones universidad de Salamanca. - 2001. - 210p.
Antigenic activity of protein fractions of Setaria labiato-pappillosa somatic extract. Haidarov K.A., Berezhko V.K., Napisanova L.A., Dachno I.S., Shkurka E.P. All-Russian K.I. Skryabin Institute of Helminthology. Sumsk National Agrarian University.
Summary. One performed fractionation of mature Setaria labiato-pappilosa somatic extract. Antigen-reactive components were determined in the obtained fraction using ELISA with reference positive and control sera which have the diagnostic significance for Dirofilaria infection. As a result one obtained 40 protein fractions with protein content of 0,009 to 1,545 mg/ml. 7 of 40 fractions obtained by ELISA were determined (17,5%) in which presented antigen components were capable to recover serum IgF antibodies in dogs infected by Dirofilaria.
495
