CC BY
58
Биохимия, биотехнология и диагностика
УДК 619:616.-097
ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ РЕАКЦИЯ КАК МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕННОГО РОДСТВА РАЗНЫХ ВИДОВ ГЕЛЬМИНТОВ
В.К. БЕРЕЖКО доктор биологических наук
Л.А. НАПИСАНОВА, К.А. ХАЙДАРОВ, А.А. ТХАКАХОВА кандидаты биологических наук
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии
им. К.И. Скрябина,
117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28, e-mail: [email protected]
Иммуноферментную реакцию (ИФР) можно использовать в качестве метода установления антигенного родства между различными видами гельминтов на основе реакции антиген-антитело в гомологичном и гетерологичном вариантах с гипериммунными сыворотками к каждому виду. Установлены различия в реактивности кроликов к антигенам соматических экстрактов из половозрелых Dirofilaria immitis и Setaria labiato-papillosa в ИФР различным титром специфических антител и уровнем оптической плотности (ОП). Показатели ОП в гомологичном варианте ИФР с гипериммунными сыворотками к антигенам экстракта из D. immitis и S. labiato-papillosa были выше, чем в гетерологичной системе. При сопоставлении показателей ОП в обоих вариантах ИФР установлено, что более 50 % синтезируемых антител у кроликов, иммунизированных белковыми экстрактами из дирофилярий и сетарий, вступают в реакцию антиген-антитело с гетерологичным антигеном. В результате последующего иммунохимического анализа белковых экстрактов из обоих видов паразитов с сыворотками зараженных D. immitis собак определили наличие в экстракте из S. labiato-papillosa диагностически значимых антигенных компонентов при дирофиляриозе. Половозрелых S. labiato-papillosa можно использовать в качестве источника антигена при дирофиляриозе собак.
Ключевые слова: иммуноферментный тест, дирофи-лярии, сетарии, гипериммунная сыворотка, антигенное родство.
Установление серологического родства между гельминтами-предста-вителями разных систематических единиц с использованием гипериммунных сывороток открывает широкие возможности в решении проблем иммунодиагностики и иммунопрофилактики гельминтозов.
Многочисленными исследованиями 70-80-х годов прошлого столетия было установлено, что антигенное родство между гельминтами сокращается с таксономической удаленностью [1, 2, 4, 5, 12, 14, 16].
Помимо этого, было показано, что число потенциальных антигенов в соматических экстрактах гельминтов значительно превышает количество функциональных, вызывающих синтез антител в инвазированном организме и имеющих диагностическое значение [5, 8, 10, 20-22].
56
При выборе гетерологичного вида паразита в качестве источника диагностического антигена возникает необходимость определения их антигенного родства, что, как правило, устанавливают иммунохимическими и серологическими методами с использованием антисывороток к антигенным компонентам каждого вида.
Такой подход в получении диагностических антигенов особенно привлекателен в тех случаях, когда существует проблема получения гомологичного антигенного материала.
Поскольку в наших диагностических исследованиях при дирофиляриозе возникла проблема в получении достаточного количества гомологичного антигена, мы использовали для этой цели половозрелые сетарии (Setaria labiato-papillosa), которые как и дирофилярии относятся к подотряду Filariata и могли иметь в антигенном составе компоненты, идентичные диагностическим при дирофиляриозе.
Исходя из этого, была поставлена цель - установить антигенное родство между S. labiato-papillosa и Dirofilaria immitis иммуноферментной реакцией (ИФР) с использованием гипериммунных сывороток к соматическим антигенам-экстрактам из этих видов гельминтов, оценив их активность в гомологичном и гетерологичном вариантах ИФР.
Материалы и методы
Объектами исследования служили половозрелые сетарии (S. labiato-papillosa), выделенные от инвазированного крупного рогатого скота на убойных пунктах Кабардино-Балкарской Республики и Украины, и половозрелые дирофилярии (D. immitis), полученные от зараженных собак в Краснодарском крае и Волгоградской области.
Соматические экстракты из каждого биоматериала готовили по методу Ruitenberg, Van Knapen [19] с модификациями применительно к нашим условиям. В полученных экстрактах определяли содержание белка на спектрофотометре при 280 нм по методу Layne [17] с калибровочной кривой на основании пятой фракции бычьего сывороточного альбумина. Гипериммунные сыворотки к антигенам приготовленных экстрактов получали иммунизацией четырех кроликов массой 2,0-2,5 кг, по два кролика на каждый экстракт. Схема иммунизации включала три трехдневных периода подкожного и внутримышечного введения соответствующего экстракта с интервалом между введениями три дня и последующей отдаленной реиммунизации, проведенной на 28-30-е сутки после окончания цикла иммунизации. Каждый кролик на весь цикл иммунизации в общей сложности получил по 10,5 мг соответствующего белка-экстракта. Кровь у иммунизированных кроликов брали на 7-9-е сутки после окончания цикла иммунизации и реиммунизации.
Активность полученных сывороток оценивали в ИФР методом титрования образцов сывороток кратно двум от разведения 1 : 100 до 12800 как с гомологичным, так и с гетерологичным экстрактами с последующим подтверждением данных реакцией иммунодиффузии (РИД) по методике Гусева и Цветкова [7] в 1,2%-ном агаровом геле (Difco) на 0,9%-ном растворе хлористого натрия.
Результаты и обсуждение
Исследование гипериммунных сывороток к антигенам экстрактов из половозрелых сетарий и дирофилярий в ИФР показало, что каждый иммунизированный кролик проявил индивидуальную реактивность, которая проявилась в реакции различным титром сывороточных антител и соответственно уровнем оптической плотности (ОП) в ИФР (табл. 1-4).
Так, судя по этим показателям, наиболее активно иммунный ответ проявился у кроликов к антигенам экстракта из дирофилярий. Но и в этом случае, судя по результатам ИФР в гомологичной системе реакции, иммунный ответ у одного кролика был выражен сильнее. С разведения 1 : 100 до 1 : 12800 показатели ОП иммунной сыворотки этого кролика были выше ми-
57
нимально на 0,098, а максимально на 0,292 (табл. 1). Такая тенденция, хотя и менее ярко выраженная, была отмечена и в показателях ОП в гомологичной системе ИФР с гипериммунными сыворотками обоих кроликов, иммунизированных антигеном-экстрактом из сетарий.
Отмеченные незначительные различия в этом случае свидетельствуют о том, что реактивность обоих кроликов по отношению к антигенам экстракта из половозрелых сетарий была равнозначной.
Что касается данных, полученных в гетерологичном варианте иммунореакции, можно с уверенностью констатировать, что все иммунные сыворотки к антигенам обоих видов паразитов проявили достаточную активность, хотя и в этом случае, судя по показателям ОП, наиболее активными были антисыворотки к антигенам половозрелых дирофилярий. Причем, также как и в гомологичном варианте ИФР, показатели ОП с иммунной сывороткой одного кролика были выше в среднем на 0,021-0,159 и эта разница увеличивалась при разведении. Наименьшую разницу в ОП (0,021) регистрировали в разведении 1 : 100, наибольшую (0,159) - в разведении 1 : 1600. При последующих разведениях эта тенденция сохранялась (табл. 2).
Аналогичный анализ гетерологичного варианта иммунореакции с антигеном из половозрелых D. immitis и антисыворотками двух кроликов к экстракту из S. labiato-papillosa показал незначительные колебания в показателях ОП в ИФР (табл. 4). Тем не менее, наибольшую разницу ОП (0,073) отмечали между исследуемыми антисыворотками в разведении 1 : 400, наименьшую (0,001) - в разведении 1 : 800. Различия в проявлении ИФР в гомологичном и гетерологичном вариантах безусловно являются следствием индивидуальной реактивности подвергнутых иммунизации кроликов, поскольку и доза введенного белка-антигена (10,5 мг) и условия их последующего содержания и кормления были одинаковыми.
Особенно наглядно различия иммунореактивности антисывороток к антигенам экстрактам из дирофилярий и сетарий можно проследить при сопоставлении показателей ОП в процентном отношении в гомологичной и гетерологичной постановках ИФР, взяв для примера наименьшее разведение 1 : 100 и наибольшее - 1 : 12800.
Так, если показатели ОП в гомологичной иммунореакции (антисыворотка к экстракту D. immitis и антиген D. immitis) условно принять за 100 %, то при гетерологичном варианте (антисыворотка к экстракту D. immitis и антиген из S. labiato-papillosa) при указанных выше разведениях с антисыворотками двух кроликов они составили соответственно 81,6 %; 87,7 и 66,7; 65,8 %.
Аналогичный анализ показателей ОП в ИФР с антисыворотками кроликов к антигенам экстракта из S. labiato-papillosa в гомологичном и гетерологичном вариантах реакции показал соответственно 68,9 %; 76,2 и 46,8; 49,7 %.
Эти данные, во-первых, подтверждают, что иммунная ответная реакция к антигенам-экстракта из D. immitis была выражена несколько сильнее, а, во-вторых, что в большинстве случаев более 50 % синтезируемых в процессе иммунизации антител к антигенам обоих паразитов вступают в реакцию антиген-антитело с гетерологичным антигеном.
Бесспорным и давно доказанным иммунохимическими методами является тот факт, что белковые экстракты из гельминтов не отличаются гомогенностью и содержат антигенные компоненты различной молекулярной массы, активности и специфичности.
Экспериментально также установлено, что в процессе заражения количество функционально значимых антигенов гельминтов, вызывающих синтез специфических антител, на выявлении которых основаны иммунотесты, значительно меньше, чем число потенциальных антигенов [5, 10, 20].
58
1. Оценка активности гипериммунных сывороток к антигенам экстракта из половозрелых D. immitis в ИФР ___________________________(гомологичная система; АГ - D. immitis)____________________
Исследуемый материал Оптическая плотность в ИФР при разведении исследуемых сывороток
1 : 100 1 : 200 1 : 400 1 : 800 1 : 1600 1 : 3200 1 : 6400 1 : 12800
Сыворотка кроличья 0,909 0,932 0,910 0,829 0,806 0,589 0,480 0,310
гипериммунная к АГ из 0,935 0,920 0,982 0,954 0,974 0,904 0,819 0,694
дирофилярий (а) 1,315 1,105 0,919 0,945 0,902 0,871 0,530 0,415
М±т 1,053±0,13 0,985±0,06 0,937±0,02 0,909±0,04 0,894±0,05 0,788±0,1 0,610±0,11 0,493±0,11
Сыворотка кроличья 0,937 0,830 0,714 0,763 0,541 0,364 0,286 0,176
гипериммунная к АГ из 0,900 0,863 0,887 0,812 0,794 0,610 0,406 0,333
дирофилярий (б) 1,028 0,902 0,878 0,799 0,685 0,515 0,470 0,360
М±т 0,955±0,04 0,865±0,021 0,826±0,06 0,791±0,02 0,673±0,07 0,496±0,07 0,387±0,05 0,290±0,06
Контрольная сыворотка 0,125 0,118 0,108 0,100 0,098 0,086 0,072 0,060
0,133 0,125 0,109 0,095 0,083 0,076 0,068 0,059
0,121 0,124 0,119 0,099 0,083 0,077 0,059 0,048
М±т 0,126±0,004 0,122±0,002 0,112±0,04 0,098±0,002 0,088±0,01 0,076±0,003 0,066±0,004 0,056±0,004
Примечание. * -Р < 0,05 при 1критическом = 2,78.
59
2. Оценка активности гипериммунных сывороток к антигенам экстракта из половозрелых D. immitis в ИФР (гетерологичная система АГ - S. labiato-papillosa)
Исследуемый материал Оптическая плотность в ИФР при разведении исследуемых сывороток
1 : 100 1 : 200 1 : 400 1 : 800 1 : 1600 1 : 3200 1 : 6400 1 : 12800
Сыворотка кроличья 0,730 0,698 0,611 0,536 0,465 0,337 0,244 0,253
гипериммунная к АГ из 0,941 0,966 0,947 0,851 0,779 0,611 0,446 0,418
дирофилярий (а) 0,905 0,830 0,790 0,705 0,648 0,585 0,490 0,315
М±т 0,859±0,07 0,831±0,08 0,783±0,1 0,697±0,1 0,631±0,1 0,511±0,09 0,393±0,08 0,329±0,05
Сыворотка кроличья 0,808 0,729 0,634 0,507 0,359 0,254 0,182 0,147
гипериммунная к АГ из 0,806 0,848 0,799 0,706 0,523 0,385 0,269 0,198
дирофилярий (б) 0,900 0,820 0,789 0,690 0,535 0,480 0,305 0,229
М±т 0,838±0,03 0,799±0,04 0,740±0,05 0,634±0,06 0,472±0,06 0,373±0,07 0,252±0,04 0,191±0,02
Контрольная сыворотка 0,125 0,118 0,108 0,100 0,098 0,086 0,072 0,060
0,133 0,125 0,109 0,095 0,083 0,076 0,068 0,059
0.121 0.124 0.119 0.099 0.083 0.077 0.059 0.048
М±т 0,126±0,004 0,122±0,002 0,112±0,04 0,098±0,002 0,088±0,01 0,076±0,003 0,066±0,004 0,056±0,004
Примечание. * - Р< 0,05 при критическом = 2,78.
60
3. Оценка активности гипериммунных сывороток к антигенам экстракта из половозрелых S. labiato-papillosa в ИФР (гомологичная система; АГ - S. labiato-papillosa)
Исследуемый Оптическая плотность в ИФР при разведении исследуемых сывороток
материал 1 : 100 1 : 200 1 : 400 1 : 800 1 : 1600 1 : 3200 1 : 6400 1 : 12800
Сыворотка кроличья 0,811 0,762 0,613 0,562 0,382 0,271 0,218 0,199
гипериммунная к АГ 0,989 0,900 0,858 0,697 0,527 0,322 0,217 0,147
из сетарий (ai) 1,102 0,998 0,903 0,795 0,630 0,405 0,313 0,212
M±m 0,967±0,08 0,886±0,07 0,791±0,09 0,685±0,07 0,513±0,07 0,335±0,04 0,249±0,031 0,186±0,02
Сыворотка кроличья 0,835 0,809 0,703 0,626 0,471 0,369 0,295 0,147
гипериммунная к АГ 0,956 0,927 0,816 0,707 0,523 0,398 0,265 0,151
из сетарий (60 0,870 0,802 0,759 0,690 0,580 0,405 0,315 0,221
M±m 0,887±0,04 0,846±0,041 0,759±0,03 0,674±0,03 0,525±0,031 0,391±0,011 0,292±0,014 0,173±0,02
Контрольная сыво- 0,118 0,099 0,082 0,069 0,062 0,068 0,059 0,053
ротка 0,104 0,082 0,072 0,063 0,059 0,057 0,047 0,032
0.129 0.111 0.093 0.081 0.072 0.062 0.055 0.047
М±т 0,117±0,007 0,097±0,008 0,082±0,006 0,071±0,005 0,064±0,004 0,062±0,003 0,053±0,004 0,044±0,01
Примечание. *- Р < 0,05 приtKpHTH4ecKOM = 2,78.
61
4. Оценка активности гипериммунных сывороток к антигенам экстракта из половозрелых S. labiato-papillosa в ИФР (гетерологичная система; АГ - D. immitis)
Исследуемый Оптическая плотность в ИФР при разведении исследуемых сывороток
материал 1 : 100 1 : 200 1 : 400 1 : 800 1 : 1600 1 : 3200 1 : 6400 1 : 12800
Сыворотка кроличья 0,686 0,561 0,377 0,327 0,260 0,191 0,095 0,080
гипериммунная к АГ 0,600 0,586 0,486 0,352 0,228 0,178 0,125 0,083
из сетарий (а 1) 0.712 0.603 0.512 0.405 0.320 0.232 0.138 0.099
М±т 0,666±0,03 0,583±0,012 0,458±0,04 0,361±0,023 0,269±0,03 0,200±0,02 0,119±0,013 0,087±0,01
Сыворотка кроличья 0,699 0,677 0,483, 0,279 0,191 0,142 0,093 0,082
гипериммунная к АГ 0,629 0,546 0,508 0,326 0,226 0,170 0,123 0,079
из сетарий (6 1) 0.701 0.680 0.603 0.480 0.348 0.215 0.151 0.098
М±щ 0,676±0,02 0,634±0,044 0,531±0,05 0,362±0,06 0,255±0,05 0,176±0,021 0,122±0,02 0,086±0,01
Контрольная сыво- 0,118 0,099 0,082 0,069 0,062 0,068 0,059 0,053
ротка 0,104 0,082 0,072 0,063 0,059 0,057 0,047 0,032
0,129 0,111 0,093 0,081 0,072 0,062 0,055 0,047
М±т 0,117±0,007 0,097±0,008 0,082±0,006 0,071±0,005 0,064±0,004 0,062±0,003 0,053±0,004 0,044±0,01
Примечание. *- Р < 0,05 приtKpHTH4ecKOM = 2,78.
62
Слабая антигенность паразитарных белков для хозяина является следствием сближения их структуры в результате происходившей параллельной эволюции паразита и хозяина.
Одна из форм маскировки паразита под хозяина - характерная для гельминтов молекулярная мимикрия [11, 13, 15], которая выражается сорбцией белков хозяина поверхностными структурами паразита, что приводит к ослаблению иммуногенности их антигенов, которое, в свою очередь, влияет на уровень синтезируемых у хозяина антител и, следовательно, на эффективность иммунодиагностических тестов при гельминтозах.
В большинстве случаев у таксономически близких, а иногда и филогенетически удаленных биологических видов, многие белки имеют большое структурное сходство и, следовательно, антигенное родство, что является источником перекрестных реакций в иммунотестах.
При этом приспособленность определенных видов паразитов к определенным видам хозяев - ни что иное, как приобретенное в процессе эволюции свойство организма паразита приспосабливаться к защитным реакциям хозяина [3, 6, 18].
Именно установление перекрестной реактивности у разных видов гельминтов служит обоснованием для использования в некоторых случаях гетерологичных видов в качестве источников антигенного материала.
Наши данные убедительно доказали, что в белковом спектре экстрактов из половозрелых дирофилярий и сетарий имеются сходные белковые компоненты, вызывающие синтез антител у кроликов, вступающих в реакцию антиген-антитело с антигенами обоих видов гельминтов. Тем не менее, необходимо было получить конкретный ответ на вопрос о том, есть ли среди компонентов белкового экстракта из сетарий диагностически значимые при дирофиляриозе и можно ли использовать сетарии в качестве источника такого антигена.
Ответ на этот вопрос был получен в результате иммунохимического анализа соматических экстрактов из сетарий и дирофилярий с сыворотками зараженных D. immitis собак РИД, при которой в обоих случаях проявилась одна диффузная полоса преципитации. Проявление диффузных полос связано, как правило, с наличием в сыворотке антител различной специфичности и гетерогенностью антигенов.
Учитывая, что доля видоспецифических компонентов в антигеном спектре белковых экстрактов из гельминтов незначительная, для проведения диагностических исследований целесообразнее использовать хорошо очищенные и охарактеризованные антигены. Именно такой подход был впоследствии осуществлен нами, поскольку источником антигенного материала служил гетерологичный белковый экстракт из сетарий.
Таким образом, на основании анализа результатов проведенных нами исследований, подтвердивших присутствие в белковом экстракте из сетарий диагностически значимых антигенных компонентов при дирофиляриозе, мы считаем возможным использование половозрелых S. labiato-papillosa в качестве источника получения диагностического антигена при дирофиляриозе собак.
Литература
1. Andreeva G.N., Ermolin G.A., Tarakanov V.I. Perekrestno-reagiruiushie an-tigeni v ekstraktah Aphelenchus avenae, Neoaplectana glaseri i Dictyocaulus fi-laria // Tr. Vses. in-ta gelmintol. - 1975. - T. 22. - S. 3-7.
2. Andreeva G.N., Berezhko V.K. Sravnitelnii immunohimicheskii analiz nekotorih vidov nematod - parazitov rastenii, nasekomih I selskohoziaistvennih zhivotnih // Tr. Vses. in-ta gelmintol. - 1980. - T. 25. - S. 15-21.
3. Astafev B.A., Petrov O.E. Evoliucionno-geneticheskaia teoria parazitizma // Uspehi sovremen. biol. - 1992. - T. 112, № 2. - S. 163-175.
4. Ballad N.E., Sokolovskaia O.M. Viiavlenie obshih I specifichnih antigennih komponentov u Cysticercus bovis, Cysticercus cellulosae i Taeniarhynchus sagina-tus // Med. parazitol. i parazit. bol. - 1968. - № 2. - S. 193-198.
63
5. Berezhko V.K. Immunologicheskaia reaktivnost, immunodiagnostika i im-munoprofilaktika pri gelmintozah zhivotnih // Dissю ... d-ra biol. nauk. - M., 1994.
- 474 s.
6. Vinnickii V.M. Mehanizm antigelmintnogo immuniteta v svete vzaimoo-buslovlennoi filogenii parasite i hoziaina // Dokladi AN SSSR. - 1950. - T. 75, № 3. - S.477-480.
7. Gusev A.I. Cvetkov V.S. K tehnike postanovki reakcii mikroprecipitacii v agare // Lab. delo. -1961. - № 2. - S. 43-45.
8. Dargene R.K. Antigeni Trichinella spiralis, uchastvuiushie v immuno-geneze pri eksperimentalnom trihinelloze pescov // Tr. Vses. in-ta gelmintol. -1971. - T. 17. - S. 275-276.
9. Klimenko V.V., SazanovA.M. Perekrestno-reagiruiushie antigeni u Fasciola hepatica i Fasciola gigantica i ih promezhutochnih hoziaeva // Tr. Vses. in-ta gelmintol. - 1975. - T. 22. - S. 85-91.
10. Klimenko V.V. Obektivnie faktori, ogranichivaiushie diagnosticheskie efektivnost parazitarnih antigenov, i puti ih preodoleniia // Tr. Vses. in-ta gelmintol. - 2004. - T. 40. - S. 116-124.
11. Petrov R. V. Immunologia. - M.: Medicina, 1983. - 363 s.
12. Sviridenko-Stepankovskaia L.P., Konovalova M.N., Poletaeva O.G., Sokolovskaia O.N. Viiavlenie gruppopodobnih antigenov b ehinokokkovoi zhidkosti i ekstraktov liofilizatov Cysticercus cellulosae, С. bovis, Taeniarhynchus saginatus, Ascaris suum // Med. parazitol. i parazit. bol. - 1972. - № 2. - S. 131135.
13. Bhaffacharya Alok, Bhaffacharya Sudha, Sehgal Devinder Molecular basis of immune response against parasites // Curr. Sci (India). - 1991. - V. 60, № 9-10.
- P.569-580.
14. Capron A., Brygoo E.R., Afchain D. Apport de letude de la structure anti-genique a la phylogenie des Helminthes // Bull. Mus. Nat. hist. natur. Zoo. - 1972.
- V. 55 - P. 877-885.
15. Damian R.T. Molecular mimicry: antigen sharing by parasite and host and its consequences // American Naturalist. - 1964. - V. 98, № 900. - P. 129-149.
16. Hiroshi Schinoda S. Study on Rhabditis elongate. I. Antigenisity // Jap. J. Parasitol. - 1969 - V. 18, № 1. - P. 87-92.
17. Layne Е. Spectrophotometric and turbidometric methods for measuring proteins // Methods Enzymol. - 1957. - V. 3. - Р. 447-454.
18. Renaud F. Biodiversite, genetique et evolution dans les systemes hotes-parasites // Bull. Soc. Zool. Ff. - 1992. - V. 117, № 1. - P. 109-115.
19. Ruitenberg E.J., Van Knapen F. Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) as a diagnostic method for Trichinella spiralis infections in pigs // Vet. parasitol. - 1977. - V. 3, № 4. - P. 317-326.
20. Smith W.D. Serum and mucus antibodies in sheep immunised with larval antigens of Haemonchus contortus // Res. Vet. Sci. - 1977. - V. 22, № 1. - P. 128-129.
21. Smith W.D. Anti-larval antibodies in the serum and abomasal mucus of sheep hyperinfected with Haemonchus contortus // Res. Vet. Sci. - 1977. - V. 22, №. 3. - P. 334-338.
22. Wendrychowicz H., Bezubic B. Studies on the antigens of Ostertagia cir-cumcincta. I. Somatic antigens of infective larvae // Acta parasitol. pol. - 1983. -V. 28, № 24. - P. 233-244.
Immunoenzymatic reaction as method of determination of antigen affinity in different species of helminths V.K. Berezhko doctor of biological sciences L.A. Napisanova, K.A. Haidarov, A.A. Thakahova candidates of biological sciences
All-Russian Research Institute of Helminthology named after K.I. Skryabin,
64
117218, Moscow, B. Cheremushkinskaya, 28, e-mail: [email protected]
Immunoenzymatic reaction (IER) widely used for immunodiagnosis and sero-epizootic studies of helminthosis could be applied as a method for determination of antigen affinity between different kinds of helminths on the base of antigen-antibody reaction (heterologous and homologous) using hyperimmune sera for each type. Differences of reactivity in rabbits to antigens of somatic extracts from pubescent Dirofilaria immitis and Setaria labiato-papillosa are determined, that has been proved in IER by different titers of specific antibodies and level of optical density (OD). OD values in homologous antigen-antibody reaction (IER) in both cases: hyperimmune sera to antigen of extracts from D. immitis as well as from S. labiato-papillosa were higher than in heterologous system. By comparison of OD values in both IER variations it was determined that more that 50 % of synthesized antibodies in rabbits immunized with enzyme extracts from D. immitis and S. labi-ato-papillosa undergo the reaction antigen-antibody with a heterologous antigen. According to results of the coming immunochemical analysis of enzyme extracts from both types of parasites along with sera from dogs infected with D. immitis is determined that the antigen components important for diagnosis of dog's dirofilari-asis are presented in extract from S. labiato-papillosa. From our point of view the using of pubescent S. labiato-papillosa as an antigen souce by dirofilariasis in dogs is possible.
Keywords: immunoenzymatic test, Dirofilaria immitis, Setaria labiato-papillosa, hyperimmune serum, antigen affinity.
65
