CC BY
4
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ БИОЛОГИЯ
Научная статья УДК 579.22.582.28:619 EDN: KBHSUY
DOI: 10.21285/2227-2925-2023-13-3-382-391
Анализ состава жирных кислот, летучих полярных и неполярных органических соединений ветеринарного препарата «Траметин Плюс»
В.А. Чхенкели***м, Г.Д. Чхенкели*, А.А. Никонова***, А.Г. Горшков***
*ООО «Биотехвет», г. Иркутск, Российская Федерация
**Иркутский государственный университет, г. Иркутск, Российская Федерация ***Лимнологический институт СО РАН, г. Иркутск, Российская Федерация
Аннотация. Для профилактики и лечения ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней у молодняка сельскохозяйственных животных предлагается новый ветеринарный препарат «Траметин Плюс», получаемый на основе грибов-ксилотрофов с использованием методов биотехнологии. Свойства биопрепаратов, получаемых на основе микроорганизмов и грибов, зависят от биологически активных веществ, входящих в их состав. В литературе имеются разрозненные сведения об особенностях липогенеза и составе жирных кислот, синтезируемых дереворазрушающими грибами. В работе представлены данные по изучению качественного и количественного состава жирных кислот, качественный анализ летучих полярных и неполярных органических соединений препарата. Установлено, что суммарная концентрация жирных кислот составляет 70 мкг/г препарата. Из них 50,0% приходится на свободные жирные кислоты, из которых доля этерифицированных кислот составляет 50,0% от общей массы жирных кислот. Среди доминирующих неполярных летучих компонентов препарата «Траметин Плюс» можно отметить сквален. Органические алифатические аминокислоты, такие как глицин, аргинин, в-аланин с небольшой молекулярной массой, представлены как минорные неполярные летучие компоненты препарата «Траметин Плюс». Данные анализа подтверждают многокомпонентность препарата, что обусловливает его разнообразные биологические свойства, а именно антибактериальную, противовирусную, антиоксидантную и иммуностимулирующую активность, что вызывает высокую лечебно-профилактическую эффективность ветеринарного препарата «Траметин Плюс».
Ключевые слова: ксилотрофы, ветеринарный препарат, жирные кислоты, метиловые эфиры, хромато-масс-спектрометрия
Финансирование. Работа выполнена при финансовой поддержке ФБГУ «Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере», договор № 4893ГС1/86520 от 16 февраля 2023 г.
Для цитирования: Чхенкели В.А., Чхенкели Г.Д., Никонова А.А., Горшков А.Г. Анализ состава жирных кислот, летучих полярных и неполярных органических соединений ветеринарного препарата «Траметин Плюс» // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2023. Т. 13. N 3. С. 382-391. https://doi.org/10.21285/2227-2925-2023-13-3-382-391. EDN: KBHSUY.
PHYSICOCHEMICAL BIOLOGY
Original article
Determining the fatty acids, polar and non-polar volatile organic compounds of the veterinary preparation "Trametin Plus"
Vera A. Chkhenkeli***M, Guram D. Chkhenkeli*, Alena A. Nikonova***,
Alexander G. Gorshkov***
*Biotechvet LLC, Irkutsk, Russian Federation **lrkutsk State University, Irkutsk, Russian Federation ***Limnological Institute SB RAS, Irkutsk, Russian Federation
Abstract. For the prevention and treatment of associated gastrointestinal and respiratory diseases of growing stock, a new veterinary preparation "Trametin Plus" is proposed. This drug is obtained from fungi-xylotrophs using biotechnology methods. The properties of such preparations depend on bioactive substances included in their composition.
© Чхенкели В.А., Чхенкели Г.Д., Никонова А.А., Горшков А.Г., 2023
Available publications present miscellaneous information on the lipogenesis features and fatty acids composition synthesized by wood-destroying fungi. In this work, we study the qualitative and quantitative composition of fatty acids and analyze volatile polar and non-polar organic compounds of "Trametin Plus". The total concentration of fatty acids was found to be 70 yg/g, with 50.0% being free acids and 50.0% being their esters. Squalene was established to be the most dominant non-polar volatile component. Concerning the minor non-polar volatile components of "Trametin Plus", these are amino acids with a low molecular weight, such as glycine, arginine and p-alanine. The analysis confirms the multicomponent composition of the preparation, which accounts for its diverse biological properties, namely antibacterial, antiviral, antioxidant and immune-boosting activity. These properties determine the high health-promoting efficacy of the studied veterinary preparation.
Keywords: xylotrophs, veterinary preparation, fatty acids, methyl esters, chromatography-mass spectrometry
Funding. The work was carried out with financial support of the Federal State Budgetary Institution "Fund for Promotion of the Development of Small Forms of Enterprises in the Scientific and Technical Sphere", contract no. 4893GS1/86520 dated February 16, 2023.
For citation: Chkhenkeli V.A., Chkhenkeli G.D., Nikonova A.A., Gorshkov A.G. Determining the fatty acids, polar and non-polar volatile organic compounds of the veterinary preparation "Trametin Plus". Izvestiya Vuzov. Prikladnaya Khimiya i Biotekhnologiya = Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology. 2023;13(3):382-391. (In Russian). https://doi.org/10.21285/2227-2925-2023-13-3-382-391. EDN: KBHSUY.
ВВЕДЕНИЕ
Во всем мире возрастает интерес к разработке лекарственных препаратов на основе природных соединений. В медицине становятся приоритетными направления по изучению природных источников лекарственных препаратов [1-10].
Совершенствование системы мер по снижению заболеваемости молодняка сельскохозяйственных животных включает в себя использование новых лечебно-профилактических препаратов, в качестве которого предлагается новый препарат «Траметин Плюс», получаемый на основе культуральной жидкости при жидкофазном культивировании продуцента Trametes pubescens (Shumach. Fr.) Pilat., штамм 0663 из коллекции Ботанического института им. Л.Л. Комарова РАН [11-14].
В литературе имеются сведения об особенностях липогенеза и составе липидов низших грибов, водорослей, в то время как для высших грибов, в частности для базидиомицетов, аналогичные данные практически являются разрозненными. Состав свободных жирных кислот (СЖК) базидиомицетов рода малоизучен1,2,3. Исследования ограничиваются единичными работами по изучению липидов плодовых тел [15-21]. Однако достаточно хорошо известно, что жирные кислоты обладают фармакологической активностью в отношении различных нозологий как у человека, так и у животных. Целью настоящей работы являлось изучение качественного и количественного состава жирных кислот, качественного состава летучих полярных и неполярных органических соединений ветеринарного препарата «Траметин Плюс».
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Определение жирных кислот проводили по методике Никоновой А.А. и соавторов [22].
Экстракция липидов из препарата «Траметин Плюс». Липиды экстрагировали из параллельных навесок смесью Фолча (хлороформ-метанол в соотношении 2:1, по объему) в пластиковых пробирках типа Эппендорф емкостью 2 мл, встряхивая и выдерживая их в ультразвуковой ванне (1,2 мл х 3 х 5 мин). Экстракты объединяли в стеклянных пробирках для центрифугирования, добавляли 1,2 мл воды, эмульгировали, центрифугировали при 3000 об/мин. Перед экстракцией липидов из губок к навескам (масса влажной навески 0,02 г при влажности 97%) добавляли 100 мкл 8%-й Н^04 в воде и после изменения окраски с зеленой на желтую через 2 мин экстрагировали липиды. Экстракцию липидов из губок проводили один раз, к экстракту добавляли 350 мкл воды.
Кислотная этерификация жирных кислот и получение метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК) (общее содержание) препарата «Траметин Плюс». Хлороформный слой экстракта (нижний) переносили в стеклянные пенициллиновые флаконы емкостью 10 мл, упаривали в токе аргона досуха, сразу добавляли 4,5 мл 2%-й Н^04 в метаноле, плотно закрывали фольгой и помещали в термостат при температуре 55 °С на 1,5 ч. После метанолиза жирных кислот растворы охлаждали до комнатной температуры, добавляли 0,8 мл н-гексана. МЭЖК из полученных растворов экстрагировали н-гексаном (3 мл х 2 х 2 мин). Перед второй экстракцией к растворам добавляли по 1 мл воды. Экстракты концентрировали до 1 мл в токе аргона, осушали безводным №2Б04. Экстракты анализировали методом ГХ-МС.
Раздельное получение метиловых эфиров этерифи-цированных и свободных жирных кислот в условиях изменения рН препарата «Траметин Плюс». К навескам выделенных липидов (0,2 г сырой массы) добавляли 2 мл 0,4 М раствора №0Н в метаноле, помещали в УЗ-ванну
1Цуркан Я.С. Селекция микроорганизмов с высоким содержанием практически значимых полиненасыщенных жирных кислот: дис. ... д-ра философии (PhD). Алматы, 2015.195 с.
2Поединок Н.И. Биотехнологические основы интенсификации культивирования съедобных и лекарственных макромицетов с помощью света низкой интенсивности: дис. ... д-ра биол. наук. Киев, 2015. 387 с.
3Горностай Т.Г. Химический состав, способ получения и фармакогностическая характеристика мицелия Inonotus rheades (Hymenochaetaceae): дис. ... канд. фарм. наук. Иркутск, 2019. 208 с.
на 5 мин. Полученные метиловые эфиры (МЭ) этерифи-цированных жирных кислот (ЭЖК) экстрагировали н-гек-саном (3 мл х 2), промывали водой, сушили безводным Na2SO4, концентрировали в токе аргона до объема 1 мл.Экстракты МЭ ЭЖК анализировали методом ГХ. К оставшемуся щелочному раствору добавляли 3 мл воды, 0,15 г перетертого в фарфоровой ступке сульфата меди(11), встряхивали в течение 5-10 мин до перехода голубой окраски Cu2SO4 в зеленую - Cu(OH)2 (до рН=6,0), не передерживая раствор, чтобы избежать перехода Cu(OH)2 в CuO черного цвета, способного окислять жирные кислоты. СЖК экстрагировали н-гек-саном (3 мл х 2). Гексан выпаривали и проводили кислотную этерификацию СЖК. Экстракты анализировали методом ГХ-МС.
Анализ МЭЖК (качественный) методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием экстрактов. Экстракты анализировали на хромато-масс-спектрометре 6890В GC System, 7000С GC/MS Triple Quad (Agilent, США) с колонкой Optima-17 (30 м х 0,25 мм; 0,25 мкм) фирмы Macherey-Nagel (Германия). Температура инжектора составляла 280 °С, температура квадруполя - 150 °С, температура ионного источника - 230 °С; тип ионизации - электронный удар; энергия ионизации 70 эВ; объем пробы 2 мкл в режиме без деления потока; температура блока сопряжения ГХ-МСД 310 °С; поток по колонке 2,54 мл/мин. Хроматографию проводили в условиях нагрева колонки от 80 (удерживание 0,5 мин) до 290 °С со скоростью 2 °С/мин и далее нагрев до 310 °С (удерживание 5 мин) со скоростью 5 °С/мин. Общее время анализа составило 115 мин. Пики детектировали в диапазоне значений m/z 40-500. Масс-спектры идентифицировали с использованием программного обеспечения NIST Mass Spectral Search Program for the NIST Mass Spectral Library (V. 2.2).
Количественное определение МЭЖК жирных кислот методом ГХ-МС. Количественное определение МЭЖК проводили методом внутреннего стандарта, для чего к экстрактам перед анализом добавляли 50 мкл стандартного раствора дидецилового эфира (C20H42O) в н-гексане (1 мг/мл). Детектор градуировали в диапазоне 1МЭЖК от 40 до 540 мкг в пробе с использованием стандартов (Supelco, США) «35 F.A.M.E. Mix, C4-C24, 100 mg neat» и «Methyl cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoic ester, 10 mg/mL in heptane» (70-1000 мкг в пробе). Калибровочные коэффициенты были определены для индивидуальных кислот и для групп кислот (насыщенных, мононенасыщенных, полиненасыщенных).
Экстракция неполярных органических компонентов препарата «Траметин Плюс». Экстракцию неполярных компонентов пробы проводили из навесок препарата «Траметин Плюс» массой 1,0 г. Навеску препарата помещали в стеклянный флакон и экстрагировали 3 мл н-гексана трижды (1 мин). Экстракты объединяли, промывали дистиллированной водой, осушали безводным сульфатом натрия, концентрировали в токе аргона до объема 0,5 мл и анализировали методом ГХ-МС в режиме полного сканирования масс-спектра с использованием программного обеспечения «Библиотека масс-спектров» NIST и Mass Spectral Search Program for the NIST Mass Spectral Library (V. 2.2).
Экстракция полярных органических компонентов препарата «Траметин Плюс»
Способ 1. Экстракцию полярных компонентов пробы проводили из навесок препарата «Траметин Плюс» массой 1,0 г. Навеску препарата наносили на патрон с обращенно-фазным сорбентом DSC C-18 (Supelco, США), предварительно промытый н-гексаном (5 мл), ацетоном (5 мл), метанолом (5 мл) и дистиллированной водой (10 мл) в вакууме. Элюирование пробы, сконцентрированной на патроне, проводили этанолом (5 мл.) под вакуумом. Экстракт концентрировали в токе аргона до объема 0,5 мл и анализировали методом ГХ-МС в режиме полного сканирования масс-спектра с использованием программного обеспечения «Библиотека масс-спектров» NIST и Mass Spectral Search Program for the NIST Mass Spectral Library (V. 2.2).
Способ 2. Экстракцию полярных компонентов пробы проводили из навесок препарата «Траметин Плюс» массой 1,0 г. К навеске препарата добавляли соляную кислоту HCl до pH=2,0. Экстракцию осуществляли 3 мл хлористого метилена трижды в течение 1 мин. Экстракты объединяли, промывали дистиллированной водой, осушали безводным сульфатом натрия, концентрировали в токе аргона до объема 0,5 мл и анализировали методом ГХ-МС в режиме полного сканирования масс-спектра с использованием программного обеспечения «Библиотека масс-спектров» NIST и Mass Spectral Search Program for the NIST Mass Spectral Library (V. 2.2).
Качественный анализ полярных и неполярных компонентов проб методом газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Экстракты анализировали на хромато-масс-спектрометре 6890В GC System, 7000С GC/MS Triple Quad (Agilent, США) с колонкой Optima-17 (30 м х 0,25 мм; 0,25 мкм) фирмы Macherey-Nagel (Германия). Температура инжектора составила 280 °С, температура квадруполя - 150 °С, температура ионного источника - 230 °С; тип ионизации - электронный удар; энергия ионизации 70 эВ; объем пробы 2 мкл в режиме с делением потока в соотношении 5:1. Деление 12,691 см3/мин. Температура блока сопряжения ГХ-МСД 310 °С; поток по колонке 3,02 мл/мин. Хроматографию проводили в условиях нагрева колонки от 45 (удерживание 3 мин) до 310 °С (удерживание 15 мин) со скоростью 7 °С/мин. Общее время анализа составило 56 мин. Пики детектировали в диапазоне значений m/z 40-500. Масс-спектры идентифицировали с использованием программного обеспечения NIST Mass Spectral Search Program for the NIST Mass Spectral Library (V. 2.2).
В табл. 1 приведены массы проб препарата «Траметин Плюс», указаны экстрагенты, способ подготовки проб, анализируемые компоненты пробы.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
При проведении анализа СЖК, ЭЖК и общих жирных кислот (ОЖК) ветеринарного препарата «Траметин Плюс» в форме их МЭ среди них проанализированы насыщенные жирные кислоты (НЖК), мононенасыщенные жирные кислоты (МНЖК) и полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК).
На хроматограммах экстрактов МЭ СЖК было выявлено 15 пиков жирных кислот, из которых были идентифицированы все 15 пиков. На хроматограммах экстрактов МЭ ЭЖК было выявлено 18 пиков жирных кислот, из которых были идентифицированы все 18 пиков.
Таблица 1. Данные по анализу проб ветеринарного препарата «Траметин Плюс» Table 1. Analysis data of samples of the veterinary drug "Trametin Plus"
№ пробы Препарат, масса, г Анализируемые компоненты Экстрагент Особенности пробоподготовки
1.1 0,996 Общие жирные кислоты Кислотный гидролиз общих
1.2 1,006 жирных кислот
2.1 1,013 Свободные жирные кислоты Смесь Фолча для экстракции Щелочная этерификация свободных жирных кислот и экс-
2.2 1,024 липидов и н-гексан для экстракции метиловых эфиров жирных кислот тракция метиловых эфиров свободных жирных кислот н-гексаном
3.1 1,013 Переэтерификация этерифицированных жирных кислот при рН = 6 и экстракция метиловых эфиров этерифицированных жирных кислот н-гексаном
3.2 1,024 Этерифицированные жирные кислоты
4 5,031 Неполярные компоненты н-гексан Жидкость-жидкостная экстракция
5 5,025 Полярные компоненты Этанол Твердофазная экстракция на патронах с обращенно-фазным сорбентом С18 и элюирование этанолом
6 5,032 Полярные компоненты Хлористый метилен Жидкость-жидкостная экстракция при рН = 2,0
Таблица 2. Время удерживания tR и калибровочные коэффициенты k идентифицированных жирных кислот Table 2. Retention time tR and calibration coefficients k of identified fatty acids
Формула жирных кислот Название ШРАС (и тривиальное название) tR, мин k
12:0 Додекановая кислота (лауриновая) 27,603 1,2149
13:0 Тридекановая кислота (тридециловая) 33,433 1,2416
iso-14:0 Изо-тетрадекановая кислота 36,662 1,3677
a/iso-14:0 Анти-изо-тетрадекановая кислота 36,950 1,3677
14:0 Тетрадекановая кислота (миристиновая) 39,098 1,3677
iso-15:0 Изо-пентадекановая кислота 42,492 1,3842
a/iso-15:0 Анти-изо-пентадекановая кислота 42,975 1,3842
15:0 Пентадекановая кислота (пентадециловая) 44,562 1,3842
16:1 Цис-11-гексадеценовая кислота 48,364 1,2873
16:1 Цис-9-гексадеценовая кислота (пальмитолеиновая) 48,522 1,2873
16:0 Гексадекановая кислота (пальмитиновая) 49,880 1,6130
17:0 Гептадеценовая кислота (маргариновая) 52,928 1,1129
18:2 Цис, цис-9, 12-октадекадиеновая кислота (линолевая) 57,902 1,2477
18:1 Цис-11-октадеценовая кислота (цис-вакценовая) 58,240 1,5533
18:1 Цис-9-октадеценовая кислота (олеиновая) 58,535 1,5533
18:0 Октадекановая кислота (стеариновая) 59,686 1,7802
20:0 Эйкозановая кислота (арахиновая) 68,757 1,8832
22:1 цис-13-докозеновая кислота (эруковая) 76,026 1,6634
На хроматограммах экстрактов МЭ ОЖК было представлено 18 пиков жирных кислот, из которых были идентифицированы все 18 пиков. Всего в составе проб ветеринарного препарата «Траметин Плюс» идентифицировано 18 жирных кислот, из них 12 НЖК, 5 МНЖК и одна ПНЖК - незаменимая ш-6 полиненасыщенная линолевая кислота, представленная в минимальных количествах. Хроматографические характеристики идентифицированных кислот представлены в табл. 2, качественный и количественный состав - в табл. 3.
На долю этерифицированных кислот, т.е. кислот, которые находятся в препарате в связанной форме в качестве кислотных остатков триглицеридов и фос-фолипидов, приходится 45,0% всех жирных кислот препарата. На долю свободных несвязанных жирных кислот приходится 55,0% всех жирных кислот препарата «Траметин Плюс» (табл. 3).
Основная доля всех жирных кислот препарата (82,0%) приходится на НЖК. На долю МНЖК приходится 16,0% всех кислот, на долю ПНЖК - 2,0% (см. табл. 3). Наблюдается перераспределение в составе жирных кислот в зависимости от степени их насыщенности между свободными и связанными кислотами. Так, для свободных кислот на долю насыщенных жирных кислот приходится 67,0%, а на долю ненасыщенных - 33,0%; для связанных кислот на долю НЖК приходится 82,0%, а на долю ненасыщенных - 18,0%. Отмечено преоб-
фицированной форме (см. табл. 3).
Из табл. 3 видно, что средняя концентрация жирных кислот в препарате «Траметин Плюс» составляет около 70,0 мкг/г ветпрепарата. Концентрация НЖК составляет около 57,0 мкг/г, концентрация ненасыщенных жирных кислот - около 12,0 мкг/г. Концентрация СЖК составляет около 41,0 мкг/г, концентрация ЭЖК - около 34,0 мкг/г препарата.
Процентное содержание жирных кислот приведено в табл. 4.
Качественный анализ летучих полярных и неполярных органических соединений ветеринарного препарата «Траметин Плюс» был проведен с использованием библиотеки масс-спектров NIST Database. Отмечен очень сложный состав компонентов. В особенности это касается гексанового и этанольного экстрактов препарата. Значительная часть пиков на хроматограммах является негомогенными пиками, которые не могут быть идентифицированы простым сравнением с библиотеками масс-спектров NIST. Значительная часть пиков регистрируется как гомогенные пики, но также не может быть идентифицирована путем сравнения масс-спектров этих пиков с библиотечными, поскольку масс-спектры пиков препарата «Траметин Плюс» и библиотечных спектров имеют значимые различия.
Вероятнее всего, это связано со сложностью объекта и уникальностью биологических соединений,
ладание ненасыщенных кислот в свободной неэтери-Таблица 3. Качественный и количественный (мкг/г) состав жирных кислот препарата «Траметин Плюс» Table 3. Qualitative and quantitative (mcg/g) composition of fatty acids of "Trametin Plus"
Формула Содержание жирных кислот в препарате, мкг/г препарата
жирных Номера проб Среднее содержание
кислот 1.1 1.2 2.1 2.2 3.1 3.2 ОЖК* ЭЖК СЖК ОЖК**
12:0 0,099 0,098 0,091 0,127 0,031 0,709 0,099 0,109 0,370 0,478
13:0 0,122 0,121 0,000 0,000 0,045 0,145 0,121 0,000 0,095 0,095
iso-14:0 0,444 0,439 0,226 0,237 0,280 0,696 0,441 0,232 0,488 0,720
a/iso-14:0 0,234 0,232 0,299 0,274 0,067 0,146 0,233 0,287 0,106 0,393
14:0 3,317 3,284 1,107 1,031 0,890 3,325 3,301 1,069 2,108 3,177
iso-15:0 3,835 3,797 6,659 5,886 0,132 0,451 3,816 6,272 0,291 6,564
a/iso-15:0 6,221 6,159 10,26 9,481 0,252 0,984 6,190 9,871 0,618 10,49
15:0 1,642 1,626 0,290 0,320 0,363 1,238 1,634 0,305 0,800 1,106
16:1 2,951 2,921 0,852 0,810 1,601 3,397 2,936 0,831 2,499 3,330
16:1 1,090 1,079 1,629 1,287 0,426 0,621 1,085 1,458 0,524 1,982
16:0 28,57 28,29 8,270 7,760 7,33 23,57 28,428 8,016 15,45 23,46
17:0 1,077 1,066 1,365 1,061 0,193 0,164 1,071 1,213 0,179 1,392
18:2 1,161 1,150 0,555 0,505 0,932 1,771 1,156 0,530 1,352 1,881
18:1 6,047 5,987 2,038 1,878 4,801 10,37 6,017 1,958 7,586 9,544
18:1 0,550 0,544 0,318 0,289 0,367 0,830 0,547 0,304 0,598 0,902
18:0 10,71 10,60 1,691 1,580 3,330 9,605 10,65 1,636 6,468 8,103
20:0 0,735 0,727 0,000 0,000 0,177 0,413 0,731 0,000 0,295 0,295
22:1 0,589 0,583 0,000 0,000 0,834 1,288 0,586 0,000 1,061 1,061
Сумма 69,39 68,70 35,65 32,53 22,05 59,72 69,05 34,09 40,88 74,97
НЖК 57,00 56,44 30,26 27,76 13,09 41,44 56,72 29,01 27,26 56,27
МНЖК 11,23 11,11 4,838 4,265 8,030 16,51 11,17 4,551 12,27 16,82
ПНЖК 1,161 1,150 0,555 0,505 0,932 1,771 1,156 0,530 1,352 1,881
Примечание. Здесь и в табл. 4: *- общее содержание жирных кислот (свободных и этерифицированных), полученное прямым способом (см. п. 2); **- общее содержание жирных кислот (свободных и этерифицированных), полученное суммированием значений содержаний свободных и этерифицированных жирных кислот в пробах, полученных согласно п. 3.
Таблица 4. Качественный и количественный (% от суммы) состав жирных кислот препарата «Траметин Плюс»
Table 4. Qualitative and quantitative (% of the total) composition of the fatty acids of "Trametin Plus"
Формула Состав жирных кислот в препарате, % от суммы жирных кислот в пробе
жирных Номера проб Среднее содержание
кислот 1.1 1.2 2.1 2.2 3.1 3.2 ОЖК* ЭЖК СЖК ОЖК**
12:0 0,14 0,14 0,25 0,39 0,14 1,19 0,14 0,32 0,90 0,64
13:0 0,18 0,18 0,00 0,00 0,20 0,24 0,18 0,00 0,23 0,13
iso-14:0 0,64 0,64 0,63 0,73 1,27 1,17 0,64 0,68 1,19 0,96
a/iso-14:0 0,34 0,34 0,84 0,84 0,30 0,24 0,34 0,84 0,26 0,52
14:0 4,78 4,78 3,11 3,17 4,04 5,57 4,78 3,14 5,15 4,24
iso-15:0 5,53 5,53 18,7 18,1 0,60 0,76 5,53 18,40 0,71 8,75
a/iso-15:0 8,96 8,96 28,8 29,2 1,14 1,65 8,96 29,0 1,51 14,0
15:0 2,37 2,37 0,81 0,98 1,65 2,07 2,37 0,90 1,96 1,47
16:1 4,25 4,25 2,39 2,49 7,26 5,69 4,25 2,44 6,11 4,44
16:1 1,57 1,57 4,57 3,96 1,93 1,04 1,57 4,28 1,28 2,64
16:0 41,2 41,2 23,2 23,9 33,2 39,5 41,2 23,5 37,8 31,3
17:0 1,55 1,55 3,83 3,26 0,88 0,27 1,55 3,56 0,44 1,86
18:2 1,67 1,67 1,56 1,55 4,23 2,97 1,67 1,55 3,31 2,51
18:1 8,71 8,71 5,72 5,77 21,8 17,4 8,71 5,74 18,6 12,7
18:1 0,79 0,79 0,89 0,89 1,67 1,39 0,79 0,89 1,46 1,20
18:0 15,4 15,4 4,74 4,86 15,1 16,1 15,4 4,80 15,8 10,8
20:0 1,06 1,06 0,00 0,00 0,80 0,69 1,06 0,00 0,72 0,39
22:1 0,85 0,85 0,00 0,00 3,78 2,16 0,85 0,00 2,60 1,42
Сумма 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
НЖК 82,2 82,2 84,9 85,3 59,4 69,4 82,2 85,1 66,7 75,1
МНЖК 16,2 16,2 13,6 13,1 36,4 27,6 16,2 13,4 30,0 22,4
ПНЖК 1,67 1,67 1,56 1,55 4,23 2,97 1,67 1,55 3,31 2,51
входящих в его состав, часть из которых может быть пока просто неизвестна науке. Подробная идентификация компонентов препарата требует серьезных длительных научных исследований, тщательной и детализированной для каждого класса соединений подготовки проб, изучения структуры соединений с использованием различных методов хроматографии, масс-спектрометрии, ядерного магнитного резонанса и т.д. Ряд пиков летучих компонентов на хроматограммах указанных экстрактов может быть идентифицирован с вероятностью >70,0%. Эти соединения представлены ниже (табл. 5, 6).
Неполярные летучие компоненты пробы, растворимые в н-гексане, представлены соединениями с небольшими молекулярными массами Мг<350 (см. табл. 5), среди них пираны, фураны, спирты, альдегиды, кетоны, гетероциклические соединения, насыщенные алифатические углеводороды (предельные п-алканы), непредельные углеводороды диенового ряда, в том числе сквален, ароматические соединения, индол (см. табл. 5).
Полярные летучие компоненты пробы, растворимые в этиловом спирте, представлены соединениями с небольшими молекулярными массами Мг<310 (см. табл. 6), среди них уксусная кислота, ацетоин - один из продуктов бутандиолового брожения, уксусный ангидрид, фурфураль - продукт дегидрирования ксилозы (см. табл. 6), гетероциклические соединения фуранон и пиранон, альдегиды, в том числе фенилацетальдегид, пептиды, кетоны, простейшие сахара и аминокислоты, ароматические соединения.
Летучие аминокислоты препарата «Траметин Плюс» представлены как минорные компоненты пробы, среди них глицин и саркозин в форме дипептида глицилсар-козина, где саркозин - метильное производное аминокислоты глицина, аргинин и 0-аланин, представленный в форме амида аминокислоты ^-аланин и пантоевой кислоты (витамин группы В).
Среди перечисленных соединений есть соединения, обладающие несомненной и достаточно сильной биологической активностью. Активность проявляется как противовоспалительное, антибактериальное, противовирусное, антиоксидантное, обволакивающее, иммуно-модулирующее, противоопухолевое действие. При этом ряд соединений обладает несомненной токсичностью в экспериментах на животных согласно литературным данным, включая гепатотоксичность, канцерогенность, общетоксическое действие, нейротоксичность.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведен количественный анализ жирных кислот ветеринарного препарата «Траметин Плюс». Показано, что суммарная концентрация жирных кислот составляет 70 мкг/г препарата. Из них 50,0% приходится на СЖК, большинство из которых обладают мощным антибактериальным, противовирусным, противоопухолевым действием, в то время как этерифицированные (связанные) кислоты, на долю которых приходится 50,0% от общей массы жирных кислот, в большей степени обладают обволакивающим и противовоспалительным действием. В то же время незаменимые ПНЖК в препарате практически отсутствуют. Согласно литературе
Таблица 5. Неполярные органические компоненты препарата «Траметин Плюс» согласно библиотеке NIST
Table 5. Non-polar organic components of the drug "Trametin Plus" according to the NIST library
tR, мин Формула Название согласно библиотеке масс-спектров NIST
2,089 C6H12O 2,5-диметилтетрагидрофуран
2,204 C6H12O 2-метилтетрагидро-2Н-пиран
2,239 C7H14 метилциклогексан
2,647 C6H14O 3-метил-3-пентанол,
2,941 C7H 8 толуол
3,336 C6H12O 3-метил-1-пентин-3-ол
3,409 C6H14O 2-гексанол
3,723 C6H12O 3-гексанон
5,427 C7H16O2 5-метокси-2-метил-2-пентанол
5,507 C6H14S 1- гексантиол
5,950 C9H18O3 2-этоксиэтил-3-метилбутаноат
6,443 C6H10O2 1-(3-этилоксиранил)этанон
7,654 C17H30O4 циклогексилнонилоксалат
9,123 C13H26 гептилциклогексан
10,239 C8H 8O фенилацетальдегид
12,882 C11H16O 1-метокси-4-метил-2-(1-метилэтил) бензол
14,478 c7h5ns 1,2-бензизотиазол
15,691 C10H12O анетол
15,776 C8H7N индол
17,211 C14H30 тетрадекан
21,004 C16H34 гексадекан
21,477 C12H14O 4-метил-1-фенил-1-пентен-3-он
22,957 C13H16O 5-метил-1-фенил-1-гексен-3-он
25,027 C11H34O2 изопропил-12-метилтридеканоат
25.600 C18H38O 1-октадеканол
26,382 C16H22O4 диизобутилфталат
27,515 C11H36 2,6,10-триметилтетрадекан
27,929 C16H22O4 дибутилфталат
28,711 C20H40 1-эйкозен
31,553 C22H46O 1-докозанол
35,434 C24H38O4 диизоктилфталат
37,738 C30H50 сквален
38,435 C H NO 22 43 транс-13-докозенамид
высокое содержание СЖК может быть характерно для ряда водорослей [15], мицеллярных грибов [16] и, как показано в наших исследованиях, для базидиальных грибов. Их анализ, бесспорно, играет важную роль в диагностической медицине [17].
Среди доминирующих неполярных летучих компонентов препарата «Траметин Плюс» присутствует соединение тритерпенового ряда - сквален С30Н50 (надежность определения методом ГХ-МС >95,0%). Это вещество обладает мощным антиоксидантным, иммуностимулирующим, обволакивающим поверхностно-активным действием, защищая слизистые оболочки организма.
Таблица 6. Полярные органические компоненты препарата «Траметин Плюс» согласно библиотеке NIST
Table 6. Polar organic components of the drug "Trametin Plus" according to the NIST library
tR, мин Формула Название согласно библиотеке масс-спектров NIST
2,586 C2H4O2 уксусная кислота
3,485 C4H8O2 ацетоин
4,09 C4H10O2 2,3-бутандиол, р-^*^*)]-
4,489 C4H6O3 уксусный ангидрид
5,156 C5H4O2 фурфурол
8,046 C4H4O2 2(5Н)-Фуранон
8,616 C6H6O2 5-метилфурфурол
10,255 C8H8O фенилацетальдегид
10,932 C5H10N2O3 глицилсаркозин
11,711 C6H8O4 пиранон
12,161 C12H14N4O4 2-винил-9-[3-дезокси-р^-рибофуранозил]гипоксантин
12,97 C25 H 44N 2O5S 2-миристиноилпантетеин
13,712 C6H14N4O2 аргинин
14,534 C6H6O3 5-гидроксиметилфурфурол
14,863 C8H14O1 6-О-аcetyl-p-d-маннопираноза
15,785 C8H1N м-аминофенилацетилен имидазоло[1,2-а]
20,963 C19H15N3O пиридин-6-карбонитрил, 1,2,3,5-тетрагидро-7-метил
24,782 C5H4N4O3 мочевая кислота 5,10-диэтокси-2,3,7,8-
28,693 C H N O 14 22 2 2 тетрагидро-1Н,6Н- дипирроло[1,2-a:1',2'-d] пиразин
31,316 C H N O 12 14 2 2 3-метил-6-(фенилметил)-2,5-пиперазиндион
31,714 C11H12N2O2 3-( фенилметил)-2,5-пиперазиндион
33,951 C15H20N2O2 цикло-(Ь-лейцил-Ь-фенилаланил) пирроло[1,2-а]
34,714 C14H16N2O2 пиразин-1,4-дион, гексагидро-З-(фенилметил)-
Простейшие органические алифатические аминокислоты, такие как глицин (М = 75 г/моль), аргинин (М = 174 г/моль), в-аланин (М = 89 г/моль), с небольшой молекулярной массой представлены как минорные неполярные летучие компоненты препарата «Траметин Плюс».
Остальные органические компоненты препарата способны оказывать комплексное воздействие на организм. Токсичность некоторых компонентов для животных может быть рассмотрена для установления доз и сроков применения препарата «Траметин Плюс».
СПИСОК
1. Ильичёва Т.Н., Ананко Г.Г., Косогова Т.А., Оль-кин С.Е., Омигов В.В., Таранов О.С. [и др.]. Проти-вови-русная активность меланина из чаги (Inonotus obliquus), полученного на основе культивирования штамма F-1244, выделенного в чистую культуру // Химия растительного сырья. 2020. N 2. С. 283-289. https://doi.org/10.14258/jcpim.2020025167.
2. Теплякова Т.В., Пьянков О.В., Косогова Т.А., Кабанов А.С., Петровская И.Ф. Трутовик скошенный, чага Inonotus obliquus (Ach. ex Pers.) Pilat. - перспективный гриб для получения противовирусных препаратов // Микология сегодня. М.: Национальная академия микологии, 2022. Т. 4. С. 107-119.
3. Teplyakova T.V., Gashnikova N. Medical mushrooms in complex treatment of human Immunodeficiency virus infection // International Journal of Medicine Mushrooms. 2019. Vol. 21, no. 5. P. 487-492. https://doi.org/10.1615/IntJMedMushrooms.2019030175.
4. Голышкин А.В., Альмяшева Н.Р., Зиангирова М.Ю., Краснопольская Л.М. Ростовые и биохимические характеристики некоторых видов съедобных и лекарственных грибов в зависимости от способов предобработки лигноцеллюлозного сырья // Сельскохозяйственная биология. 2019. Т. 54. N 3. С. 607-615. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2019.3.607rus .
5. Тренин А.С., Краснопольская Л.М., Бычкова О.П., Альмяшева Н.Р., Голышкин А.В., Максимова М.А. [и др.]. Скрининг ингибиторов биосинтеза стеро-лов для создания новых антифунгальных антибиотиков // Успехи медицинской микологии. 2019. Т. 20. С. 465-469. EDN: QXHXSX.
6. Golyshkin A., Almyasheva N., Yarina M., Krasnopolskaya L. Mycelium growth of xylotrophic basidiomycetes on chemically modified lignocellulosic substrates // Abstract Book, XVIII Congress of European Mycologists (Warsaw and Biatowieza, 16-21 September 2019). Warsaw, 2019. P. 98.
7. Almyasheva N., Golyshkin A., Rogozhin E., Krasnopolskaya L. The comparative study of phenolic metabolites produced by Hericium erinaceus and Agrocybe aegerita in vegetative and generative stages // Abstract Book, XVIII Congress of European Mycologists (Warsaw and Biatowieza, 16-21 September 2019). Warsaw, 2019. P. 99.
8. Тренин А.С., Краснопольская Л.М., Бычкова О.П., Максимова М.А., Альмяшева Н.Р., Голышкин А.В. Биологически активные соединения высших грибов с анти-фугальной активностью и способностью к подавлению биосинтеза стеролов // Молекулярные и биологические аспекты химии, фармацевтики и фармакологии: 5-я Международная междисциплинарная конференция (г. Судак, 15-18 сентября 2019 г.). М.: Перо, 2019. С. 172. EDN: QNTAIH.
9. Альмяшева Н.Р., Голышкин А.В., Зиангирова М.Ю., Петрова Д.А., Краснопольская Л.М. Продукция липо-литических ферментов ксилотрофными грибами отдела Basidiomycota // Антибиотики и химиотерапия. 2018. Т. 63. N 1-2. С. 8-13. EDN: XTGEMH.
10. Almyasheva N.R., Shuktueva M.I., Petrova D.A., Kopytsyn D.S., Kotolev M.S., Vinokurov V.A., et al. Biodisel fuel production by Aspergillus niger whole-cell biocatalyst in optimized medium // Mycoscience. 2017.
Vol. 59, no. 2. P. 147-152. https://doi.Org/10.1016/j.myc.2017.09.003.
11. Чхенкели В.А., Романова Е.Д., Власов Б.Я. Профилактика негативного воздействия экологи-ческих факторов на организм молодняка сельскохозяйственных животных и птицы с использованием ветеринарного препарата Траметин. Lambert Academic Publshing, 2020. 121 c.
12. Чхенкели В.А. Механизмы действия препарата Траметин на организм животных при ассоциированных инфекциях. СПб.: Проспект науки, 2020.176 с.
13. Чхенкели В.А. Препараты последнего поколения на основе грибов-ксилотрофов рода Trametes: обнаруженные эффекты, механизмы действия и применение. М.: Перо, 2014. 126 с. EDN: SXVVQZ.
14. Чхенкели В.А., Уланская А.В. Сальмонеллез как биологический фактор в экотехсистеме и его профилактика с использованием ветеринарного препарата «Траметин». Иркутск: Изд-во ИГУ, 2022. 107 с.
15. Falk-Petersen S., Sargent J.R., Henderson J., Hegseth E.N., Hop H., Okolodkov Y.B. Lipids and fatty acids in ice algae and phytoplankton from the marginal ice zone in the Barents sea // Polar Biology. 1998. Vol. 20. Р. 41-47.
https://doi.org/10.1007/s003000050274.
16. Феофилова Е.П., Бурлакова Е.Б., Кузнецова Л.С. Значение реакции свободного окисления в регуляции роста и липидообразования эукариотных и прокариотных организмов // Прикладная биохимия и микробиология. 1987. Т. 23. N 1. С. 3-13.
17. Феофилова Е.П., Горнова И.Б., Меморская А.С., Гарибова Л.В. Липидный состав плодовых тел и глубинного мицелия Lentinus edodes (Berk.) Sing [Lentinula edodes (Berk.) Pegler)] // Микробиология. 1998. Т. 67. N 5. С. 655-659.
18. Белова Н.В. Перспективы использования биологически активных соединений базидиальных грибов в России // Микология и фитопатология. 2004. Т. 38. N 2. С. 1-7.
19. Бабицкая В.Г., Черноок Т.В., Щерба В.В. Характеристика липидов глубинного мицелия грибов // Вестник Белорусского государственного университета. Серия 2: Химия. Биология. География. 2009. Т. 4. N 1. С. 101-111.
20. Лощинина Е.А., Цивилева О.М., Макаров О.Е., Никитина В.Е. Изменение углеводного и жирнокислотного состава мицелия Lentinus edodes при совместном культивировании Azoprifilum brasilense // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2012. N 2. С. 64-67.
21. Цивилёва О.М., Нгуен Т.Ф., Ву Л.Н., Чернышо-ва М.П., Юрасов Н.А., Петров А.Н. [и др.] Липидные компоненты пигментированного и глубинного мицелия Ganoderma разных климатических зон // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2015. N 3. С. 37-47.
22. Никонова А.А., Шишлянников С.М., Шишлян-никова Т.А., Авезова Т.Н., Бабенко Т.А., Белых О.И. [и др.] Определение свободных и этерифицированных жирных кислот в гидробионтах с различным содержанием полиненасыщенных кислот методом газожидкостной хроматографии // Журнал аналитической химии. 2020. Т. 75. N 10. С. 907-920. https://doi.org/10.31857/S0044450220100102. EDN: WHRREK.
1. Ilyicheva T.N., Anan'ko G.G., Kosogova T.A., Olkin S.E., Omigov V.V., Taranov O.S., et al. Antiviral activity of the melanin from birch fungus (Inonotus obliquus) obtained by cultivating F-1244 strain isolating to pure culture. Khimiya rastitel'nogo syr'ya. 2020;(2):283-289. (In Russian).
https://doi.org/10.14258/jcpim.2020025167.
2. Teplyakova T.V., P'yankov O.V., Kosogova T.A., Kabanov A.S., Petrovskaya I.F. Mowed polypore, chaga Inonotus obliquus (Ach. ex Pers.) Pilat. - a promising mushroom for obtaining antiviral drugs. In: Mycology today. Moscow: Natsional'naya akademiya mikologii; 2022, vol. 4, p. 107-119. (In Russian).
3. Teplyakova T.V., Gashnikova N. Medical mushrooms in complex treatment of human Immunodeficiency virus infection. International Journal of Medicine Mushrooms. 2019;21(5):487-492. https://doi.org/10.1615/IntJMedMushrooms.2019030175.
4. Golyshkin A.V., Almyasheva N.R., Ziangirova M. Yu., Krasnopolskaya L.M. Effect of pretreatment of ligno-cellulosic substrates on physiological and biochemical characteristics of some species of edible and medical mushrooms. Sel'skokhozyaistvennaya biologiya = Agricultural Biology. 2019;54(3):607-615. (In Russian). https://doi.org/10.15389/agrobiology.2019.3.607rus.
5. Trenin A.S., Krasnopol'skaya L.M., Bychkova O.P., Al'myasheva N.R., Golyshkin A.V., Maksimova M.A., et al. Screening of inhibitors of sterol biosynthesis for the development of new antifungal antibiotics. Uspekhi meditsinskoimikologii. 2019;20:465-469. (In Russian). EDN: QXHXSX.
6. Golyshkin A., Almyasheva N., Yarina M., Krasnopolskaya L. Mycelium growth of xylotrophic basidiomy-cetes on chemically modified lignocellulosic substrates. In: Abstract Book, XVIII Congress of European Mycologists. Warsaw and Biatowieza, 16-21 September 2019. Warsaw; 2019, p. 98.
7. Almyasheva N., Golyshkin A., Rogozhin E., Krasnopolskaya L. The comparative study of phenolic metabolites produced by Hericium erinaceus and Agro-cybe aegerita in vegetative and generative stages. In: Abstract Book, XVIII Congress of European Mycologists. Warsaw and Biatowieza, 16-21 September 2019. Warsaw; 2019, p. 99.
8. Trenin A.S., Krasnopol'skaya L.M., Bychkova O.P., Maksimova M.A., Al'myasheva N.R., Golyshkin A.V. Biologically active compounds of higher fungi with antifugal activity and the expectation of a decrease in sterol biosynthesis. In: Molekulyarnye i biologicheskie aspekty kh-imii, farmatsevtiki i farmakologii: 5-ya Mezhdunarodnaya mezhdistsiplinarnaya konferentsiya = Molecular and Biological Aspects of Chemistry, Pharmaceutics and Pharmacology: 5th International Interdisciplinary Conference. Sudak, 15-18 September 2019. Moscow: Pero; 2019, p. 172. (In Russian). EDN: QNTAIH.
9. Almyasheva N.R., Golyshkin A.V., Ziangirova M.Y., Petrova D.A., Krasnopolskaya L.M. Production of lipolytic enzymes by xylotrophic fungi of the division Ba-sidiomycota. Antibiotiki i khimioterapiya = Antibiotics and Chemotherapy. 2018;63(1-2):8-13. (In Russian). EDN: XTGEMH.
10. Almyasheva N.R., Shuktueva M.I., Petrova D.A.,
Kopytsyn D.S., Kotolev M.S., Vinokurov V.A., et al. Biodisel fuel production by Aspergillus niger whole-cell biocatalyst in optimized medium. Mycoscience. 2017;59(2):147-152.
https://doi.org/10.1016/j.myc.201709.003.
11. Chkhenkeli V.A., Romanova E.D., Vlasov B.Ya. Prevention of the negative impact of environmental factors on the body of young farm animals and poultry using the veterinary drug Trametin. Lambert Academic Publshing; 2020. 121 p. (In Russian).
12. Chkhenkeli V.A. Mechanisms of action of trametin preparations on the body of animals with concomitant infections. St. Petersburg: Prospekt nauki; 2020.176 p. (In Russian).
13. Chkhenkeli V.A. Main generations based on xylotrophic fungi of the genus Trametes: revealed effects, mechanisms of action and application. Moscow: Pero; 2014. 126 p. EDN: SXVVQZ. (In Russian).
14. Chkhenkeli V.A., Ulanskaya A.V. Salmonellosis as a biological factor in the eco-technical system and its prevention using the veterinary drug "Trametin". Irkutsk: Izd-vo IGU; 2022. 107 p. (In Russian).
15. Falk-Petersen S., Sargent J.R., Henderson J., Hegseth E.N., Hop H., Okolodkov Y.B. Lipids and fatty acids in ice algae and phytoplankton from the marginal ice zone in the Barents sea. Polar Biology. 1998;20:41-47. https://doi.org/10.1007/s003000050274.
16. Feofilova E.P., Burlakova E.B., Kuznetsova L.S. The significance of the free oxidation reaction in the regulation of growth and lipid formation of eukaryotic and prokaryotic organisms. Prikladnaya biokhimiya i mikro-biologiya. 1987;23(1):3-13. (In Russian).
17. Feofilova E.P., Gornova I.B., Memorskaya A.S., Garibova L.V. Lipid composition of fruit bodies and deep mycelium of Lentinus edodes (Berk.) Sing [Lentinula edodes (Berk.) Pegler)]. Mikrobiologiya. 1998;67(5):655-659. (In Russian).
18. Belova N.V. Prospects for the use of biologically active compounds of basidiomycetes in Russia. Mi-kologiya i fitopatologiya. 2004;38(2):1-7. (In Russian).
19. Babitskaya V.G., Chernook T.V., Shcherba V.V. Characterization of lipids in the deep mycelium of fungi. Vestnik Belorusskogo gosudarstvennogo universiteta. Seriya 2: Khimiya. Biologiya. Geografiya. 2009;4(1): 101-111. (In Russian).
20. Loschinina E.A., Tsivileva O.M., Makarov O.E., Nikitina V.E. Changes in carbohydrate and fatty-acid content of Lentinus edodes mycelium in dual cultures with Azospirillum brasilense. Izvestiya Vuzov. Prikladnaya Khimiya i Biotekhnologiya = Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology. 2012;2:64-67. (In Russian).
21. Tsivileva O.M., Nguyen T.P., Vu L.N., Chernysho-va M.P., Yurasov N.A., Petrov A.N., et al. Lipidic components of pigmented and submerged mycelium of Gan-oderma from different climatic zones. Izvestiya Vuzov. Prikladnaya Khimiya i Biotekhnologiya = Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology. 2015;(3):37-47. (In Russian).
22. Nikonova A.A., Shishlyannikov S.M., Shishlyan-nikova T.A., Avezova T.N., Babenko T.A., Belykh O.I., et al. Determination of free and esterified fatty acids in hydro-
coles of different content of polyunsaturated fatty acids by gas-liquid chromatography. Zhurnal analiticheskoi kh-imii. 2020;75(10):907-920. (In Russian).
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ
Чхенкели Вера Александровна,
д.б.н., доцент,
Иркутский государственный университет, 664003, г. Иркутск, ул. Ленина, 2, Российская Федерация; генеральный директор, ООО «Биотехвет»,
664007, г. Иркутск, ул. Декабрьских событий, 105А/12, Российская Федерация, Mchkhenkeli@rambler.ru https://orcid.org/0000-0001-8175-2623
Чхенкели Гурам Давидович,
к.т.н., старший научный сотрудник, ООО «Биотехвет»,
664007, г. Иркутск, ул. Декабрьских событий, 105А/12, Российская Федерация, chkhenkeli@rambler.ru
Никонова Алена Александровна,
к.х.н., старший научный сотрудник, Лимнологический институт СО РАН, 664033, г. Иркутск, ул. Улан-Баторская, 3, Российская Федерация, alenaxis@list.ru
Горшков Александр Георгиевич,
к.х.н., заведующий лабораторией, Лимнологический институт СО РАН, 664033, г. Иркутск, ул. Улан-Баторская, 3, Российская Федерация, gorchkov_ag@mail.ru
Вклад авторов
Все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации.
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.
Информация о статье
Поступила в редакцию 04.05.2023. Одобрена после рецензирования 29.06.2023. Принята к публикации 31.08.2023.
https://doi.org/10.31857/S0044450220100102. EDN: WHRREK.
INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Vera A. Chkhenkeli,
Dr. Sci. (Biology), Associate Professor, Irkutsk State University,
2, Lenin St., Irkutsk, 664003, Russian Federation; General Director, Biotechvet LLC,
105A/12, Dekabr'skikh Sobytii St., Irkutsk, 664007, Russian Federation, [><]chkhenkeli@rambler.ru https://orcid.org/0000-0001-8175-2623
Guram D. Chkhenkeli,
Cand. Sci. (Engineering), Senior Researcher, Biotechvet LLC,
105A/12, Dekabr'skikh Sobytii St., Irkutsk, 664007,
Russian Federation,
chkhenkeli@rambler.ru
Alena A. Nikonova,
Cand. Sci (Chemistry), Senior Researcher, Limnological Institute SB RAS,
3, Ulan-Batorskaya St., Irkutsk, 664033, Russian Federation, alenaxis@list.ru
Alexander G. Gorshkov,
Cand. Sci (Chemistry), Head оf the Laboratory, Limnological Institute SB RAS, 3, Ulan-Batorskaya St., Irkutsk, 664033, Russian Federation, gorchkov_ag@mail.ru
Contribution of the authors
The authors contributed equally to this article.
Conflict interests
The authors declare no conflict of interests regarding the publication of this article.
The final manuscript has been read and approved by all the co-authors.
Information about the article
The article was submitted 04.05.2023. Approved after reviewing 29.06.2023. Accepted for publication 31.08.2023.
