CC BY
309
© О.Н.Беспалова,
О.А. Тарасенко, Т.Э. Иващенко,
В.С. Баранов
НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт-Петербург
АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ НЕЙРОНАЛЬНОЙ (nNOS) И ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ (eNOS) NO-СИНТАЗ ПРИ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ И ЗАДЕРЖКЕ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ ПЛОДА
■ Развитие плацентарной недостаточности (ПН) часто связывают с нарушением плацентарной гемодинамики и плодово-материнского кровообращения. Важную роль в развитии этих процессов играет образование вазоактивных веществ. Среди них особое место занимает оксид азота (NO), обладающий выраженными вазодиляторными свойствами.
Целью настоящего исследования являлось выявление ассоциаций функционально значимых полиморфных вариантов генов нейрональной NO-синтазы и эндотелиальной NO-синтазы с развитием (ПН) и задержкой внутриутробного развития плода.
■ Ключевые слова: плацентарная недостаточность (ПН); задержка внутриутробного развития плода (ЗВУР плода); гены нейрональной ЫО-синтазы (пЫО8) и эндотелиальной ЫО-синтазы (еШ8)
Введение
Проблема плацентарной недостаточности (ПН) по социальной и медицинской значимости относится к наиболее актуальным проблемам современного акушерства. Течение и исход беременности являются результатом множественных взаимодействий между эмбрионом и его окружением. В этой связи наибольший интерес вызывает плацента — специализированный орган, обеспечивающий благополучное протекание беременности.
Развитие ПН часто связывают с нарушением плацентарной гемодинамики и плодово-материнского кровообращения [3, 8, 10]. Важную роль в развитии этих процессов играет образование вазоактив-ных веществ. Среди них особое место занимает оксид азота (N0), обладающий выраженными вазодиляторными свойствами [1, 12].
Открытие свойств N0 как полифункционального физиологического регулятора явилось одним из значительных достижений последнего десятилетия [2]. Оксид азота по современным представлениям играет роль универсального регулятора множества физиологических процессов в организме, включающих поддержание сердечно-сосудистого гомеостаза, иммунного статуса, цитотокси-ческой активности макрофагов и т. д. [7].
Синтезировать и выделять N0 способны большинство клеток организма: клетки эндотелия сосудов, некоторые нейроны, тромбоциты, клетки мозгового слоя надпочечников, макрофаги и т.д. [9, 11]. Согласно последним данным, N0 синтезируется в трофоблас-те, плаценте и миометрии беременных женщин [13-15, 19, 23].
N0-синтазы составляют семейство ферментов несколько отличающихся между собой аминокислотной последовательностью и, соответственно, по механизмам, регулирующим их активность. Все эти ферменты катализируют одну и ту же реакцию окисления аминокислоты L-аргинина с одновременным синтезом другой аминокислоты цитруллина и образованием N0. Традиционно выделяют 3 основные формы N0-синтаз: нейрональную ^N08), макрофагальную ^N08) и эндотелиальную ^N08). пК08- и еN0S-синтазы являются конститутивными (кальций-зависимыми), а mN0S-синтаза — функционирует как индуцибельная [4].
В настоящее время хорошо изучены гены, ответственные за синтез данных ферментов. Выявлены функционально значимые полиморфные варианты этих генов [17].
Известно, что полиморфизм гена пК08 обусловлен различным числом тринуклеотидных повторов ААТ в 20 интроне. Выявлено достоверное уменьшение синтеза N0 у носителей аллелей с высоким числом таких повторов (> 12).
В гене eN0S описаны 4 полиморфных варианта: А27С в интроне 18; G10T в интроне 23; 4а/4Ь полиморфизм в интроне 4 и структурный полиморфизм Glu298Asp в экзоне 7. Полиморфизм в 4 интроне представлен 2 аллелями: 4Ь-аллель, в котором присутствуют 5 повторяющихся фрагментов 27 п. н., и 4а-аллель, в
котором 4 таких повтора. У гомозигот по аллелю 4а уровень нитратов и нитритов в крови, который напрямую связан со скоростью выработки N0 эндотелием сосудов, достоверно ниже, чем у индивидов с генотипом 4Ъ/4Ъ. Это свидетельствует о влиянии данного полиморфизма на уровень экспрессии гена.
Известно, что при развитии ПН содержание N0 в крови матери снижено, что, по-видимому, играет важную роль в патогенезе заболевания [21, 22]. В последние годы появились работы показывающие, что при перманентной угрозе прерывания беременности суммарное содержание нитритов и нитратов в моче в несколько раз меньше по сравнению с физиологической беременностью [6].
Все эти косвенные наблюдения позволяют предположить наличие связи полиморфизмов генов N0-синтазы с различными акушерскими патологиями, в основе которых лежат изменения сосудистого тонуса (гестоз, плацентарная недостаточность и невынашивание беременности).
Изучение возможной ассоциации функционально значимых полиморфных вариантов генов нейрональной N0-синтазы ^N08) и эндотели-альной N0-синтазы ^N08) с развитием плацентарной недостаточности и явилось целью настоящего исследования.
Материалы и методы
Плаценты были получены от 93 родильниц родильного отделения НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН (руководитель — д. м. н. Мозговая Е.В.): у 58 пациенток при физиологических срочных родах и спонтанных преждевременных родах с диагностированной ПН (по данным УЗИ, допплерометрии, биохимических показателей и результатам гистологического обследования) и у 35 родильниц при физиологических срочных родах без диагностированной ПН. Группу 1 (контроль) составили 35 плацент от родильниц без невынашивания беременности (НБ) (выкидыши и преждевременные роды) в анамнезе. У данных пациенток течение данной беременности не осложнялось ПН, а также при последующем гистологическом обследовании плацент не было выявлено ПН. Группу 2 составили 32 плаценты от родильниц без НБ в анамнезе и без установленного при данной беременности диагноза ПН, но при исследовании плацент — диагноз
ПН был поставлен. В группу 3 вошли 26 плацент от родильниц без НБ в анамнезе и с установленным диагнозом ПН (задержкой внутриутробного развития плода) по данным УЗИ, подтвержденном неона-тологом при рождении, а также гистологическим исследованием плацент.
Выделение ДНК из образцов ткани проводили в соответствии с общепринятой методикой. Методом ПЦР исследована частота аллелей и генотипов пК08 гена и аллелей и генотипов 4а/4Ъ полиморфизма eN0S гена в образцах ДНК плацент в 3-х различных группах.
Характеристика изученных полиморфных вариантов генов и последовательности олигопрай-меров приведены в табл. 1.
250 нг исследуемого образца геномной ДНК добавляли к 25 мкл смеси, которая включала 0,67 мМ трис-НС1, рН 8,8 при 25 0С: 16,6 мМ (ОТ4)2804: 6,7 мМ Mga2: 6,7 мкм ЭДТА: 10 мМ 2-меркаптоэтанола, 170 мкг БСА, смесь четырех основных dNTP в концентрации 0,8 мМ каждого, термостабильную ДНК-полимеразу, 0,2 ед/мкл («Сибэнзим», Новосибирск) и по 0,001 оптической единицы каждого олигопраймера.
Для амплификации фрагментов гена пК08 и eN0S использовали следующие условия ПЦР: после денатурации (94 0С-7 минут) проводили 32 цикла амплификации в режиме 95 0С-50 секунд, 58 0С-50 секунд, 72 0С-50 секунд и заключительный синтез 72 0С-5 минут. После амплификации анализировали продукты реакции в 7,0 % полиакри-ламидном геле с последующей окраской этидиумб-ромидом и визуализацией в проходящем УФ свете.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы «8ТАТ18Т1СА v5.5а». Для вычисления и сравнения средних величин цифровых данных, а также для оценки достоверности полученных результатов пользовались методами оценки разности между долями, анализа средних тенденций (1;-критерий Стьюдента), корреляционным анализом. За достоверность различий принимался уровень р < 0,05. При сравнении частот генотипов использовали стандартный критерий х2. Относительный риск (OR) развития заболевания при определенном генотипе рассчитывали по стандартной формуле, с поправкой на малые выборки, 0R = (а + 0,5)/(Ъ + 0,5) х ^ + 0,5)/(с + 0,5), где а и Ъ — количество больных, имеющих и не име-
Таблица 1
Список олигонуклеотидных праймеров, использованных для проведения ПЦР
Ген, локализация Структура олигопраймеро^_
nNOS (12q24) Различное число ААТ повторов в 20 интроне (от 9 до 16) F: TGGCAAACATGAAAATCAAGGTAT R: TGAACCAGCCCTCCTAATAA
eNOS (7q35-36) 4 и 5 повторов по 27 п. н. в 5 интроне F: 5'-AGGCCCTATGGTAGTGCCTT-3' R: 5'-TCTCTTAGTGCTGTGGTCAC-3'
Таблица 2
Частоты аллелей гена nNOS в плацентах с ПН (гистологически установленной и с ЗВУР плода) и без ПН (группе контроля)
Группы Аллели nNOS Группа контроля ПН (гистология) ЗВУР плода
П = 64 П = 60 П = 48
П М ± т % N М ± т % п М ± т %
9 2 3,1 ± 2,2 6 10,0 ± 3,9 1 2,1 ± 2,1
10 37 57,8 ± 6,2 27 45,0 ± 6,4 24 50,0 ± 7,2
11 0 0 1 1,7 ± 1,6 0 0
12 1 1,6 ± 1,6 0 0 1 2,1 ± 2,1
13 0 0 1 1,7 ± 1,6 1 2,1 ± 2,1
14 17 26,6 ± 5,5 12 20,0 ± 5,2 10 20,8 ± 5,8
15 7 10,9 ± 3,9 10 16,7 ± 4,8 9 18,7 ± 5,6
16 0 0 3 5,0 ± 2,8 1 2,1 ± 2,1
19 0 0 0 0 1 2,1 ± 2,1
< 12 39 60,9 ± 6,1 34 56,7 ± 6,4 25 52,1 ± 7,2
> 12 25 39,1 ± 6,1 26 43,3 ± 6,4 23 47,9 ± 7,2
ющих мутантныи генотип, соответственно, а с и ё — количество человек в контрольной группе, имеющих и не имеющих мутантный генотип, соответственно. OR указан с 95 % доверительным интервалом. Границы доверительного интервала вычисляли по формулам OR = OR(1 - 1,96/л,х2> и
т г ^ т1п
OR = OR(l + 1,96/^x2).
тах
Результаты
В результате проведенной работы определены частоты аллелей и генотипов по гену nNOS в плацентах с ПН и без ПН (табл. 2 и рис. 1).
При анализе ААТ повторов в 20 интроне гена nNOS выявлено 9 различных аллелей содержащих 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или 19 повторов. Мы объединили идентифицированные аллели в две группы: < 12 повторов и > 12 повторов.
Как видно из табл. 2, изучаемые группы не отличались по частотам аллелей гена nNOS (р > 0,05). Частоты генотипов по гену nNOS в обследо-
Гсшпми <12 <12п!ЧОЧ Генотип <12 >12п.М>* Гсногии >12*>12 иМ)*
■ Групп» контроля □ ПН (гнсгалопш) □ ЗВУР плода
Рис. 1. Частоты генотипов по гену nNOS в плацентах с ПН (гистологически установленной и с ЗВУР плода) и без ПН (группе контроля)
ванных группах представлены на рисунке 1. Согласно полученным результатам в 3 обследованных группах распределение генотипов nNOS гена достоверно не отличалось (р > 0,05). Отмечено некоторое повышение частоты генотипа > 12/> 12 nNOS гена в плацентах от родильниц с ЗВУР плода (25 ± 8,8 %) по сравнению с группой плацент с гистологически установленной ПН (10 ± 5,5 %) и с контролем (15,5 ± 6,4 %).
При анализе 4а/4Ь полиморфизма в 4 интроне гена eNOS выявлены достоверные различия в частотах аллелей и генотипов в образцах плацент от родильниц с ПН и ЗВУР плода и контролем.
Частота аллеля 4Ь гена в контрольной группе была достоверно выше, чем в группах с ПН и ЗВУР плода (94,3 ± 2,8 %, 81,2 ± 4,9 % и 82,7 ± 5,2 %, соответственно, р < 0,01) (рис. 2). Аллель 4а гена eNOS встречался в 3 раза чаще в группах 2 и 3 по сравнению с контролем (р < 0,05) (см. рис. 2).
Аллель 4а (N08
Рис. 2. Частоты аллелей гена eNOS в плацентах с ПН (гистологически установленной и с ЗВУР плода) и без ПН (группе контроля)
ЗВУР плода Генотип 4а\4Ь eNOS
Рис. 3. Частоты генотипов гена eNOS в плацентах с ПН(гистологически установленной и с ЗВУР плода) и без ПН (группе контроля)
При анализе распределения генотипов по гену eNOS были также выявлены достоверные отличия (p < 0,01; df 2). Частота генотипа 4a/4b в группах плацент от родильниц с гистологически установленным диагнозом — ПН (37,5 ± 8,5 %) и с задержкой внутриутробного развития плода (34,6 ± 9,3 %) была в 3 раза выше, чем в группе контроля (11,4 ± 5,4 %) (рис. 3).
Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что наличие генотипа 4a/4b eNOS гена в плацентах увеличивает риск развития ПН и ЗВУР плода. Действительно, согласно рассчитанному коэффициенту соотношения (OR) шансов, при наличии генотипа 4a/4b eNOS в плацентах, риск развития ПН у женщин повышен в 4 раза (OR 4,27; Cl: 1,37-13,3), а риск развития ЗВУР плода более чем 3,5 раза (OR 3,8; Cl: 1,15-12,6).
Результаты распределения частот сочетаний генотипов двух изученных генов nNOS и eNOS в контроле и в плацентах, с гистологически диагностированной ПН и с ЗВУР плода, пред став-
си/си nNOS + 4bV4b eNOS
-Группа контроля -ИН (гистология) ЗВУР плода
Рис. 4. Частоты распределения сочетанных генотипов гена nN0S и еN0S в плацентах с ПН (гистологически установленной и с ЗВУР плода) и без ПН (группе контроля)
лены на рис. 4. Из полученных данных следует, что в плацентах группы 2 с ПН достоверно чаще встречается сочетанный генотип < 12/> 12 nN0S + 4а/4Ъ еN0S (30 ± 8,4 %) по сравнению с группой контроля (6,4 ± 4,4 %, р < 0,01). При этом генотип > 12/> 12 nN0S + 4а/4Ъ еN0S был идентифицирован только в группах с ПН и ЗВУР плода.
Таким образом, согласно рассчитанному коэффициенту соотношения шансов при наличии генотипа < 12/> 12 nN0S + 4а/4Ъ еN0S в плацентах, риск развития ПН у женщин повышен в 5 раз ДО 5,21; С^1,3-20,1).
Обсуждение
Развитие ПН часто связывают с нарушением плацентарной гемодинамики и плодово-материн-ского кровообращения [3, 8, 10]. На сегодняшний день в акушерской науке существуют многочисленные теории о причинах и механизмах возникновения и развития плацентарной недостаточности. На наш взгляд, наиболее интересной является теория, в основе которой лежит повреждение эндотелия маточно-плацентарных сосудов [6, 9, 10]. Повреждение эндотелия и увеличение проницаемости сосудов вызывает ряд негативных последствий: уменьшение синтеза оксида азота (N0), расслабляющего сосудистую стенку; возрастание выработки цитокинов; повышение чувствительности к эндогенным вазопрессорам; увеличение спазма сосудов и т. д. [5, 11]. Известно, что снижение концентрации оксида азота может приводить к усилению агрегации тромбоцитов. С другой стороны, N0 может выступать в роли антиростового фактора, препятствующего пролиферации гладкомышечных клеток стенки сосудов. Таким образом, уровень N0 является важным звеном в патогенезе ПН и ЗВУР плода.
За короткий период, прошедший с момента открытия ангиотропной функции N0, накоплен огромный экспериментальный и клинический материал, позволивший установить субстрат биосинтеза оксида азота, ферменты и изоферменты, принимающие участие в биосинтезе оксида азота, молекулярный механизм физиологического и патофизиологического эффекта оксида азота и т. д. [3, 12]. N0, как мощный эндогенный вазоди-лятатор, принимает участие в регуляции системного и легочного сосудистого сопротивления и в процессах коагуляции [11]. Оксид азота играет активную роль в поддержании сосудистого тонуса в центральной и вегетативной нервной системе. По эфферентным нервам этот агент регулирует деятельность органов дыхательной системы, желудочно-кишечного тракта и мочеполовой системы [22]. Оксид азота подавляет пролиферацию глад-комышечных клеток сосудов [20, 23]. Снижение
активности оксида азота может вызывать сужение сосудов и провоцировать тромбоз.
В работах американских и шведских авторов обнаружена локальная экспрессия 3-х изоформ NOS в трофобласте, плаценте и миометрии у беременных женщин [13, 15]. У небеременных женщин содержание NO в матке небольшое, по мере наступления и прогрессирования неосложненной беременности оно возрастает и снижается непосредственно перед родами [14, 21]. При развитии ПН содержание NO в крови матери, как правило, сильно снижено [21, 22]. Установлено также значительное (в несколько раз) снижение суммарных нитритов и нитратов в моче женщин с перманентной угрозой прерывания беременности [6]. Все эти данные, по-видимому, указывают на важную роль оксида азота в патогенезе заболевания.
Проведенный нами анализ полиморфизма nNOS гена, не выявил достоверных различий между тремя обследованными группами, хотя была отмечена тенденция к увеличению частоты генотипа > 12/> 12 nNOS гена в плацентах от родильниц с ЗВУР плода (25 ± 8,8 %), по сравнению с группой плацент с гистологически установленной ПН (10 ± 5,5 %) и с контролем (15,5 ± 6,4 %).
При анализе полиморфизма гена eNOS обнаружена ассоциация «мутантного» аллеля 4а с развитием плацентарной недостаточности, в том числе ЗВУР плода. Как известно, аллель 4а коррелирует с более низким уровнем экспрессии NOS. Понижение уровня экспрессии гена является причиной снижения концентрации оксида азота [11, 12], которое может приводить к нарушению функционирования эндотелия и, как следствие, к развитию тромботических осложнений. При анализе распределения генотипов eNOS гена также выявлены достоверные отличия (p < 0,01; df 2). Частота генотипа 4a/4b по гену eNOS в группах плацент от родильниц с гистологически установленным диагнозом ПН, а также с задержкой внутриутробного развития плода была в 3 раза выше, чем в группе контроля.
Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что генотип 4a/4b eNOS гена в плацентах увеличивает риск развития ПН и ЗВУР плода. При этом согласно коэффициенту соотношения шансов (OR) такой генотип плода увеличивает риск развития ПН в 4 раза, а риск развития ЗВУР плода почти в 3,5 раза.
Интересно отметить, что распределение со-четанных генотипов по двум изученным генам также достоверно отличалось в плацентах с ПН и в контроле. В плацентах с гистологически установленным диагнозом — ПН достоверно чаще встречается генотип < 12/> 12 nNOS + 4a/4b еNOS по сравнению с группой контроля (30 ± 8,4 % и
6,4 ± 4,4 %, соответственно). Согласно коэффициенту соотношения шансов (OR), при наличии генотипа < 12/> 12 nNOS + 4a/4b еNOS в плацентах, риск развития ПН у женщин повышен в 5 раз. Обращает на себя внимание, что генотип > 12/> 12 nNOS + 4a/4b еNOS, приводящий к наименьшей выработке базального оксида азота, идентифицирован только в группах с ПН и ЗВУР плода.
В настоящее время количество исследований, посвященных изучению роли полиморфизмов генов nNOS и eNOS в развитии акушерской патологии (ПН, НБ и гестоза), весьма невелико. Так, например, в работе австралийских авторов выявлена ассоциация 4a/4b полиморфизма eNOS гена с привычным невынашиванием беременности. Частота аллеля 4а была в 2 раза выше при привычном невынашивании, чем в контроле [16]. В мексикано-испанской популяции Техаса носи-тельство аллеля 4а было определено как фактор риска развития преэклампсии [18].
Полученные результаты, а также анализ данных литературы свидетельствуют в пользу наличия ассоциации функционально значимых аллельных вариантов генов NO-синтазы с акушерской патологией, в том числе и с плацентарной недостаточностью и ЗВУР плода. Однако для однозначного понимания роли полиморфных вариантов генов NO-синтазы в патогенезе плацентарной недостаточности, и в том числе ЗВУР плода, необходимы дальнейшие широкомасштабные исследования.
В заключение хочется отметить, что в 1998 году Р. Фуршготт, Л. Игнарро и Ф. Мурад получили высшую оценку мировой науки — Нобелевскую премию за работы по выяснению механизмов, связанных с участием NO в дисфункции эндотелия. Однако вопросы об участии NO в ге-незе конкретных заболеваний остаются открытыми и на сегодняшний день.
Литература
1. Арутюнян А.В. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма / Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. — СПб.: Фолиант, 2000. — 104 с.
2. ВанинА.Ф. Биологическая роль оксида азота: история, современность и перспективы исследований / Ванин А.Ф. // Биохимия. — 1998. — Т. 63,№ 7. — С. 731-733.
3. Гармашева Н.П. Патологические основы охраны внутриутробного развития человека / Гармашева Н.П., Константинова Н.Н. — Л.: Медицина, 1983. — 157 с.
4. Гервазиев Ю.В. Механизмы регуляции кальмодулином активности синтазы окиси азота / Гервазиев Ю.В., Соколов Н.Н. // Вопросы медицинской химии. — 1999. — № 3. — С. 20-22.
5. Зубжицкая Л.Б. Иммуноморфологическое состояние плаценты при акушерской патологии / Зубжицкая Л.Б., Коше-лева Н.Г., Семенов В.В.; Ред. Айламазян Э.К. — СПб.: Норд-медиздат, 2005. — 304 с.
6. Крукиер И.И. Продукция NO и окислительная деструкция
белков в плаценте при физиологической беременности и плацентарной недостаточности / Крукиер И.И. // Бюл. эк-сперим. биологии и медицины. — 2003. — Т. 136, № 10. — С. 418-420.
7. Кудрин А.В. Микроэлементы и оксид азота — полифункциональные лиганды / Кудрин А.В. // Вопр. биол. медицинской и фармацевтической химии. — 2000. — № 1. — С. 3-5.
8. Плацентарная недостаточность: диагностика и лечение: учебное пособие / Аржанова О.Н., Кошелева Н.Г. [и др.]. — СПб.: Издательство Н-Л, 2001. — 32 с.
9. РадзинскийВ.Е. Биохимия плацентарной недостаточности / Радзинский В.Е., Смалько П.Я. — М.: Медицина, 2001. — С. 268.
10. Сидорова И.С. Клинико-диагностические аспекты фе-топлацентарной недостаточности / Сидорова И.С., Макаров И. О. — М.: МИА, 2005. — 296 с.
11. Сосунов А.А. Оксид азота как межклеточный посредник / Сосунов А.А. // Соровский образовательный журнал. — 2000. — Т. 6, № 12. — С. 27-34.
12. Alderton W.K. Nitric oxide synthases: structure, function and inhibition / Alderton W.K., Cooper C.E., Knowles R.G. // Biochem. J. — 2001. — Vol. 357. — P. 593-615.
13. Al-HijjiJ. Nitric oxide synthase activity in humtrophoblast, term placenta and pregnant myometrium / Al-Hijji J., Andolf E., Laurini R., Batra S. // Reprod. Biol. Endocrinol. — 2003. — Vol. 1. — P. 51-53.
14. Bao S. Brain nitric oxide synthase expression is enhanced in the human cervix in labor / Bao S., Rai J., Schreiber J. // J. Soc. Gynecol. Invest. — 2001. — Vol. 8. — P. 158-164.
15. Bao S. Expression of nitric oxide synthase isoforms in human pregnant myometrium at term / Bao S., Rai J., Schreiber J. // J. Soc. Gynecol. Investig. — 2002. — Vol. 9, N 6. — P. 351-356.
16. Endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism in women with idiopathic recurrent miscarriage / Tempfer C., Unfried G., Zeillinger R. [et al.] // Human Reproduction. — 2001. — Vol. 16, N 8. — P. 1644-1647.
17. Expression and functional analysis of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in human placenta / Rossmanith W.G., Hoffmeister U., Wolfahrt S. [et al.] // Mol. Hum. Reprod. — 1999. — Vol. 5. — P. 487-494.
18. Gravid mice deficient for eNOS have features consistent with a preeclampsia phenotype / Gregg A.R., Tempfer C., Moreno R. [et al. ] // J. Soc. Gynecol. Investig. — 1999. — Vol. 6. — P. 81.
19. HaddadE.K. Early embryo loss is associated with local production of nitric oxide by decidual mononuclear cells / Haddad E.K., Duclos A.J., Baines M.G. // J. Exp. Med. — 1995. — Vol. 182. — P. 1143-1151.
20. Human trophoblast invasion and spiral artery transformation. The role of nitric oxide / Lyall F., Bulmer J.N., Kelly H. [et al.] // American J. of Pathology. — 1999. — Vol. 154. — Р. 1105-1114.
21. Maul H. Nitric oxide and its role during pregnancy: from ovulation to delivery / Maul H., Longo M., Saade G.R., Garfield R.E. // Curr. Pharm. Design. — 2003. — Vol. 9. — P. 359-380.
22. Rosselli M. Nitric oxide and reproduction / Rosselli M. // Mol. Hum. Reprod. — 1997. — Vol. 3. — P. 639-641.
23. Sanyal M. Localization of nitric oxide synthase in human trophoblast cells: role of nitric oxide in trophoblast proliferation and differentiation / Sanyal M., Nag T.C., Das C. // Am. J. Reprod. Immunol. - 2000. - Vol. 43. - P. 70-77.
ANALYSIS POLYMORPHISMS OF THE NEURONAL NITRIC OXIDE SYNTHASE (nNOS) AND ENDOTHELIAL NITRIC OXIDE SYNTHASE (eNOS) GENES WITH PLACENTAL INSUFFICIENCY (PLI) AND INTRAUTERINE GROWTH RESTRICTION (IUGR)
Bespalova O.N., Tarasenko O.A., Ivaschenko T.E., Baranov V.S.
■ Summary: Placental insufficiency (PLI) is a syndrome involving dysfunction of vascular endothelium and imbalance between endothelium derived constricting and relaxing factors. Recent evidence suggest a major role endothelium-derived nitric oxide (NO) plays in the regulation of vascular resistance during normal pregnancy and pregnancy with PLI and IUGR. NO is a potent vasodilator generated by the catalytic action of neuronal nitric oxide synthase (nNOS) and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in placenta.
Genetic polymorphisms of the nNOS gene and of the gene eNOS were studied by PCR-based assays in 30 placentas with PLI, in 24 placentas with IUGR and in placentas from 32 women with one or more normal pregnancies and no obstetric complications. We examined the relationship between the size of the AAT repeat polymorphism of the nNOS gene, the 4a/4b polymorphism of the eNOS gene and PLI and IUGR.
There was no significant difference between the study groups and the control group in the frequencies of genotypes and alleles of the nNOS gene. The frequencies of allele 4a of the eNOS gene were significantly higher in placentas with PLI (18,8 %) and placentas with IUGR (17,3 %), as compared to the control group (7,7 %). The distribution of genotype were also significantly different between the study groups and the control group (p < 0,01: df 2). Concordance of nNOS < 12/> 12 and eNOS 4b/4a was recorded in 31,4 % of genotypes in the group with PLI and only in 6,4 % in the control group (p < 0,01; OR 5,21, CL:1,3-20,1). The results provide the evidence that the polymorphic variants of the nNOS gene and the eNOS gene are associated with PLI and IUGR.
■ Key words: placental insufficiency; intrauterine growth restriction (IUGR); gene neuronal nitric oxide synthase (nNOS) & gene endothelial nitric oxide synthase (eNOS)
