CC BY
162
160,0%
Ширина Толщина Толщина Диаметр Толщина Диаметр Толщина
суставной аналога гиалинового зрелого костной сосуда сосудистой
головки суставного хряща хондроцита балки стенки
диска мыщелка
□ 1-я группа □ 2-я группа
Примечание. Значения контрольной группы приняты за 100%.
Рис. 1. Динамика изменений показателей костной ткани элементов височно— нижнечелюстного сустава
с 1-ой группой. Толщина суставного диска снижена на 49,2% (р < 0,001) по сравнению с контролем и достоверно снижена по сравнению с 1-й группой. Толщина гиалинового хряща, покрывающего головку сустава, меньше показателей контрольной группы на 7,9% (р < 0,001) и 1-й группы на 17,4% (р < 0,01). Возможно, это связано с истончением промежуточной зоны хряща, содержащей зрелые хондроциты, диаметр которых уменьшен на 8,1% (р < 0,01) при сравнении как с контролем, так и с 1-й группой — на 34,7% (р < 0,001). Изогенных групп значительно меньше. Зона «монетных столбиков» отсутствует, что является еще одной отличительной осо-
бенностью строения суставного хряща крыс. В базаль-ной зоне хряща кальцинированный слой существенно шире некальцинированного. Четко прослеживается базофильная линия.
Исследуя костную ткань мыщелка, нами установлено, что костные трабекулы расширены на 36,3% (р < 0,05) по сравнению с данными контрольной и на 9,8% (р < 0,001) при сравнении с показателями 1-й группы, практически сливаются между собой. Количество и диаметр кровеносных сосудов уменьшен на 33,6% (р < 0,001) по сравнению с контролем, просвет их, большей частью спавшийся. Толщина сосудистой стенки так же достоверно уменьшена на 49,2% (р < 0,01) при сравнении с показателями контроля и на 21,9% (р < 0,01) при сравнении с 1-й группой.
Таким образом, суставной диск представлен пучком плотной волокнистой соединительной ткани и расположен продольно относительно головки мыщелкового отростка височно-нижнечелюстного сустава крысы.
Нарушение процессов энхондрального костеобра-зования в элементах височно-нижнечелюстного сустава при экспериментальном гипотиреозе, приводит к уменьшению количества сосудистых элементов, утолщению костных балок, которые сливаются между собой, образуя грубопетлистую сеть. Данные изменения сопровождаются деформацией головки мыщелкового отростка, что свидетельствует о возникновении деформирующего остеоартроза сустава.
ЛИТЕРАТУРА
1. Безруков В.М. Заболевания височно-нижнечелюстного сустава. — М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. — 48 с.
2. Белая Ж.Е., Рожинская Л.Я., Мельниченко Г.А. Современные представления о действии тиреоидных гормонов и тиреотропного гормона на костную ткань. // Проблемы эндокринологии. — 2006. — Т.52. № 2. — С. 48-54.
2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. — М.: Практика, 1998. — 459 с.
2. Корнилов Н.В., Аврунин А.С. Адаптационные процессы в органах скелета. — СПб.: МОРСАР АВ, 2001. — 269 с.
3. Лобанов С.В., Лопатина Д.В. Клинический опыт применения гиалуроновой кислоты в комплексном лечении больных с деформирующим остеоартрозом суставов // Русский медицинский журнал. — 2010. — №11. — С. 756758.
4. Мельниченко Г.А., Моргунова Т.Б. Поражение суставов
при гипотиреозе // Клиническая геронтология. — 2009. — № 2. — С 55-58.
4. Чугунова Л.Г., Рябков А.Н., Савилов К.В. Способ моделирования гипотиреоза — Рязань: Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, патент Российской Федерации №2165648, 2001.
4. Sauren Y., Mierement R., Groot C. An electron microscopic study on the presence of proteoglycans in the mineralized matrix of rat and human compact lamellar bone // Anat. Rec. — 1992. — Vol.232. № 1. — P. 36-44.
4. Tanaka M., Ejiri S., Kohnol S. Region-specific Bone Mass Changes in Rat Mandibular Condyle Following Ovarietomy. // J. Dent. Res. — 2000. — Vol. 79. № 1. — P. 1901-1913.
5. Williams A.J., Barnard J.C. Thyroid Hormones Regulate Fibroblast Growth Factor Receptor Signaling during Chondrogenesis. // Endocrinology. — 2005. — №12. — Р. 5568-5580.
Информация об авторах: 672090, г. Чита, ул. Горького, 39а, e-mail: [email protected] Щеглакова Галина Юрьевна — ассистент кафедры; Писаревский Юрий Леонидович — д.м.н., профессор, заведующий кафедрой; Бабичев Юрий Иванович — к.м.н., ассистент кафедры.
© ГОРИНА А.С., КОЛЕСНИЧЕНКО Л.С. — 2011 УДК 577.112.3:616.89
АМИНОКИСЛОТЫ СЫВОРОТКИ КРОВИ И МОЧИ У ДЕТЕЙ С СИНДРОМОМ АСПЕРГЕРА
Анна Сергеевна Горина1, Лариса Станиславовна Колесниченко2 ('Sick Children Hospital, Research Institute 555 University Ave., Toronto, ON M5G — M.J. Haddad, President; 2Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра химии, зав. — д.м.н., проф. Л.С. Колесниченко)
Резюме. В сыворотке крови детей с синдромом Аспергера, независимо от состояния, повышались концентрации аргинина, таурина, глутамата, пролина, цистеина и аспартата и снижалась концентрация метионина. Только в стабильном состоянии повышалось содержание лизина. Только при ухудшении состояния повышались концентрации аспарагина, глутамина и глицина и понижалось содержание серина, в-аланина и тирозина. При ухудшении состояния изменения в концентрации аминокислот были более выражены, чем в стабильном состоянии. Была изменена экскреция аминокислот в мочу. Изменения затрагивали преимущественно аминокислоты, транспортируемые системами X-AG-, в и у+, а при ухудшении состояния также системы А/А8С. Анализ изменений уровней аминокислот в сыворотке крови позволяет предположить дисбаланс возбуждающих и тормозных нейромедиаторов, а также нарушения белкового питания.
Ключевые слова: синдром Аспергера, ранний детский аутизм, аминокислоты, нейромедиаторы, сыворотка, моча.
SERUM AND URINARY AMINO ACIDS IN CHILDREN WITH ASPERGER SYNDROME
A.S. Gorina1, L.S. Kolesnichenko2 ('Sick Children Hospital, Research Institute 555 University Ave., Toronto, ON M5G; 2Irkutsk State Medical University)
Summary. In serum of children with Asperger syndrome, independently on their condition, an increase in arginine, taurine, glutamate, proline, cysteine and aspartate and a decrease in methionine was observed. Lysine was elevated only in stable condition. Elevation in asparagine, glutamine and glycine and decrease in serine, ^-alanine and tyrosine occurred only in aggravated condition. Changes in amino acids concentrations were more pronounced in aggravated condition than in stable condition. Urinary excretion of amino acids was altered. The changes involved predominantly amino acids transported by X-AG-, p m y+ systems and in aggravated condition also by A/ASC systems. Analysis of changes in serum amino acids suggests a disbalance between excitatory and inhibitory neurotransmitters as well as a disturbance in protein nutrition.
Key words: Asperger syndrome, early childhood autism, amino acids, neurotransmitters, serum, urine.
Синдром Аспергера — общее расстройство развития (группа F84.5 по МКБ-10), характеризующееся качественным затруднением социальных взаимодействий (включая отсутствие эмоциональной взаимности), а также ограниченными, повторяющимися и стереотипными моторными движениями и шаблонами поведения, интересов и занятий. В отличие от синдрома Каннера, при синдроме Аспергера отсутствует клинически значимая задержка познавательного развития, развития речи, соответствующих возрасту навыков самообслуживания и адаптивного поведения (исключая социальные взаимодействия).
Встречаемость синдрома Аспергера среди детей школьного возраста оценивается по крайней мере как 0,3-0,4% или около 0,7% с учетом спорных случаев, до 50 % имеющих синдром Аспергера не диагностируются [14]. Синдром Аспергера, как и другие расстройства аутистического спектра, чаще встречается среди лиц мужского пола (7580% случаев).
Аминокислоты играют важную роль в функционировании организма, как материал для синтеза белков, так и источник разнообразных метаболитов, в том числе нейромедиаторов. Кроме того, многие аминокислоты сами являются нейромедиа-торами. Нарушения баланса аминокислот в биологических жидкостях происходят из-за нарушений поступления аминокислот из пищеварительной системы в кровь, метаболизма аминокислот в крови, поступления аминокислот в нервную систему через гематоэнцефалический барьер и метаболизма аминокислот в нервной системе. Результатом могут быть недостаточные или избыточные уровни нейромедиаторов (се-ротонина, дофамина, нора-дреналина, ГАМК, глицина, аспартата, глутамата и таури-на) и зависящие от этого ней-рологические нарушения.
Связь между аномальным метаболизмом аминокислот и аутистическими расстройствами предполагалась давно
и большинство исследований свидетельствует о наличии таких изменений при аутизме. Однако литературные данные очень противоречивы, и анализ состояний различной степени тяжести как правило не проводится.
Цель настоящей работы — проанализировать связь между профилем аминокислот и тяжестью состояния при синдроме Аспергера у детей. Для этого измерялось содержание аминокислот в сыворотке крови и мочи у детей с синдромом Аспергера в стабильном состоянии и при его ухудшении.
Таблица 1
Изменения в уровне аминокислот в сыворотке крови при синдроме Аспергера, М ± т. Аминокислоты сгруппированы по транспортным системам
Транспортные системы аминокислот Нейроме-диаторная функция Сыворотка (мкмоль/л)а
Контроль Стабильное состояние Ухудшение состояния
N=150 N=42 N=42
A/ASC Аланин 3 74,88± 11,83 363,82± 17,56 388,06± 19,77
Аспарагин 52,08±1,00 54,41 ±2,82 66,06±3,44***
Глутамин 453,36±9,27 492,36±20,52 694,94±29,66***
Метионин 24,03±0,56 16,64± 1,02*** 7,27±0,46***
Серин 116,39±2,28 126,63±7,55 70,13 ±2,46***
Треонин 82,39±2,29 92,54±5,87 91,75±3,72
Цистеин ТормНейр 75,49±1,69 83,92±4,41* 117,13±6,34***
СУММАРНО 1178,62±15,51 1230,32±29,14 1435,33±36,65***
в в-аланин 35,12±0,87 32,28±1,77 24,13±1,30***
Таурин ТормНейр 119,62±3,37 138,08±7,23* 362,75±14,12***
СУММАРНО 154,74±3,48 170,36±7,44* 386,88±14,18***
Gly Глицин ТормНейр 252,79±5,94 281,79± 14,04* 306,31 ±10,11***
L Валин 257,59±5,17 252,03±10,96 257,19±10,39
Изолейцин 92,23±2,43 101,76±5,50 93,94±3,50
Лейцин 187,79±4,22 196,00± 10,38 177,31 ±7,45
Тирозин пВозбНейр 80,23±2,18 84,96±3,94 125,81 ±7,62***
Триптофан пВозбНейр 80,07±2,21 77,92±3,80 76,19±3,55
Фенилаланин предшТир 68,18± 1,52 67,79±3,42 67,13±2,88
СУММАРНО 766,09±7,9 780,46±17,32 797,56±15,95
X-AG- Аспартат ВозбНейр 21,70±0,42 25,13± 1,48** 69,00±2,21***
Глутамат ВозбНейр 78,22±2,22 90,69±4,71* 114,88±3,47***
СУММАРНО 99,92±2,26 115,82±4,94** 183,88±4,12***
y+ Аргинин предшNO 91,53±2,58 121,67±6,85*** 222,25±8,79***
Гистидин 90,32±3,05 98,46±4,86 97,63±4,69
Лизин 137,28±3,43 153,85±8,79* 128,25±6,16
Орнитин 65,65±2,22 68,28±3,30 68,31 ±4,37
СУММАРНО 384,78±5,71 442,26±12,6*** 516,44±12,5***
Пролин 147,84±4,77 171,54±10,77* 213,19±10,01***
ГАМК пТрмНейр 0,41±0,01 0,40±0,02 0,40±0,01
Примечание: Значимость отличий от контроля: * — Р< 0,05; ** — Р< 0,01;
*** — р< 0,001. ТормНейр — Тормозной нейромедиатор, пВозбНейр — Предшественник возбуждающих нейромедиаторов, предшТир — Предшественник тирозина, ВозбНейр — Возбуждающий нейромедиатор, предшNO — Предшественник N0, пТрмНейр — Преимущественно тормозной нейромедиатор. а — Концентрация ГАМК в нмоль/л.
Материалы и методы
Было обследовано 42 ребенка с синдромом Аспергера в возрасте от трех до семи лет из детского областного реабилитационного центра и клиники нервных болезней института педиатрии и репродукции человека ВСНЦ СО РАМН и клиники медицинского факультета университета Генриха Гейне (Дюссельдорф, Германия). Диагноз в исследуемой группе определялся с использованием критериев международной классификации психических заболеваний МКБ-10 для диагностики аутичного расстройства у детей. Ухудшение состояния при синдроме Аспергера определялось как грубые , достаточно стойкие аффективные нарушения настроения, повышенное моторное возбуждение, агрессия, нарушение внимания, способности к обучению и сна, а также аномальные изменения аппетита. Во всех вариантах в периоде ухудшения не происходит продвижения в психическом развитии или темп его крайне замедлен. Группу контроля составили 150 детей. Проводился перекрестный анализ проб крови, отобранных в России и Германии, с применением двойного слепого метода, в целях повышения качества анализов и воспроизводимости результатов исследований. Пробы, отобранные у пациентов в России, отправлялись замороженными при низкой температуре, в Германию и анализировались в клинике медицинского факультета университета Генриха Гейне (Дюссельдорф). Пробы, отобранные у пациентов в Германии, аналогичным образом, отправлялись для анализа в Россию. Исследования проводились в течение 5 лет и были завершены в конце 2002 г. Исследования были проведены с соблюдением международных стандартов и биоэтических норм, в соответствии с Хельсинской декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека». Протокол исследований был одобрен на заседаниях комитетов по биоэтике Восточно-Сибирского научного центра РАМН и медицинского факультета университета Генриха Гейне (Дюссельдорф, Германия).
Для исследования содержания аминокислот венозная кровь собиралась утром натощак в две пробирки (для получения сыворотки), моча — в течение суток в стерильные контейнеры из темного стекла. Полученные образцы подвергались стандартной обработке и хранению (при -700С). Триптофан и его метаболиты разделялись на системе высокопроизводительной жидкостной хроматографии с переключением колонок (HPLC-725 CAII; Tosoh Corp, Japan) и измерялись методом селективной флюорометрической детекции с использованием флюо-рометра Шимадзу RF-10AXL. Использовались реактивы
фирм Beckman и Sigma. Анализ производился солгасно Биркрофту с соавторами [2].
Использовались реактивы и контрольные материалы фирм Beckman и Sigma. Данные представлялись как среднее ± стандартная ошибка. Для сравнения средних применялся критерий Стьюдента. Критический уровень значимости при проверке гипотез р=0,05.
Результаты и обсуждение
Сыворотка крови
При исследовании сыворотки крови у детей, находящихся в стабильном состоянии (табл. 1) значительно повышен аргинин (на 33%), в меньшей степени аспар-тат (на 16%), глутамат (на 16%), пролин (на 16%), тау-рин (на 15%), лизин (на 12%), цистеин (на 11%), глицин (на 11%), а также понижен метионин (на 31%). В целом повышены суммы аминокислот транспортных систем в (на 10%), X-AG— (на 16%) и y+ (на 15%).
При ухудшении состояния наблюдалось значительное повышение содержания аспартата (на 218%), таурина (на 203%), аргинина (на 143%), цистеина (на 55%), глутамина (на 53%), глутамата (на 47%), про-лина (на 44%), глицина (на 21%), аспарагина (на 27%). Содержание метионина было значительно снижено, на 70%. Кроме того, была снижены концентрации серина (на 40%), бета-аланина (на 31%) и тирозина (на 17%). В
Таблица 2
Изменения в уровне аминокислот в моче при синдроме Аспергера, M ± m. Аминокислоты сгруппированы по транспортным системам
Транспортные системы аминокислот Нейроме-диаторная функция Моча (мкмоль/л)
Контроль Стабильное состояние Ухудшение состояния
N=150 N=42 N=42
A/ASC Аланин 244,70±4,36 239,90± 11,33 238,50±11,53
Аспарагин 46,53±1,17 48,18±2,57 36,81 ±2,05***
Глутамин 716,39±17,58 720,74±40,63 718,56±31,6
Метионин 29,89±0,81 33,05± 1,55 16,13±0,71 ***
Серин 149,00±3,36 143,74±6,03 123,94±5,18***
Треонин 93,36±2,70 93,74±3,82 92,38±3,09
Цистеин ТормНейр 144,58±2,90 141,46±7,00 145,19±6,52
СУММАРНО 1424,45±18,9 1420,82±43,45 1371,50±34,86
в в-аланин 31,01 ±1,00 29,64±1,73 34,63± 1,18
Таурин ТормНейр 74,53±1,86 98,64±3,36*** 99,94±4,53***
СУММАРНО 105,53±2,11 128,28±3,78*** 134,56±4,68***
Gly Глицин ТормНейр 588,18±12,58 614,59±26,7 557,06±30,71
L Валин 49,79±1,60 52,72±2,90 45,94±1,60
Изолейцин 42,60±1,19 43,95±2,54 39,69±1,44
Лейцин 61,93±1,56 61,49±3,41 60,38±3,12
Тирозин пВозбНейр 73,65±1,96 75,46±2,86 70,75±4,16
Триптофан пВозбНейр 163,03±4,03 165,87±5,9 166,5±6,34
Фенилаланин предшТир 31,01 ±0,72 28,23±1,09 29,44±1,23
СУММАРНО 422,01±5,20 427,72±8,40 412,69±8,57
X-«G- Аспартат ВозбНейр 43,31 ±1,02 39,08±2,43 66,06±3,32***
Глутамат ВозбНейр 120,01 ±2,64 124,69±5,16 127,94±6,45
СУММАРНО 163,32±2,83 163,77±5,71 194,00±7,26***
y+ Аргинин предшNO 31,91 ±0,61 32,77±2,00 26,13± 1,04***
Гистидин 494,43 ±11,62 491,82±22,75 491,44±22,20
Лизин 101,31 ±2,59 103,15±5,45 107,25±6,42
Орнитин 35,81 ±0,82 34,97±1,38 34,19± 1,72
СУММАРНО 663,46±11,95 662,72±23,52 659±23,20
Пролин 33,43±0,98 35,00±1,71 42,25±1,49***
Примечание: Значимость отличий от контроля: * — Р< 0,05; ** — Р< 0,01;
*** — р< 0,001. ТормНейр — Тормозной нейромедиатор, пВозбНейр — Предшественник возбуждающих нейромедиаторов, предшТир — Предшественник тирозина, ВозбНейр — Возбуждающий нейромедиатор, предшNO — Предшественник N0, пТрмНейр — Преимущественно тормозной ней-ромедиатор.
целом повышены суммы аминокислот транспортных систем A/ASC (на 22%), ß (на 150%), X-AG— (на 84%) и y+ (на 34%).
Моча
Анализ мочи у детей в стабильном состоянии (табл. 2) показал значительное повышение таурина (на 32%), что обусловило повышение суммы аминокислот транспортной системы ß (на 22%). При ухудшении состояния значительно повышены содержание таурина (на 34%), аспартата (на 53%) и пролина (на 26%). Значительно понижены концентрации аспарагина (на 21%), метионина (на 46%), серина (на 17%) и аргинина (на 18%). В целом были повышены суммы аминокислот по транспортным системам ß (на 28%) и X-AG— (на 19%).
Анализ изменений уровня аминокислот в сыворотке и моче у детей с ранним детским аутизмом (синдром Аспергера) показал, что в сыворотке крови, как в стабильном нервно-психическом состоянии, так и при ухудшении состояния происходит повышение концентраций аргинина, таурина, глутамата, аспартата, про-лина и цистеина и снижение концентрации метионина, однако в стабильном состоянии только повышение аргинина и понижение метионина превышали по амплитуде 30%. При ухудшении состояния упомянутые изменения, наблюдавшиеся в стабильном состоянии, были значительно более выражены; кроме того, повышались концентрации аспарагина, глутамина и глицина и понижалось содержание серина, ß-аланина и тирозина. Наиболее сильно изменялись концентрации аспартата, аргинина, таурина и метионина. Изменения затрагивали преимущественно аминокислоты, транспортируемые системами X-AG-, ß и y+, а при ухудшении состояния также системы A/ASC.
Изменения в моче в стабильном состоянии согласуются с изменениями в крови только в отношении повышения концентрации таурина. При ухудшении состояния, изменения в моче отражают часть изменений в крови (повышение аспартата, пролина и таурина и понижение метионина и серина), но в значительно более ослабленном виде. Кроме того, понижается экскреция аспарагина, в противоположность повышению его содержания в крови.
Аминокислоты и продукты их метаболизма могут выполнять роль нейромедиаторов в нервной системе. Так, тирозин — источник L-DOPA, дофамина, норадре-налина и адреналина, а триптофан — предшественник серотонина [9]. Глутамат и аспартат являются возбуждающими нейромедиаторами; кроме того, глутамат — источник ГАМК, основного тормозного нейромедиато-ра в мозге млекопитающих [5]. Глицин и таурин также являются тормозными нейромедиаторами. Одна из серусодрежащих аминокислот, цистеин, оказывает тормозящее действие на нервную систему, и его избыток может оказывать успокаивающее действие на детей с аутизмом [6]. С другой стороны, дефицит серусодержа-щих аминокислот (таких, как метионин и цистеин) может быть признаком хронической дисфункции пищеварения, с последующим дисбактериозом, нарушением
всасывания и обмена серусодержащих аминокислот, а также пониженной устойчивостью к оксидативному стрессу [8, 10].
Аминокислоты транспортируются через гематоэн-цефалический барьер из крови в мозг с помощью нескольких транспортных систем. L-система транспортирует большие нейтральные аминокислоты (неполярные и ароматические), A/ASC — система — малые нейтральные аминокислоты (преимущественно полярные), y+ система — положительно заряженные аминокислоты, в система — таурин и в-аланин [12]. Изменение уровня аминокислот в крови способно нарушить баланс аминокислот, конкурирующих за одну и ту же транспортную систему, так как избыток одной аминокислоты может помешать транспорту другой.
Полученные нами результаты согласуются с некоторыми данными [13], в том числе при синдроме Аспергера [1]. Повышение содержания глутамата и тау-рина особенно выражены при ухудшении состояния, что согласуется с данными о положительной корреляции между их содержанием и тяжестью аутистического расстройства [13]. Повышение глицина находится в соответствии с результатами [4], а повышение аспартата и таурина — с данными [11]. В целом наши результаты подтвержают представление о дисрегуляции возбуждающих и тормозных систем аминокислотной нейро-трансмиссии [3]. Понижение концентрации метионина и тирозина сыворотки согласуется с некоторыми данными литературы [8] и может быть объяснено нарушениями белкового питания, которые отмечаются при ау-тистических расстройствах [7]. В свою очередь, понижение концентрации тирозина при ухудшении состояния может приводить к нарушению синтеза катехоламинов. Упомянутые изменения в профиле аминокислоты сыворотки были особенно выражены при ухудшении состояния, что может частично объяснять аффективные расстройства у детей с синдромом Аспергера: грубые нарушения стабильности настроения, повышенное моторное возбуждение и агрессия, нарушение внимания и способности к обучению, нарушение сна и аномальные изменения аппетита.
Таким образом, у детей с ранним детским аутизмом при синдроме Аспергера обнаружено изменение в сыворотке крови уровней аминокислот, принадлежащим к нескольким транспортным системам (прежде всего A/ASC, X-AG-, beta, y+). При ухудшении состояния изменения, наблюдавшиеся в стабильном состоянии усиливались и обнаруживались изменения в уровне других аминокислот. Результаты могут быть интерпретированы как возможное нарушение баланса аминокислот, имеющих нейромедиаторные функции: аспартата и глутама-та — медиаторов возбуждающей нейротрансмиссии, таурина, глицина и цистеина — медиаторов тормозной нейротрансмиссии. Недостаток метионина и тирозина может быть индикатором нарушения белкового питания, а недостаток тирозина, кроме того, — возможным фактором нарушения когнитивных функций при ухудшении состояния.
ЛИТЕРАТУРА
1.Aldred S., Moore K.M., Fitzgerald M., Waring R.H. Plasma amino acid levels in children with autism and their families. // J Autism Dev. Disord. — 2003. — Vol. 33(1). — P. 93-97.
2.Bearcroft C.P., Farthing M.J.G., Perret D. Determination of 5-hydroxytryptamine, 5-hydroxyindoleacetic acid and tryptophan in plasma and urine by HPLC with fluorimetric detection. // Biomed. Chromatogr. — 1995. — Vol. 9. — P. 23-27.
3.Blaylock R.L., Strunecka A. Immune-glutamatergic dysfunction as a central mechanism of the autism spectrum disorders. // Curr. Med. Chem. — 2009. — Vol. 16(2). — P. 157-170.
4. Castejon O.J, Marcano De Hidalgo A., Castejon O.J.H.V., et al. [Imbalance of plasma amino acids in patients with autism and subjects with attention deficit/hyperactivity disorder]. Desequilibrio de aminoacidos plasmaticos en pacientes autistas y ensujetos con trastorno de deficit de atencion con hiperactividad.
// Revista De Neurologia. — 2001. — Vol. 33(5). — P. 401-408.
5. Cohen B.I. GABA-transaminase, the liver and infantile autism. // Med. Hypotheses. — 2001. — Vol. 57(6). — P. 673-674.
6.Connors S. L., Crowell D. E. Secretin and autism: the role of cysteine. // J. Am. Acad. Child Adolesc. Psychiatry. — 1999. — Vol. 38(7). — P. 795-796.
7.Evans C., Dunstan R.H., Rothkirch T., et al. Altered amino acid excretion in children with autism. // Nutr. Neurosci. — 2008. — Vol. 11(1). — P. 9-17.
8.James S.J., Melnyk S., Jernigan S., et al. Metabolic endophenotype and related genotypes are associated with oxidative stress in children with autism. // Am. J. Med. Genet. B Neuropsychiatr. Genet. — 2006. — Vol. 5(8). — P. 947-956.
9.Katuzna-Czaplinska J., Michalska M., Rynkowski J. Determination of tryptophan in urine of autistic and healthy
children by gas chromatography/mass spectrometry. // Med Sci Monit. — 2010. — Vol. 16(10). — CR488-492.
10.Main P.A., Angley M.T., Thomas P., et al. Folate and methionine metabolism in autism: a systematic review. // Am. J. Clin. Nutr. — 2010. — Vol. 91(6). — P. 1598-1620.
11.Moreno H., Borjas L., Arrieta A., et al. Clinical heterogeneity of the autistic syndrome: a study of 60 families // Invest Clin. — 1992. — Vol. 33(1). — P. 13-31.
12.Ohtsuki S., Terasaki T. Contribution of carrier-mediated transport systems to the blood-brain barrier as a supporting
and protecting interface for the brain; importance for CNS drug discovery and development. // Pharm. Res. — 2007. — Vol. 24(9). — P. 1745-1758.
13.Shinohe A., Hashimoto K., Nakamura K., et al. Increased serum levels of glutamate in adult patients with autism. // Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. — 2006. — Vol. 30(8). — P. 1472-1477.
14.Stewart M.E., Barnard L., Pearson J., et al. Presentation of depression in autism and Asperger syndrome: a review. // Autism. — 2006. — Vol. 10(1). — P. 103-116.
Информация об авторах: 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, e-mail: [email protected] Колесниченко Лариса Станиславовна — заведующая кафедрой химии, профессор, д.м.н.; Горина Анна Сергеевна — к.б.н., научный сотрудник Sick Children Hospital, Research Institute, Toronto, ON M5G Canada, 555 University Ave,
© ТЫЖИГИРОВА В.В., ЛАПШИНА М.П. — 2011 УДК 615.2:616-073.524
ФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИФЕНГИДРАМИНА ГИДРОХЛОРИДА В ЛЕКАРСТВЕННОМ ПРЕПАРАТЕ
АНТИГРИППИН-АНВИ
Валентина Викторовна Тыжигирова, Марина Павловна Лапшина (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, зав. — д.х.н., проф. Е.А. Илларионова)
Резюме. Разработана фотометрическая методика определения дифенгидрамина гидрохлорида в капсулах Антигриппин-АНВИ, основанная на реакции лекарственного вещества с кислотным красителем бромтимоловым синим. Изучены оптимальные условия образования окрашенного комплекса и его спектральные характеристики. Установлена линейность методики в диапазоне концентраций 50-100 мкг/мл (коэффициент корреляции 0,9981). Методика не отягощена систематической ошибкой, коэффициент вариации не превышает 2%, что подтверждает валидность предлагаемой методики.
Ключевые слова: дифенгидрамина гидрохлорид, фотометрическое определение, бромтимоловый синий, вали-дация.
PHOTOMETRIC DEFINITION OF DIPHENHYDRAMINE HYDROCHLORIDE IN A MEDICAL PRODUCT ANTIGRIPPIN-ANVI
V.V. Tyzhigirova, M.P. Lapshina (Irkutsk State Medical University)
Summary. The photometric technique of definition Diphenhydramine hydrochloride in capsules Antigrippin-ANVI based on reaction of medicinal substance with acid dye Bromothymol blue has been developed. Optimum conditions of formation of the painted complex and its spectral characteristics have been e studied. Linearity of the technique in a range of concentration of 50-100 mkg/ml has been established (correlation coefficient is 0,9981). The results do not have systematic fault, the coefficient of a variation does not exceed 2% that confirms a validity of technique.
Key words: diphenhydramine hydrochloride, photometric definition, bromothymol blue, validation.
Комбинированный лекарственный препарат Антигриппин-АНВИ применяется в качестве симптоматического средства для лечения гриппа и ОРВИ у взрослых. Препарат выпускается в форме капсул А и Б. В состав капсул А входят лекарственные вещества: аскорбиновая кислота 300 мг, ацетилсалициловая кислота 250 мг, рутозид 20 мг; капсул Б — метамизол натрия 250 мг, кальция глюконат 100 мг, дифенгидрамина гидрохлорид 20 мг. Разделение компонентов по двум разным капсулам позволяет избежать фармацевтическую несовместимость аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот с дифенгидрамина гидрохлоридом и существенно продлить срок годности лекарственного препарата.
В соответствии с нормативной документацией (НД) количественное определение компонентов капсул проводится в основном химическим методом [4]. Выбор химического метода не вызывает сомнения, так как его достоинства общеизвестны. Метод является абсолютным, не требует сравнения со стандартными образцами. Кроме того, химические методы экспрессны, просты в исполнении, экономичны. Поэтому применение химических методов в анализе макрокомпонентов лекарственного препарата вполне обосновано.
Однако методика количественного определения ди-фенгидрамина гидрохлорида, содержащегося в лекарственном препарате в микроколичествах (20 мг), требу-
ет совершенствования. Она недостаточно чувствительна и специфична. Кроме того, определение проводится не по активной части молекулы дифенгидрамина, а по иону хлора аргентометрическим методом с использованием бромфенолового синего в качестве индикатора. Метрологическая оценка методики на модельных смесях показала, что она отягощена систематической ошибкой, завышающей результаты анализа (табл. 2, 3). Об этом свидетельствует критерий Стьюдента: вычисленное значение ^ =2,47) больше табличного (^а6=2,3б). Источником систематической погрешности, как установлено нами, являются сопутствующие компоненты — метамизол натрия и кальция глюконат, которые мешают фиксированию точки конца титрования вблизи точки эквивалентности.
Цель настоящего исследования заключалась в разработке новой методики количественного определения ди-фенгидрамина гидрохлорида в капсулах Антигриппин-АНВИ фотометрическим методом.
Материалы и методы
В работе использовали фармацевтическую субстанцию дифенгидрамина гидрохлорида, удовлетворяющую требованиям НД [5]. Титрованный раствор серебра нитрата, индикаторы и реактивы готовили и стандартизо-
