CC BY
22
ПОСТЕРЫ
НЕЙРООНКОЛОГИЯ
может быть проведена дифференциальная диагностика между опухолевой тканью и белым веществом по краю опухолевой резекции в ходе нейрохирургических вмешательств. Среди критериев ОКТ-сигнала достоверную сопряженность с гистологическим строением изучаемой ткани имеют следующие: в исходной поляризации — интенсивность сигнала и наличие областей с разной интенсивностью; в кросс-поляризации — интенсивность сигнала и равномерность его затухания сигнала.
Появление углеводных молекул гепарансульфата в клетках глиобластомы как фактор негативного прогноза течения заболевания
Г. М. Казанская'-2, А. М. Волков2, А. Ю. Цидулко', Р. С. Киселев3, А. В. Суховских'-2, Д. В. Костромская2, В. В. Кобозев2, А. С. Гайтан3,4, С. В. Айдагулова'2, А.Л. Кривошапкин3,4, Э. В. Григорьева'
Место работы: 'ФГБНУ Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики, Новосибирск; 2ФГБУ ННИИПК им. акад. Е. Н. Мешалкина, Новосибирск; 3Новосибирский государственный медицинский университет, Новосибирск; 4 Европейский медицинский центр, Москва
e-mail: [email protected]
Введение. Глиобластома остается одним из самых смертельных типов опухолей, выбор терапии для которой сильно ограничен, а отсутствие прогностических маркеров не позволяет оптимизировать существующие схемы лечениия. Наряду с потенциальными биомаркерами белковой природы перспективными маркерами также могут быть и углеводные молекулы гликозаминогликанов (хондроитинсульфат, гепа-рансульфат), составляющие основу ВКМ ткани головного мозга.
Цель. Определение содержания гепарансульфатов (ГС) в нормальной и опухолевой ткани головного мозга и изучение их взаимосвязи с общей и безрецидивной выживаемостью пациентов с глиобластомой.
Материалы и методы. Исследование проводили на клинических образцах глиобластомы человека (n=41). Содержание и локализацию ГС в образцах определяли методом иммуно-гистохимического окрашивания с использованием антител на углеводные молекулы ГС, количественную оценку проводили на основе метода дифференциальной интенсивности сигнала (0, 1+, 2+, or 3+) и программного обеспечения ZENblue (Carl Zeiss). Для сопоставления полученных результатов с клиническими данными использовали мультивариа-тивный анализ и графики Каплан-Мейер. Результаты. В глиальных клетках нормальной ткани головного мозга ГС практически не экспрессируется, однако клетки глиобластомы показывали выраженное окрашивание на ГС (хотя при этом была отмечена высокая межопухолевая и вну-триопухолевая гетерогенность позитивного сигнала, который варьировал от 0 до 3+ в пределах одной и той же опухоли). Присутствие ГС в опухолях было связано не с определенным типом клеток, а скорее с функциональными зонами ткани опухоли (максимальное содержание ГС определялась в железисто-подобных структурах и не границе с некротическими очагами). ГС-позитивные опухоли не были ассоциированы с такими клиническими признаками, как первичная/вторичная опухоль, степень ее резекции, возраст или пол, но проявляли сильную ассоциацию с безрецидивным выживанием пациентов (р<0,05). Сравнительный анализ содержания
ГС в тканях исходной и рецидивирующей опухоли одного и того же пациента (6 пар образцов) показал дальнейшее повышение содержания ГС в рецидивирующих опухолях по сравнению с первоначальной опухолью. Заключение. Накопление гепарансульфата в клетках глиобластомы может являться молекулярным маркером высокой вероятности рецидива заболевания, который может быть использован при определении стратегии лечения пациентов с глиобластомой.
Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 16-15-10243).
Общая выживаемость пациентов с метастазами в головной мозг после радиохирургического лечения
С.М. Банов2-', А. В. Голанов', Е.Р. Ветлова', И.К. Осинов2, С.А. Маряшев'-2, А.А. Дургарян'
Место работы: 'ФГБУ ННПЦ нейрохирургии им. ак. Н. Н. Бурденко, Москва; 2Центр Гамма Нож, Москва e-mail: [email protected]
Симптоматические метастазы в головной мозг (МГМ) встречаются у 8—10% онкологических больных. Частота регистрации МГМ, вероятно, будет возрастать, поскольку общая выживаемость онкологических пациентов увеличивается в связи с совершенствованием лекарственного лечения. Течение заболевания у пациентов с МГМ носит в большинстве случаев агрессивный характер. Прогноз у пациентов с МГМ остается плохим: медиана общей выживаемости не превышает одного месяца без лечения. В настоящем исследовании проведен анализ результатов лечения пациентов с МГМ, получивших радиохирургическое лечение на аппарате Гамма нож (РХ) в самостоятельном варианте лечения.
Цель. Изучение показателей общей выживаемости и частоты интракраниальных рецидивов у пациентов с метастазами в головной мозг после проведения радиохирургического лечения в самостоятельном варианте лечения. Материал и методы. Проведен анализ результатов лечения 582 пациентов с метастазами в головной мозг (249 мужчин и 333 женщины), которые получили РХ на аппарате Гамма нож. Первичный онкологический диагноз был представлен немелкоклеточным раком легкого, раком молочной железы, меланомой, раком почки и колоректальным раком у 163, 164, 123, 89 и 43 пациентов соответственно. У 251 пациента (43,1 %) были множественные (>5 очагов) МГМ. Медиана суммарного объема и количества МГМ составила 5,2 см3 (интервал 0,09—56,6) и 4 (интервал 1—39) соответственно. Средняя краевая доза радиации была 21 Гр (диапазон 15—24 Гр). Проведена оценка влияния на общую выживаемость следующих клинических факторов: возраст (<50 лет/>50 лет), числа МГМ (>4/<3), суммарного объема МГМ (<5 см3/>5 см3), морфологии первичной опухоли, индекса Карновского (>80/<70) и экстракраниальных метастазов («да»/«нет»). Результаты. Общая выживаемость пациентов в целом по группе на сроке 12 и 24 месяцев составила 43,0% и 25,1% соответственно. Медиана общей выживаемости после РХ составила 9,9 месяцев (95% ДИ 8,6-11,4). В многофакторном анализе наличие рака молочной железы (0Р-0,54, р=0,02), число МГМ >5 (0Р=1,97;р=0,0021), индекс Карновского >80 (0Р-0,49, р <0,0001), возраст <50 лет (0Р-0,67, р=0,043) и отсутствие экстракраниальных метастазов (0Р=0,52, р=0,015) ассоциированы с общей выживаемостью, Выводы. Проведение радиохирургии у пациентов с МГМ обеспечивает медиану общей выживаемости 9,9 месяцев.
ПОСТЕРЫ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ
Наличие рака молочной железы, хороший функциональный статус, ограниченные (<4 очага) МГМ, возраст <50 лет и отсутствие экстракраниальных метастазов являются предикторами лучшей выживаемости.
Участие системы глутатион - глутаредоксин в регуляции пролиферации опухолевых клеток линии MCF-7 при индуцированном росковитином окислительном стрессе
Е. В. Шахристова', Е. А. Степовая', О. Л. Носарева', Е. В. Ру-диков'
Место работы: ФГБОУ ВО Сибирский государственный медицинский университет Минздрава России, г. Томск e-mail: [email protected]
В настоящее время фундаментальные исследования, проводимые в области молекулярно-клеточных взаимодействий, позволяют выявить молекулярные механизмы развития различных социально-значимых заболеваний, в том числе злокачественных новообразований. Изучение молекулярных механизмов опухолевого роста, сопровождающейся активной пролиферацией трансформированных клеток, дизрегу-ляцией апоптоза на фоне развития окислительного стресса, является одним из приоритетных направлений трансляционной медицины.
Цель. Установление роли глутатиона и глутаредоксина в регуляции пролиферации опухолевых клеток линии MCF-7 при индуцированном росковитином окислительном стрессе. Материалы и методы. В исследованиях была использована культура клеток линии MCF-7 (эпителиоподобная аденокар-цинома молочной железы человека), полученная из Российской коллекции клеточных культур Института цитологии РАН. Опухолевые клетки культивировали адгезионным методом в полной питательной среде, содержащей 90% EMEM, 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 1 % заменимых аминокислот, 10 мкг/мл бычьего инсулина, 0,3 мг/мл L-глутамина и 100 мкг/мл гентамицина. Клетки аденокарциномы молочной железы культивировали в течение 18 ч при 37°C и 5% CO2 в присутствии и отсутствии росковитина (ROSC («Sigma-Aldrich», США), ингибитор циклинзависимых протеинкиназ) в конечной концентрации 20 мкМ. Оценку распределения опухолевых клеток по фазам клеточного цикла проводили методом проточной цитофлуориметрии по протоколу Cycle Test Plus («Becton Dickinson», США). Продукцию активных форм кислорода (АФК), представленных перекисными группировками гидро- и липопероксидов, в культуре клеток линии MCF-7 оценивали с использованием флуоресцентного зонда 2,7-дихлорфлуоресцеиндиацетата на проточном лазерном цитометре «BD FaCSCanto II» («Becton Dickinson», США). Концентрацию восстановленной (GSH) и окисленной (GSSG) форм глутатиона в клетках линии MCF-7 оценивали методом, основаным на способности GSH взаимодействовать с 5,5-дитиобис-2-нитробензойной кислотой с образованием тионитрофенольного аниона, имеющего характерный максимум поглощения при длине волны 412 нм. Для определения GSSG пробы предварительно инкубировали с блокатором SH-групп — 2-винилпиридином. Методом вестерн-блоттинга с использованием моноклональных антител («Abcam», США) определяли внутриклеточное содержание глутаредоксина по протоколу фирмы-производителя. Расчет содержания исследуемого белка проводили относительно концентрации референсного протеина р-актина. Результаты выражали
в виде медианы (Ме) и квартилей (Q1-Q3). Достоверность различий выборок оценивали непараметрическим критерием Манна-Уитни при уровне значимости р<0,01. Результаты. Культивирование клеток линии MCF-7 в присутствии ROSC способствовало снижению прогрессии фаз клеточного цикла, что выражалось в уменьшении количества опухолевых клеток в 1,4 раза (р<0,01) в G0/G1 фазах и в 2,5 раза (р<0,01) в G2/M фазах по сравнению с соответствующими показателями в интактной культуре, составившими 56,37 (55,89-56,57) % и 7,92 (5,82-10,11) % соответственно. Остановка клеточного цикла в G2/M фазах при действии ROSC сопровождалась активацией окислительного стресса в клетках линии MCF-7 с увеличением генерации АФК в 1,6 раза (р<0,01) по сравнению со значениями показателя в интактной культуре (0,81 (0,80-0,83) у. е.). Ведущую роль в защите клеток от окислительного стресса и поддержании редокс-гомеостаза играет система глутатиона, включающая глутатион и глутатионзависимые ферменты, в частности глутаредоксин. Поскольку АФК способны повреждать макромолекулы клеток, в том числе белки-регуляторы пролиферации, в опухолевых клетках при действии ROSC нами зарегистрировано снижение концентрации GSH в 1,8 (р<0,05) раз по сравнению с интакт-ной культурой, который может использоваться в качестве кофермента в ферментативных реакциях взаимодействия с гидро- и липопероксидами. Отсутствие ожидаемого увеличения содержания GSSG в клетках линии MCF-7 при роско-витин-индуцированном окислительном стрессе, может быть следствием глутатионилирования свободных SH - групп аминокислотных остатков в составе редокс-регулируемых белков. Также нами установлено увеличение содержания глутаредоксина в 1,3 раза (р<0,01) в клетках линии MCF-7 при действии ROSC в ответ на индукцию окислительного стресса. Глутаредоксин, катализируя процесс деглутатиони-лирования, модулирует активность транскрипционных факторов NF-kB, Nrf2 и AP-1, под контролем которых находятся участки генов, кодирующих ключевые белки антиокси-дантной системы, в том числе ферменты синтеза и метаболизма глутатиона. Поскольку глутатионилирование/ деглутатионилирование белков при действии ROSC способно приводить к конформационным изменениям структуры белковых молекул, в том числе циклинзависимых протеинкиназ, что может привести к нарушению выполняемых ими функций и остановке пролиферации опухолевых клеток линии MCF-7.
Заключение. Таким образом, остановка пролиферации клеток линии MCF-7 в G2/M фазах клеточного цикла при действии росковитина обусловлена не только механизмом конкурентного ингибирования циклинзависимых проте-инкиназ, но и индукцией окислительного стресса. Нами установлено, что индукция росковитином окислительного стресса в опухолевых клетках линии MCF-7 способствовала глутатионилированию/деглутатионилированию белков, изменению их структуры и функций, что ведет к нарушению прогрессии фаз клеточного цикла, указывая на возможность регуляции пролиферации через модуляцию функциональных свойств редокс-зависимых протеинов клетки с помощью системы глутатион — глутаредоксин. Полученные результаты в дальнейшем могут быть использованы для разработки подходов таргетной терапии опухолей молочной железы. Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (гуманитарные и общественные науки) в рамках научного проекта № 17-36-01029.
ПОСТЕРЫ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ
Визуализация злокачественных фиброзно-эпителиальных опухолей в эксперименте с помощью комплекса Mn (II) c димеркаптоянтарной кислотой как парамагнитного препарата для контрастного усиления МР-томографии
В.Ю. Усов'-2, М.Л. Белянин2, А. Ю. Коваленко3, А.И. Безлеп-кин', Е. Л. Чойнзонов', В. Д. Филимонов2 Место работы: 'Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской Академии наук, Томск; 2Национальный исследовательский Томский политехнический университет, Томск; 3Сибирский государственный медицинский университет, Томск e-mail: [email protected]
Цель. Мы попытались разработать парамагнитный контраст для визуализации опухолей без риска высвобождения гадолиния на основе комплекса Mn-димеркаптоянтарной кислоты (ДМСА) и изучили накопление его у животных с фиброзно-эпителиальными опухолями носоглотки. Материалы и методы. Комплекс Мп-ДМСА был получен по нанопорошковой технологии из оксида марганца (II) и димеркатосукцината с получением в итоге 0,5М раствора Мп-ДМСА при pH=6,5—7,2, при этом избыток ДМСА составлял 0,5—0,9%. Препарат Мп-ДМСА вводился внутривенно медленно животным (5 кошек и 4 собаки, все — ветеринарные пациенты с опухолями носоглотки) как 0,05 мл 0,5М раствора на 1 кг веса тела. МРТ в Т1-взв. спин-эхо режиме проводилась при TR=500 мс, TE=15 мс срезами по 2-2,5 мм, в матрицу 256x256, при поле зрения 200x200 мм. Поглощение оценивалось визуально как изменение в интенсивности Т1-взв. спин-эхо сканов МРТ и с расчетом индекса усиления (ИУ) Т1- взв. МРТ как отношение интенсивности на элемент изображения: ИУ= (Средн. Инт. Т1-взв. МРТ) Mn-DMSA/(Средн. Инт. Т1-взв. МРТ) исходн. У трех животных оценивалась кинетика поглощения контрастного препарата в опухоли в течение 12—15 мин с ежеминутной записью Т1-взв. спин-эхо МР-то-мосрезов и взятием проб крови, с расчетом констант поглощения из крови в опухоль по Гьедде-Рутланду-Патлаку. Результаты. Релаксивность R1 для комплекса Мп-ДМСА составила 3,2 1/ (с*мМ). Визуально на Т1-взв. МРТ в спин-эхо режиме во всех случаях Мп-ДМСА вызывал усиление интенсивности изображения опухоли в целом, наиболее интенсивно в периферических отделах и в меньшей степени — в центральных непер-фузируемых отделах. ИУ превышали 1,29 для периферических отделов опухолей во всех случаях (в среднем ИУ=1,62±0,12), при лишь ИУ=1,23±0,07 в центральных участках. Нормальные мышцы практически не накапливали Мп-ДМСА при ИУ=1,07±0,03. Константа скорости диффузии из крови в ткань ккровь—ткань была <0,12 мл / мин/100 г ткани для неопухолевых структур и > 0,24 мл/ мин/ 100 г ткани в васкуляризированныхотделах опухоли, с медленнойобратной диффузией, и кткань—кровь < 0,04 мл / мин/100 г ткани.
Заключение. Мп-ДМСА обеспечивает достоверное усиление фиброзно-слизистых опухолей в Т1-взв. спин-эхо режиме МР-томографии, не проявляет определимых токсических и физиологических эффектов. Комплекс Мп-ДМСА обоснованно предполагать в качестве основы для дальнейшей разработки парамагнитного контрастного препарата для визуализации злокачественных новообразований.
Альтернативная система кровоснабжения опухоли
А. А. Вартанян'
Место работы: 'ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» МЗ РФ e-mail: [email protected]
Введение. По данным ряда клинических испытаний анти-ангиогенные препараты достоверно увеличивают общую выживаемость онкологических больных. В то же время накапливаются данные, свидетельствующие о том, что не все опухоли отвечают на анти-VEGF терапию. Одной из причин выживаемости опухолевых клеток в условиях блокирования ангиогенеза может быть гетерогенность кровеносных тосудов. Формирование васкулярных каналов опухолевыми клетками (ОК) в отсутствие эндотелиальных клеток (ЭК) и фибробластов получило название васкулогенная мимикрия (ВМ). Целью данной работы явилось исследование молекулярных детерминант опухолевой клетки, позволяющей ей формировать васкулярные каналы.
Методы. В работе были использованы 2D- и 3D- культивирование клеток, формирование сосудисто-подобных структур (СПС) на Матригеле, ИГХ, ИЦХ, нокдаун гена, электрофорез и Вестерн блот, проточная цитофлуориметрия. Результаты. Впервые в опухолевом материале больных свет-локлеточным раком почки обнаружены васкулярные каналы, выстланные ОК.
Двойное окрашивание анти-CD31 антителами и PAS-реа-гентом наглядно продемонстрировало сайты сообщения сосудов, выстланных ЭК и ОК. Обнаружена высокая статистическая корреляция между появлением в опухоли ВМ и безрецидивным выживанием больных (р=0,05, %2=7,813). Использование нейтрализирующих антител к VEGFR1, нокдаун VEGFR1, далее использование ингибиторов к предполагаемому нами адапторному белку — PKC — нокдаун двух его изоформ, подтверждение полученных результатов в экспериментальной модели опухоли позволило идентифицировать ранее неописанный в литературе сигнальный путь VEGFA/VEGFR1/РКСa, участвующий в кровоснабжении опухоли. В условиях анти-Notch терапии активируется альтернативное, независимое от эндотелия кровоснабжение опухоли — ВМ. При этом в опухоли значительно увеличивается экспрессия маркеров метастазирования MMP-2 и VEGFR1, что свидетельствует о прогрессии опухоли в более агрессивный фенотип. Методом последовательного повышения дозы аранозы, направленного на утрату клетками программы клеточной гибели, была создана модельная клеточная линия меланомы, резистентная к аранозе.
Комбинирование ДНК-повреждающих агентов с нециток-сическими концентрациями ЛХС1269, низкомолекулярного ингибитора ВМ, восстанавливет чувствительность резистентных клеток к апоптозу. Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) при неконтактном культивировании с клетками мела-номы приобретают некоторые характеристики ЭК и формируют СПС. Инициирует процесс формирования СПС VEGFA. Обучение МСК про.
Оценка эффективности ингибитора танкиразы как потенциального противоопухолевого средства для терапии колоректального рака
Я. А. Иваненков4, С.М. Ярцева'■4, С. В. Леонов2, А.Г. Мажуга4, А. С. Ерофеев'-4, М. С. Веселов2, Е. О. Игнатьева3, Е. М. Треща-лина3, П. В. Горелкин'-4, А. Г. Шахбазян '■2, Ш. Краусс5 Место работы: 'ООО «Медицинские Нанотехнологии», г. Москва; 2Московский физико-технический институт
