CC BY
0
Для корреспонденции
Седова Ирина Борисовна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории энзимологии питания ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» Адрес: 109240, Российская Федерация, г. Москва, Устьинский проезд, д.2/14 Телефон: (495) 698-53-65 E-mail: isedova@ion.ru https://orcid.org/0000-0002-6011-4515
Седова И.Б.1, Чалый З.А.1, Иванова У.В.1, Тутельян В.А.1, 2
Альтернариатоксины в продуктах переработки томатов, реализуемых на российском рынке
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи, 109240, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация
1 Federal Research Centre for Nutrition, Biotechnology and Food Safety, 109240, Moscow, Russian Federation
2 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University), 119991, Moscow, Russian Federation
Alternaria toxins in tomato products marketed in the Russian Federation
Sedova I.B.1, Chalyy Z.A.1, Ivanova U.V.1, Tutelyan V.A.1' 2
Помидоры и продукты их переработки широко производятся и потребляются во всем мире. Известно, что Alternaria spp. являются основной причиной альтер-нариоза (сухая пятнистость) на свежих томатах, как в поле, так и после сбора урожая. Токсины, продуцируемые этими грибами, - широко распространенные загрязнители томатов и продуктов из них.
Цель исследования - изучение загрязненности альтернариатоксинами продуктов переработки томатов, реализуемых на отечественном рынке, а также оценка нагрузки ими на человека за счет потребления томатных соков. Материал и методы. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС)
Финансирование. Исследование выполнено за счет средств субсидии Минобрнауки России на выполнение государственного задания (№ FGMF-2023-0006).
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие конфликта интересов.
Вклад авторов. Дизайн исследования - Тутельян В.А.; сбор и обработка материала - Чалый ЗА., Седова И.Б., Иванова У.В.; статистическая обработка данных - Чалый З.А., Седова И.Б.; написание текста - Седова И.Б.; редактирование, утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех частей статьи - все авторы.
Для цитирования: Седова И.Б., Чалый ЗА., Иванова У.В., Тутельян В.А. Альтернариатоксины в продуктах переработки томатов, реализуемых на российском рынке // Вопросы питания. 2024. Т. 93, № 1. С. 103-111. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2024-93-1-103-111 Статья поступила в редакцию 24.11.2023. Принята в печать 19.01.2024.
Funding. The research was carried out at the expense of subsidies from the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (a state task № FGMF-2023-0006).
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Contribution. Research design - Tutelyan V.A.; collection and processing of material - Chalyy Z.A., Sedova I B., Ivanova U.V.; statistical data processing - Chalyy Z.A., Sedova I.B.; manuscript writing - Sedova I.B.; editing, adoption of the final article, responsibility for the integrity of all parts of the article - all authors.
For citation: Sedova IB., Chalyy Z.A., Ivanova U.V., Tutelyan V.A. Alternaria toxins in tomato products marketed in the Russian Federation. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2024; 93 (1): 103-11. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2024-93-1-103-111 (in Russian) Received 24.11.2023. Accepted 19.01.2024.
в 64 образцах продуктов переработки томатов (паста, кетчуп, сок) определяли содержание альтернариатоксинов (альтернариола, его метилового эфира, аль-тенуена, тентоксина, тенуазоновой кислоты).
Результаты. Приоритетными альтернариатоксинами для томатной пасты, кетчупа и сока оказались тенуазоновая кислота (61% из 64 проб, в количестве от 20,0 до 1065,5 мкг/кг), альтенуен (52%, 8,9-200,1 мкг/кг) и альтернариол (27%, 12,2-561,6 мкг/кг). Образцы томатной пасты оказались наиболее загрязненными альтернариатоксинами, томатного сока - наименее загрязненными. Одновременно несколько токсинов были найдены в 91% образцов томатной пасты, 35% кетчупов, 23% томатных соков.
Заключение. Впервые в России получены данные, свидетельствующие о загрязнении альтернариатоксинами томатной пасты, кетчупа и томатного сока, реализуемых на российском рынке. Установлена высокая частота их загрязнения тенуазоновой кислотой, альтенуеном и в меньшей степени альтернариолом, что свидетельствует о потенциальном риске здоровью человека при их поступлении в организм с продуктами переработки томатов и необходимости гигиенической оценки загрязненности вышеперечисленных продуктов тенуазоновой кислотой, альтенуеном и альтернариолом. При расчете потенциальной нагрузки альтернариатоксинами для различных возрастных групп населения показана возможность поступления высоких уровней альтернариола (до 56,77 нг/кг массы тела в сутки) при ежедневном потреблении томатного сока для взрослых и детей в возрасте до 3 лет, а также тенуазоновой кислоты при потреблении томатного сока, загрязненного на уровне 95-го персентиля, при питании в организованных коллективах для детей-сирот и оставшихся без попечения родителей. Ключевые слова: альтернариатоксины; тенуазоновая кислота; альтенуен;
альтернариол; продукты переработки томатов; загрязнение; ВЭЖХ-МС/МС; оценка риска
Tomatoes and tomato products are widely produced and consumed throughout the world. Alternaria spp. are the main cause of alternariosis (black mold disease) on fresh tomatoes, both in the field and after harvesting. Alternaria toxins are widespread contaminants of tomato products.
The aim of the present study was to evaluate the contamination of tomato processing products from the domestic market with Alternaria toxins, as well as to assess their intake by humans through the consumption of tomato juices.
Material and methods. The content of Alternaria toxins (alternatiol, alternariol monomethyl ether, altenuene, tentoxin, tenuazonic acid) was determined in 64 samples of tomato products (paste, ketchup, juice) by high-performance liquid chromatography coupled to tandem mass-spectrometric detection (HPLC-MS/MS).
Results. The priority Alternaria toxins for tomato paste, ketchup and juice were tenuazonic acid (61% of 64 samples, in amounts from 20.0 to 1065.5цg/kg), altenuene (52%, 8.9-200.1 цg/kg)) and alternariol (27%, 12.2-561.6 цg/kg). Samples of tomato paste turned out to be the most contaminated with Alternaria toxins while tomato juice samples were the least contaminated. At the same time, several toxins were found in 91% of tomato paste samples, 35% of ketchups, and 23% of tomato juices.
Conclusion. To the best of our knowledge, the present study is the first survey devoted to Alternaria toxins contamination of tomato paste, ketchup and tomato juice sold on the Russian market. The high frequency of their contamination with tenuazonic acid, altenuene and, to a lesser extent, alternariol has been established, which indicates a potential risk to human health when tomato processing products are consumed. This indicates the need for a hygienic assessment of contamination the above products with tenuazonic acid, altenuene and alternariol. When calculating the potential intake of Alternaria toxins for different age population groups, it was shown that high levels of alternariol (up to 56.77 ng/kg body weight per day) could be obtained under daily consumption of tomato juice by adults and children under three years of age, as well as tenuazonic acid when consuming tomato juice contaminated at the 95th percentile level as part of the diet in organized groups for orphans and children without parental care. Keywords: Alternaria toxins; tenuazonic acid; altenuene; alternariol; tomato products; contamination; HPLC-MS/MS; risk assessment
Микотоксины - токсичные метаболиты плесневых грибов - наиболее опасные природные загрязнители продовольственного сырья. Контроль загрязнения ими сельскохозяйственной продукции является условием предупреждения недопустимого риска, связанного с вредным воздействием на человека и будущие
поколения. Наиболее распространенными микотокси-нами являются токсины грибов рода Fusarium, Alternaria, Aspergillus и Pénicillium.
Помидоры и продукты их переработки широко производятся и потребляются во всем мире. В 2020 г. производство томатов занимало 1-е место среди овощных
культур в мире [1]. По данным Минсельхоза России, урожай овощей в круглогодичных теплицах в 2022 г. значительно увеличился [2]. Около 70% продукции томатов предназначено для переработки на пюре, мякоть, соусы, соки и кетчупы.
Кетчуп является вторым по популярности соусом в России после майонеза. В 2022 г. российскими предприятиями было выпущено кетчупа и томатных соусов на 12,1% больше по сравнению с 2021 г. Потребление кетчупа занимает почти 13% от объема всех соусов и специй, продаваемых в России [3].
Известно, что микроскопические грибы Alternaría spp. являются основной причиной альтернариоза (сухая пятнистость) на свежих томатах, как в поле, так и после сбора урожая [4-6]. По нашим данным, в свежих томатах обнаруживали тентоксин (TEN, частота обнаружения -27%), альтернариол (АОН, 9%) и тенуазоновую кислоту (ТеА, 9%); в плесневелых томатах частота загрязнения и уровни альтернариатоксинов значительно выше [7].
Установлена загрязненность микотоксинами Alternaría (альтернариатоксины, АТ) различных томатных продуктов [8-11]. По данным Европейского агентства по безопасности пищи (EFSA), АОН и ТеА наиболее распространены среди АТ. Их обнаруживали чаще в зерновых, томатах и продуктах их переработки [12, 13].
В тесте Эймса и на культурах клеток млекопитающих (в экспериментах in vitro) было установлено, что AOH и метиловый эфир альтернариола (AME) обладают мутагенными и генотоксическими свойствами. Получены единичные данные о степени токсичности АТ в экспериментах in vivo. Так, LD50 при пероральном введении мышам и крысам натриевой соли ТеА составила 81-186 мг/кг массы тела в сутки. Таким образом, данное вещество относится к веществам 3-го класса опасности [14, 15]. Употребление загрязненной АТ пищи рассматривают как возможную причину высокой заболеваемости раком пищевода в провинции Хэнань (Китай) [16, 17]. Высокую степень загрязненности пищевых продуктов ТеА связывают с развитием тяжелого заболевания Оньялаи (onyalai; purpura thrombopenica tropica acuta; острая тропическая тромбоцитопеническая пурпура), встречающегося в странах Африки к югу от пустыни Сахара [18].
В Российской Федерации ранее не изучали загрязненность токсинами грибов рода Alternaria продуктов переработки томатов. Учитывая, что, по данным EFSA, томаты и продукты из них являются одними из основных источников воздействия АТ с пищей на человека, целью данной работы было изучение частоты и уровня загрязнения ими томатной пасты, кетчупа и томатных соков, реализуемых на территории России, и провизорная оценка потенциального риска здоровью для населения России.
Материал и методы
Образцы продуктов переработки томатов покупали на предприятиях розничной торговли Москвы
и Московской области случайным образом. Исследовано 64 пробы продукции: 22 образца томатной пасты, 20 образцов кетчупа и 22 образца томатного сока отечественного и импортного производства.
Подготовку образцов для скрининга АТ в продуктах из томатов проводили в соответствии с разработанной методикой. В пробирку типа фалькон объемом 50 см3 отбирали измельченную пробу массой 5 г, добавляли 5 см3 дистиллированной воды (только для кетчупа и томатной пасты) и перемешивали, добавляли 10 см3 ацетонитрила, подкисленного 1% муравьиной кислотой, после 1 мин перемешивания на вортексе встряхивали на шейкере в течение 10 мин. Добавляли 1 г NaCl и 4 г безводного MgSO4, интенсивно перемешивая вручную или на вортексе. Экстракт центрифугировали в течение 5 мин при 7000 об/мин на центрифуге Rotina 38 (Hettich, Германия), затем отбирали 1 см3 супернатанта и упаривали досуха на роторном испарителе (Rotovac, Германия). После этого перерастворяли в 500 мм3 смеси ацетонитрил : вода (20:80 об.). Полученный раствор переносили в пробирку типа эппендорф объемом 1,5 см3 и центрифугировали в течение 10 мин при 15 000 об/мин на центрифуге (Thermo Scientific, США). В хроматографическую виалу вносили 100 мм3 супернатанта, после добавления 100 мм3 метанола проводили идентификацию и количественное определение АТ методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии высокого давления с тан-демным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС) в режиме положительной электрораспылительной ионизации при атмосферном давлении и динамического мониторинга выбранных переходов.
Анализ АТ проводили с использованием ВЭЖХ-системы (Agilent Technologies 1100), состоящей из градиентного насоса, термостата колонок, автосамплера и соединенной с тройным квадрупольным масс-спектро-метрическим детектором (Triple Quad 6400). Разделение аналитов осуществляли на колонке, заполненной силикагелем с привитыми группами октадецилсилана (Zorbax SB-C18, 150x4,6 мм, 3,5 мкм, размер пор - 80Ä, Agilent), в режиме градиентного элюирования смесью вода : ацетонитрил, модифицированной 0,1% муравьиной кислотой.
Использованы стандарты: AOH (99,3%), AME (99,77%), альтенуен (ALT) (98%), тентоксин (TEN) (99,84%) (Fermentek, Израиль). Исходные растворы этих токсинов готовили в метаноле в концентрации 200 мкгЛзм3. Стандарт ТеА с концентрацией 100,6 мкг^м3 был получен из компании Romer (Romer Labs, Biopure, Австрия). Все исходные растворы хранили при -18 °C.
Матричный эффект для всех токсинов, кроме ТеА, был незначительным и не превышал 18%, для ТеА составил 30%. Степени извлечения токсинов варьировали от 86% (ТеА) до 110% (АМЕ). Пределы количественного определения метода для TEN, AME, AOH, ALT и TeA составили 1, 4, 6, 8 и 20 мкг/кг соответственно.
Оценку риска здоровью, обусловленного загрязненностью АТ томатного сока, проводили на основании
Таблица 1. Частота обнаружения и уровни загрязнения продуктов переработки томатов альтернариатоксинами (64 образца) Table 1. Occurrence of Alternaría toxins in tomato products (64 samples)
Токсин Toxin Количество контаминированных проб, абс. (%) Number of positive samples, abs. (%) Диапазоны загрязнения, мкг/кг (мкг/дм3) Contamination range, rn/kg (wg/i) Среднее содержание в загрязненных пробах, мкг/кг (мкг/дм3) Mean content In positive samples, yg/kg (yg/l) Содержание в пробах всего ряда, мкг/кг (мкг/дм3) MT content In total samples, yg/kg (yg/l)
M 95%
Томатная паста / Tomato pasta (n=22)
ALT 22 (100) 14,0-561,6 105,4 105,4 153,5
TeA 20 (91) 25,2-1065,5 331,9 301,7 1053,2
АОН 7 (32) 14,0-200,1 129,0 41,1 121,9
AME 5 (23) 5,9-62,0 24,2 5,5 32,0
TEN 2 (9) 1,0; 2,72 1,86 0,2 2,6
Кетчуп I Ketchup (n=20)
ALT 9 (45) 8,9-49,1 21,7 9,8 42,0
TeA 7 (35) 20,0-341,5 102,6 35,9 74,3
АОН 5 (25) 15,3-37,6 21,3 5,3 16,6
TEN 1 (5) 2,0 2,0 0,1 0
Томатный сок / Tomato juice (n=22)
TeA 12 (55) 21,1-203,5 81,3 44,4 104,2
AOH 5 (23) 12,2-22,6 16,6 3,8 14,6
ALT 2 (9) 10,1; 11,7 10,9 1,0 9,6
Продукты переработки томатов, всего I Tomato products, total (n=64)
TeA 39 (61) 20,0-1065,5 213,6 130,2 721,0
ALT 33 (52) 8,9-200,1 76,8 39,6 145,3
АОН 17 (27) 12,2-561,6 64,3 17,1 39,6
AME 5 (8) 5,9-62,0 24,2 1,9 7,1
TEN 3 (5) 1,0-2,7 1,9 0,1 0
сравнения величины суточного поступления АТ с величиной суточного порога их токсического воздействия (ТТС) на человека. Расчетное суточное поступление токсинов с томатным соком рассчитывали по формуле:
M х Р
^расч. = ,
w
где Мрасч. - расчетное суточное поступление АТ, нг/кг массы тела; M - среднее содержание АТ в томатном соке, мкг/дм3; Р - потребление томатного сока, см3/сут; w - масса тела, кг.
Результаты и обсуждение
Изучение частоты и уровня контаминации продуктов переработки томатов АТ позволило установить, что приоритетными загрязнителями для этого вида продукции являются ТеА (61% от общего количества образцов, уровень загрязнения до 1065,5 мкг/кг), ALT (52%, до 200,1 мкг/кг) и АОН (27%, до 561,6 мкг/кг) (табл. 1). TEN в анализируемых образцах обнаруживали крайне редко, на низких уровнях загрязнения (см. табл. 1). Среди изученных образцов продуктов переработки томатов наиболее загрязненными токсинами по частоте
обнаружения и уровням загрязнения АТ оказались образцы томатной пасты, наименее - томатные соки, кетчупы заняли промежуточное положение.
Все изученные образцы томатной пасты (n=22) содержали ALT, среднее содержание токсина составило около 100 мкг/кг (см. табл. 1). J. Walravens и соавт. также сообщали об обнаружении ALT в 55% исследованных образцов томатной пасты, однако уровни загрязнения были меньше, до 62 мкг/кг [10]. ТеА была найдена в 91% случаев, ее среднее содержание в загрязненных пробах составило около 300 мкг/кг. Имеются сведения о выявлении TeA в образцах томатной пасты (концентрате): частота загрязнения токсином в них варьировала от 60 до 100%, а максимальные уровни загрязнения -от 29 до 5955 мкг/кг [6, 10, 15, 19, 20].
АОН и АМЕ обнаруживали реже - в 32 и 23% случаев соответственно. Уровни загрязнения АОН также находились в более низком диапазоне (см. табл. 1). Среднее содержание АОН и АМЕ в загрязненных пробах составило соответственно 129,0 и 24,2 мкг/кг. Об обнаружении АОН в томатных концентратах также сообщалось в ряде публикаций: уровни загрязнения варьировали от 2,9 до 105,3 мкг/кг [10, 15, 21]. В исследованиях C. Mujahid и соавт. и J. Walwarens и соавт. в томатном концентрате содержание АМЕ было значительно ниже (до 7,9 мкг/кг) [10, 15], чем в нашем исследовании. Что касается TEN, то этот АТ был найден только в 2 образцах
в количестве 1,0 и 2,7 мкг/кг. По данным J. Walravens и соавт., этот токсин был выявлен на низких уровнях загрязнения - до 8,9 мкг/кг [10].
Изучение загрязненности АТ образцов кетчупа (см. табл. 1) показало, что наиболее распространенным токсином в этих образцах оказался ALT. Он был выявлен в 9 из 20 исследованных образцов в количестве до 50 мкг/кг, в среднем 21,7 мкг/кг. Реже, в 35% образцов обнаруживали ТеА на уровне до 350 мкг/кг (в среднем 102,6 мкг/кг). Ранее ТеА часто обнаруживали в образцах кетчупа: частота загрязнения варьировала от 50 до 100%, уровни загрязнения - от 0,3 до 633,4 мкг/кг [22, 23]. По результатам наших исследований, токсин АОН был найден в каждом 4-м образце на уровне от 15 до 38 мкг/кг. При исследовании кетчупа в Китае и Южной Корее уровни загрязнения АОН варьировали в диапазоне от 2,7 до 14,6 и от 1,4 до 1,8 мкг/кг соответственно [22, 23]. О значительно более высоких уровнях загрязнения АОН сообщали K. Zhao и соавт. - от 10,2 до 1787 мкг/кг [24]. Только один из изученных в данном исследовании образцов был загрязнен TEN на уровне 2 мкг/кг. Следовые количества АМЕ были выявлены в 2 образцах.
Образцы томатных соков оказались наименее загрязненными АТ по сравнению с пробами кетчупа и пасты, что закономерно обусловлено меньшим содержанием в них сухих веществ. В этом виде продукции были найдены 3 токсина: ТеА, AOH и ALT. Наиболее распространенной из них в томатном соке оказалась ТеА, выявленная в 55% образцов в количестве от 21,1 до 203,5 мкг/кг. Реже, в каждом 4-м образце обнаруживали АОН на уровне от 13,5 до 22,6 мкг/кг. 2 из 22 образцов содержали ALT на уровне около 10 мкг/кг. Частота загрязнения ТеА образцов томатного сока в ряде исследований варьировала от 40 до 100%, а уровни загрязнения - от 0,2 до 340 мкг/кг
%
Томатная паста Кетчуп Томатный сок
Tomato paste Ketchup Tomato juice
МТ не обнаружены / MTs were not detected
■ Обнаружен 1 МТ / One MT was detected
■ Обнаружено 2 и более МТ / More than 2 MTs were detected
Частота комбинированного загрязнения альтернариатоксинами некоторых продуктов переработки томатов
МТ - микотоксины.
The frequency of combined contamination of some types of tomato products with Alternaria toxins
МТ - mycotoxins.
[10, 22-25]. В отличие от полученных нами данных, K. Zhao и соавт. обнаружили АОН во всех 9 исследованных образцах сока на более высоких уровнях загрязнения - до 278 мкг/кг [24]. При этом, по данным других авторов [10, 22, 23], уровни загрязнения АОН в соках не превышали 27 мкг/кг.
Изучение совместной контаминации токсинами продуктов переработки томатов позволило установить, что 91% из 22 исследованных образцов пасты был загряз-
Таблица 2. Одновременное обнаружение нескольких альтернариатоксинов (АТ) в образцах продуктов переработки томатов Table 2. Simultaneous detection of some Alternaria toxins (АТ) in tomato product samples
Продукт Product Пконт/n ncont/n Выявляемые одновременно АТ Simultaneously detected AT Уровни загрязнения, мкг/кг (мкг/дм3) Contamination levels, yg/kg (yg/l)
Паста томатная Tomato paste 12/22 ALT+TeA ALT: 55,3-153,6; TeA: 25,2-1054,5
4/22 ALT+TeA+AOH+AME ALT: 57,1-200,1; TeA: 169,8-1065,5; AOH: 31,0-561,6; AME: 7,3-62,0
2/22 ALT+TeA+AOH ALT: 57,2; 131,0; TeA: 124,5; 421,5; AOH: 14,0; 22,0
1/22 ALT+TeA+AOH+TEN ALT: 101,3; TeA: 1028,8; AOH: 122,4; TEN: 1,0
1/22 ALT+TeA+TEN+AME ALT: 90,1; TeA: 704,8; TEN: 2,7; AME: 5,9
Кетчуп Ketchup 2/20 AOH+TeA AOH: 15,8; 37,6; TeA: 160,4; 341,5
2/20 AOH+ALT AOH: 16,6; 21,3; ALT: 42,0; 49,1
1/20 TeA+ALT TeA: 74,3; ALT: 8,9
1/20 AOH+TeA+ALT AOH: 15,3; TeA: 73,6; ALT: 35,1
1/20 TeA+TEN TeA: 22,5; TEN: 2,0
Томатный сок Tomato juice 4/22 AOH+TeA AOH: 12,2-22,6; TeA: 52,0-136,1
1/22 AOH+TeA+ALT AOH: 13,5; TeA: 60,2; ALT: 10,1
П р и м е ч а н и е. * - n - количество исследованных образцов; пконт - количество контаминированных образцов. N o t e. * - п - total number of studied samples; ncont - number of contaminated samples.
Таблица 3. Расчетное среднее поступление некоторых альтернариатоксинов (АТ) c томатным соком Table 3. Estimated Alternaria toxins (АТ) daily intake per person with tomato juices
Микотоксин Mycotoxin Расчетное суточное поступление АТ для населения России в целом, нг/кг массы тела в сутки (% от ТТС) (2,45 см3/сут) Estimated AT daily Intake for Russian population on average (2,45 ml/day), ng/kg b.w. per day (% of TTC) Расчетное суточное поступление АТ для населения, регулярно потребляющего томатный сок, нг/кг массы тела в сутки (% от ТТС) (233,59 см3/сут) Estimated AT daily intake for consumers (233,59 ml/day), ng/kg b.w. per day (% of TTC)
среднее / mean 95-й персентиль / 95% среднее/mean 95-й персентиль / 95%
TeA 1,55 (G,1) 3,65 (G,2) 148,16 (9,9) 347,72 (23,2)
AOH G,13 (5,3) G,51 (2G,4) 12,68 (504,2) 48,72 (1948,8)
ALT G,G4 (G,GG3) G,34 (G,G2) 3,34 (G,2) 32,G4 (2,1)
нен 2 и более МТ (см. рисунок, табл. 2): в 12 образцах были найдены одновременно токсины ТеА и ALT; в 2 образцах - вместе с AOH. 6 проб пасты содержали по 4 АТ, при этом 4 пробы были загрязнены ALT+TeA+AOH+AME, в единичных случаях выявляли ALT+TeA+TEN в сочетании с AOH или AME.
В 6 из 20 образцов кетчупа обнаруживали по 2 АТ и 1 образец одновременно содержал 3 токсина (AOH+ TeA+ALT).
Образцы томатного сока в 23% случаев были загрязнены несколькими АТ: в 4 из 22 проб обнаружили ТеА с АОН, в 1 случае наряду с этими АТ обнаружили и ALT.
Следует отметить, что сочетанное поступление токсинов Alternaria может оказывать более выраженное негативное влияние на здоровье по сравнению с токсическими эффектами отдельных АТ [26].
На основании полученных данных был проведен расчет нагрузки АТ при потреблении томатных соков. Исходя из сведений об уровнях их контаминации и оценки их вклада в среднее хроническое поступление с пищей (см. табл. 1), в качестве приоритетных контаминантов были выбраны ТеА, АОН и ALT.
Сведения о потреблении томатного сока были взяты из базы данных Росстата по выборочному наблюдению рационов питания населения России за 2008 г. Среднее потребление томатного сока составило 2,45 см3/сут; для потребителей этого напитка - варьировало от 7 до 1000 см3/сут, в среднем - 233,59 см3/сут. Средняя масса тела человека была принята за 70 кг.
На основании результатов скрининга загрязнения АТ томатных соков по данным настоящего исследования использовали величины среднего содержания токсинов и 95-го персентиля. Расчет потенциальной нагрузки АТ на человека при потреблении томатного сока был произведен относительно ТТС на человека: для ТеА и TEN -
1500 нг/кг массы тела; АОН и АМЕ - 2,5 нг/кг массы тела [11]. Для ALT сочли возможность использовать значение 1500 нг/кг массы тела в сутки, поскольку в бактериальном тесте Эймса in vitro этот токсин не проявлял мутагенного действия и данных об его генотоксичности у млекопитающих нет [15].
Полученные данные свидетельствуют, что расчетная нагрузка АТ при ежедневном потреблении томатного сока для населения в целом ниже ТТС АТ. При регулярном потреблении томатного сока, загрязненного АОН, как на среднем уровне загрязнения, так и на уровне 95-го персентиля расчетная нагрузка АОН может более чем в 5 раз превысить величину ТТС, и ее следует оценивать как представляющую серьезный риск для здоровья населения (табл. 3).
При расчете поступления АТ для детей принимали массу их тела в соответствии со стандартами ВОЗ1. Согласно Изменению к разделу 1 главы II Единых санитарно-эпидемиологических и гигиенических требований к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю)2, для детей старше 6 мес жизни разрешается употреблять томатный сок в виде монокомпонентных или смешанных соков. В соответствии с СанПиН 2.3/2.4.3590-20 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения» суточная порция фруктовых соков для детей в возрасте 6 мес составляет 50-60 см3, 7 мес - 70 см3, 8 мес - 80 см3, 9-12 мес -90-100 см3. В среднесуточных наборах для детей, оставшихся без попечения родителей и детей-сирот, в возрасте от 12 до 36 мес порция соков составляет 150 см3, от 3 лет и старше - 200 см3. В среднесуточных наборах для организации питания детей, обучающихся в образовательных учреждениях кадетского типа, заложено потребление 200 см3 для детей 5-11-х классов.
1 WHO child growth standards: length/height-for-age, weight-for-age, weight-for-length, weight-for-height and body mass index-forage: methods and development. World Health Organization, 2006. [Электронный ресурс]. URL: https://www.who.int/publications/i/ item/924154693X
2 Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к продукции (товарам), подлежащей санитарно-эпидемио-
логическому надзору (контролю). Москва : Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. 707 с. (с изм. на 22.02.2022). [Электронный ресурс]. URL: https://docs.cntd.ru/document/902249109
Таблица 4. Расчетная суточная нагрузка альтернариатоксинами (АТ) на детей при потреблении томатных соков (1 порция в сутки), нг/кг массы тела в сутки (% от ТТС)
Table 4. Estimated mean intake of Alternaria toxins (АТ) with tomato juice (1 portion per day) for children, ng/kg b.w. per day (% of TTC)
Возраст детей Children age Нагрузка АТ Intake of АТ АТ (содержание среднее и 95% перцентиль, мкг/дм3) / AT (mean content and 95%, yg/l)
ТеА (44,4 и/and 104,2) АОН (3,8 и/and 14,6) ALT (1,0 и/and 9,6)
С учетом примерной схемы питания детей 1-го года жизни / According to the approximate nutritional plan for children in the first year of life
6-12 мес 6-12 months средняя / mean 278,54-442,23 (18,6-29,5) 23,84-36,85 (953,6-1596,6) 6,27-10,2 (0,4-0,7)
95% 653,69-1039,24 (43,6-69,3) 91,5-141,5 (3660-5660) 60,2-97,9 (4,0-6,5)
Дети-сироты и дети, оставшиеся без попечения родителей / Orphaned children and legally free children
1-3 года 1-3 years old средняя mean 584,21-663,35 (39,0-44,2) 48,31-56,77 (1932,2-2270,9) 12,7-14,9 (0,9-1,0)
95% 1372,9-1558,9 (91,5-103,9) 185,51-218,00 (7420,4-8719,9) 121,92-143,04 (8,1-9,5)
Расчет потенциальной нагрузки наиболее распространенными токсинами на детей при потреблении томатного сока (табл. 4) был произведен с применением величин их среднего содержания и 95-го персентиля (см. табл. 1).
Данные расчетного поступления АОН, ТеА и ALT с томатными соками, представленными на рынке России, показали возможность превышения величины токсического воздействия АОН для детей, ежедневно потребляющих этот продукт (от 954 до 5660% от ТТС) или реже - с частотой потребления 1 раз в неделю (от 136,2 до 808,6% от ТТС). При этом расчетные данные показали, что ежедневное потребление томатного сока, загрязненного ТеА на уровне 95-го персентиля, также может представлять риск для здоровья при организованном питании детей-сирот и оставшихся без попечения родителей (см. табл. 4).
Выводы
1. Установлено, что среди микотоксинов, продуцируемых грибами рода Alternaria, приоритетными загрязнителями продуктов переработки томатов являются ТеА, АОН и ALT.
2. Показана возможность поступления высоких концентраций АОН при потреблении томатного сока с пищей для детей (от 953,6 до 8719,9% от ТТС) и для взрослого населения, ежедневно потребляющих этот вид продукции переработки томатов (504,2-1948,8% от ТТС).
3. Для решения вопроса о регламентировании содержания АТ в продуктах переработки томатов (паста, кетчуп, сок) целесообразно продолжить исследования по накоплению данных о загрязненности томатных соков, предназначенных для питания детей, АОН; томатной пасты и кетчупа - АОН и ТеА.
Сведения об авторах
Седова Ирина Борисовна (Irina B. Sedova) - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории энзимологии питания ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва, Российская Федерация) E-mail: isedova@ion.ru https://orcid.org/0000-0002-6011-4515
Чалый Захар Андреевич (Zakhar A. Chalyy) - младший научный сотрудник лаборатории энзимологии питания ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва, Российская Федерация) E-mail: brew@ion.ru https://orcid.org/0000-0002-9371-8163
Иванова Ульяна Валерьевна (Ulyana V. Ivanova) - лаборант-исследователь лаборатории энзимологии питания ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» (Москва, Российская Федерация) E-mail: ds557@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-8962-9133
Тутельян Виктор Александрович (Victor A. Tutelyan) - академик РАН, доктор медицинских наук, профессор, научный
руководитель ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», заведующий кафедрой гигиены питания и токсикологии ИПО
ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (Москва, Российская
Федерация)
E-mail: tutelyan@ion.ru
https://orcid.org/0000-0002-4164-8992
Литература
1. Тутова Т.Н., Несмелова Л.А. Анализ мирового производства 2.
овощных культур // Вестник Ижевской государственной 3.
сельскохозяйственной академии. 2022. Т. 4, № 72. С. 41—49. БОТ: https://doi.org/10.48012/1817-5457_2022_4_41-49
URL: https://www.retail.ru/rbc/pressreleases/situatsiya-na-rynke-tomatov Мехедькин А.А. Анализ мирового рынка специй // Управление рисками в АПК. 2019. № 5. С. 50-63. URL: http://www.agrorisk. ru/20190505
4. Andersen B., Frisvad J.C. Natural occurrence of fungi and fungal metabolites in moldy tomatoes // J. Agric. Food Chem. 2004. Vol. 52. P. 7507-7513. DOI: https://doi.org/10.1021/jf048727k
5. da Cruz Cabral L., Rodriguez A., Delgado J., Patriarca A. Understanding the effect of postharvest tomato temperatures on two toxigenic Alternaria spp. strains: growth, mycotoxins and cell-wall integrity-related gene expression // J. Sci. Food Agric. 2019. Vol. 99. P. 6689— 6695. DOI: https://doi.org/10.1002/jsfa.9950
6. Bertuzzi T., Rastelli S., Pietri A., Giorni P. Alternaria toxins in tomato products in Northern Italy in the period 2017—2019 // Food Addit. Contam. Part B Surveill. 2021. Vol. 14, N 3. Р. 170—176. DOI: https:// doi. org/ 10.1080/19393210.2021.1895325
7. Чалый З.А., Соколов И.Е. Анализ загрязненности микотокси-нами томатов // Материалы V Школы молодых ученых «Основы здорового питания и пути профилактики алиментарно-зависимых заболеваний». Москва, 2022. С. 106 — 107. ISBN 978-5990949-8-9.
8. Terminiello L., Patriarca A., Pose G., Fernandez Pinto V. Occurrence of alternariol, alternariol monomethyl ether and tenuazonic acid in Argentinean tomato puree // Mycotoxin Res. 2006. Vol. 22, N 4. P. 236— 240. DOI: https://doi.org/10.1007/BF02946748
9. Lopez P., Venema D., Rij k T., de Kok A., Scholten J.M., Mol H.G.J., de Nijs M. Occurrence of Alternaria toxins in food products in the Netherlands // Food Control. 2016. Vol. 60. P. 196—204. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.foodcont.2015.07.032
10. Walravens J., Mikula H., Rychlik M., Asam S., Devos T., Njumbe Ediage E. et al. Validated UPLC-MS/MS methods to quantitate free and conjugated Alternaria toxins in commercially available tomato products and fruit and vegetable juices in Belgium // J. Agric. Food Chem. 2016. Vol. 64, N 24. P. 5101—5109. DOI: https://doi.org/1021/acs. jafc.6b01029
11. Puntscher H., Kütt M.L., Skrinjar P., Mikula H., Podlech J., Fröhlich J. et al. Tracking emerging mycotoxins in food: development of an LC-MS/MS method for free and modified Alternaria toxins // Anal. Bioanal. Chem. 2018. Vol. 410. P. 4481—4494. DOI: https://doi. org/10.1007/s00216-018-1105-8
12. EFSA (European Food Safety Authority); Arcella D., Eskola M., Gomez Ruiz J.A. Dietary exposure assessment to Alternaria toxins in the European population // EFSA J. 2016. Vol. 14, N 12. Article ID е04654. DOI: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2016.4654
13. Bernal R.Ä.R., Reynoso C.M., Londono G.V.A., Broggi L.E., Resnik S.L. Alternaria toxins in Argentinean wheat, bran, and flour // Food Addit. Contam. Part B Surveill. 2019. Vol. 12. P. 24—30. DOI: https:// doi.org/10.1080/19393210.2018.1509900
14. EFSA on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). Scientific Opinion on the risks for animal and public health related to the presence of Alternaria toxins in feed and food // EFSA J. 2011. Vol. 9, N 10. Article ID 2407. DOI: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2011.2407
15. Mujahid C., Savoy M-C., Basle Q., Woo P.M., Ee E.C.Y., Mottier P. et al. Levels of Alternaria toxins in selected food commodities including green coffee // Toxins. 2020. Vol. 12. Article ID 595. DOI: https://doi. org/10.3390/toxins12090595
16. Liu G.T., Qian Y.Z., Zhang P., Dong W.H., Qi Y.M., Guo H.T. Etiologic role of Alternaria alternata in human esophageal cancer // Chin. Med. J. 1992. Vol. 105, N 5. P. 394-400.
17. Chen A., Mao X., Sun Q., Wei Z., Li J., You Y. et al. Alternaria mycotoxins: an overview of toxicity, metabolism, and analysis in food // J. Agric. Food Chem. 2021. Vol. 69, N 28. P. 7817-7830. DOI: https:// doi.org/10.1021/acs.jafc.1c03007
18. de Oliveira R.C., Carnielli-Queiroz L., Correa B. Epicoccum sorghinum in food: occurrence, genetic aspects and tenuazonic acid production // Curr. Opin. Food Sci. 2018. Vol. 23. P. 44-48. DOI: https://doi. org/10.1016/j.cofs.2018.05.011
19. Asam S., Rychlik M. Recent developments in stable isotope dilution assays in mycotoxin analysis with special regard to Alternaria toxins // Anal. Bioanal. Chem. 2015. Vol. 407, N 25. P. 7563-7577. DOI: https:// doi.org/10.1007/s00216-015-8904-y
20. Lohrey L., Marschik S., Cramer B., Humpf H.-U. Large-scale synthesis of isotopically labeled 13C2-tenuazonic acid and development of a rapid HPLC-MS/MS method for the analysis of tenuazonic acid in tomato and pepper products // J. Agric. Food Chem. 2013. Vol. 61. P. 114-120. DOI: https://doi. org/10.1021/jf305138k
21. Haro M.L.M., Cabrera G., Pinto V.F., Patriarca A. Alternaria toxins in tomato products from the Argentinean market // Food Control. 2023. Vol. 147. Article ID 109607. DOI: https://doi.org/10.1016/j.food-cont.2023.109607
22. Ji X., Deng T., Xiao Y., Jin C., Lyu W., Wu Z. et al. Emerging Alternaria and Fusarium mycotoxins in tomatoes and derived tomato products from the China market: occurrence, methods of determination, and risk evaluation // Food Control. 2023. Vol. 145. Article ID 109464. DOI: https://doi. org/10.1016/j.foodcont.2022.109464
23. Woo S.Y., Lee S.Y., Jeong T.K., Park S.M., Auh J.H., Shin H.-S. et al. Natural occurrence of Alternaria toxins in agricultural products and processed foods marketed in South Korea by LC-MS/MS // Toxins (Basel). 2022. Vol. 14, N 12. Article ID 824. DOI: https://doi. org/10.3390/toxins14120824
24. Zhao K., Shao B., Yang D., Li F. Natural occurrence of four Alternaria mycotoxins in tomato- and citrus-based foods in China // J. Agric. Food Chem. 2015. Vol. 63, N 1. P. 343-348. DOI: https://doi. org/10.1021/jf5052738 PMID: 25520156.
25. Zhao K., Shao B., Yang D., Li F., Zhu J. Natural occurrence of Alternaria toxins in wheat-based products and their dietary exposure in China. PLoS One. 2015. Vol. 10. Article ID e0132019. DOI: https://doi. org/10.1371/journal.pone.0132019
26. Hickert S., Krug I., Cramer B., Humpf H.-U. Detection and quantitative analysis of the non-cytotoxic allo-tenuazonic acid in tomato products by stable isotope dilution HPLC-MS/MS // J. Agric. Food Chem. 2015. Vol. 63. P. 10 879-10 884. DOI: https://doi.org/10.1021/ acs.jafc.5b04812
27. Crudo F., Varga E., Aichinger G., Galaverna G., Marko D., Dall'Asta C. et al. Co-occurrence and combinatory effects of Alternaria mycotoxins and other xenobiotics of food origin: current scenario and future perspectives // Toxins. 2019. Vol. 11. Article ID 640. DOI: https://doi. org/10.3390/toxins11110640
References
1. Tutova T.N., Nesmelova L.A. Analysis of world production of vegetable crops. Vestnik Izhevskoy gosudarstvennoy sel'skokhozyaystvennoy akademii [Bulletin of Izhevsk State Agricultural Academy]. 2022; 4 (72): 41-9. DOI: https://doi.org/10.48012/1817-5457_2022_4_41-49 (in Russian)
2. URL: https://www.retail.ru/rbc/pressreleases/situatsiya-na-rynke-tomatov
3. Mekhed'kin A.A. World spice market analysis. Upravlenie riskami v APK [Risk Management in Agribusiness]. 2019; (5): 50-63. URL: http://www.agrorisk.ru/20190505 (in Russian)
4. Andersen B., Frisvad J.C. Natural occurrence of fungi and fungal metabolites in moldy tomatoes. J Agric Food Chem. 2004; 52: 7507-13. DOI: https://doi.org/10.1021/jf048727k
5. da Cruz Cabral L., Rodríguez A., Delgado J., Patriarca A. Understanding the effect of postharvest tomato temperatures on two toxigenic Alternaria spp. strains: growth, mycotoxins and cell-wall integrity-related gene expression. J Sci Food Agric. 2019; 99: 6689-95. DOI: https://doi.org/10.1002/jsfa.9950
6. Bertuzzi T., Rastelli S., Pietri A., Giorni P. Alternaria toxins in tomato products in Northern Italy in the period 2017-2019. Food Addit Contam Part B Surveill. 2021; 14 (3): 170-6. DOI: https://doi.org/ 10.1080/19393210.2021.1895325
7. Chaliy Z.A., Sokolov I.E. Analysis of mycotoxin's contamination of tomato. In: Materials of the V School of Young Scientists «Fundamentals of healthy eating and ways to prevent alimentary-dependent diseases». Moscow, 2022: 106-7. ISBN 978-5-990949-8-9. (in Russian)
10.
12.
13.
Terminiello L., Patriarca A., Pose G., Fernandez Pinto V. Occurrence of alternariol, alternariol monomethyl ether and tenuazonic acid in Argentinean tomato puree. Mycotoxin Res. 2006; 22 (4): 236—40. DOI: https://doi.org/10.1007/BF02946748
Lopez P., Venema D., Rijk T., de Kok A., Scholten J.M., Mol H.G.J., de Nijs M. Occurrence of Alternaria toxins in food products in the Netherlands. Food Control. 2016; 60: 196-204. DOI: https://doi.org/10.1016/j. foodcont.2015.07.032
Walravens J., Mikula H., Rychlik M., Asam S., Devos T., Njumbe Ediage E., et al. Validated UPLC-MS/MS methods to quantitate free and conjugated Alternaria toxins in commercially available tomato products and fruit and vegetable juices in Belgium. J Agric Food Chem. 2016; 64 (24): 5101-9. DOI: https://doi.org/1021/acs.jafc. 6b01029
Puntscher H., Kütt M.L., Skrinjar P., Mikula H., Podlech J., Fröhlich J., et al. Tracking emerging mycotoxins in food: development of an LC-MS/MS method for free and modified Alternaria toxins. Anal Bioanal Chem. 2018; 410: 4481-94. DOI: https://doi.org/10.1007/ s00216-018-1105-8
EFSA (European Food Safety Authority); Arcella D., Eskola M., Gomez Ruiz J.A. Dietary exposure assessment to Alternaria toxins in the European population. EFSA J. 2016; 14 (12): e04654. DOI: https:// doi.org/10.2903/j.efsa.2016.4654
Bernal R.Á.R., Reynoso C.M., Londoño G.V.A., Broggi L.E., Resnik S.L. Alternaria toxins in Argentinean wheat, bran, and flour. Food
8.
9
Addit Contam Part B Surveill. 2019; 12: 24-30. DOI: https://doi.org/ 21. 10.1080/19393210.2018.1509900
14. EFSA on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). Scientific Opinion on the risks for animal and public health related to the pres- 22. ence of Alternaria toxins in feed and food. EFSA J. 2011; 9 (10): 2407. DOI: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2011.2407
15. Mujahid C., Savoy M-C., Baslé Q., Woo P.M., Ee E.C.Y., Mottier P., et al. Levels of Alternaria toxins in selected food commodities including green coffee. Toxins. 2020; 12: 595. DOI: https://doi.org/10.3390/ 23. toxins12090595
16. Liu G.T., Qian Y.Z., Zhang P., Dong W.H., Qi Y.M., Guo H.T. Etiologic role of Alternaria alternata in human esophageal cancer. Chin Med J. 1992; 105 (5): 394-400.
17. Chen A., Mao X., Sun Q., Wei Z., Li J., You Y., et al. Alternaria myco- 24. toxins: an overview of toxicity, metabolism, and analysis in food. J Agric Food Chem. 2021; 69 (28): 7817-30. DOI: https://doi.org/10.1021/acs. jafc.1c03007
18. de Oliveira R.C., Carnielli-Queiroz L., Correa B. Epicoccum 25. sorghinum in food: occurrence, genetic aspects and tenuazonic acid production. Curr Opin Food Sci. 2018; 23: 44-8. DOI: https://doi. org/10.1016/j.cofs.2018.05.011
19. Asam S., Rychlik M. Recent developments in stable isotope dilu- 26. tion assays in mycotoxin analysis with special regard to Alternaria toxins. Anal Bioanal Chem. 2015; 407 (25): 7563-77. DOI: https://doi. org/10.1007/s00216-015-8904-y
20. Lohrey L., Marschik S., Cramer B., Humpf H.-U. Large-scale synthesis 27. of isotopically labeled 13C2-tenuazonic acid and development of a rapid HPLC-MS/MS method for the analysis of tenuazonic acid in tomato and pepper products. J Agric Food Chem. 2013; 61: 114-20. DOI: https://doi. org/10.1021/jf305138k
Haro M.L.M., Cabrera G., Pinto V.F., Patriarca A. Alternaria toxins in tomato products from the Argentinean market. Food Control. 2023; 147: 109607. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2023.109607 Ji X., Deng T., Xiao Y., Jin C., Lyu W., Wu Z., et al. Emerging Alternaria and Fusarium mycotoxins in tomatoes and derived tomato products from the China market: occurrence, methods of determination, and risk evaluation. Food Control. 2023; 145: 109464. DOI: https://doi. org/10.1016/j.foodcont.2022.109464
Woo S.Y., Lee S.Y., Jeong T.K., Park S.M., Auh J.H., Shin H.-S., et al. Natural occurrence of Alternaria toxins in agricultural products and processed foods marketed in South Korea by LC-MS/MS. Toxins (Basel). 2022; 14 (12): 824. DOI: https://doi.org/10.3390/ toxins14120824
Zhao K., Shao B., Yang D., Li F. Natural occurrence of four Alternaria mycotoxins in tomato- and citrus-based foods in China. J Agric Food Chem. 2015; 63 (1): 343-8. DOI: https://doi.org/10.1021/jf5052738 PMID: 25520156.
Zhao K., Shao B., Yang D., Li F., Zhu J. Natural occurrence of Alternaria toxins in wheat-based products and their dietary exposure in China. PLoS One. 2015; 10: e0132019. DOI: https://doi. org/10.1371/ journal.pone.0132019
Hickert S., Krug I., Cramer B., Humpf H.-U. Detection and quantitative analysis of the non-cytotoxic allo-tenuazonic acid in tomato products by stable isotope dilution HPLC-MS/MS. J Agric Food Chem. 2015; 63: 10 879-84. DOI: https://doi.org/10.1021/acs.jafc.5b04812 Crudo F., Varga E., Aichinger G., Galaverna G., Marko D., DallAsta C., et al. Co-occurrence and combinatory effects of Alternaria mycotoxins and other xenobiotics of food origin: current scenario and future perspectives. Toxins. 2019; 11: 640. DOI: https://doi.org/10.3390/ toxins11110640
