CC BY
40
иммунология № 2, 2015
R. et al. Oral vaccination of monkeys with an invasive Escherichia coli K-12 hybrid expressing Shigella flexneri 2a somatic antigen. Infection and immunity. 1984; 46 (2): 465-9.
12. Robbins J.B., Chu C.,Schneerson R. Hypothesis for vaccine development: protective immunity to enteric diseases caused by nontyphoidal salmonellae and shigellae may be conferred by serum IgG antibodies to the O-specific polysaccharide of their lipopolysaccharides. Clinical infectious diseases: an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 1992; 15 (2): 346-61.
13. DuPont H.L., Hornick R.B., Snyder M.J., Libonati J.P., Formal S.B.,Gangarosa E.J. Immunity in shigellosis. II. Protection induced by oral live vaccine or primary infection. The Journal of infectious diseases. 1972; 125 (1): 12-6.
14. Fries L.F., Montemarano A.D., Mallett C.P., Taylor D.N., Hale T.L., Lowell G.H. Safety and immunogenicity of a proteosome-Shigella flexneri 2a lipopolysaccharide vaccine administered intranasally to healthy adults. Infection and immunity. 2001; 69 (7): 4545-53.
15. Passwell J.H., Harlev E., Ashkenazi S., Chu C., Miron D., Ramon R. et al. Safety and immunogenicity of improved Shigella O-specific polysaccharide-protein conjugate vaccines in adults in Israel. Infection and immunity. 2001; 69 (3): 1351-7.
16. Passwell J.H., Ashkenzi S., Banet-Levi Y., Ramon-Saraf R., Farzam N., Lerner-Geva L. et al. Age-related efficacy of Shi-gella O-specific polysaccharide conjugates in 1-4-year-old Israeli children. Vaccine. 2010; 28 (10): 2231-5.
17. Westphal O., Luderitz, O., Bister, F. Uber die Extraktion von
Bakterien mit Phenol- Wasser Z. Naturforsch. 1952; 7 (Teil B): 148-55.
18. Sergeev V.V., Solodovnikov Yu.P., Elkina S.I., Shuster B.Yu. Effectiveness of enteric immunization live dysentery vaccine in field experiments. Acta. Microbiol. Acad. Sci. Hung. 1976; 22: 6-9. (in Russian)
19. Pharmacopoeia of the Russian Federation. «Nauchnyy tsentr Ekspertisy sredstv meditsinskogo primeneniya». 2008; XII.
20. Way S.S., Borczuk A.C.,Goldberg M.B. Adaptive immune response to Shigella flexneri 2a cydC in immunocompetent mice and mice lacking immunoglobulin A. Infection and immunity. 1999; 67 (4): 2001-4.
21. Kharrison T.R. Internal Diseases. Moscow: «Meditsina». 2002; 1165-68. (in Russian)
22. Hale T.L.,Keren D.F. Pathogenesis and immunology in shigellosis: applications for vaccine development. Current topics in microbiology and immunology. 1992; 180: 117-37.
23. Noriega F.R., Losonsky G., Lauderbaugh C., Liao F.M., Wang J.Y.,Levine M.M. Engineered deltaguaB-A deltavirG Shigella flexneri 2a strain CVD 1205: construction, safety, immunoge-nicity, and potential efficacy as a mucosal vaccine. Infection and immunity. 1996; 64 (8): 3055-61.
24. Aparin P.G. Polysaccharide vaccines against bacterial intestinal infections. 2004.
25. Brade H., Opal S.M., Vogel S.N., Morrison D.C. Endotoxin in Helth and Disease. Marcel Dekker, Inc.; 1999.
Received 20.05.14
экспериментальная и клиническая аллергология
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 616-056.43-078.33
Резников Ю.П.1, Масленников В.В.1, Полякова В.И.1, Игнатьева Г.А.2
АЛЛЕРГОМОНИТОРИРОВАНИЕ IN VITRO: К ОЦЕНКЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МЕТОДОВ
1ФгБУ «Центральная клиническая больница с поликлиникой» Управления делами Президента РФ, 121359, г Москва; 2«ГНЦ - Институт иммунологии» ФМБА России, г. Москва
Вынужденный отказ от радиоаллегосорбентного теста (РАСТ) в in vitro аллергодиагностике неизбежно приводит к ослаблению лабораторных позиций в этом разделе диагностики, даже если он будет базироваться на иммуно-хемилюминесценции. Это открывает горизонты для поиска альтернативы, сопоставимой по чувствительности с РАСТ, но лишенной недостатков радиоизотопного метода исследования.
Ключевые слова: аллергодиагностика; альтернативы.
Для цитирования: Иммунология. 2015; 36(2):
Reznikov Yu.P.1, Maslennikov V.V.1, Polyakova V.I.1, Ignat'eva G.A.2
IN VITRO ALLEGROMONITORING: TO ASSESS THE SENSITIVITY OF THE METHODS
'«Central clinical hospital with polyclinic» Management Department of the President of the Russian Federation, 121359, Moscow; 2State research center «Institute of immunology» FMBA of Russia, Moscow
Forced failure from radioallergosorbent test (RAST) in the in vitro allergodiagnostic inevitably leads to the weakening of laboratory items in this section diagnosis, even if it will be based on immunochemiluminescence. This opens the horizons to search for alternatives that are comparable in sensitivity with Age, but devoid of the shortcomings of the radioisotope research method.
Keywords: allergodiganostic; alternative.
citation: Immunologiya. 2015; 36(2):
Для корреспонденции: резников Юрий Петрович, immlab@yandex.ru For correspondence: Reznikov Yuriy Petrovich, immlab@yandex.ru
Постоянный рост количества аллергических заболеваний особенно в промышленных городах, имеющиеся ограничения по применению in vivo диагностических приемов (детский возраст, наличие бронхиальной астмы, заболеваний кожи, выраженный дермографизм и др.), стремление к объективной оценке проводимой аллергенспецифической терапии (АСИТ) диктуют необходимость выбора метода, позволяющего достаточно точно определить спектр заинтересованных реагинов и антител (АТ), вовлекаемых в патологических процесс. В связи с прекращением выпуска наборов для проведения радиоаллергосорбентного теста (РАСТ), разработчики которого в свое время получили Нобелевскую премию [1],возникает проблема поиска достойной ему замены, способной по чувствительности конкурировать со ска-рификационными (in vivo) методами диагностики. При этом необходимо отметить, что РАСТ, как показали результаты проведенного нами сравнения чувствительности к ключевым аллергенам, мог уступать кожным пробам по степени выраженности реакции: скарификационным пробам, расцениваемым на +++, соответствовал широкий диапазон концентраций реагинов: от 0,55 Е/мл (низкая) до > 17,5 Е/мл (очень высокая). В то же время РАСТ оказался более гибким при подборе спектра аллергенов, а в некоторых случаях и при выявлении аллергии (табл. 1).
Весьма актуальным является выявление всего вовлекаемого диапазона реагинов - специфических IgE (sIgE) и ал-лергенспецифических АТ (sIgG) у пациента, поэтому удельный вес аллергодиагностикумов in vitro наверняка будет расти, правда, при условии сохранения их чувствительности на уровне РАСТ или даже выше.
Сопоставление чувствительности in vitro аллергодиагностикумов с РАСТ. Для сопоставления чувствительности мы выбрали наиболее популярные в лабораторной практике методы аллергодиагностики: иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунофлюорометрический анализ (ИФЛА). Исследовали сыворотки крови у пациентов с диагнозами аллергического сезонного ринита и атопической бронхиальной астмы. Результаты исследования сывороток крови в РАСТ и ИФА представлены в табл. 2.
Согласно представленным данным, выявляемая концентрация sIgE методом ИФА оказалась существенно ниже, чем
Таблица 2
результаты исследования уровня сывороточных аллергенспеци-фических IgE методами рАсТ и ИФА
№ сыворотки Код, аллерген Hycor Allergopharma
РАСТ ИФА ИФА
Е/мл
4877 t2, ольха 6,5 0,78 2,5
t3, береза > 17,5 8,44 > 17,5
2288 g3, ежа сборная 8,42 1,86 5,0
g6, тимофеевка 12,7 1,82 5,4
луговая
е1, эпителий кошки 1,27 0,52 1,09
3973 w6, полынь обыкно- 2,59 0,94 1,4
венная
3151 £1, белок яйца 9,55 1,31 1,09
3485 d1, клещ Птеронис- > 17,5 8,37 > 17,5
синус
d2, клещ Фарина > 17,5 > 17,5 > 17,5
е1, эпителий кошки > 17,5 4,89 6,78
е2, эпителий собаки > 17,5 5,22 > 17,5
3973 w6, полынь обыкно- 2,59 0,76 0,94
венная
1832 £2, белок коровьего 0,94 0,0 0,64
молока
3056 £3, треска атланти- 0,61 0,0 0,0
ческая
Таблица 1
сопоставление информативности in vitro и in vivo методов диагностики аллергии
^Е/аллерген РАСТ Скарификационная проба
код Е/мл № серии степень реакции
^Е, кЕ/л 565
Тимофеевка луговая g6 0,84 198 +++
Ольха t2 2,92 174 +++
Береза t3 > 17,5 184 +++
Орешник t4 2,49
Полынь обыкновенная w6 0,73 283 +++
Одуванчик w8 0,40 86 -
Лебеда w15 1,49 266 +++
Домашняя пыль № 2 h2 0,55 304 +++
Эпителий кошки e1 0,49 164 ++
Эпителий собаки e2 0,5 166 ++
в РАСТ, даже при использовании наборов реагентов одного и того же производителя. При этом, используя ИФА Hycor, мы не обнаружили в крови sIgE к коровьему молоку (f2) и ни в одном тесте ИФА к треске (f3). Таким образом, представленные данные свидетельствуют о меньшей чувствительности ИФА по сравнению с таковой РАСТ. Это побудило нас использовать для определения содержания sIgE ИФЛА. Результаты такого сопоставления представлены в табл. 3. Согласно этим данным, ИФЛА существенно чувствительнее, чем ИФА. Там, где в ИФА sIgE не удавалось выявить (например, к дерматофагоидам), в ИФЛА они проявлялись, но в несопоставимо более низких концентрациях, чем в РАСТ (см. табл. 3). Поэтому неудивительно, что при снижении концентрации реагинов в крови, выявляемых в РАСТ, этот метод, как и ИФА, оказался недостаточно чувствительным (табл. 4). В табл. 5, где подобраны сыворотки крови, показавшие низкие концентрации sIgE в РАСТ и оказавшиеся негативными в ИФА, ИФЛА давал позитивные результаты лишь в редких случаях. В приводимом ниже случае с диагностической целью использовали комбинированный метод оценки реагинов - ИФА, усиленный хемилюминесценцией (IMMULITE 2000). Как и предыдущие варианты, он не смог конкурировать по чувствительности со скарификационными пробами.
Пациентка А., 57 лет, поступила с жалобами на приступообразный сухой кашель, ощущение тяжести в грудной клетке, свистящие звуки при выдохе, возникающие на протяжении всего года, но усиливающиеся весной. С подозрением на хроническую обструктивную болезнь легких,
Таблица 3
Чувствительность методов определения содержания аллерген-специфических IgE в крови при их высоком уровне в рАсТ
Аллерген № сыворотки РАСТ ИФЛА ИФА
Е/мл
g3, ежа сборная 1213 11,26 > 6,07
g6, тимофеевка луговая 1213 9,55 > 4,36
t2, ольха 591 5,6 > 6,6
t3, береза 591 9,42 > >
w6, полынь обыкновенная 1300 8,11 1,79
d1, клещ Птерониссинус 6573 5,4 0,57 <
d2, клещ Фарина 6573 6,1 3,33 2,22
h2, домашняя пыль № 2 1213 6,63 4,11 4,09
е1, эпителий кошки 13 > > >
е2, эпителий собаки 513 3,53 1,56 1,43
11, белок яйца 1296 10,86 7,4 4,36
£3, треска атлантическая 1296 5,01 16,4 5,34
Таблица 4
Чувствительность методов определения содержания аллерген-специфических ^Е в крови при их среднем уровне в рАсТ
Аллерген № сыворотки РАСТ ИФЛА ИФА
Е/мл
g3, ежа сборная 591 2,13 4,15 0,6
g6, тимофеевка луговая 591 2,22 3,28 0,67
t2, ольха 1160 2,08 9,18 2,24
te, береза 590 2,7 4,76 2,21
w6, полынь обыкновенная 747 2,78 1,26
w8, одуванчик 6838 0,91 0,6 <
d1, клещь Птерониссинус 1587 1,78 0,39 <
d2, клещ Фарина 1300 1,32 < <
к2, домашняя пыль № 2 207 2,38 2,91 0,95
е1, эпителий кошки 207 2,76 3,24 1,45
е2, эпителий собаки 163 3,18 3,68 1,31
11, белок яйца 939 2,33 1,78 1,32
£2, белок коровьего молока 939 2,79 3,93 1,26
13, треска атлантическая 269 1,22 7,37 3,46
бронхиальную астму направлена на комплексное клинико-лабораторное обследование. Результаты проведенных скари-фикационных проб не показали позитивности к аллергенам домашней (две серии) и библиотечной пыли, перу подушки, клещам домашней пыли, смеси трав, одуванчику, полыни, лебеде, но положительными (++) оказались реакции к шерсти собаки, кошки, перхоти лошади и смеси аллергенов деревьев. При поиске реагинов в сыворотке крови к эпителию кошки и собаки (el и e2), широкому спектру пищевых аллергенов, плесеням Alternaria tenuis и Aspergillus niger, а также к смеси клещей домашней пыли положительных результатов не отметили.
Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что отказ от РАСТ привел к существенной уступке в чувствительности аллергодиагностикумов in vitro и указывает на необходимость разработки новых диагностических подходов, аналогичных по чувствительности РАСТ.
Для такого метода необходим подбор и наиболее актуального по составу спектра выявляемых реагинов - российской аллергологической панели, подобного такому, что существует в варианте множественного аллергосорбентного теста, однако лишенного главного недостатка - существенного объема сыворотки, необходимого для его постановки. Предложенная нами в 1990-х годах панель [2] также не может удовлетворить клиницистов, ибо современные технологии должны предоставить им возможность оценить и эффектив-
Таблица 5
Чувствительность методов определения содержания аллерген-специфических IgE в крови при их низком уровне в рАсТ
Аллерген № сыворотки РАСТ ИФЛА ИФА
Е/мл
g3, ежа сборная 747 0,51 < <
g6, тимофеевка луговая 930 0,53 < <
t2, ольха 1074 0,39 0,42 <
t3, береза 797 0,65 < <
w6, полынь обыкновенная 590 0,58 0,84
w8, одуванчик 1525 0,41 < <
d1, клещ Птерониссинус 114 0,4 < <
d2, клещ Фарина 114 0,5 < <
Ь2, домашняя пыль № 2 320 0,52 < <
е1, эпителий кошки 163 0,42 < <
е2, эпителий собаки 207 0,66 < <
12, белок коровьего молока 296 0,4 < <
13, треска атлантическая 939 0,37 0,4 <
ность современных методов лечения - АСИТ, для чего необходимо иметь тест-систему, предоставляющую возможность оценивать и уровень нарабатываемых блокирующих АТ, принадлежащих в большинстве своем к IgG [3].
литература
1. Fadal R.G., Nalebuff D.J., eds. RASTin ClinicalAllerge. 2-nd ed. Carlsbad: Symposia Foundation: 1989.
2. Topoleva T.S., Reznikov Y.P., Goryachkina L.A. Composition of «Russian panel» for in vitro diagnosis of atopia. Suppl. Biochim. Clin. 1995; 19: 10-75.
3. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. Норма и патология: 3-е изд. М.: Медицина; 2010.
Поступила 11.09.14
references
1. Fadal R.G., Nalebuff D.J., eds. RAST in Clinical Allerge. 2nd ed. Carlsbad: Symposia Foundation: 1989.
2. Topoleva T.S., Reznikov Y.P., Goryachkina L.A. Composition of «Russian panel» for in vitro diagnosis of atopia. Suppl. Biochim. Clin. 1995; 19: 10-75.
3. Khaitov R.M., Ignat'eva G.A., Sidorovich I.G. Immunology. Norm and Pathology [Immunologiya. Norma i patologiya]. 3rd ed. Moscow: Meditsina; 2010. (in Russian)
Received 11.09.14
