CC BY
24
УДК 612.1:615.324-092.4
АДАПТОГЕННОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОДУКТОВ ПАНТОВОГО ОЛЕНЕВОДСТВА НА СОСТОЯНИЕ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА У КРЫС ПРИ СВЕРХПОРОГОВОЙ ФИЗИЧЕСКОЙ НАГРУЗКЕ
Алтайский государственный медицинский университет, г.Барнаул Блажко А.А., Шахматов И.И., Киселев В.И., Жариков А.Ю.
В статье представлены данные исследования системы гемостаза крыс интегральным методом -тромбоэластографией при сверхпороговой физической нагрузке без предварительного приема адаптогена и при предварительном курсовом 30-дневном приеме концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала. Также рассмотрено влияние курсового приема концентрата и отдельно добавок (глюкоза, аскорбиновая кислота, фруктовая эссенция), входящих в состав исследуемого концентрата, на показатели системы гемостаза. Авторами показано, что предварительный 30-дневный прием концентрата снижает риск развития состояния тромботической готовности у крыс после 8-часовой физической нагрузки за счет повышения на 30-й день приема концентрата фибринолити-ческой активности плазмы крови. Также показано, что компонентами, повышающими адаптивные свойства системы гемостаза у крыс, являются активные вещества, содержащиеся в крови и гистолизате из репродуктивных органов самцов марала.
Ключевые слова: тромбоэластография, гистолизат из репродуктивных органов марала, система гемостаза.
The article presents the results of the study of the hemostatic system of rats by means of an integral method -thromboelastography by suprathreshold physical load without prior intake of the adaptogene and by preliminary course 30-day intake of the concentrate containing blood and histolysate of the Siberian stag reproductive organs. There was also studied the influence of the course intake of the concentrate and separate additives (glucose, ascorbic acid, fruit essence) contained in the studied concentrate on the hemostatic system parameters. It was showed, that the preliminary course 30-day intake of the concentrate decreases the risk of development of the state of thrombotic readiness in rats after 8-hour physical load due to the increased intake of the concentrate of blood plasm fibrinolytic activity. It was also proved, that the components increasing adaptive qualities of the hemostatic system in rats are active agents contained in blood and histolysate of the Siberian stag reproductive organs. Key words: thromboelastography, histolysate of the Siberian stag reproductive organs, hemostatic system.
Введение
Физическая нагрузка является одним из наиболее часто встречающихся видов стрессорного воздействия на организм человека и при регулярном действии может повышать его устойчивость за счет механизмов перекрестной адаптации [1, 2]. При этом сверхпороговая физическая нагрузка может приводить к развитию повреждений органов и систем, вызывая в организме состояние дистресса [3]. Известно, что дистресс со стороны системы гемостаза проявляется развитием состояния тромботической готовности [3, 4]. Существует множество методик для распознавания развития состояния тром-ботической готовности, однако общую картину свертывания от начала коагуляции до процесса фибринолиза с определением вязкоупругих свойств сгустка позволяет зафиксировать только интегральный метод - тромбоэластография [5, 6].
Ранее в нашей лаборатории установлено, что для того, чтобы избежать развития состояния тромботической готовности при сверхпороговом стрессорном воздействии, необходимо 72
повышать устойчивость организма и системы гемостаза в частности физическими тренировками или приемом растительных адаптогенов [7, 8]. К адаптогенам животного происхождения относятся продукты пантового оленеводства, которые повышают умственную и физическую работоспособность организма [9]. Известно, что в продуктах пантового оленеводства отсутствуют запрещенные допинговые вещества или близкие к ним аналоги [10]. Причем отмечено, что концентраты, содержащие помимо крови марала еще и гистолизат из половых органов самцов, обладают более выраженным тонизирующим действием за счет повышения биосинтетической активности в клетках скелетной мускулатуры крыс [11].
Ранее нами уже было рассмотрено действие курсового приема продуктов пантового оленеводства на состояние системы гемостаза [12, 13]. Однако действие предварительного приема концентрата и его составляющих на показатели системы гемостаза, оцененных методом тром-боэластографии, при сверхпороговой физической нагрузке изучено не было.
Цель работы - оценить реакции системы гемостаза методом тромбоэластографии у крыс после сверхпороговой физической нагрузки при предварительном курсовом приеме концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, а также исключить возможное адаптивное действие на систему гемостаза добавок (глюкоза, аскорбиновая кислота, фруктовая эссенция), входящих в состав используемого концентрата.
Материалы и методы исследования
Исследования были выполнены на 50 крысах-самцах линии Wistar массой 250 ± 30 г. Животные были разделены на пять групп (интакт-ная и четыре экспериментальные группы).
Первые две экспериментальные группы животных подвергались восьмичасовой физической нагрузке в виде навязанного бега в тредбане со скоростью вращения 6-8 м/мин. При этом животные второй экспериментальной группы, в отличие от первой, предварительно принимали концентрат в течение 30 дней. Сразу после окончания воздействия физической нагрузки кровь для исследования забиралась в объеме 5 мл из печеночного синуса в полистироловый шприц, содержащий 3,8% раствор цитрата натрия (соотношение крови и цитрата 9:1) под наркозом.
Третья и четвертая группы экспериментальных животных принимали в течение 30 дней концентрат (третья группа) и отдельно добавки (глюкоза, аскорбиновая кислота, фруктовая эссенция), входящие в состав используемого концентрата (четвертая группа), и не подвергались воздействию физической нагрузки. Кровь забиралась на 31-й день приема концентрата и добавок.
Экспериментальные животные принимали концентрат, содержащий кровь и гистолизат половых органов самцов марала, выпускающийся под торговым названием «Пантогемато-ген (Лубяньгем)» (ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства» ФАНО России, г. Барнаул) по 4,5 мл в сутки. Расчет дозы концентрата для крыс производился с учетом коэффициентов межвидового пересчета [14]. Экспериментальные животные содержались в индивидуальных клетках и принимали водный раствор концентрата пе-рорально из индивидуальных поилок. Раствор приготавливался путем добавления 4,5 мл концентрата в воду с доведением раствора до общего объема 40 мл (суточная норма потребления воды для данных крыс, выявленная нами до начала эксперимента).
Животные четвертой экспериментальной группы принимали добавки (глюкоза, аскорбиновая кислота, фруктовая эссенция), входящие в состав исследуемого концентрата, в объеме 1,7 мл в сутки в течение 30 дней. Объем 1,7 мл
добавок концентрата разводился водой до 4,5 мл; тем самым предполагаемое действующее вещество (кровь и гистолизат половых органов самцов марала) было заменено водой в соответствующих пропорциях. Интактные животные принимали воду в том же объеме, что и экспериментальные животные.
Запись тромбоэластограммы проводилась на аппарате RotemGamma (Германия) в режиме Natem в течение 35 минут с использованием активатора Star-tem. Оценивались такие параметры тромбоэластограммы, как:
- Время коагуляции (СТ) - время от момента внесения активатора до достижения тромбоэ-ластограммой амплитуды в 2 мм, данный интервал отражает фазу инициации свертывания крови [15].
- Время формирования сгустка (CFT) - время изменения амплитуды тромбоэластограммы с 2 мм до 20 мм, данный показатель характеризует фазу усиления процесса тромбообразова-ния [15].
- Угол альфа (ALP) - угол, образованный продольной осью тромбоэластограммы и прямой, проведенной по касательной к тромбоэласто-грамме из точки, соответствующей амплитуде сгустка 2 мм. Эта величина отражает кинетику образования сгустка и характеризует фазу распространения [16].
- Максимальная твердость сгустка (MCF) - показатель, соответствующий максимальной амплитуде сгустка и отражающий функции тромбоцитов и фибриногена [8].
- Максимальный лизис (ML) - показатель, характеризующий уровень максимального фи-бринолиза, зарегистрированного в течение анализа. Определяется как нахождение самой низкой амплитуды после достижения MCF.
Использование крыс в экспериментах осуществлялось в соответствии с Европейской конвенцией по охране позвоночных животных, используемых в эксперименте, а также Директивами - 86/609/EEC. Обезболивание животных проводилось в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных».
Обработка данных
Полученные в ходе исследования данные представлены в таблицах в виде (m [25-75 %]), где m - медиана в выборочной совокупности; [25-75 %] - 25-й и 75-й перцентиль. Статистический анализ проводился на персональном компьютере с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.0 (StatSoft, США). Достоверность различий оценивалась при помощи непараметрического U-критерия Манна-Уитни, так как исследуемые признаки не подчинялись нормальному распределению. Различия счита-
лись достоверными при уровне статистической значимости p<0,05.
Результаты и обсуждение
Как следует из данных, представленных в таблице 1, восьмичасовая физическая нагрузка вызывала у крыс (первая экспериментальная группа) укорочение времени коагуляции (CT) на 26 % (p1=0,002), повышение показателя «угол альфа» на 10% (p1<0,001) и сокращение времени формирования сгустка (CFT) на 22% (p1=0,028) по сравнению с показателями интактных животных, что говорит о сдвиге системы гемостаза в сторону гиперкоагуляции и согласуется с уже описанными данными, полученными с помощью коагулологических тестов. Максимальная твердость сгустка (MCF) по завершении восьмичасового стрессорного воздействия уменьшалась на 11% (p1=0,018) по сравнению с интактными животными, что свидетельствовало об уменьшении количества тромбоцитов и снижении уровня фибриногена в крови экспериментальных животных вследствие их потребления на внутрисосудистое тромбообразо-вание. Максимальный лизис сгустка (ML) после восьмичасовой нагрузки, в отличие от интакт-ных животных, не определялся, что говорило о снижении фибринолитической активности плазмы крови. Таким образом, изменения описанных показателей тромбоэластограммы свидетельствуют о том, что восьмичасовая физическая нагрузка вызывает у крыс развитие состояния тромботической готовности [3, 4].
У животных второй экспериментальной группы, которые были подвержены действию восьмичасовой физической нагрузки после 30-дневного курсового приема концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, показатели тромбоэласто-граммы не отличались от таковых у интактных животных. Следовательно, предварительный прием адаптогена уменьшал риск развития состояния тромботической готовности у крыс после восьмичасовой физической нагрузки.
Как следует из данных, представленных в таблице 2, у крыс 30-дневный прием концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, вызывал снижение максимальной твердости сгустка на 12 % (p1=0,014), а также повышение максимального лизиса (ML) на 125 % (p1=0,021) по сравнению с интактными животными, что свидетельствует о повышении фибринолитической активности плазмы крови. Такое адаптивное действие приема концентрата может быть связано с активацией выделения эндотелием тканевого активатора плазминоге-на (t-PA) и уменьшением количества ингибитора активации плазминогена (PAI-1) [17].
Прием добавок (глюкоза, аскорбиновая кислота, фруктовая эссенция), входящих в состав
исследуемого концентрата, в течение 30 дней у крыс не вызывал изменений показателей тромбоэластограммы по сравнению с интакт-ными животными. Следовательно, можно предположить, что действующими компонентами концентрата, повышающими адаптивность системы гемостаза, проявляющуюся в повышении фибринолитической активности плазмы крови, являются активные вещества, содержащиеся в крови и гистолизате из репродуктивных органов маралов.
Выводы
1. Сверхпороговая восьмичасовая физическая нагрузка вызывает у крыс развитие состояния тромботической готовности.
2. Предварительный 30-дневный прием концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, снижает риск развития состояния тромботической готовности у крыс после сверхпороговой физической нагрузки.
3. Повышение адаптированности системы гемостаза при приеме концентрата, содержащего кровь и гистолизат из репродуктивных органов марала, заключается в повышении фибринолитической активности плазмы крови.
4. Действующими компонентами используемого концентрата «Пантогематоген (Лубянь-гем)», повышающими адаптивные свойства системы гемостаза у крыс, являются активные вещества, содержащиеся в крови и гистолизате из репродуктивных органов самцов марала.
Список литературы
1. Агаджанян Н.А., Баевский Р.М., Берес-нева А.П. Учение о здоровье и проблемы адаптации. - Ставрополь: Изд-во СГУ, 2000. - 203 с.
2. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2001; 3: 28-40.
3. Шахматов И.И. Влияние различной продолжительности однократной физической нагрузки и иммобилизации на реакции системы гемостаза // Фундаментальные исследования. 2010; 3: 144150.
4. Момот А.П. и др. Современные методы распознавания состояния тромботиче-ской готовности. - Барнаул, 2011. - 138 с.
5. Trzebicki J., Kuzminska G., Domagala P. Thromboelastometry - a new method supporting the therapeutical decisions in the coagulopathy based on the Hartet's thromboelastography // Pol. Merkur. Lekarski. 2009; 27(158): 85-91.
Таблица 1
Показатели тромбоэластограммы: интактных животных; экспериментальных крыс после 8-часовой физической нагрузки; экспериментальных животных после 8-часовой физической нагрузки при предварительной 30-дневном приеме концентрата
„ Интактные крысы Показатели , г (n=10) 8-часовая физическая нагрузка (n=10) 8-часовая физическая нагрузка на 31-й день приема концентрата (n=10)
Время коагуляции (CT), сек 193,0 [167,3-206,3] 143,0 [114,0-163,0] p1=0,002 (Д1 - 26 %) 176,0 [163,5-183,5] p1=0,349
Время формирования сгустка (CFT), сек 76,0 [64,3-106,5] 59,5 [52,5-67,8] p1=0,028 (Д1 - 22 %) 74,0 [70,0-80,0] p1=0,690
Угол альфа (ALP), 0 73,0 [68,5-77,0] 80,0 [79,5-82,0] p1<0,001 (Д1 + 10 %) 74,5 [68,0-77,0] p1=0,939
Максимальная твердость сгустка (MCF), мм 68,0 [62,0-70,8] 60,5 [59,0-65,3] p1=0,018 (Д1 - 11 %) 67,5 [66,8-70,3] p1=0,562
Максимальный лизис (ML), % 4,0 [1,0-6,0] 0,0 [0,0-1,0] p1=0,013 (Д1 - 100 %) 3,0 [0,8-6,5] p1=0,894
Примечания: результаты представлены в таблицах в виде (т [25-75 %]), где т - медиана в выборочной совокупности; [25-75 %] - 25-й и 75-й перцентиль. А1 - статистически значимая разница экспериментальной группы с ин-тактными животными при р < 0,05; р1 - уровень значимости различий экспериментальной группы с интактными животными. СТ - время коагуляции, С!7! - время формирования сгустка, МС! - максимальная твердость сгустка, МЬ - максимальный лизис.
Таблица 2
Показатели тромбоэластограммы: интактных животных; экспериментальной группы крыс, принимавших в течение 30 дней концентрат; экспериментальных животных, принимавших в течение 30 дней добавки концентрата
„ Интактные крысы 30-дневный прием
I U lKd.id 1С/Ш (n=10) концентрата (n=10) , добавок концентрата (n=10)
Время коагуляции (CT), сек 193,0 [167,3-206,3] 209,0 [173,0-250,0] p1=0,270 189,5 [181,5-197,8] p1=0,979
Время формирования сгустка (CFT), сек 76,0 [64,3-106,5] 101,0 [90,0-106,0] p1=0,064 81,0 [72,8-90,0] p1=0,655
Угол альфа (ALP), 0 73,0 [68,5-77,0] 73,0 [71,0-76,0] p1=0,944 71,5 [70,3-74,8] p1=0,930
Максимальная твердость сгустка (MCF), мм 68,0 [62,0-70,8] 60,0 [57,0-65,0] p1=0,014 (Д1 - 12 %) 67,0 [63,3-72,0] p1=0,396
Максимальный лизис (ML), % 4,0 [1,0-6,0] 9,0 [5,0-12,0] p1=0,021 (Д1 + 125 %) 5,5 [2,0-10,0] p1=0,482
Примечания: результаты представлены в таблицах в виде (т [25-75 %]), где т - медиана в выборочной совокупности; [25-75 %] - 25-й и 75-й перцентиль. А1 - статистически значимая разница экспериментальной группы с ин-тактными животными при р < 0,05; р1 - уровень значимости различий экспериментальной группы с интактными животными. СТ - время коагуляции, С!7! - время формирования сгустка, MCF - максимальная твердость сгустка, МЬ - максимальный лизис.
6. Theusinger O.M., Wanner G.A., Emmert M.Y., Billeter A., Eismon J., Seifert B., Simmen H.P., Spahn D.R., Baulig W. Hyperfibrinolysis diagnosed by rotational thromboelastometry (ROTEM1) is associated with higher mortality in patients with severe trauma // Anesth Analg. 2011; 113(5): 1003-1012.
7. Алексеева О.В., Бондарчук Ю.А., Шахматов И.И., Вдовин В.М., Бондаренко Н.А. Адаптивные изменения в показателях периферической крови в процессе физических тренировок // Бюллетень сибирской медицины. - 2005; 4: 35.
8. Шахматов И.И., Бондарчук Ю.А., Вдовин В.М., Алексеева О.В., Киселев В.И. Нарушения гемостаза и их коррекция адаптогеном // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. -2010; 2: 43-46.
9. Суслов Н.И., Гурьянов Ю.Г. Продукция на основе пантогематогена. Механизмы действия и особенности применения. -Новосибирск: Сибирское университетское издательство. - 2008. - 146 с.
10. Семенов В.А., Латков Н.Ю., Кошелев Ю.А., Позняковский В.М. Применение пантогематогена в спортивно-медицинской практике // Техника и технология пищевых производств. - 2014; 2: 113-117.
11. Жариков А.Ю., Луницын В.Г., Лампатов В.В., Мотин Ю.Г., Талалаева О.С., Елисеев Д.В., Павляшик Г.В. Влияние новых средств из сырья пантовых оленей на биосинтетические процессы в клетках скелетной мускулатуры крыс в условиях длительной физической нагрузки // Биомедицина. - 2016; 1: 90-94.
12. Бондарчук Ю.А., Блажко А.А., Алексеева О.В., Шахматов И.И., Николаев В.Ю. Влияние курсового приема элеутерококка и пантогематогена на состояние
системы гемостаза // Современные проблемы науки и образования. - 2016; 6. URL: https://www.science-education.ru/ ru/article/view?id=25928 (дата обращения: 25.11.2017).
13. Блажко А.А., Шахматов И.И., Москаленко С.В., Лычева Н.А. Активирующее действие пантогематогена на реакции системы гемостаза // Сибирский научный медицинский журнал. - 2016; 36(4): 51-55.
14. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ.
- М: Медицина, 2005. - 829 с.
15. Kawassaki J., Katori N., Kodaka M., Miyao H., Tanaka K.A. Electron microscopic evaluation of clot morphology during thrombelastography // Anesth. Analg. 2004; 99(5): 1440-4.
16. Johansson P.I., Svenders M.S., Salado J., Bochsen L., Kristensen A.T. Investigation of the thrombin-generating capacity, evaluated by thrombogram, and clot formation evaluated by thrombelastography of platelets stored in the blood bank for up to 7 days // Vox Sang. 2008; 94(2): 113-8.
17. Мельникова Ю.С., Макарова Т.П. Эндо-телиальная дисфункция как центральное звено патогенеза хронических болезней // Казанский медицинский журнал.
- 2015; 96(4): 659-665.
Контактные данные
Автор, ответственный за переписку: Блажко Александр Александрович, преподаватель кафедры нормальной физиологии Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул.
656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 40.
Тел.: (3852) 566861.
Email: [email protected]
