CC BY
51
ФАРМАКОЛОГИЯ, ФАРМАЦИЯ, МЕДИЦИНСКАЯ ХИМИЯ
УДК 615.014:54.057:547.534.2:547.857.7.001.8
9-[2-(3,5-ДИМЕТИЛБЕНЗИЛОКСИ)ЭТИЛ]АДЕНИН: УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫЙ СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ ОБЩЕФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ
А.А. Озеров, М.С. Новиков, Н.В. Онищенко, О.Ю. Ананьева
НИИ фармакологии ВолГМУ, отдел фармакологии ВНЦ РАМН и Администрации Волгоградской области
9-[2-(3,5-Диметилбензилокси)этил]аденин является перспективным противовирусным агентом, сочетающим высокую анти-ВИЧ-1 активность с выраженным антицитомегаловирусным действием. По данным E. De Clercq, это соединение одновременно ингибирует репликацию ВИЧ-1 и цитомегаловируса человека in vitro в на-номолярных концентрациях, а также активно против Коксаки вируса (величины ЕС50 составляют 0,1, 0,2 и 2,5 ^M, соответственно) и имеет индекс селективности в отношении указанных вирусов от 500 до 1000 [1]. Впервые синтез этого вещества был осуществлен нами на основе реакции свободнорадикального бромирования ме-зитилена до 3,5-диметилбензилбро-мида с последующей этерификацией этиленгликолем, превращением в тозилат и алкилированием аде-нина-основания [2]. Однако вследствие наличия трех метальных групп в молекуле мезитилена реакция бензильного бромирования сопровождается побочным замещением в ароматическое ядро, что в конечном итоге приводит к наличию бромированных примесей в целевом соединении. Ввиду того, что в настоящее время 9-[2-(3,5-диметилбензилокси)этил]аденин является объектом углубленных доклинических, в частности, токсикологических исследований, указанные бромсодержащие примеси могут привести к увеличению общей и специфической токсичности этого вещества. В связи с этим нами был разработан новый селективный способ синтеза, позволяющий избежать стадии бромирования мезити-лена и получить субстанцию целевого соединения более высокой чистоты.
В качестве исходного соединения в новом методе синтеза был также использован мезити-лен, который окисляли до 3,5-диметилбензойной кислоты при кипячении с избытком разведенной азотной кислоты, как это описано для о-толуи-ловой кислоты [3]. Далее 3,5-диметилбензойную
кислоту под действием хлористого тионила превращали в соответствующий хлорангидрид и восстанавливали до 3,5-диметилбензилового спирта алюмогидридом лития в тетрагидро-фуране по стандартной методике [4]. Синтезированный спирт путем кипячения с хлористым тионилом в среде хлороформа переводили в соответствующий 3,5-диметилбензилхлорид, которым ал-килировали этиленгликоль в присутствии гидро-ксида калия. В результате последней реакции был получен ключевой интермедиат для синтеза конечного продукта - 2-(3,5-диметилбензилокси)-этанол, который превращали в тозилат и использовали в заключительном алкилировании адени-на-основания в среде безводного диметилфор-мамида в присутствии карбоната калия.
Несмотря на то, что новый метод синтеза включает семь стадий против четырех в первоначальной схеме, расход мезитилена сокращается более, чем в 3 раза, а выход конечного продукта в расчете на аденин-основание повышается с 51 до 57 %.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ
ХИМИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
В работе были использованы высококачественные реактивы и растворители (мезитилен, хлористый тионил, алюмогидрид лития, тетра-гидрофуран, тозилхлорид, аденин, диметилфор-мамид) фирм Aldrich и Merck. Спектр ЯМР 1Н регистрировали на спектрометре Broker DRX500 в растворе ДМСО-В6, Масс-спектр регистрировали на спектрометре Varian MAT-111 (прямой ввод, ионизация методом электронного удара, 70 эВ). Температура плавления измерена в стеклянном капилляре на приборе Mel-Temp 3.0 (Laboratory Devices Inc., США).
3,5-Диметилбензойная кислота. 100 мл (0,710 моль) мезитилена, 250 мл концентрированной азотной кислоты и 500 мл воды кипятят в течение 5 дней с перерывами на ночь (общее время кипячения около 50 ч). Реакционную массу охлаждают в течение суток при температуре 0-5 °С, закристаллизовавшийся продукт отфильтровывают, промывают на фильтре 100 мл холодной воды, растворяют в 500 мл 10 % раствора едкого натра, добавляют 10 г активированного угля, кипятят 15 мин, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, фильтрат при перемешивании подкисляют концентрированной соляной кислотой до сильнокислой реакции, осадок отфильтровывают, промывают на фильтре 250 мл холодной воды, сушат на воздухе при комнатной температуре и получают 95,6 г 3,5-диметилбен-зойной кислоты в виде светло-желтого кристаллического вещества, выход 89 %. т. пл. 170-173 °С.
Хлорангидрид 3,5-диметилбензойной кислоты. К 75,0 г (0,499 моль) 3,5-диметилбензойной кислоты добавляют 50,0 мл (0,696 моль) хлористого тионила и выдерживают при комнатной температуре в течение суток, периодически перемешивая реакционную массу. Добавляют 100 мл безводного хлороформа, кипятят с защитой от влаги в течение 1 ч до образования прозрачного раствора, растворитель и избыток хлористого тионила отгоняют на кипящей водяной бане в вакууме водоструйного насоса, остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию с т. кип. 114-118 °С / 15 мм рт. ст., и получают 77,5 г хло-рангидрида 3,5-диметилбензойной кислоты в виде светло-желтой жидкости, выход 92 %, n20D 1,5450.
3,5-Диметилбензиловый спирт. К суспензии 11,5 г (0,280 моль) алю-могидрида лития в 200 мл безводного тетрагидрофурана добавляют при интенсивном перемешивании 75,0 г (0,445 моль) хлорангидрида 3,5-диметилбензой-ной кислоты с такой скоростью, чтобы реакционная масса слабо кипела (общее время дозирования 1 ч 40 мин). По окончании дозирования реакционную массу перемешивают еще в течение 1 ч, охлаждают до комнатной температуры, осторожно добавляют 10 мл воды и затем раствор 50 мл
концентрированной серной кислоты в 200 мл воды. Органический слой отделяют, сушат сульфатом натрия, упаривают на кипящей водяной бане в вакууме водоструйного насоса, остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию с т. кип. 105— 106 °С / 15 мм рт. ст., и получают 46,7 г 3,5-диме-тилбензилового спирта, выход 77 %, п200 1,5318.
3,5-Диметилбензилхлорид. К кипящему раствору 35,0 мл (0,487 моль) хлористого тионила и 1 капли пиридина в 100 мл безводного хлороформа в течение 20 мин добавляют 45,0 г (0,330 моль) 3,5-диметилбензилового спирта, дополнительно кипятят с течение 1 ч, растворитель и избыток хлористого тионила отгоняют на кипящей водяной бане в вакууме водоструйного насоса, остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию с т. кип. 105-108 °С / 15 мм рт. ст., и получают 42,6 г 3,5-диметилбензилхлорида, выход 94 %, п20р 1,5392.
2-(3,5-Диметилбензилокси)этанол. К раствору 20,0 г (0,401 моль) 90 %-ного гранулированного едкого кали в 200 мл безводного эти-ленгликоля добавляют 40,0 г (0,259 моль) 3,5-диметилбензилхлорида и перемешивают на кипящей водяной бане в течение 2 ч. Охлаждают, добавляют при перемешивании 800 мл воды, экстрагируют 3 раза по 100 мл 1,2-дихлорэтана, экстракт сушат сульфатом натрия, упаривают на кипящей водяной бане в вакууме водоструйного насоса, остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию с т. кип. 133-135 °С / 15 мм рт. ст., и получают 33,1 г 2-(3,5-диметилбензилокси)этанола, выход 71 %, п □ 1,5182.
9-[2-(3,5-Диметилбензилокси)этил]аденин. К охлажденному до температуры -10 °С раствору 25,0 г (0,139 моль) 2-(3,5-диметилбензилок-си)этанола и 35 мл (0,433 моль) безводного пиридина в 200 мл хлороформа добавляют порциями в течение 15 мин 30,0 г (0,157 моль) тозилхлори-да, выдерживают сутки при температуре 0-5 °С, последовательно промывают по 200 мл воды, 1 н соляной кислоты, 2 % карбоната калия, воды, сушат сульфатом магния, упаривают при температуре 75-80 °С в вакууме водоструйного насоса, остаток растворителя удаляют при той же температуре при 15 мм рт. ст. и получают 45,7 г (99 %) тозилата 2-(3,5-диметилбензилокси)этанола в виде светло-желтого масла, который используют далее без дополнительной очистки.
Смесь 18,0 г (0,134 моль) аденина и 25,0 г (0,181 моль) безводного карбоната калия перемешивают в 200 мл безводного диметилформа-мида при температуре 110-115 °С в течение 30 мин, добавляют в течение 30 мин раствор то-зилата в 50 мл безводного диметилформамида и перемешивают при той же температуре 1 ч. Горячий раствор фильтруют, фильтрат охлаждают в течение суток при температуре 0-5 °С, выделившийся осадок отфильтровывают, про-
мывают отдельно 25 мл диметилформамида и 100 мл воды, сушат на воздухе и получают 16,0 г 9-[2-(3,5-диметилбензилокси)-этил]аденина в виде светло-желтого кристаллического вещества, т. пл. 180-183 °С.
Фильтрат диметилформамида упаривают в вакууме, остаток обрабатывают 200 мл воды, охлаждают в течение суток при температуре 0-5 °С, выделившийся осадок отфильтровывают, промывают 100 мл воды, сушат на воздухе и пе-рекристаллизовывают из 50 мл диметилформа-мида, дополнительно получая 6,8 г целевого продукта.
Общий выход 22,8 г (57,2 %).
Масс-спектр, т/е: М* 297 (3 %), 178 (14 %), 163 (31 %), 149 (22 %), 134 (100 %), 119 (67 %), 105 (47 %), 92 (64 %), 91 (46 %).
Спектр ЯМР 1Н, 6, м. д.: 2,17 с (6 Н, СН3); 3,78 т (5 Гц, 2 Н, СН2); 4,35 т (5 Гц, 2 Н, СН2); 4,39 с (2 Н, СН2); 6,71 с (2 Н, арил); 6,84 с (1 Н, арил); 7,02 уш.с (2 Н, N42); 8,06 с (1 Н, Н-8); 8,12 с (1 Н, Н-2).
С целью установления общефармакологического действия 9-[2-(3,5-диметилбензилок-си)этил]аденина (лабораторный шифр УМД-99-56), нами было изучено его влияние на сердечнососудистую и центральную нервную систему.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Все эксперименты были выполнены на крысах-самцах массой 200-250 г. Изучение психотропной активности и гемодинамических эффектов проводили согласно Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ [5]. При исследовании психотропной активности соединение УМД-99-56 вводилось животным внутрибрюшин-но в дозах 0.1, 1, 5, 10 и 50 мг/кг в изотоническом растворе хлорида натрия с добавлением твина за 1 ч до эксперимента. Животным контрольной группы вводился изотонический раствор хлорида натрия. Для изучения психотропной активности проводились тесты открытого поля, приподнятого крестообразного лабиринта, выработки условной реакции пассивного избегания и определения порога электроболевой чувствительности согласно общепринятым методикам. Для выявления антидепрессивной активности использовался тест принудительного плавания [6]. Дополнительное исследование антидепрессивной активности соединения проводили на модели резер-пиновой депрессии. При этом исследовалось влияние однократного введения вещества в дозах 1, 5 и 10 мг/кг на активность крыс в тесте принудительного плавания после 2-х дневного введения резерпина (2 мг/кг/сут.). В качестве препарата сравнения был использован трициклический антидепрессант имипрамин (10 мг/кг).
Для изучения влияния УМД-99-56 на гемодинамику крыс применялся прямой способ реги-
страции систолического артериального давления (САД) и частоты сердечных сокращений (ЧСС) через введенный в бедренную артерию полиэтиленовый катетер. АД и ЧСС измерялись у наркотизированных животных (нембутал, 40 мг/кг) при помощи электронного манометра производства компании "Elema-Siemens" (Швеция-Германия) и компьютерного гемодинамического анализатора на базе программы BEAT. Исследуемое вещество вводилось внутрибрюшинно в дозах 10 и 50 мг/кг в изотоническом растворе хлорида натрия с добавлением твина, животным контрольной группы вводился изотонический раствор натрия хлорида. После регистрации исходных значений АД и ЧСС вводили соединение и повторяли измерения через 1, 30 и 60 мин после введения.
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы Biostatis-tics 4.03 с использованием однофакторного дисперсионного анализа и критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони [7].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При изучении психотропной активности введение VMA-99-56 в дозах 5, 10 и 50 мг/кг вызывало достоверное сокращение длительности иммобилизации крыс в тесте принудительного плавания на 58 %, 59 % и 57 %, соответственно, в то время как введение малых доз 0,1 и 1 мг/кг не оказывало статистически значимого эффекта (табл. 1). Снижение времени иммобилизации в тесте принудительного плавания традиционно считается показателем антидепрессивной активности, однако, может быть обусловлено и психостимулирующим действием изучаемого вещества. Отсутствие увеличения локомоторной активности крыс, получавших VMA-99-56 во всех исследованных дозах, в тесте открытого поля позволяет исключить психостимулирующее влияние соединения и трактовать обнаруженный эффект как антидепрессивный. Для подтверждения этого предположения было проведено изучение антидепрессивной активности соединения на модели резерпиновой депрессии. Симпатолитик резерпин вызывает истощение запасов моноаминов в нейронах ЦНС, что является патогенетической основой развивающегося при его введении де-прессивноподобного состояния. В качестве метода оценки изменения эмоционального состояния животных был использован плавательный тест.
Введение соединения VMA-99-56 в дозах 1, 5 и 10 мг/кг животным, находящимся в состоянии резерпиновой депрессии, приводило к достоверному сокращению времени иммобилизации, т. е. к антидепрессивному эффекту (табл. 2). При этом эффект соединения в дозе 5 мг/кг был сходен с действием препарата сравнения имипра-мина, а в дозе 10 мг/кг превосходил его (табл. 2).
Таблица 1
Антидепрессивная активность 9-[2-(3,5-диметилбензилокси)этил]аденина (VMA-99-56) в тесте принудительного плавания, (М ± т)
Таблица 2
Антидепрессивная активность 9-[2-(3,5-диметилбензилокси)этил]аденина (УМА-99-56) в тесте принудительного плавания на модели резерпиновой депрессии, М ± т
Соединение Доза, г/кг Длительность иммобилизации, с (А %) Количество прыжков, (А %)
0 92,1 ± 15,8 0,2 ± 0,2
Контроль 0,1 85,3 ± 10,7 (-7) 0,7 ± 0,3 (+250)
VMA-99-56 1 64,0 ±10,5 (-31) 0,5 ± 0,3 (+350)
5 38,9 ±12,2 (-58)* 0,9 ± 0,4 (+150)
Контроль VMA-99-56 0 10 50 62,3 ± 8,5 25,8 ± 7,0 (-59) * 27,0 ± 6,5 (-57)* 0,5 ± 0,2 0,4 ± 0,2 (-20) 0,4 ± 0,2 (-20)
Группа животных Длительность иммобилизации, с Количество прыжков
Контроль (резерпин +
физ. р-р) 87,3 ± 20,3 0,3 ± 0,3
Имипрамин, 10 мг/кг 20,6 ± 7,4* 0,4 ± 0,4
VMA-99-56, 1 мг/кг 48,8 ± 12,9 0,3 ± 0,3
VMA-99-56, 5 мг/кг 25,4 ±10,5* 0,4 ±0,3
VMA-99-56, 10 мг/кг 14,6 ± 6,0* 0,1 ± 0,1
Примечание. Здесь и в табл. 2: * - изменения, достоверные по сравнению с контрольной группой при р < 0,05. Однофакторный дисперсионный анализ, критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони для множественных сравнений.
Таблица 3
Систолическое артериальное давление крыс и частота сердечных сокращений после введения 9-[2-(3,5-диметилбензилокси)этил]аденина (УМА-99-56), М±т
Группа Доза (мг/кг) Систолическое артериальное давление (мм рт. ст.)
Исходное Время после введения вещества
1 мин 30 мин 60 мин
Контроль VMA-99-56 10 50 101,2 ±1,2 107,4 ±2,8 94,6 ± 5,8 101,5 + 1,3 106,8+1,8 92,2 ±4,7 96,8 ±3,1 101,0 ±2,4 97,0 ±2,0 103,1 ±1,7 98,3 ± 5,2 96,0 + 4,9
Частота сердечных сокращений (ударов/мин)
Контроль VMA-99-56 10 50 407.6 ±10,0 422.7 ±23,7 461.8 ±23,4 395.8 + 16,4 432.9 ±23,0 426,4 ±30,6 372,4 ±19,2 441,1 ±32,8 457,8 ±28,5 422,5 ±9,9 407,7 + 20,9 456,6 + 33,5
В тестах приподнятого крестообразного лабиринта, выработки условной реакции пассивного избегания и определения порога переносимости электроболевого раздражения достоверных изменений в поведении животных не было выявлено, что свидетельствует об отсутствии у исследованного соединения анксиолитической, ноотропной и анальгетической активности .
При выполнении исследования влияния соединения УМД-99-56 на деятельность сердечнососудистой системы исходные показатели САД и ЧСС крыс контрольной группы и крыс, получавших соединение, достоверно не отличались. В контрольной группе животных не было обнаружено достоверных изменений САД и ЧСС через 1, 30 и 60 мин после введения физиологического раствора, что свидетельствует об отсутствии влияния посторонних факторов на основные показатели деятельности сердечно-сосудистой системы во время проведения эксперимента. Введение УМД-99-56 в дозах 10 и 50 мг/кг также не оказывало достоверного влияния на систоли-
ческое АД и частоту сердечных сокращений крыс на всем протяжении периода наблюдения (табл. 3).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, при изучении психотропной активности VMA-99-56 был обнаружен антидепрессивный эффект в дозах 5, 10 и 50 мг/кг. Изучение гемодинамических эффектов VMA-99-56 в дозах 10 и 50 мг/кг не выявило его влияния на показатели артериального давления и частоты сердечных сокращений.
ЛИТЕРАТУРА
1. Петров В.И., Озеров А.А., Новиков М.С., Бальзарини Я., Де Клерк Э. // Фундаментальные исследования. - 2004. - № 1. - С. 77.
2. Патент РФ по заявке № 2003100974 (2003) / Петров В.И., Озеров А.А., Новиков М.С., Покровский В.И., Покровский В.В., Бальзарини Я., Де Клерк Э. Производные пурина, обладающие противовирусной активностью.
3. Хейнс А. Методы окисления органических соединений: алканы, алкены, алкины, арены. - М.: Мир, 1988. - 400 с.
12 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I ВЕСТНИК ВолГМУ
2004
4. Репинская И.Б., Шварцберг М.С. Избранные методы синтеза органических соединений. - Новосибирск: Изд. Новосиб. ун-та, 2000. - 282 с.
5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических ве-
Ozerov A.A., Novikov M.S., Onischenko N.V., Anan'eva O.Yu. 9-[2-(3,5-dimethylbenziloxy)ethyl]adenine: the improved synthesis and study of common pharmacological actaon // Vestnik of Volgograd state medical University. - 2004. -№ 12. - P. 17-21.
A new method of synthesis of 9-[2-(3, 5-dimethylbenzyloxy)ethyl]adenine allowed to receive the compounds of higher purity was developed. Psychopharmacological profile and haemodynamic effects of this adenine derivative were investigated. We revealed the antidepressant-like activity of this compound in the forced swimming test in the doses of 5, 10 and 50 nig/kg, that was confirmed using the model of reserpine depression in rats. We have not observed any significant changes in systolic blood pressure and heart rate in rats treated with the investigated drug.
ществ. - Под ред. В.П. Фисенко. - М.: Ремедикум. -2000. - 398 с.
6. Porsolt R.D., Le Pichon M, Jalfre M. // Nature. -1977. - Vol. 266. - No. 21. - P. 730-732.
7. Гланц С. Медико-биологическая статистика. -Пер. с англ. - М.: Практика. - 1998. - 459 с.
УДК 615:33:615.225.2(5-012)
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ МАРКЕТИНГОВЫЙ АНАЛИЗ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО РЫНКА АНТИГИПЕРТЕНЗИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ В ДАЛЬНЕВОСТОЧНОМ РЕГИОНЕ
Е.В. Слободенюк
Дальневосточный государственный медицинский университет, г. Хабаровск, кафедра клинической фармакологии ВолГМУ
Антигипертензивные препараты являются одним из наиболее значимых секторов мирового фармацевтического рынка: в 2000 г. эти препараты составляли 10 % из 250 наиболее продаваемых лекарств в мире. Объем продаж трех ведущих гипотензивных препаратов - амлодипина-бесилат, эналаприла малеат и лизиноприла превысил 5 млрд. долларов США. В рейтинге мировых продаж лекарственных средств в 2002 г. по материалам "IMS World Review 2003" среди 10 ведущих фармакотерапевтических групп были представлены три группы сердечно-сосудистых средств: гиполипидемические (21 млрд. долларов США, годовой прирост с 2001 года - 12 %), антагонисты ионов кальция (9,9 млрд. долларов, годовое снижение - 1 %) и ингибиторы ангиотен-зин-конвертирующего фермента (ИАКФ, 7,8 млрд. долларов, без динамики).
Для оценки объема продаж различных фар-макотерапевтических групп лекарственных средств представляет интерес проведение локальных (местных) фармакоэкономических исследований, так как каждый регион имеет свои особенности финансирования, уровня жизни и доходов населения. Учитывая социальную значимость артериальной гипертензии, поиск путей повышения качества лечения, выбор наиболее эффективных, безопасных, и в тоже время экономичных лекарственных средств является сегодня актуальной задачей.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Проведение фармакоэкономического анализа составляющих рынка сердечно-сосудистых средств в Дальневосточном регионе и сравнение результатов розничного товарооборота данного фармакотерапевтического класса лекарственных средств в 2002 и 2003 годах.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Проведение сравнительного анализа розничного товарооборота сердечно-сосудистых средств на фармацевтическом рынке Хабаровского края было проведено за период 2002-2003 гг. Особое внимание уделялось определению структуры потребления препаратов ИАКФ. Материалы исследования включали анализ розничных продаж антигипертензивных лекарственных препаратов (АГП) по данным розничного аудита готовых лекарственных средств в 2002 и 2003 гг. с использованием метода АВС-анализа.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Общий анализ розничных продаж в Дальневосточном регионе показал, что рейтинг группы сердечно-сосудистых средств от общего объема продаж в денежном выражении увеличился и достиг 16,5 % в 2003 г. Доля АГП в этой группе осталась прежней - около 50 %. Лидирующую позицию второй год подряд занимают ингибиторы
