CC BY
31
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
окрашивали толуидиновым синим. Подсчет проводили на единицу площади с пересчетом на 1 мм2. Для определения синтетической активности вычисляли средний гистохимический коэффициент. Для оценки функциональной активности рассчитывали индекс дегрануляции. Значимость различий при статистической обработке экспериментального материала оценивали по непараметрическому критерию Манна—Уитни.
Результаты. На 7 сутки после прокола не наблюдается каких-либо достоверных изменений в количестве тучных клеток в поврежденном семеннике, но к 30-м суткам происходит снижение этого показателя по сравнению с интактной группой. При этом синтетическая активность тучных клеток на все сроки эксперимента остается высокой. Индекс дегрануляции на 7 сутки растет, а на 30 возвращается к показателю интактных животных. После тупой травмы на 7 сутки возрастает количество тучных клеток, а на 30 сутки происходит снижение количества мастоцитов до уровня интактных животных. Вместе с количеством тучных клеток достоверно возрастает и их синтетическая активность на 7 сутки. На 30 сутки после воздействия уровень синтетической активности тучных клеток возвращается к показателям интактных животных. Индекс дегрануляции увеличивается на 7 сутки и остается таким же и на 30 сутки после тупой травмы. На 7 сутки после формирования экспериментальной модели варикоцеле не отмечается достоверных изменений в количестве тучных клеток семенников, но уже на 30 сутки данный показатель резко уменьшается. Оценивая функциональные показатели тучных клеток, отмечаем повышение их синтетической активности на 7 сутки. К 30-м суткам картина становится противоположной, и синтетическая активность резко снижается и становится достоверно меньше интактных показателей. Индекс деграну-ляции тучных клеток, в свою очередь, также значительно повышается к 7-м суткам и резко падает ниже интактного показателя к 30-м.
Заключение. Таким образом, гетерогенная тучнокле-точная популяция совершенно по-разному реагирует на различные повреждения семенника как количественными, так и функциональными изменениями. Можно предположить, что тучные клетки обладают разнонаправленным действием в зависимости от срока воздействия. Так, на ранние сроки мастоциты способствуют развитию воспаления и косвенно вызывают деструкцию органа, а на поздние сроки играют иммунорегуляторную роль в ре-паративных процессах в семеннике. Следовательно, повышение количества мастоцитов на ранние сроки может свидетельствовать об ухудшении картины восстановления, а на поздние сроки, наоборот, их повышенное количество указывает на положительный прогноз восстановления.
АКТИВАЦИЯ ТОЛЛ-ПОДОБНЫХ РЕЦЕПТОРОВ ВАКЦИНАМИ ПРОТИВ ГРИППА (IN VITRO)
Хромова Е.А., Сходова С.А, Столпникова В.Н., Кукина О.М., Ахматова Н.К., Костинов М.П.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия
Введение. Грипп остается актуальной проблемой здравоохранения на протяжении последних десятилетий. Единственным способом эффективного ограничения распространения гриппа и уменьшения тяжести его последствий является широкий охват вакцинацией групп
риска населения. Наибольшее применение, в силу своей высокой эффективности и малой реактогенности, получили инактивированные иммуноадъювантные вакцины против гриппа. В механизме формирования поствакцинального иммунитета в настоящее время отсутствует информация о сравнительной активности адъювантных и безадъювантных вакцин и их влиянии на врожденные эффекторы иммунной системы на молекулярно-клеточ-ном уровне.
Известно, что к факторам врожденного иммунитета относятся предсуществующие в организме до контакта с патогеном механизмы защиты, предназначенные для предупреждения проникновения возбудителя и для запуска раннего воспалительного ответа Toll-подобные рецепторы (TLRs), которые распознают широкий спектр пато-ген-ассоциированных молекулярных структур (PRRs).
Цель и задачи. Изучение влияния вакцин против гриппа на содержание клеток с экспрессией TLRs in vitro.
Материалы и методы. Экспрессию TLRs на МЛПК определяли методом проточной цитометрии с применением мАТ к TLR-2, TLR-3, TLR-4, TLR-5, TLR-8, TLR-9 (eBioscience, США) с использованием проточного цито-метра FC-500 (Beckman Culter, США).
Исследуемые вакцины: Инфлювак — субъединичная вакцина, Ваксигрип — сплит-вакцина. Данные вакцины содержат 2 штамма вируса гриппа А по 15 мкг, один штамм вируса гриппа В — 15 мкг. Гриппол плюс — поли-мер-субъединичная иммуноадъювантная вакцина. Содержит 2 штамма вируса гриппа А по 5 мкг, один штамм вируса гриппа В — 5 мкг и иммуноадъювант Полиоксидо-ний — 500 мкг.
Результаты. Изучение влияния данных вакцин на содержание гранулоцитов с экспрессией TLRs выявило существенное повышение экспрессии со стороны TLR-5, TLR-9. Более активным стимулирующим действием на TLR-3+ клетки обладала субъединичная вакцина (увеличение содержания в 7,2 раза), несколько ниже была активность иммуноадъювантной вакцины (увеличение в 5,1 раз), сплит-вакцина повышала экспрессию в 3,7 раз. Известно, что TLR-8 распознает одноцепочечные РНК вирусов и является специфическим рецептором для распознавания вируса гриппа. Максимально активирующим влиянием обладала субъединичная вакцина (увеличение в 5,7 раз), при этом активность сплит-вакцины была несколько ниже (в 4,1 раза). Это, вероятно, связано с костимулирующим влиянием на экспрессию TLR-8 Полиоксидония в составе иммуноадъювантной вакцины и воздействием поверхностных и внутренних вирусных белков в составе сплит-вакцины. В отношении активации лимфоцитов, экспрессирующих TLRs, было выявлено максимально активирующее влияние на эндосомаль-ные рецепторы сплит-вакцины. Под ее воздействием увеличивалась экспрессия TLR-9 в 4 раза, безадъювант-ная и адъювантная субъединичные вакцины оказывали меньшее стимулирующее влияние (увеличение в 2,8 и 3,3 раза соответственно). При инкубации МЛПК со сплит-вакциной происходило увеличение численности клеток с экспрессией TLR-8 в 10 раз. Иммуноадъювантная вакцина проявляла большую активность по сравнению с другими вакцинами только в отношении количества лимфоцитов с экспрессией TLR-4, что можно объяснить опосредованным лиганд-рецепторным взаимодействием. Также отмечено увеличение TLR-5—экспрессирующих моноцитов в 4,7 раз при стимуляции субъединичной вакциной. Выявлено, что иммуноадъювантная вакцина яв-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ляется единственной активирующей вакциной в отношении TLR-3+ моноцитов. Все вакцины являлись мощными стимуляторами TLR-9, увеличивая экспрессию в среднем в 5 раз. Примечательным явился факт, что иммуноадъю-вантная (в 2 раза) и сплит-вакцина (в 4 раза) статически значимо повышали содержание клеток с экспрессией эн-досомального рецептора TLR-8.
Вывод. Все исследуемые вакцины обладали иммуностимулирующим действием в отношении эффекторов врожденного иммунитета, так как в культуре МЛПК индуцировали нарастание численности TLRs-экспресирующих клеток. Более сильным потенциалом обладала иммуноадъювантная вакцина, повышающая численность клеток с рецепторами распознавания в 1,36,8 раз.
СУЩЕСТВУЮТ ЛИ В-ЛИМФОЦИТЫ, ТОРМОЗЯЩИЕ ОБРАЗОВАНИЕ АНТИТЕЛ И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ?
Чернышова И.Н., Гаврилова М.В., Комарова Л.В., Снегирева Н.А.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия
Введение. Гуморальный иммунный ответ у животных и человека развивается по известным правилам. При первичном иммунном ответе максимальное число антитело-продуцентов (АОК) в селезенке мышей выявляется на 4-5-е сутки после введения антигена (АГ); на 6-7-е сутки происходит их снижение почти до исходного уровня. Помимо образования АОК, введение АГ приводит также к поликлональной активации В-лимфоцитов, причем оба процесса развиваются параллельно. Известно, что при ответе на Т-зависимые АГ важную роль в регуляции гуморального ответа играют Т-лимфоциты. В то же время о клетках, участвующих в регуляции синтеза/ секреции специфичных и поликлональных иммуноглобулинов (ИГ) при ответе на Т-независимые АГ 2-го типа (ТН-2 АГ), известно сравнительно немного. В последние годы появились данные о В-клетках, обладающих регуля-торными, в частности супрессорными, свойствами. Эти клетки получили название Breg. Свойства и функциональная активность Breg изучались, главным образом, на модели воспалительных и аутоиммунных процессов. Регуляторная (супрессорная) активность таких клеток обусловлена секрецией IL-10. Для Breg характерна экспрессия CDld и CD5, а также IgM и CD24. При этом CD23 на них отсутствует. Роль этих клеток в гуморальном иммунном ответе практически не изучалась. Часть Breg принадлежит к популяции В-1 лимфоцитов. Поскольку В-1 клетки отвечают, в основном, на ТН-2 АГ, изучение роли Breg в регуляции ответа на ТН-2 АГ представляется весьма актуальным.
Цель и задачи. Проверка предположения об участии IL-10-продуцирующих В-клеток в регуляции (угнетении) образования АТ и поликлональных ИГ при ответе на ТН-2 АГ. Определение динамики образования IL-10-секретирующих В-клеток и сопоставление ее с динамикой образования АОК и иммуноглобулин-продуцентов (ИГОК) при иммунизации мышей ТН-2 АГ.
Материалы и методы. Опыты проводили на мышах линии CBA. Мышей иммунизировали ТН-2 АГ — альфа (1—^3) декстраном в дозе 5 мкг/мышь. Клетки селезенки получали на 1, 4-7-е сутки после введения АГ. Затем методом иммуномагнитной сепарации выделяли CD^+В-
клетки (чистота 95-97%) и в них определяли число АОК, ИГОК и IL-10-секретирующих клеток (IL-10+B) методом ELISPOT. В этих же клетках оценивали содержание Breg клеток с фенотипом CD5+CD1dhiCD19+ и IL-10+ В-клеток с использованием набора Regulatory B cell isolation kit методом проточной цитометрии на Beckman Coulter EPICS XL.
Результаты. Установлено, что наибольшее число АОК (2458/млн B-клеток против 188/млн в норме) наблюдалось на 4-е сутки; к 6 суткам отмечалось снижение их содержания примерно в 2 раза, к 7 суткам — в 3 раза по сравнению с пиковым значением. Сходным образом изменялось содержание ИГОК в селезенке иммунизированных мышей.
Динамика образования IL-10+В-клеток в селезенке отличалась от таковой для АОК и ИГОК. Методом ELISPOT наибольшее увеличение IL-10-секретирующих В-клеток (примерно на 30% по сравнению с нормой) выявлено на 5-е сутки, на 7-й день их содержание возвращалось к исходному уровню. Методом проточной цитометрии установлена сходная динамика: на 6-й день после иммунизации содержание IL-10+В-клеток возрастало примерно в 2,5 раза и в последующие дни снижалось. Нужно отметить, что содержание IL-10+В-клеток в селезенке было незначительным и составляло 0,40,5%.
Выявление Breg клеток с фенотипом CD5+CD1dhiCD19+ (основные продуценты IL-10) показало, что количество таких клеток в селезенке мышей в норме составляло 0,3-0,8%. После иммунизации декстраном содержание CD5+CD1dhiCD19+ клеток на 4-й день возрастало примерно в 1,5 раза и сохранялось на таком уровне до 6 дня, после чего происходило снижение их числа. Возрастание уровня CD5+CD1dhiCD19+ клеток на 4-е сутки, можно объяснить тем, что В1-клетки, имеющие такой фенотип, являются основной популяцией, отвечающей на ТН-2 АГ, и также достигают максимума на 4-5-е сутки, как указано выше.
Заключение. Выявлены различия в динамике образования АОК, ИГОК и IL-10+В-клеток в селезенке мышей при иммунизации мышей ТН-2 АГ декстраном: снижение числа АОК и ИГОК коррелировало с увеличением содержания IL-10+В-клеток и Вreg с фенотипом CD5+CD1dhiCD19+. Полученные данные свидетельствуют о возможном участии Breg клеток, продуцирующих IL-10, в регуляции (угнетении) иммунного ответа на ТН-2 АГ.
ПРОТЕАСОМЫ ПЕЧЕНИ В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ И РАЗВИТИИ ТОЛЕРАНТНОСТИ К ТРАНСПЛАНТАТУ
Шарова Н.П.1, Карпова ЯД.1, Божок Г.А.2, Астахова Т.М.1, Ерохов П.А.1, Алабедалькарим Н.М.2, Устиченко В.Д.2, Легач Е.И.2, Люпина Ю.В.1
1ФГБУН «Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова» РАН, Москва, Россия 2 Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, Харьков, Украина
Введение. Протеасомы, мультисубъединичные про-теазы, регулируют многочисленные клеточные процессы, расщепляя или подвергая процессингу компоненты сигнальных путей, транскрипционные факторы и другие белки. Особые формы протеасом млекопитающих, иммунные протеасомы, содержащие протеолитические субъединицы LMP2, LMP10 и/или LMP7, обеспечивают
