Валидация методики количественного определения кислоты салициловой в лекарственной форме методом спектрофотометрии

Евтифеева О.А.; Проскурина К.И.; Хмелева М.А.; Петухова И.Ю.

УДК: 615.074:547.575

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КИСЛОТЫ САЛИЦИЛОВОЙ В ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ МЕТОДОМ СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ

О.А. ЕВТИФЕЕВА1 К. И. ПРОСКУРИНА1 М. А. ХМЕЛЕВА2 И.Ю. ПЕТУХОВА1

1)Национальнът фармацевтический университет,

Харьков, Украина

2) Донецкий национальнът медицинский университет им. М.Горького,

Донецк, Украина

e-mail: anchem@ukrfa.kharkov.ua

Для методики количественного определения кислоты салициловой в лекарственной форме салицилово-резорцинового спиртового раствора проведена валидация согласно требованиям Государственной фармакопеи Украины. Осуществлен прогноз полной неопределенности результатов анализа спектрофотометрического определения. Для методики исследованы валидационные параметры стабильности, робастности, линейности, правильности, сходимости, воспроизводимости. Доказано, что методика может быть корректно воспроизведена и пригодна для дальнейшего использования.

Ключевые слова: валидация методик количественного определения, салициловая кислота, спектрофотометрия.

Введение. Гарантией эффективности и безопасности лекарственных средств (ЛС) является создание национальных стандартов их качества. Для установления соответствия качества ЛС регламентируемым требованиям необходимо применение различных аналитических методов. Вывод о качестве ЛС в значительной степени зависит от качества самого метода. Поэтому необходимо оценивать пригодность аналитических методов для предполагаемого их применения [1, 2, 3].

Ранее нами были изучены условия протекания реакции образования комплексного соединения при взаимодействии кислоты салициловой и алюминия хлорида. Установлены соотношения кислоты салициловой и алюминия хлорида, при которых комплекс становится стабильным и характеризуется постоянным максимумом поглощения при длине волны 314 нм. На основе реакции для быстрого, простого и точного количественного определения кислоты салициловой в лекарственной форме салицилово-резорцинового спиртового раствора была разработана методика, которая базируется на методе спектрофотометрии [4]. Согласно требованиям Государственной фармакопеи Украины (ГФУ) методики должны быть валидированы [3].

Целью работы является проведение валидации методики количественного определения кислоты салициловой методом спектрофотометрии в лекарственной форме 4% салицилово-резорцинового спиртового раствора.

Материалы и методы. Для проведения исследований использовали субстанции производства China Jiangsu Medicines & Health Products Import & Export (Group) Corporation кислоты салициловой (серия № 1004020) и резорцина (серия № HF20100701), которые отвечают требованиям ГФУ [3].

Для работы применяли мерную посуду класса А, реактивы, которые отвечают требованиям ГФУ, аналитические весы АВ 204 S / A METTLER TOLEDO, спектрофотометр «SPECORD 200».

Для эксперимента объектом исследования была выбрана экстемпоральная лекарственная форма - 4% салицилово-резорциновый спиртовой раствор, которая была изготовлена, учитывая правила аптечной технологии по прописи:

Кислоты салициловой 4,0 г

Резорцина 4,0 г

Спирта 70% до 100 мл.

Методика количественного определения кислоты салициловой: 1,00 мл 4% салициловорезорцинового спиртового раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100,00 мл и доводят объем раствора спиртом 70% до 100,00 мл. 5,00 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100,00 мл, добавляют 1,00 мл 1,00% раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора спиртом 70% до 100,00 мл. Раствор сравнения - спирт 70%. Оптическую плотность полученного раствора измеряют в максимуме поглощения при длине волны 314 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Стандартный раствор: 0,2 г (точная навеска) кислоты салициловой помещают в мерную колбу вместимостью 100,00 мл и доводят объем раствора спиртом 70% до 100,00 мл. 1,00 мл полу-

ченного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100,00 мл, добавляют 1,00 мл 1,00% раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора спиртом 70% до 100,00 мл.

Содержание кислоты салициловой в процентах (Х) вычисляют по формуле:

А х Г . X 100 100100

X = -1---^----------------,

Ast х 1 х 5

где Ai - оптическая плотность аналитического раствора препарата;

Ast - оптическая плотность стандартного раствора;

Cst - концентрация стандартного раствора (в г/мл).

Приготовление модельныхрабочих растворов: готовили пять модельных растворов согласно диапазону применения методики [5] в концентрациях: 80,00%, 90,00%, 100,00%, 110,00%, 120,00% от номинальной. Точные навески резорцина и кислоты салициловой (m, г) помещали в мерную колбу вместимостью 100,00 мл и доводили спиртом 70% до 100,00 мл.

Приготовление раствора плацебо: 0,2 г (точная навеска) резорцина помещают в мерную колбу вместимостью 100,00 мл и доводят объем раствора спиртом 70% до 100,00 мл 1,00 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100,00 мл, добавляют 1,00 мл 1,00% раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора спиртом 70% до 100,00 мл.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили согласно статье ГФУ «Статистический анализ результатов химического эксперимента» N [3].

Результаты и их обсуждение. Согласно содержанию кислоты салициловой в лекарственной форме, учитывая требования нормативной документации [5, 6], был выбран диапазон применения методики от 80,00% до 120,00%. Рассчитаны критерии приемлемости метрологических характеристик для методики анализа, которые приведены в табл. 1 [7, 8].

Таблица 1

Критерии приемлемости метрологических характеристик методики количественного определения кислоты салициловой

Критерии приемлемости метрологических характеристик Величина критического значения в %

Допуски содержания по требованиям ГФУ ±10,00

Максимально допустимая полная неопределенность методики - maxДAs 3,20

Максимальная систематическая погрешность - тахб 1,02

Критическое значение остаточного стандартного отклонения - RSDo%< 1,81

Индекс корреляции - Rc> 0,9924

Критическое практически незначимое значение свободного члена - а< 5,12

Согласно требованиям ГФУ [3] для методик количественного определения необходимо обязательно делать прогноз максимально допустимой неопределенности результатов, чтобы оценить корректность воспроизведения методики в другой лаборатории (табл. 2) [9]. Прогноз неопределенности методики проводили по расчетам неопределенности пробоподготовки (стадий взвешивания и разведения) и неопределенности конечной аналитической операции [3]. Используя фармакопейные требования к предельно допустимым погрешностям для мерной посуды, весов и приборов и значение неопределенности конечной аналитической операции -0,70% [10], провели расчеты полной неопределенности методики количественного определения кислоты салициловой по формуле: д^ = ^(д2р + Дрд^) [3]. Полная неопределенность методики

отвечает требованиям: ДАв =^(1,08 + 0,70) = 1,29% maxX^ = 3,2% [3].

Специфичность методики исследовали по изучению относительной систематической погрешности (Snoise,%), которая может вноситься вспомогательными веществами или продуктами разложения при определении вещества. Чтобы определить влияние плацебо, измеряли оптическую плотность (Ablank) раствора плацебо три раза с извлечением кюветы. Параллельно измеряли оптическую плотность (Ast) стандартного раствора. Было найдено среднее значение раствора плацебо: Ablank = 0,0057; Ast = 0,7153. Относительную систематическую погрешность, которая вносится вспомогательными веществами, рассчитывали по формуле: (100х0,0057)/0,7153=0,79% [10]. Согласно полученным данным выполняется неравенство 5noise=0,79%<max5=i,02%, то есть фоновое поглощения является незначимым, а методика характеризуется допустимой специфичностью.

Таблица 2

Оценка неопределенности пробоподготовки методики количественного определения кислоты салициловой

Операция пробоподготвки Параметр Неопределенность, %

Стандартный раствор

Взвешивание на аналитических весах, г mst 0,0002/0,2x100 = 0,10