СВЯЗЬ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ α С РАЗВИТИЕМ И ОСОБЕННОСТЯМИ ТЕЧЕНИЯ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА

Ельчанинова Светлана Александровна; Смагина Инна Вадимовна; Ночевная Ольга Михайловна; Переверзева Ольга Васильевна; Игнатова Юлия Николаевна—Канд. Мед. Наук

СВЯЗЬ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ а С РАЗВИТИЕМ И ОСОБЕННОСТЯМИ ТЕЧЕНИЯ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА

С.А. Ельчанинова1, И.В. Смагина2' 3, О.М. Ночевная3, О.В. Переверзева1, Ю.Н. Игнатова2 3

1Кафедра биохимии и клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития РФ; 2кафедра нервных болезней с курсом неврологии и рефлексотерапии ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития РФ; 3КГБУЗ Краевая клиническая больница, Барнаул

Изучены ассоциации полиморфизма локуса rs1800629 гена фактора некроза опухоли a (TNFa) с риском развития и особенностями течения рассеянного склероза (РС), а также с уровнем TNFa в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) у больных РС, русских, проживающих в Алтайском крае. Не обнаружено значимой ассоциации РС с генотипом исследованного полиморфного локуса TNFa, однако выявлена связь сочетания женского пола и аллеля A гена TNFa (rs1800629) с РС (отношение шансов равно 5,01; 1,19 ± 21,14; p = 0,028). Не обнаружено как ассоциации генотипа TNFa (rs1800629) с высокой скоростью прогрессирования РС, так и связи носительства аллеля A в гене TNFa (rs1800629) с уровнем TNFa в ЦСЖ (r = 0,08, p = 0,714). Выявлена положительная связь между количеством обострений за 3 года и уровнем TNFa в ЦСЖ (r = 0,58, p = 0,041), что может объясняться участием этого цитокина в инициации иммунного воспаления в ЦНС.

Ключевые слова: рассеянный склероз, ген, фактор некроза опухоли a

Association of locus rs1800629polymorphism of tumor necrosis factor alpha (TNF-a) gene with the risk of development and progression of multiple sclerosis (MS) and the level of TNF-a in cerebrospinal fluid (CSF) was studied in MS patients, living in Russia in Altai region. We did not reveal significant correlation between MS and genotype of the polymorphic locus of TNF-a gene, however we revealed significant correlation between female gender with allele A TNF-a gene (rs1800629) and MS (OR = 5,01; CI = 1,19^21,14; р = 0,028). The association of rs1800629 genotype of TNF-a with rapid progression of MS was not found, as well as the relation of carriership of allele А TNF-a gene (rs1800629) with the level of TNF-a in CSF (r = 0,08, p = 0,714). Positive correlation between the rate of relapses during the last three years and the level of TNF-a in CSF (r = 0,58, p = 0,041) can be explained by the contribution of this cytokine in activation of immune inflammation in the central nervous system.

Key words: multiple sclerosis, gene, tumor necrosis factor a

Рассеянный склероз (РС) является одной из наиболее социально значимых проблем неврологии [2]. Несмотря на достижения последних лет, которые позволили объяснить ряд закономерностей этиологии, патогенеза, клинического течения и особенностей ответа на иммуномодулирующую терапию, данное заболевание остается сложнопредсказуемым [4].

Известно, что в основе патогенеза РС лежат процессы аутоиммунного воспаления и нейроде-

Россия, Барнаул, 656024, ул. Ляпидевского, 1 Russia, Barnaul, 656024, Lyapidevskogo str., 1 Сведения об авторах:

Ночевная Ольга Михайловна — врач-невролог отд-ния неврологии КГБУЗ Краевая клиническая больница, Барнаул, e-mail: olga279_87@mail.ru;

Смагина Инна Вадимовна — канд. мед. наук, доц., врач-невролог отд-ния неврологии КГБУЗ Краевая клиническая больница, Барнаул, e-mail: siv7000@yandex.ru; Ельчанинова Светлана Александровна — д-р биол. наук, проф., зав. каф. биохимии и клинической лабораторной диагностики Алтайского государственного медицинского университета, консультант КГБУЗ Краевая клиническая больница, Барнаул, e-mail: elch@bk.ru;

Переверзева Ольга Васильевна — ассистент каф. биохимии и клинической лабораторной диагностики Алтайского государственного медицинского университета, Барнаул; Игнатова Юлия Николаевна—канд. мед. наук, врач-невролог отд-ния неврологии КГБУЗ Краевая клиническая больница, Барнаул.

генерации в ЦНС. Инициация патологического процесса происходит в периферической крови и включает специфическую активацию аутореак-тивных СБ4+Т-клеток. Обсуждаются различные механизмы активации: участие суперантигенов, молекулярная мимикрия, а также избыточная экспрессия таких провоспалительных цитокинов, как фактор некроза опухоли а (ТОТа), интерферон-у, и др. [2].

Важным патогенетическим феноменом считают повышение уровня ТОТа в плазме крови и ликворе у больных РС [1—3]. Источником этого цитокина в ЦНС является глия, а основным биологическим эффектом — повреждение миелина и олигодендро-цитов, поэтому секрецию ТОТа рассматривают как составляющую одного из главных механизмов повреждения нервной ткани [6].

В отдельных популяциях выявлена ассоциация РС с полиморфными вариантами последовательности -3080-> А гена ТОТа, который располагается на хромосоме 6 между регионами ИЬА-В класса I и ИЬА класса III [5].

В связи с этим целью исследования стало изучение ассоциации полиморфного локуса ге1800629 гена ТОТа с риском развития и особенностями течения РС, а также с ликворным уровнем ТОТа в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) у больных РС Алтайского края.

НЕВРОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 6, 2012

Таблица 1

Риск развития РС в зависимости от носительства аллеля А в полиморфном локусе ^1800629 гена ТМГа

Таблица 3

Относительный риск высокой скорости прогрессирования РС в зависимости от генотипа ТМГа (^1800629)

Модель наследования

Отношение шансов, М (ДИ)

Аддитивная

Доминантная

Рецессивная

0,84 (0,47—1,50) 0,90 (0,47—1,72) 0,32 (0,03—3,19)

0,558 0,741 0,336

Пациенты и методы исследования

В исследование были включены 100 больных с ремиттирующим РС, проживающих на территории Алтайского края, русских по этнической принадлежности. Средний возраст больных 36,5 ± 11,4 года, длительность заболевания 7,2 ± 1,4 года, инвалидизация по шкале Expanded Disability Status Scale (EDSS) 3,4 ± 1,7 балла. Диагноз выставляли по критериям McDonald (2005 г.). Скорость прогрес-сирования РС рассчитывали по отношению EDSS на момент обследования к длительности болезни. Группа контроля, сформированная из 100 лиц, не страдающих РС и другими аутоиммунными заболеваниями, не отличалась от группы больных РС по возрасту, половому составу, месту рождения и проживания до 15 лет, возрасту прибытия на территорию Алтайского края.

Концентрацию TNFa в ЦСЖ определили у 60 из 100 больных РС. Исследование проводили в период обострения до начала терапии кортикостеро-идами и ремиссию, не ранее чем через 3 мес после прекращения фармакотерапии. Длительность заболевания в этой группе больных составила 7,4 ± 1,3 года, скорость прогрессирования РС 0,57 ± 0,19 балла/год.

Проведение исследования разрешено этическими комитетами КГБУЗ Краевая клиническая больница и ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития РФ. Все участники исследования дали письменное информированное согласие на включение в данное исследование.

Для генетических исследований ДНК выделяли из венозной крови с применением стандартной процедуры, включающей выделение и лизис клеток крови, гидролиз белков протеиназой К, очистку ДНК экстракцией примесей фенол-хлороформом и

Таблица 2

Риск развития РС в зависимости от генотипа TNFa (rs1800629)

Генотип Количество генотипов Отношение шансов, М (ДИ) Р

контроль РС

G/G 75 77 Не оценивали с учетом большого

количества генотипа

G/A 22 22 0,97 (0,49—1,91) 0,941

A/A 3 1 0,28 (0,03—2,76) 0,272

Скорость прогрессирования Частота генотипов, % Отношение шансов, М (ДИ) Р

РС G/G G/A A/A

Медленная (< 0,25 балла/год) 27 9 0 0,88 (0,39—1,96) 0,761

Средняя (от 0,25 до 0,75 балла/ год) 29 6 0 0,58 (0,23—1,46) 0,663

Высокая (> 0,75 балла/год) 21 7 1 1,74 (0,69—4,39) 0,344

осаждение ДНК этанолом. Генотипирование одно-нуклеотидной замены (SNP) в гене TNFa (-308G-> A, rs 1800629) проводили с помощью полимераз-ной цепной реакции в режиме реального времени на амплификаторе iCycler iQ5 (Bio-Rad, США) с использованием конкурирующих TaqMan-зондов, комплементарных полиморфным участкам ДНК. Концентрацию TNFa в ликворе, забранном при люм-бальной пункции, измеряли методом иммунофер-ментного анализа с использованием реагентов и по протоколу «Biosource Europe S.A.» (Бельгия).

Статистический анализ выполнен в программе Statistica v. 6.0. Сравнение выборочных средних проводили с помощью ^-критерия Манна—Уит-ни. Корреляции оценивали по критерию Спирмена (rs). Соответствие частот генотипов распределению Харди—Вейнберга анализировали с применением критерия х2 в программе R. language v. 2.11.1. Для проверки гипотез о наличии ассоциации признаков использовали лог-регрессионный анализ с оценкой относительного риска по отношению шансов (ОШ). Анализ ассоциации редкого аллеля А полиморфного локуса rs1800629 гена TNFa с РС проводили для трех моделей наследования признака: аддитивной, доминантной и рецессивной. Результаты представлены в виде выборочного среднего (М) с указанием стандартного отклонения (SD) или 95% доверительного интервала (ДИ). Для всех использованных статистических критериев принят критический уровень значимости p < 0,05.

Результаты и обсуждение

При анализе результатов исследования установили, что распределение генотипов TNFa (rs1800629) соответствовало распределению Харди—Вейнберга у больных РС и в группе контроля (p = 0,68 и p = 0,39 соответственно). Частота аллеля A в контрольной группе (0,14) и у пациентов с РС (0,12) не различалась (p = 0,55).

При логистическом регрессионном анализе с поправкой на пол не выявили значимой ассоциации ал-леля A TNFa (rs1800629) с РС ни для одной из трех моделей наследования - аддитивной, доминантной, рецессивной (табл. 1).

Также не обнаружили значимой ассоциации РС с генотипом исследованного полиморфного локу-

са TNFa (табл. 2). Следует отметить, что данные о связи полиморфизма последовательности -3080>Л гена TNFa с предрасположенностью к РС, полученные в разных популяциях, неоднозначны. В ряде исследований не выявлено ассоциации полиморфного локуса TNFa (ге1800629) с РС, тогда как в отдельных работах показан протективный эффект аллеля Л этого локуса [7]. Такая разнородность данных может отражать как генетическую гетерогенность РС в разных популяциях, так и то, что данный полиморфный локус сцеплен с функциональным полиморфизмом, предрасполагающим к развитию РС.

Выявили сочетания женского пола и аллеля Л гена TNFa (ге1800629) с РС (ОШ = 5,01; 1,19—21,14; p = 0,028). Это подтверждает мнение ведущих российских исследователей в области генетики РС о том, что при выявлении предрасположенности к РС анализ сочетаний генов может обеспечить большую статистическую мощность в связи с мультифактор-ным характером этого заболевания [8].

Не обнаружили ассоциации генотипа TNFa (ге-1800629) с высокой скоростью прогрессирования РС (табл. 3).

По результатам исследования ликвора установили, что при обострении по сравнению с периодом ремиссии концентрация ТОТа была повышена в 5,2 раза ^ = 0,031). Это соответствует представлениям об активации воспалительной компоненты патологического процесса в ЦНС при обострении РС [9].

Не обнаружили связи носительства аллеля А в гене TNFa (ге1800629) с ликворным уровнем ТОТ а (г = 0,08, p = 0,714). Однако выявили положительную корреляционную связь между количеством обострений за 3 года и уровнем ТОТа (^ = 0,58; p = 0,041). Уровень этого цитокина в ЦНС выше медианы (23 пг/мл) ассоциирован с повышенным ри-

ском обострений РС в ближайшие 3 года (ОШ = 3,05; 1,91—6,88; p = 0,023).

Таким образом, полиморфизм гена TNFa (rs1800629) у женщин ассоциирован с риском развития РС в Алтайском крае. Высокий ликворный уровень TNFa в ЦНС в период обострения РС не связан с полиморфизмом гена TNFa (rs1800629), однако является прогностически неблагоприятным в отношении частоты последующих обострений заболевания, что необходимо учитывать при выборе тактики терапии. Можно полагать, что эффект TNFa как фактора экзацербации РС реализуется через инициацию этим цитокином иммунного воспаления в ЦНС.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гусев Е.И., Завалишин И.А., Бойко А.Н. Рассеянный склероз и другие демиелинизирующие заболевания. — М.: Миклош, 2004.

2. Гусев Е.И., Завалишин И.А., Бойко А.Н. Рассеянный склероз: Клиническое руководство. М.: Реал Тайм, 2011.

3. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С. Цитокины. СПб: ООО «Изд-во Фолиант», 2008.

4. Шмидт Т.Е., Яхно Н.Н. Рассеянный склероз: руководство для врачей. — 3-е изд. — М.: МЕДпресс-информ, 2012.

5. Oksenberg J. Baranzini S. Role genomics in studying MS // Int. J. MS. — 2002. — Vol. 9, N 3. — P. 91—99.

6. Bielekova B., Martin R. Development of biomarkers in multiple sclerosis // Brain. — 2006. — Vol.127. — P. 1463—1478.

7. Drulovic J., Popadic D., Mesaros S. et al. Decreased frequency of the tumor necrosis factor alpha -308 allele in Serbian patients with multiple sclerosis // Eur. Neurol. — 2003. — Vol. 50, N 1. — Р. 25—29.

8. Favorova O.O., Favorov A.V., Boiko A.N. et al. Three allele combinations associated with multiple sclerosis // BMC Med. Genet. — 2006. — Vol. 7. — P. 63—70.

9. Hohlfeld R., Kerschensteiner M., Meinl E. Dual role of inflammation in CNS disease // Neurology. — 2007. — Vol. 68. — P. 58—63.

СВЯЗЬ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ α С РАЗВИТИЕМ И ОСОБЕННОСТЯМИ ТЕЧЕНИЯ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Association of tumor necrosis factor α with developing and progression of multiple sclerosis

Текст научной работы на тему «СВЯЗЬ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ α С РАЗВИТИЕМ И ОСОБЕННОСТЯМИ ТЕЧЕНИЯ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА»