CC BY
71
УДК 616.711-007.55:575.174.015.3
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ИНСУЛИНОПОДОБНЫХ ФАКТОРОВ РОСТА I И II ТИПОВ
И ИДИОПАТИЧЕСКИЙ СКОЛИОЗ
© Рыжков И.И., Райгородская М.А., Борзилов Е.Е., Дедков А.А., Спицын В.А., Полоников А.В.
Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия; Медико-генетический научный центр РАМН, Москва, Россия
E-mail: ryzhkcoff@,rambler. га
Методом ПЦР-ПДРФ генотипированы образцы ДНК 300 детей с идиопатическим сколиозом и 300 здоровых детей. Ассоциации между полиморфизмом гена IGF-I -1245 G/A и идиопатическим сколиозом отсутствуют. Генотип АА полиморфизма гена IGF II +3123 G/A чаще встречается у здоровых лиц; в то же время гетерозиготность по данному полиморфизму чаще встречается у больных идиопатическим сколиозом. У больных сколиозом гомозигот IGF II +3121 АА отмечается меньшая выраженность деформации позвоночника по данным оптико-топографического исследования. Ассоциации между рентгенометрическими параметрами и полиморфными вариантами генов инсулиноподобных факторов роста не выявлено. Статистически значимо увеличение значения латерального отклонения в вершине первичной сколиотической дуги у гетерозигот IGF I -1245 GA.
Ключевые слова: идиопатический сколиоз, инсулиноподобный фактор роста, ДНК-полиморфизм, наследственная предрасположенность.
POLYMORPHISM OF INSULIN-LIKE GROWTH FACTORS I AND II IN ADOLESCENT
IDIOPATHIC SCOLIOSIS Ryzhkov I.I., Raygorodskaya M-А., Borzilov E.E., Dedkov A.A., Spitsyn V.A., Polonikov A. V.
Kursk State Medical University, Kursk;
Medico-Genetic Scientific Center of RAMS, Moscow, Russia DNA samples of 300 children with idiopathic scoliosis and 300 healthy children were genotyped by PCR-RFLP. Associations between polymorphism of gene IGF-I -1245 G/A and idiopathic scoliosis are absent. Genotype АА of polymorphism of gene IGFII +3123 G/A meets at controls is more often; heterozygotes on this polymorphism meets at sick of idiopathic scoliosis is more often. In homozygotes IGF II +3121 AA with idiopathic scoliosis deformation of spine according to optiko-topographical research is decreased. Associations between roentgenometrical parameters and polymorphic variants of genes insulin-likes growth factors it is not revealed. The increase in value of a lateral deviation in primary scoliotic valve at heterozygotes IGF I-1245 GA is statistically significant.
Keywords: genetic testing, predictive diagnostics, common diseases.
Сколиотическая болезнь определяется как сложная трехплоскостная деформация позвоночника, прогрессирующая с ростом и развитием организма и сопровождающаяся структурными изменениями тел позвонков. Если исключить из числа всех деформаций позвоночника случаи врожденных деформаций, первичной неврологической патологии, синдромальной патологии (синдром Марфана, синдром Элерса-Данло и пр.), нейрофиброматоз, эндокринные заболевания, системные заболевания соединительной ткани -останется 80% сколиозов, называемых идиопати-ческими. На сегодняшний день есть основания полагать, что идиопатический сколиоз относится к группе мультифакториальных заболеваний.
Факторами роста называют группу белковых молекул, индуцирующих синтез ДНК в клетке. Главное отличие факторов роста от белковых гормонов - аутокринный или паракринный механизм действия (холокринный механизм действия для гормонов). Инсулиноподобные факторы роста (insulin-like growth factors) I и II типа образу-
ются под влиянием соматотропного гормона в печени и других тканях. Эти факторы роста экспрессируются в основном в тканях опорнодвигательной системы. В костной и хрящевой тканях инсулиноподобный фактор роста I типа (IGF-I) регулирует пролиферацию и созревание клеток, тормозит апоптоз, стимулирует продукцию остеоцитами и хондроцитами компонентов внеклеточного матрикса [1, 5, 16]. В мышечной ткани под влиянием IGF-I и ЮF-П повышается содержание белка, останавливается деградация и развивается гипертрофия, а также обеспечивается достаточное усвоение глюкозы как основного энергетического материала [10]. Под влиянием инсулиноподобного фактора роста II типа (IGF-II) увеличивается продукция хондроцитами молекул межклеточного матрикса, в основном агрекана и версикана [6]. Генетические вариации IGF-II ассоциируются с такими показателями, как телосложение, вес при рождении, сила кистевого схвата в среднем возрасте, а также индекс массы тела [13].
Показано, что прогрессирование сколиоза находится в прямой зависимости от уровня IGF-I в сыворотке крови [14]. Однако на сегодняшний день число работ о генетическом полиморфизме инсулиноподобных факторов роста при идиопа-тическом сколиозе невелико [17, 18].
Таким образом, основной целью нашей работы стало изучение генетического полиморфизма инсулиноподобных факторов роста I и II типов (rs35767 и rs680) в связи с возникновением и особенностями течения идиопатического сколиоза.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалом для исследования послужила выборка неродственных детей и подростков русской национальности в возрасте от 8 до 18 лет, получавших лечение по поводу идиопатического сколиоза на базе детской городской больницы № 19 им. Т.С. Зацепина (г. Москва). Всем детям проводилось клинико-рентгенологическое обследование. Исключались случаи врожденных деформаций позвоночника, первичной неврологической патологии, синдромальной патологии (синдром Марфана, синдром Элерса-Данло), нейрофибро-матоз, эндокринные заболевания, системные заболевания соединительной ткани. Все пациенты и их родители информировались о целях и задачах исследования; исследование разрешено региональным этическим комитетом (14.04.08).
Обследование включало рентгенографию позвоночника в прямой проекции. Описание рентгенограмм, определение первичной дуги сколиоза, расчет величины угла сколиотической деформации и торсионного компонента производились по методу Кобба. Применялась компьютерная оптическая топография (ООО "Метос", 20032010); для анализа использованы такие параметры, как угол латеральной асимметрии - топографический аналог угла Кобба; угол ротации позвоночника в вершине дуги относительно ее границ; латеральное отклонение осевой линии позвоночника в вершине дуги.
В анкетах фиксировались возраст, пол, диагноз, костный возраст, телосложение, уровень физической активности, занятия спортом (последние три - по трехбалльной системе). Геноти-пированы образцы ДНК 300 детей с идиопатиче-ским сколиозом и 300 здоровых детей. Статистически значимых различий между основной и контрольной группами по возрастно-половому составу не было.
Выделение ДНК из периферической венозной крови осуществлялось стандартным фенол-хлороформенным методом с использованием протеиназы К [11]. Дизайн олигонуклеотидов
проводился с использованием программного обеспечения Gene Runner 3.05 (Hastings Software, Hastings-on-Hudson, NY) на матрицах IGF-I (rs35767) и IGF-II (rs680)
(http: //www .ncbi.nlm.nih .gov).
Полимеразная цепная реакция проводилась в объеме 15 мкл в стандартной реакционной смеси. Для генотипирования полиморфизма IGF-I -1245 G/A (rs35767) в качестве прямого праймера использовали 5’-A G T G C A C C A T T G A C A C A A C A T A A T - 3’, в качестве обратного - 5’-C A A A A G C C C A G A G C A G A C A T A C -3’. Амплификация осуществлялась на аппарате "Терцик" по следующей программе: предварительная денатурация ("горячий старт") проводилась при температуре 95о в течение 4 мин; затем осуществлялось 40 амплификационных циклов, состоящих из денатурации в течение 30 сек, отжига праймеров при температуре 66о в течение 45 сек и элонгации при температуре 72о в течение 30 сек. Финальная элонгация проводилась в течение 10 мин.
Рестрикционный анализ амплификатов (367 пар нуклеотидов) проводили с использованием эндонуклеазы BspAC I (Сибэнзим, Новосибирск), согласно рекомендациям производителя. Продукты рестрикции подвергали электрофорезу в 2% агарозном геле в течение 20 минут с окрашиванием этидиум бромидом и визуализацией в UV-свете. Гомозиготный минорный генотип обозначали как AA - отсутствие сайта рестрикции (367 п.н.); как GG - гомозиготный вариант с наличием сайта рестрикции для BspAC I и размерами 258 п.н. и 109 п.н. и GA - гетерозиготный генотип (367 п.н., 258 п.н. и 109 п.н.).
Для генотипирования полиморфизма гена IGF-II +3123 G/A (rs680) в качестве прямого праймера использовали 5’-C T T G G A C T T T G A G T C A A A T T G G - 3’, в качестве обратного - 5 - C C T C C T T T G G T C T T A C T G G G -3’. Амплификация осуществлялась на аппарате "Терцик" по следующей программе: предварительная денатурация ("горячий старт") проводилась при температуре 95о в течение 4 мин; затем осуществлялось 40 амплификационных циклов, состоящих из денатурации в течение 30 сек, отжига праймеров при температуре 62о в течение 30 сек и элонгации при температуре 72о в течение 30 сек. Финальная элонгация проводилась в течение 10 мин.
Рестрикционный анализ амплификатов (236 пар нуклеотидов) проводили с использованием эндонуклеазы ApaI (Сибэнзим, Новосибирск), согласно рекомендациям производителя. Продукты рестрикции подвергали электрофорезу в 2% агарозном геле в течение 25 минут с окрашиванием этидиум бромидом и визуализацией в UV-
свете. Гомозиготный минорный генотип обозначали как AA - отсутствие сайта рестрикции (236 п.н.); как GG - гомозиготный вариант с наличием сайта рестрикции для ApaI и размерами 173 п.н. и 63 п.н. и GA - гетерозиготный генотип (236 п.н., 173 п.н. и 63 п.н.).
Контроль качества генотипирования был проведен на 5% пациентов и результаты проверки полностью соответствовали первоначальным данным генотипирования.
Независимость распределения аллелей (распределение Харди-Вайнберга) проверялось при помощи критерия %2. Для оценки распределения генотипов и частот аллелей между основной и контрольной группами вычислялись отношение шансов (odds ratio, OR) и 95% доверительный интервал (95% confidence interval, 95% CI). Оценка ассоциации рентгенометрических и оптикотопографических показателей с генотипами проводилась при помощи методов непараметрической статистики (критерии Краскела-Уоллеса, Манна-Уитни). Статистический анализ проводился при помощи программы Statistica 6.1 (Statsoft Inc., USA).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В основной группе были 144 мальчика и 156 девочек (48% и 52%); в контрольной - 140 мальчиков и 160 девочек (46,7% и 53,3%). Средний возраст детей основной группы составил 13,3 года, контрольной группы - 12,8 года. Различий между группами по возрастному и половому составу не было.
Отклонения частот генотипов IGF-I -1245 G/A от равновесия Харди-Вайнберга в основной и контрольной группах не наблюдалось (%2=0,22 в основной группе; %2=2,79 в контрольной группе; p>0,05). Также не наблюдалось отклонения частот генотипов IGF-II +3123 G/A от равновесия Харди-Вайнберга в основной и контрольной группах (%2=1,66 в основной группе; %2=3,37 в контрольной группе; p>0,05).
Функциональность полиморфизма гена IGF-I -1245 G/A определяется следующими критериями: частота минорного аллеля (А) находится в
пределах от 12 до 42% в различных популяциях; локализация в промоторной области 1 влияет на уровень экспрессии гена IGF-I и содержание IGF-I в сыворотке крови [12]; исследуемый полиморфизм находится в тесной связи с полиморфизмом, включающим 192-Ьр СА тандемных повторов в промоторе 1, функциональная важность которого доказана [4]. Область исследований данного полиморфизма включает особенности телосложения человека, закономерности роста и формирования организма. Так, гомозиготы GG ассоциируются с фенотипом, который можно описать как результат снижения функции IGF-I, как то: повышенным уровнем жировых отложений в области туловища и общим уровнем жировой ткани в организме, а также сниженной минеральной костной плотностью и мышечной массой [8]. Аллель А полиморфизма IGF-I -1245 G/A ассоциирован с уменьшением размера черепа и головного мозга у недоношенных новорожденных
[4].
Частоты аллелей полиморфизма гена IGF-I -1245 G/A, представленные в табл. 1, между собой статистически достоверно не различались ^=1,11; 95% а 0,85-1,44; р=0,46). Частоты генотипов полиморфизма гена IGF-I -1245 G/A (таблица 2) между собой также статистически значимо не различались (р>0,05). Таким образом, полученные нами данные о распределении генотипов полиморфизма гена IGF-I -1245 G/A при идиопатическом сколиозе согласуются с уже известными [18].
Полиморфизм гена ЮF-П ге680 локализован в 3’UTR. В литературе данный полиморфизм обозначается по-разному: +3123/ApaI, ApaI, ге680, G17200A и G820A [2, 7, 9, 15]. На сегодняшний день нет единства мнений о том, который из аллелей считать основным, а который минорным. Так, в международной базе данных NCBI (http://wwwлcЫ.nlm.шh.gov/nuccore/NG_008849Л ?from=5001&to=25487&report=genbank) в положении 17200 обозначен нуклеотид A, и эта информация используется в работе [9], однако основное количество авторов считает, что диким аллелем данного полиморфизма является аллель G, а мутантным - аллель А [2, 15]. Частоты алле-
Таблица 1
Распределение частот аллелей полиморфизмов генов IGF-I -1245 G/A и IGF-II +3123 G/A в основной и контрольной группах.
Ген Полиморфизм Аллели Частоты аллелей p
Основная группа (n=300) Контрольная группа (n=300)
IGF-I -1245 G/A -1245 G 0,752 0,770 0,46
-1245 A 0,248 0,230
IGF-II +3123 G/A +3123 G 0,352 0,302 0,06
+3123 A 0,648 0,698
Таблица 2
Распределение частот генотипов полиморфных вариантов генов IGF-I -1245 G/A и IGF-II +3123 G/A в основной и контрольной группах.
Частоты генотипов
Основная группа Контрольная группа
Ген Полиморфизм Генотипы (n=300) (n=300) p
n % n %
-1245 GG 168 56,0 183 61,0 0,25
IGF-I -1245 G/A -1245 GA 115 38,3 96 32,0 0,12
-1245 AA 17 5,7 21 7,0 0,62
+3123 GG 32 10,7 34 11,3 0,9
IGF-II +3123 G/A +3123 GA 147 49,0 113 37,7 0,01
+3123 AA 121 40,3 153 51,0 0,01
лей в различных популяциях составляют: G - от
0,51 до 0,718; А - от 0,282 до 0,41 [2, 9]. Наиболее частое приложение исследований данного полиморфизма - оценка типа телосложения, мышечной массы, работы мышц [3, 7, 9, 15], причем у носителей аллеля А отмечаются более выраженные катаболические эффекты [2].
Как видно из табл. 1, статистически достоверные различия частот аллелей полиморфизма гена IGF-II +3123 G/A ^=0,8; 95% а 0,63-1,01; р=0,06) в группе больных идиопатическим сколиозом и контрольной отсутствуют. Однако мы считаем, что низкий уровень ошибки второго рода ф=0,06) не позволяет с уверенностью заявить об отсутствии ассоциации аллельных вариантов этого полиморфизма с идиопатическим сколиозом и требует проведения дальнейших исследований на выборках пациентов большего объма. Также заслуживают внимания впервые отмеченные в русской популяции частоты аллелей: G - 0,3-0,35; A - 0,65-0,7, отличающиеся от уже известных.
В распределении частот генотипов полиморфизма гена IGF-II +3123 G/A (табл. 2) обнаружены следующие закономерности: гетерозиготный генотип GA статистически достоверно чаще встречается в группе больных идиопатическим сколиозом ДО=1,59; 95% С1 1,15-2,20; р=0,01), а гомозиготный генотип AA - в контрольной группе ^=0,65; 95% С1 0,47-0,90; p=0,01).
По результатам распределения аллелей и генотипов можно сделать заключение о том, что аллель А полиморфизма гена IGF II +3123 G/A, наличие которого в генотипе предопределяет ка-таболические эффекты в поперечнополосатой мускулатуре, в отношении возникновения идиопа-тического сколиоза обладает протективным действием; в то же время гетерозиготность по данному полиморфизму, наоборот, является прерогативой больных сколиозом.
Для оценки характера течения идиопатиче-ского сколиоза мы проанализировали рентгенометрические и оптико-топографические показатели в ассоциации с генетическим полиморфизмом генов инсулиноподобных факторов роста.
Рентгенологически исследованы локализация первичной дуги сколиоза (грудной, грудопоясничный, поясничный отделы позвоночника), угол первичной сколиотической дуги, измеренный по методике Кобба, и торсия тела вершинного позвонка. Результаты представлены в табл. 3. Выбор методов непараметрической статистики для анализа значений угла сколиотической дуги обусловлен отличием распределения этого показателя от нормального (критерий Колмогорова-Смирнова 0,22; p<0,01).
Как видно из табл. 3, ассоциации между рентгенометрическими параметрами и полиморфными вариантами генов инсулиноподобных факторов роста не выявлено.
Среди оптико-топографических параметров анализировались угол латеральной асимметрии, латеральное отклонение оси позвоночника в вершине дуги и ротация в вершине дуги. Результаты представлены в табл. 4.
Как видно из таблицы, имеются ассоциации полиморфизма гена инсулиноподобного фактора роста II типа с латеральным отклонением и ротацией. Установлено, что у гомозигот IGF II +3123 AA отмечаются более низкие значения латеральной девиации в вершине первичной сколиотиче-ской дуги (медиана 4,5 мм; 25% и 75% проценти-ли 3 мм и 5,7 мм) по сравнению с гомозиготами дикого типа IGF II +3123 GG (медиана 6 мм; 25% и 75% процентили 4,3 мм и 8,9 мм) и гетерозиготами IGF II +3123 GA (медиана 6 мм; 25% и 75% процентили 4,2 мм и 8,5 мм). Также установлено, что у гомозигот IGF II +3121 AA отмечаются бо-
Таблица 3
Взаимосвязь рентгенометрических характеристик идиопатического сколиоза и полиморфизма генов тканевых факторов роста
Ген Полиморфизм Локализация Угол Торсия
K-W p K-W p K-W p
IGF I -1245 G/A 2,81 0,24 0,56 0,75 1,86 0,39
IGF II +3123 G/A 5,70 0,06 5,32 0,07 0,64 0,73
Примечание: K-W - значение критерия Краскела-Уоллеса;
* - различия являются статистически значимыми.
Таблица 4
Взаимосвязь оптико-топографических характеристик идиопатического сколиоза и полиморфизма генов тканевых факторов роста
Ген Полиморфизм Латеральная асимметрия Латеральная девиация Ротация
K-W p K-W p K-W p
IGF I -1245 G/A 1,43 0,49 9,57 0,008* 2,91 0,23
IGF II +3123 G/A 0,73 0,70 6,80 0,03* 10,35 0,006*
Примечание: К-Ш - значение критерия Краскела-Уоллеса;
* - различия являются статистически значимыми.
лее низкие значения ротации в вершине первичной сколиотической дуги (медиана 2,5о; 25% и 75% процентили 2,1о и 3,7о) по сравнению с гомозиготами дикого типа IGF II +3123 GG (медиана 4,5о; 25% и 75% процентили 3,3о и 7,3о) и гетерозиготами IGF II +3123 GA (медиана 3,9о; 25% и 75% процентили 2,6о и 8,6о).
Таким образом, гомозиготность мутантного аллеля полиморфизма гена инсулиноподобного фактора роста II типа IGF II +3121 АА при идио-патическом сколиозе является протективным фактором.
В отношении ассоциации полиморфизма гена инсулиноподобного фактора роста I типа и латерального отклонения выявлено, что статистически значимо увеличение значения этого показателя у гетерозигот IGF I -1245 GA (медиана 6,25 мм; 25% и 75% процентили 4,75 мм и 8,7 мм) по сравнению с гомозиготами дикого (медиана 4,7 мм; 25% и 75% процентили 2,9 мм и 6,7 мм) и мутантного (медиана 4,45 мм; 25% и 75% процен-тили 3,05 мм и 4,95 мм) типов.
Полученные нами данные об отсутствии ассоциации между полиморфизмом гена IGF-I -1245 G/A и идиопатическим сколиозом на материале большей выборки подтверждают известные в литературе. Низкий уровень ошибки второго рода (р=0,06) не позволяет с уверенностью заявить об отсутствии ассоциированности аллелей полиморфизма +3123 G/A инсулиноподобного фактора роста II и идиопатического сколиоза, что требует проведения дальнейших исследований на выборках большего объема. Аллель +3123А полиморфизма +3123 G/A гена IGF II чаще встречался у здоровых лиц, в то же время гетерозигот-
ность по данному полиморфизму, наоборот, чаще встречалась у больных идиопатическим сколиозом. Также у гомозигот IGF II +3121 АA больных сколиозом отмечалась меньшая выраженность деформации позвоночника по данным оптикотопографического исследования. Все вышеперечисленное позволяет говорить о протективной роли мутантного аллеля А полиморфизма гена IGF II +3123 G/A. В то же время ассоциации между рентгенометрическими параметрами и полиморфными вариантами генов инсулиноподобных факторов роста не наблюдалось. Статистически значимое увеличение значения латерального отклонения в вершине первичной сколиотической дуги у гетерозиготных носителей генотипа IGF I -1245 GA требует дальнейшего подтверждения в других популяциях.
ЛИТЕРАТУРА
1. Chua K.H., Aminuddin B.S., Fuzina N.H., Ruszymah B.H. Interaction between insulin-like growth factor-1 with other growth factors in serum depleted culture medium for human cartilage engineering // The Medical Journal of Malaysia. -2001. - Vol. 59. - P. 7-8.
2. Devaney J.M., Hoffman E.P., Gordish-Dressman H. et al. IGF-II gene region polymorphisms related to exertional muscle damage // J. Appl. Physiol. - 2007. -Vol. 102. - P. 1815-1823.
3. Dedoussis G.V., Louizou E., Papoutsakis C., Skenderi K.P., Yannakoulia M. Dairy intake associates with the IGF rs680 polymorphism to height variation in peri-adolescent children // European Journal of Clinical Nutrition. - 2010. - Vol. 64. - P. 253-258.
4. Ester W.A., van Meurs J.B., Arends N.J et al. The -G1245A IGF1 polymorphism is related with small head size and less brain sparing in small for gestation-
al age bom children // European Journal of Endocrinology. - 2009. - Vol. 160, N 4. - P. 549-555.
5. Han J.-L., Liu J., Mu X.-S., Tang H.-M. Expression of insulin-like growth factor in the cancellous bone of lumbar spine in ovariectomized rats // Chinese Journal of Clinical Rehabilitation. - 2005. - Vol. 47, N 9. -P. 112-113.
6. Hamamura K., Zhang P., Yokota H. IGF2-driven PI3 kinase and TGF(3 signaling pathways in chondrogene-sis // Cell Biology International. - 2008. - Vol. 32, N 10. - P. 1238-1246.
7. Heude B., Ong K.K., Luben R., Wareham N.J., Sandhu M.S. Study of Association between Common Variation in the Insulin-Like Growth Factor 2 Gene and Indices of Obesity and Body Size in Middle-Aged Men and Women // The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. - 2007. - Vol. 92, N 7. -P. 2734-2738.
8. Kostek M.C., Devaney J.M., Gordish-Dressman H et al. A polymorphism near IGF1 is associated with body composition and muscle function in women from the Health, Aging, and Body Composition Study // European Journal of Applied Physiology. - 2010. -Vol. 110, N 2. - P. 315-324.
9. Kaku K., Osada H., Seki K., Sekiya S. Insulin-like growth factor 2 (IGF2) and IGF2 receptor gene variants are associated with fetal growth // Acta Paediatri-ca. - 2007. - Vol. 96, N 3. - P. 363-367.
10. Lopez-Alarcon M., Hunter G.R., Gower B.A., Fernandez J.R. IGF-I Polymorphism is Associated with Lean Mass, Exercise Economy and Performance Among Premenopausal Women // Arch. Med. Res. - 2007. -Vol. 38, N 1. - P. 56-63.
11. Marmur J. A procedure for the isolation of DNA from microorganisms // J. Mol. Biol. - 1961. - Vol. 3, N 2. - P. 208.
12. Palles C., Johnson N., Coupland B et al. Identification of genetic variants that influence circulating IGF1 levels: A targeted search strategy // Human Molecular Genetics. - 2008. - Vol. 17, N 10. - P. 1457-1464.
13. Sayer A.A., Syddall H., O’Dell S.D. et al. Polymorphism of the IGF2 gene, birth weight and grip strength in adult men // Age Ageing. - 2002. - Vol. 31. -P. 468-470.
14. Sanders J.O., Finegold D.N. Maturity assessment and curve progression in girls with idiopathic scoliosis // J. Bone Joint Surg. Am. - 2007. - Vol. 89. - P. 64-73.
15. Schrager M.A., Roth S.M., Ferrell R.E. et al. Insulinlike growth factor-2 genotype, fat-free mass, and muscle performance across the adult life span // Journal of Applied Physiology. - 2004. - Vol. 97, N 6. -P. 2176-2183.
16. Wang Y., Nishida S., Sakata T. et al. Insulin-like growth factor-I is essential for embryonic bone development // Endocrinology. - 2006. - Vol. 147, N 10. -P. 4753-4761.
17. Yeung H.Y., Tang N.L., Lee K.M. et al. Genetic association study of insulin-like growth factor-I (IGF-I) gene with curve severity and osteopenia in adolescent idiopathic scoliosis. // Studies in health technology and informatics. - 2006. - Vol. 123. - P. 18-24.
18. Yang B.Y., Wu Z., Zhao T. et al. Adolescent Idiopathic Scoliosis and the Single-nucleotide Polymorphism of the Growth Hormone Receptor and IGF-1 Genes // Orthopedics. - 2009. - Vol. 32. - P. 411-419.
