CC BY
62
© куликов л.к., СМИРНОВ А.А., ПРИВАЛОВ Ю.А., СОБОТОВИЧ В.Ф. - 2015 УДК 616-001.4-008.9-085.2
ПЛАНИМЕТРИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ - КРИТЕРИЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ИНФИЦИРОВАННЫХ ХРОНИЧЕСКИХ РАН ПРЕПАРАТАМИ, СОДЕРЖАЩИМИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА
Леонид Константинович Куликов, Алексей Анатольевич Смирнов, Юрий Анатольевич Привалов, Владимир Филиппович Соботович (Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования, ректор - д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра хирургии, зав. - д.м.н., доц. Ю.А. Привалов)
Резюме. В эксперименте использовались 180 белых крыс массой 200 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии и на обычном рационе. Все животные были разделены на пять групп, в каждой по шесть крыс. Животным 1-й группы (контрольная) не проводили лечение, рана заживала спонтанно. У животных 2-й группы проводили лечение препаратом - Абисил-1 (20% раствор пихтового масла в рафинированном растительном), в 3-й группе - препаратом Куриозин (ассоциат гиалуроновой кислоты и цинка), в 4-й группе - препаратом Антиран (комплексное соединение, включающее 10-15% изоборнилацетата - природного стереоизомера борни-лацетата, входящего в состав пихтового масла, 28-30% поверхностно-активного вещества - блоксополимера, 3-4% бензилового спирта, остальной объём дистиллированная вода. В 5-й группе препарат Антиран в сочетании с ультразвуковой кавитацией. Проведён сравнительный анализ планиметрических показателей заживления хронической раны при её лечении препаратами, содержащими биологически активные вещества: Абисил-1, Куриозин, Антиран, а также Антиран в сочетании с ультразвуковой кавитацией (УЗК), на последовательных этапах лечения. Установлено, что препарат Антиран в сочетании с УЗК, активизирует эпителизацию и восстановление производных эпидермиса через 14 суток, сокращает поверхность ран на 96,1%, что существенно сокращает сроки заживления хронических инфицированных ран.
Ключевые слова: планиметрия, хронические раны, воспаление, заживление ран.
PLANIMETRIC INDEXES - MEASURE EFFECTIVE TREATMENT OF INFECTION CHRONIC WOUNDS
WISH BIOLOGIC ACTIVE DRUGS
L.K. Kulikov, A.A. Smirnov, U.A. Privalov, V.F. Sobotovich (Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education, Russia)
Summary. There were 180 white rats with weight 200 g in our study. Animals were in standard place and were received usual meals. All rats were distributed to five groups with six rats in every group. In 1 group, rats were without treatment, wound healed naturally. In 2 group, rats were treated with drug Abisil (20% solution of fir oil), 3 group - drug Kuriozin (associate hyaluronic acid with zinc), 4 group - drug Antirun (complex matter, including 10-15% isobornilacetat, 28-30% surface-active agent (bloxpolimer), 3-4% benzyl alcohol, other - distilled water). In 5 group, rats were treated with drug Antirun and ultrasonic cavitation. Chronic wound size was assessed during treatment of different healed stage by planimetry. To establish, grug Antirun with ultrasonic cavitation activated epithelization at 14 day from start treatment and reduced wound area upon 96%.
Key words: chronic wound, planimetry, inflammation, healed wound.
Сроки заживления хронической раны, в конечном счёте, определяются скоростью течения отдельных фаз воспалительного процесса, имеющих свои характерные морфологические характеристики. Выполнение раневого дефекта грануляционной тканью, эпителизация, контракция и рубцевание раны являются наиболее демонстративными показателями скорости её заживления и находят своё выражение в постепенном уменьшении, а в конечном итоге ликвидации раневого дефекта [6,7,8].
Цель работы заключалась в сравнительной оценке сроков заживления хронической инфицированной раны при её лечении препаратами, содержащими содержащих биологически активные вещества.
Материалы и методы
В эксперименте использовались 180 белых крыс массой 200 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии, на обычном рационе. Эксперименты проводили в соответствии с «Правилами ведения работ с использованием экспериментальных животных», утверждённых Минздравом СССР (приложение к приказу № 775 от 12.08.1977 г.). Моделирование раны и перевод её в хронический воспалительный процесс выполняли в соответствии с методическими рекомендациями Фармкомитета СССР (№4 от 12.09.1989 г).
Животные были разделены на пять групп, в каждой по шесть животных. Животным 1-й группы (контрольная) не проводили лечение, рана заживала спонтанно. У животных 2-й группы проводили лечение препаратом - Абисил-1 (20% раствор пихтового масла в рафи-
нированном растительном), в 3-й группе - препаратом Куриозин (ассоциат гиалуроновой кислоты и цинка), в 4-й группе - препаратом Антиран (комплексное соединение, включающее 10-15% изоборнилацетата - природного стереоизомера борни-лацетата, входящего в состав пихтового масла, 28-30% поверхностно-активного вещества - блоксополимера, 3-4% бензилового спирта, остальной объём дистиллированная вода [4]. В 5-й группе препарат Антиран в сочетании с ультразвуковой кавитацией [1].
Материал для исследования забирали на 4, 8,14,21 и 28 сутки после начала лечения. Животных выводили и эксперимента методом декапитации под эфирным наркозом. Изготавливали парафиновые срезы (7-9 мкм), окрашивали гемаоксилин-эозином и по Ван Гизону, на срезах подсчитывали плотность лейкоцитарного инфильтрата и его клеточный состав. Планиметрические расчёты выполняли по методу О.А. Навакатиняна (1950), применяемого для определения пощади и скорости уменьшения плоскостных ран [6].
При статистической обработке данных для каждой выборки проверяли гипотезу о нормальности распределения. Для этого использованы тесты Колмогорова-Смирнова, Шапиро-Вилка и Лиллиефорса. При количестве наблюдений в выборке менее 20, или в случае ненормального распределения, данные представляли в виде медианы с верхним и нижним квартилями (25-й и 75-й процентили) - Me (25;75). При нормальном распределении в выборке данные представлены в средних величинах со средней квадратической ошибкой (M(s)). Определение значимости различий полученных дан-
ных (р) в сравниваемых выборках при ненормальном распределении проводили по критерию Крускала-Уолиса (k-w), для связанных выборок - по критерию Вилкоксона (W). Корреляционный анализ данных в выборках проводили с применением непараметрического коэффициента корреляции Спирмена (rs). Различия между показателями считали статистически значимыми при р<0,05. Статистическая обработка результатов произведена с помощью пакета программ Statistica 6,0 for Windows [2].
Результаты и обсуждение
Полученные данные, отражающие динамику заживления раны в различных условиях эксперимента, приведены в таблице 1. По каждой серии эксперимента приведены два показателя: медиана площади раневой поверхности и сокращение площади раны (в %) от ее исходного размера. Поскольку вариационные ряды имели ненормальное распределение, сравнение проводилось по медиане, а не по средней арифметической величине показателя. В качестве статистического критерия оценки значимости различий между группами животных был выбран критерий ранговой дисперсии Крускала-Уолисса. Эти же данные представлены на рисунках 1 и 2.
Динамика сокращения раневой поверхности инфицированной раны в разных условиях эксперимента
Спонтанное Абисил Куриозин Антиран Антиран + УЗК
S, мм2 Yt, % S, мм2 Yt, % S, мм2 Yt, % S, мм2 Yt, % S, мм2 Yt, %
До леч. 866,5 0 866,2 0 867,5 0 884,5 0 910,0 0
4 сут. 852,0 1,4 685,5 20,0 783,0 8,5 828,0 4,6 895,5 1,3
8 сут. 753,0 14,4 627,0 31,1 633,0 24,8 544,5 39,6 471,0 50,6
14 сут. 769,5 9,9 417,0 48,7 438,0 49,1 439,5 48,9 282,0 70,4
21 cут. 729,0 16,4 238,5 72,8 324,0 60,1 243,0 72,7 85,5 90,5
28 сут. 727,5 19,7 235,5 73,0 180,0 78,9 139,5 85,9 37,5 96,1
Из таблицы 1 следует, что все используемые в эксперименте препараты значительно ускоряли заживление раны. Данные морфологического исследования дают основание выделить два общих для всех препаратов эффекта - уменьшение количества и размеров микроабсцессов и стимуляция пролиферативной активности эпидермиса.
Вместе с тем, полученные результаты отчетливо иллюстрируют отличия в динамике заживления раны в разных сериях эксперимента, которые проявляют определенную закономерность. В частности, при использовании для лечения раны препарата Абисил-1 в первые 4-5 суток заживление раны проходило быстрее, а в последующие сроки - медленнее, чем при использовании препаратов Куриозин и Антиран, особенно, в сочетании Антирана с УЗК. Опираясь на данные гистологического исследования, можно предположить, что эти отличия обусловлены различными механизмами действия испытуемых препаратов. Выявление этих механизмов требует поэтапного анализа полученных данных. В соответствии с критерием ранговой дисперсии Крускала-Уолисса наибольшей ранговой сумме соответствовало быстрое уменьшение площади раны от исходных размеров и, соответственно, наоборот.
На первом этапе - с 1-х по 4-е сутки от начала лечения самое быстрое уменьшение площади раны по сравнению с её исходным размером (наибольшая ранговая сумма) наблюдались в группе животных, полу-
чавших Абисил, а наименьшую ранговую сумму (самое медленное уменьшение раны по сравнению с исходным размером) выявили в группе животных, получавших Антиран в сочетании с обработкой УЗК (р<0,01). При этом в группе животных, получавших Абисил, показатель имел наибольший вариационный размах, а в группе крыс, получавших Антиран в сочетании с обработкой УЗК - наименьший размах.
Гистологическая картина у групп животных, получавших Абисил и Антиран, не отличалась по плотности лейкоцитарной инфильтрации, клетки которой участвуют в очищении раны от инфекта и тканевого детрита, тем не менее, при использовании Абисила размеры раны сократились значительно больше. В связи с этим, возникло предположение о более высокой бактерицид-ности препарата Абисил» [5], которая обеспечивала более быстрое очищение поверхности раны от микроорганизмов и, соответственно, возможность нарастания эпидермиса на очищенную поверхность раны.
Применение Антирана обеспечивало на этом этапе скорость закрытия раны, сопоставимую со скоростью при её лечении Куриозином, однако, гистологическая картина имела существенные отличия. В частности, у животных, получавших Антиран, отмечена самая высокая сохранность эпидермиса по краям раны, что, по-видимому, и создавало условия для его активной пролиферации и, соответственно, сокращения шмщч 1 площади раны, несмотря на большое количество гнойно-некротических масс. У животных, получавших Куриозин, отличался клеточный состав лейкоцитарного инфильтрата, в нем содержалось в три раза больше лимфоцитов и макрофагов, чем при лечении ран Антираном и Абисилом. Этот факт дает основание предполагать, что в основе ранозаживляющей активности Куриозина лежит его свойство стимулировать функции иммунокомпетентных клеток, способных не только подавлять микроорганизмы, но и активировать репаративные процессы.
Самая низкая скорость сокращения раневой поверхности на этом этапе отмечена у животных, получавших Антиран в сочетании с УЗК. Вместе с тем, именно у этих животных, на 4-е сутки раны оказались полностью очищены от гнойно-некротических масс, в том числе от
юоо
900 800 700 600 500 400 300 200 100 о
хгг"
--□
Х>- - — .
4 с
8с
14с
21 с
28 с
До лечения
—О— Спонтанное заживление —□—Абисил —А- Антиран —О- Антиран +УЗК Рис. 1. Динамика уменьшения площади раневой поверхности инфицированных ран при различных способах лечения.
глубоких и поверхностных микроабсцессов, а состав лейкоцитарного инфильтрата соответствовал макро-фагической фазе воспалительного процесса, которая свидетельствует о репаративном этапе воспалительного процесса. Из этого следует, что лейкоцитарная фаза воспаления у этих животных к 4-м суткам уже завершилась. Такое ускорение острого периода воспаления, вероятно, связано с обработкой раны УЗК, которая способствует механическому удалению гнойно-некротических масс по всей ее глубине. В свою очередь, логично предположить, что активное механическое очищение раны является препятствием для репаративных процессов, в том
числе и для формирования эпидермиса на раневой поверхности.
На 8-е сутки от начала лечения и в последующие сроки наблюдения наибольшая ранговая сумма (самое быстрое уменьшение раны по сравнению с исходным размером) наблюдались в группе животных, получавших Антиран в сочетании с УЗК (р<0,01). Второе место по скорости и полноте заживления раны занимает Антиран (без УЗК), третье место - Куриозин и Абисил.
Рис. 2. Динамика относительного уменьшения площади раневой поверхности инфицированных ран (в % от исходного размера) при различных способах их лечения.
Отличительным признаком раневого процесса при использовании Абисила является самое продолжительное сохранение нейтрофильной инфильтрации в очаге воспаления. Исходя из предположения о том, что в основе ранозаживляющего эффекта этого препарата лежит его бактерицидность, становятся понятны причины замедления заживления раны в репаративный период воспалительного процесса. Поскольку Абисил является препаратом для наружного применения, его бактерицидное действие распространяется, преимущественно на бактерии, вынесенные на поверхность раны. Однако в глубине раны, до 10-12-ти суток сохранялись микроабсцессы и воспалительный отек, что и обусловило более медленное развитие раневого репаративно-го процесса. Необходимо отметить, что к 14-м суткам при использовании Абисила площадь раны по медиане была такой же, как при использовании Куриозина и Антирана, однако вариационный размах был значительно больше (в 2-5 раз).
Ранозаживляющее действие Куриозина проявилось более однозначно. Однако, в связи с относительно небольшим вариационным размахом значения площади раневой поверхности, в группе животных, получавших Куриозин, на 14-е сутки лечения была наименьшая ранговая сумма (р<0,01), несмотря на практически одинаковое значение медианы в группах сравнения (Абисил, Куриозин и Антиран). На 21-е сутки лечения Куриозином оказалась самой меньшей не только ранговая сумма, но и медиана значения площади раневой поверхности. Тем не менее, это не означает, что раноза-живляющее действие Куриозина самое слабое, так как очищение глубоких участков раны от микроабсцессов под действием этого препарата происходило раньше (на 8 сутки), чем при использовании Абисила (на 10-12 сутки). Кроме того, под действием Куриозина была более полноценной (сохранной) структура эпидермоцитов в участках новообразования эпидермиса (участки нарастания эпидермиса на раневую поверхность и новооб-
разованные волосяные фолликулы). Как упоминалось выше, отличительной чертой раневого процесса при использовании Куриозина являлось значительно более высокое содержание в лейкоцитарном инфильтрате лимфоцитов и макрофагов. Было высказано предположение, что в основе ранозаживляющего действия этого препарата лежит его иммуномодулирующая активность. Это предположение, основанное на полученных результатах, объясняет более раннее начало репаратив-ных процессов в очаге воспаления при данных условиях эксперимента.
При лечении Антираном на 8-е сутки сокращение площади раневой поверхности было более значительным, чем при лечении раны Абисилом и Куриозином, что, вероятно, связано с более активным очищением от гнойно-некротических масс не только раневой поверхности, но и глубоких участков раны, в которых уже в этот срок наблюдения микроабсцессы нами не обнаружены. Этот факт можно объяснить существенной активацией функциональных способностей нейтрофилов и макрофагов в очаге воспаления. С другой стороны, при использовании Антирана отмечена самая высокая сохранность эпидермиса и его производных по краям ран. Эти результаты дают основание предполагать, что в основе ранозаживляющего действия Антирана лежат его цитопротекторные свойства [3], которые повышают сохранность структуры и функции клеток очага воспаления и неповрежденных тканей, уменьшая их вторичную альтерацию кислородными радикалами и лизосомальными ферментами, се-кретируемыми нейтрофилами.
При лечении Антираном в сочетании с УЗК с 8-х суток и до конца наблюдений скорость уменьшения площади раневой поверхности была наиболее высокой. Этот способ лечения объединяет два лечебных воздействия - Антираном и УЗК. Механическое очищение раны от гнойно-некротических масс (на поверхности и в глубине) при помощи обработки ран УЗК обуславливает быстрое завершение лейкоцитарной фазы и развитие репаративных процессов. Цитопротекторное действие Антирана обеспечивает функциональную полноценность клеток очага воспаления и способствует ускорению репаративных процессов в инфицированной хронической ране.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.
Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.
Работа поступила в редакцию: 20.05.2015 г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Куликов Л.К., Казанков С.С., Гармашов В.И. Способ лечения хронических раневых процессов: Патент №2189814. -2001.
2. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины» // Сибирский меди-
цинский журнал (Иркутск). - 2008. - Т. 76. №1. - С.5-8.
3. Николаевский Н.В., Еременко А.Е., Иванов И.К. Биологическая активность эфирных масел. - М.: Медицина, 1987. - 144 с.
4. Полтавченко Ю.А., Рютин Н.П., Гармашов В.И. Средство для лечения ран: Патент №2113218. - 1993.
5. Степанов Э.В., Комаров М.А. Изучение состава и анти-
микробной активности летучих веществ препарата из хвои пихты сибирской // Известия СО АН СССР. - 1972. - №5. -С.38-43.
6. Фенчин К.М. Заживление ран. - Киев, 1979. - 167 с.
7. Harding K. G., Morris H.L., Patel G.K. Healing chronic wounds // Biol. Med. J. - 2002. - Vol. 324. - P.160-163.
8. Kerstein M.D. The scientific basis of healing //Adv. Skin Wound Care. - 1997. - Vol. 10. №3. - P.30-36.
REFERENCES
1. Kulikov L.K., Kazankov S.S., Garmashov V.I. A method of treating chronic wound healing process: Patent №2189814. -2001. (in Russian)
2. Majboroda A.A., Kalyagin A.N., Zobnin Y.V., Shcherbatyh A.V. Modern approaches to the preparation of the original article in the Journal of Medical and Biological direction in the light of the concept of «evidence-based medicine» // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). - 2008. - Vol. 76. №1. - P.5-8. (in Russian)
3. NicholasN., Eremenko A.E., IvanovI.K. Biological activity of essential masel. - Moscow: Meditsina, 1987. - 144 p. (in Russian)
4. Poltavchenko Y.A., Ryutin N.P., Garmashov V.I. The means
for treating wounds: Patent №2113218. - 1993. (in Russian)
5. StepanovE.V., KomarovM.A. The study of the composition and antimicrobial activity of volatile substances of the drug from Siberian fir needles // Izvestia Sibirskogo Otdelenia Akademii Nauk SSSR. - 1972. - №5. - P.38-43. (in Russian)
6. Fenchin K.M. Wound healing. - Kiev, 1979. - 167 p. (in Russian)
7. Harding K. G., Morris H.L., Patel G.K. Healing chronic wounds // Biol. Med. J. - 2002. - Vol. 324. - P.160-163.
8. Kerstein M.D. The scientific basis of healing //Adv. Skin Wound Care. - 1997. - Vol. 10. №3. - P.30-36.
Информация об авторах:
Куликов Леонид Константинович - д.м.н., профессор кафедры, 664079, г. Иркутск, Юбилейный, 100, тел. (3952) 638135, e-mail: Giuv.surgery@ya.ru; Смирнов Алексей Анатольевич - к.м.н., ассистент кафедры, тел. (3952) 638176; Привалов Юрий Анатольевич - д.м.н., доцент, заведующий кафедрой, тел. (3952) 638-157; Соботович Владимир Филиппович - к.м.н., доцент, (3952) 638156.
Information About of Authors:
Kulikov Leonid - MD, PhD, DSc, professor, 664079, Russia, Irkutsk, Jubilee -100, tel. (3952) 638135, e-mail: Giuv.surgery@ya.ru; Smirnov Alexey - MD, PhD, Assistant of the Department, tel. (3952) 638176; Privalov Yuriy - MD, PhD, DSc, docent, Head of the department, tel. (3952) 638157; Sobotovich Vladimir -MD, PhD, docent, tel. (3952) 638156.
© КАУКОВА А.Н., БЕЛЯКОВА H.A., МИЛЛЕР Д.А, ВАСЮТКОВА O.A. - 2015 УДК: 616.12-008.331.1:616-005
состояние микроциркуляции и факторы, влияющие на неё у больных гипертонической болезнью
Александра Николаевна Каукова, Наталья Александровна Белякова, Дмитрий Анатольевич Миллер, Ольга Алексеевна Васюткова (Тверской государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. М.Н. Калинкин, кафедра эндокринологии, зав. - д.м.н., проф. Н.А. Белякова)
Резюме. В исследование включены 30 женщин, больных гипертонической болезнью (ГБ), и 30 практически здоровых женщин (добровольцы). Проводилось клинико-лабораторное обследование пациентов, включающее оценку системы сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза. Изучение артериолярного кровотока, входящего в понятие микроциркуляции, осуществлялось с помощью ультразвуковой допплерографии с расчётом скоростных показателей. В результате проведенного исследования выявлено, что у больных ГБ нарушение гемостаза отмечается как в сторону гипоагрегации (66,6%), так и гиперагрегации (33,3%). Гипоагрегация чаще выявляется при давности ГБ более 10 лет и часто сопровождается гипертриглицеридемией. Артериолярный кровоток у больных ГБ характеризуется повышением максимальных скоростей, в большей степени систолической, эндотелиальной дисфункцией, а также снижением параметров артериолярного кровотока и сопротивления кожных сосудов при гипоагрегации тромбоцитов.
Ключевые слова: гипертоническая болезнь, артериолярный кровоток, гипоагрегация, гиперагрегация.
MICROCIRCULATION AND FACTORS AFFECTING ON IT FOR pATIENTS WITH HYpERTENSION
A.N. Kaukova, N.A. Belyakova, D.A. Miller, O.A Vasyutkova (Tver State Medical University, Russia)
Summary. The study included 30 female patients with hypertension and 30 apparently healthy women (volunteers). Clinical and laboratory examination was conducted including an assessment of vascular-platelet hemostasis. The study arteriolar blood flow, that enters the concept of microcirculation, carried out by the means of ultrasonic Doppler calculation speed performance. The study found that violation of hemostasis of the patients with hypertension is noted as an aside hyporaggregation (66,6%) and hyperaggregation (33,3%). Hyporaggregation is often revealed in patients with hypertension over 10 years and is often accompanied by hypertriglyceridemia. Arteriolar blood flow in patients is characterized by increasing the maximum velocity, mostly systolic, endothelial dysfunction, and also reduction of parameters of arteriolar blood flow and cutaneous vascular resistance in hyporaggregation of platelets.
Key words: hypertension, arteriolar blood flow, hypoaggregation, hyperaggregation, hypocoagulation, hypercoagulation.
Гипертоническая болезнь (ГБ) является одной из самых актуальных медицинских проблем. Это объясняется широкой распространенностью ГБ, а также высокой частотой сердечно-сосудистых осложнений и смертно-
сти [1]. Причины этого многообразны. С одной стороны, это связано с неадекватным контролем артериального давления (АД), который сегодня не превышает 2530% в популяции больных ГБ [2,3]. С другой стороны,
