CC BY
75
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© Шамаракова М.В., 2014
УДК 618.146-007.17-097+616-006.52-002.7]-08
ОЦЕНКА ЭКСПРЕССИИ P16INK4A, KI-67, VEGF И Е-КАДГЕРИНА
ПРИ ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫХ ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЯХ
ШЕЙКИ МАТКИ
М.В. ШАМАРАКОВА
ФГУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова, г. Москва
EVALUATION OF EXPRESSION OF P16INK4A, KI-67, VEGF, E-CADHERIN IN SQUAMOUS INTRAEPITHELIAL LESIONS OF THE CERVIX
M.V. SHAMARAKOVA
FSI Scientific center of obstetrics, gynecology and perinatology C.I. Kulakova, Moscow
В статье представлены результаты изучения функционального состояния плоскоклеточных интраэпителиальных поражений шейки матки, с использованием современных методов молекулярной биологии, выделение биомаркеров, способствующих диагностике пролиферативных изменений эпителия и определению течения предраковых состояний шейки матки. Исследование показало, что поражения со структурными особенностями CIN2 имеют разный злокачественный потенциал и соответственно морфологические критерии данного патологического процесса не отражает сущности биологического процесса.
Ключевые слова: плоскоклеточные интраэпителиальные поражения, шейка матки, иммуногистохимические маркеры.
The article presents the results of a study of the functional state of squamous intraepithelial lesions of the cervix, using modern molecular biology techniques, the selection of biomarkers to facilitate the diagnosis of epithelial proliferative changes, and determine the flow of precancerous cervical conditions. The study showed that lesions with structural features of CIN2 have different malignant potential and therefore the morphological criteria of a pathological process does not reflect the nature of the biological process.
Keywords: squamous intraepithelial lesions, cervix, immunohistochemical markers.
Введение
Морфологические особенности плоскоклеточных интраэпителиаль-ных поражений шейки матки (англ. Squamous intraepithelial lesion - SIL) или цервикальной интраэпителиаль-ной неоплазии (англ. cervical intraepithelial neoplasia - CIN) принято считать золотым стандартом диагностики предраковых поражений. Однако дифференциальная диагностика последних все еще остается предметом дискуссии. Так, при оценке воспроизводимости диагнозов CIN среди патологов нередко отмечаются расхождения [11]. Наблюдается гипердиагностика CIN/SIL и, вследствие этого, неоправданное лечение женщин [4]. Кроме того, в некоторых случаях возможна самопроизвольная регрессия SIL [2, 17]. В настоящее время как для повышения качества диагностической работы и определения индивидуального прогноза течения поражения шейки матки, так и проведения обосновано необходимых лечебных мероприятий большое внимание уделяется
иммуногистохимическому исследованию экспрессии биомаркеров в тканях пораженной шейки матки. Наибольшее распространение получило использование биомаркера ингибитора циклин-зависимой киназы р^^4*, экспрессия которого усиливается при инактивации протеина, регулирующего клеточный цикл Rb онкопротеином Е7 вируса папилломы человека (ВПЧ), и показателя пролиферации Ki-67 [5, 6]. Вместе с тем, воспроизводимость диагнозов SIL ограничена из-за отсутствия стандартов оценки иммуногистохимического окрашивания p16INK4a [18]. Определение экспрессии Ki-67 хотя и способствует более полноценному определению степени тяжести поражения, она не является специфической для церви-кальной неоплазии или инфецирова-ния ВПЧ [12]. Хотя, сочетанное использование биомаркеров р^^4* и Ki-67 при определении степени тяжести поражения позволяет компенсировать недостатки, возникающие при их изолированном применении, для
определения прогноза SIL/CIN этого недостаточно. Имеются сообщения о стимулирующем влиянии онкопротеи-на Е6 ВПЧ на экспрессию VEGF [16], а также о нарушении экспрессии Е-кадгерина при инактивации Rb онко-протеином Е7 [6,9]. Учитывая вышесказанное, не вызывает сомнения необходимость уточнения морфологических критериев SIL и выявление биомаркеров, определяющих их прогноз.
Цель исследования
Изучение функционального состояния плоскоклеточных интраэпите-лиальных поражений шейки матки, с использованием современных методов молекулярной биологии, выделение биомаркеров, способствующих диагностике пролиферативных изменений эпителия и определению течения предраковых состояний шейки матки.
Материалы и методы
Материалом для исследования служили биоптаты шейки матки 73 женщин: 25 наблюдений с SIL низкой степени тяжести (плоская кондилома, CIN1) (средний возраст 23±2,3 лет), 28 -высокой степени (CIN2, CIN3) (средний возраст 28,5±4,7 лет) и 20 - составили группы контроля, в том числе 11 - нео-роговевающей плоскоклеточной карциномы (средний возраст 32,9±4,1 лет), и 9 - ткани неизмененной шейки матки (средний возраст 27,7±5,6 лет). Критериями отбора служили репродуктивный
возраст, отсутствие воспалительных и реактивных изменений в биоптирован-ной ткани шейки матки, наличие проведенного ВПЧ Digene теста. Что касается тканей неизмененной шейки матки, то поводом для взятия биопсии послужило клиническое подозрение на наличие CIN/SIL, не подтвержденное при гистологическом исследовании.
Иммуногистохимическое исследование проводили на депарафиниро-ванных срезах толщиной 4 мкм с использованием моноклональных мышиных антител к ядерному антигену делящихся клеток Ki-67 (1:500, клон MIB-1, «Dako», Дания), поликлональному антителу против рекомбинантного человеческого VEGF (1:500 «Dako», Дания) и диагностического набора р^^-Ш (1:400,«Dako», Дания), мо-ноклональных мышиных антител Е-кадгерина (1:700,«Dako», Дания ),. В качестве демаскирующего приема применяли нагревание предметных стекол со срезами в Tris буфере в водяной бане (t=98°C в течение 30 мин). Эндогенная пероксидаза была блокирована с помощью инкубации срезов с 3% перекисью водорода (15 мин.). Специфическое связывание выявляли с помощью вторичных кроличьих антител фирмы Labvision. Специфическое окрашивание проводили диаминобензидином (DAB, «Dako», Дания). Срезы докрашивали гематоксилином. В каждом случае применяли позитивный и негативный контроль исследования.
Анализ изображения и фотодокументацию проводили с использованием программного обеспечения фирмы Karl Zeiss (Германия). Специфическое иммуногистохимическое окрашивание идентифицировали на основании коричневого окрашивания ядер, цитоплазмы и оболочек клеток.
Пролиферативную активность эпителия шейки матки определяли на основании наличия ядер эпителия с экспрессией Ki-67. Низкий уровень экспрессии соответствовал окрашенным клеткам, расположенным в базальном и парабазальном слое эпителия, промежуточный - в нижней и средней трети эпителия, высокий - иммунореактивность Ki-67 определялась в клетках занимающих более 2/3 эпителия.
Оценку экспрессии Е-кадгерина проводили с использованием 2-х категорий: неизмененного и патологического распределения. Под неизмененным распределением экспрессии Е-кадгерина подразумевали наличие окрашивания клеточных оболочек. При патологическом распределении экспрессии Е-кадгерина отмечалось окрашивание цитоплазмы и ядер клеток.
При оценке экспрессии р^^^ учитывали окрашивание ядра и цитоплазмы клеток. Негативными считали образцы, в которых экспрессия р^^4* отсутствовала, очаговую экспрессию р^^4* характеризовали очаги положительно окрашенных клеток в базальном слое или вариабель-
ное число положительно окрашенных клеток в парабазальном и промежуточном слое, диффузной - иммуноре-активные клетки располагались во всей толще эпителия.
Оценку экспрессии VEGF проводили полуколичественным методом с выделением 3х категорий: негативная -отсутствие экспрессии VEGF; очаговая - окрашенные клетки располагаются в 1/3-2/3 эпителиального пласта; диффузная - иммунореактивные клетки занимают более 2/3 эпителия.
Статистическая обработка полученных в ходе исследования данных проводилась на персональном компьютере с использованием статистического пакета Microsoft Excel XP (Microsoft Corp., США). Значимость различий между средними величинами и относительными показателями в группах сравнивали с помощью U теста по методу Манна-Уитни.
Результаты и их обсуждение
При морфологическом исследовании было выявлено, что SIL низкой степени тяжести (плоская кондилома, CIN1) свойственно расположение незрелых клеток базального типа в нижней трети эпителия, в промежуточном слое определялся койлоцитоз. При SIL высокой степени тяжести (CIN2, CIN2-3, CIN3) атипические клетки занимали более 1/3 эпителия, при этом отмечалась повышенная плотность клеток, последние располага-
лись хаотично. Митотическая активность соответствовала тяжести поражения: в CIN1 митозы определялись редко, лишь в нижней трети эпителия, CIN2 - в 2/3 эпителия, в CIN3 - во всей толщине эпителия.
При иммуногистохимическом исследовании в неизмененной ткани шейки матки экспрессия Ki-67 определялась лишь в парабазальном слое эпителия. В 13 образцах SIL низкой степени тяжести экспрессия Ki-67 отмечалась в нижней трети эпителия, в 12 - более чем в половине эпителиального пласта. При SIL высокой степени экспрессия ki-67 отличалась вариабельностью и наблюдалась у 8 женщин в биоптированной ткани шейки матки в пределах половины эпителиального пласта, у остальных 20 - и в поверхностном отделе эпителия. Диффузная экспрессия Ki-67 была характерна для раковых поражений шейки матки. Достоверное различие в отношении биомаркера пролиферации обнаружено между показателями неизмененного многослойного плоского эпителия шейки матки и SIL высокой степени тяжести, а также плоскоклеточной карциномы (р<0,05).
Экспрессия Е-кадгерина, которая определялась во всех случаях, изменялась по мере увеличения тяжести патологического процесса с достоверной разницей между SIL низкой степени тяжести и плоскоклеточной карциномой (p<0,001). В неизмененном
эпителии экспрессия Е-кадгерина выражалась в окрашивании клеточных оболочек. При SIL низкой степени тяжести у 4 женщин наблюдалось ослабление окрашивания клеточных оболочек и появление слабого окрашивания цитоплазмы клеток, расположенных в нижней трети эпителия, у 8 - в средней трети. У остальных пациенток с SIL низкой степени тяжести экспрессия Е-кадгерина мало отличалась от таковой в неизмененном многослойном плоском эпителии.
В SIL высокой степени тяжести отмечалось выраженное изменение экспрессии Е-кадгерина. У 3 из 28 пациенток в биоптированной ткани шейки матки хотя и сохранялось окрашивание клеточных оболочек, однако его интенсивность была снижена. В 25 случаях отмечалось окрашивание цитоплазмы и ядер клеток, которые занимали более 2/3 эпителия, притом у 4 из них имелось умеренное окрашивание оболочек клеток в верхних слоях поражения.
В 9 образцах плоскоклеточной карциномы отмечалось резкое снижение экспрессии Е-кадгерина, клеткам всего эпителиального пласта было свойственно окрашивание цитоплазмы, в 2 образцах имелись мелкие участки, в которых сохранялось слабое окрашивание оболочек клеток.
Экспрессия р^^4* в эпителии неизмененной шейки матки отсутствовала. В биоптатах шейки матки с
SIL низкой степени тяжести экспрессия р16^4а была вариабельной. У 8 женщин экспрессия данного ингибитора циклин-зависимой киназы в ткани шейки матки отсутствовала. В биоптированной ткани шейки матки 9 пациенток отмечалась очаговая экспрессия р^^4*, при этом у 5 женщин положительно окрашенные клетки определялись в парабазальном слое эпителия, в базальном отделе экспрессия биомаркера была негативной, у 4 - в нижней трети эпителиального пласта. Следует также отметить, что диффузная экспрессия р^^4* характеризовалась интенсивным окрашива-
нием и ядер, и цитоплазмы клеток, в то время как очаговая - слабым окрашиванием ядер.
В биоптированной ткани шейки матки с SIL высокой степени тяжести у 15 женщин экспрессия р^^4* была диффузной и отмечалась на всем протяжении эпителиального пласта, у 13 наблюдалась очаговая, местами интенсивная экспрессия р^^4* в более 1/3 эпителия.
В препаратах неороговевающей плоскоклеточной карциномы шейки матки преобладала диффузная экспрессия р 16]NK4&, лишь в опухолевой ткани одной женщины она отсутствовала.
Рис. 1. Экспрессия p16INK4a при SIL низкой степени тяжести. Иммунореактив-ность p16INK4a определяется в клетках пабазального и промежуточного слоя многослойного плоского эпителия
Рис. 2. Экспрессия p16INK4a при SIL высокой степени тяжести. Иммунореак-тивность p16INK4a диффузная, в том числе в клетках базального слоя многослойного плоского эпителия
В ткани неизмененной шейки матки и 12 образцах SIL низкой степени экспрессия VEGF отсутствовала. В 12 образцах SIL низкой степени тяжести определялась очаговая экспрессия VEGF в нижней трети эпителиального пласта, в 1 - она была интенсивной и занимала 2/3 эпителиального пласта.
При SIL высокой степени тяжести экспрессия VEGF достоверно усиливалась по сравнению с поражениями
низкой степени (р<0.001). В 21 биопта-те шейки матки определялась диффузная экспрессия VEGF, представленная цитоплазматическим окрашиванием, в 5 - очаговая, в 2 - негативная.
В ткани плоскоклеточной карциномы наблюдалась очаговая (у 5) и диффузная экспрессия VEGF (у 5). У одной женщины в опухолевой ткани экспрессия VEGF отсутствовала.
Рис. 3. Экспрессия Ki-67 при SIL высо- Рис. 4. Экспрессия VEGF при SIL низкой степени занимает более 2/3 эпите- кой степени тяжести в виде цитоплаз-лия матического окрашивания атипических
клеток нижней трети эпители
Результаты нашего исследования свидетельствуют о том, что по мере прогрессирования патологического процесса экспрессия Ki-67 в эпителии шейки матки повышается. Вместе с тем следует отметить, что при SIL высокой
степени (СШ2, СШ2-3, СШ3) отмечалась вариабельность экспрессии Ю-67. Подобная вариабельность экспрессии этого биомаркера указывает на субъективную оценку СШ2 и СШ3 при морфологическом исследовании биоптиро-
ванной ткани шейки матки, и возможно более целесообразным представляется их объединение и выделение SIL двух степеней тяжести.
Особенности распределения окрашивания p16INK4a отражают инфицирование низкоонкогенными и/или вы-сокоонкогенными типами ВПЧ. SIL низкой степени тяжести, обусловленные ВПЧ находящимся в эписомаль-ной форме, свойственно окрашивание клеток парабазального и промежуточного слоя, поскольку при данном варианте инфицирования экспрессия вирусных онкогенов строго регулируется и ее высокие уровни наблюдаются только в клетках парабазального и промежуточного слоя. При интеграции ВПЧ в пролиферирующие клетки эпителия экспрессия вирусных онкогенов наблюдается на всем протяжении эпителиального пласта, что определяет окрашивание клеток базального слоя при SIL низкой степени тяжести и диффузную экспрессию p16INK4a при SIL высокой степени тяжести [10].
Отсутствие экспрессии p16INK4a в ткани плоскоклеточной карциномы возможно указывает на иной механизм развития последней, не ассоциированный с ВПЧ [1, 13].
Учитывая сведения о нарушении регуляции VEGF, обусловленной он-копротеином Е6 высокоонкогенных типов ВПЧ [14, 16], и снижения экспрессии Е-кадгерина при интактива-ция pRb онкопротеином Е7 [9] мы со-
поставили результаты экспрессии VEGF, p16INK4a, Е-кадгерина и ВПЧ Digene теста у этих пациенток и выяснили, что экспрессия VEGF и патологическое распределение Е-кадгерина наблюдалась только у женщин с морфологической картиной CIN1/SIL низкой степени тяжести, инфицированных высокооногенными типами ВПЧ. При этом, экспрессия p 16INK4a имела диффузный и очаговый характер, в том числе она наблюдалась в клетках базального слоя, что свидетельствовало об интеграции ВПЧ в геном клеток эпителия. У остальных 13 пациенток со структурными особенностями SIL низкой степени тяжести экспрессия VEGF и патологическое распределение Е-кадгерина отсутствовали, при этом у 5 из них наблюдалась очаговая экспрессия p 16INK4a, все они были инфицированы низкоонкогенными типами вируса. Возможно, вариации экспрессии VEGF и p16INK4a объясняются тем, что онкопротеин Е6 ВПЧ имеет относительно слабую самостоятельную и краткосрочную активность по сравнению с окнопротеином Е7 [15]. M. Branca и соавт указывают, что стимуляция экспрессии VEGF посредством воздействия онкопротеина Е6 ВПЧ является одним из вариантов нарушения ее регуляции [7]. Что касается, онкопротеина Е7, вероятно, он оказывает слабое влияние на снижение им-мунореактивности Е-кадгерина, кото-
рое в основном связано с неопластической трансформацией клеток. У 2 женщин, инфицированных высокоон-когенными типами ВПЧ, отсутствие экспрессии VEGF и неизмененное распределение Е-кадгерина сочеталось с очаговой экспрессией p16INK4a. По-видимому, у этих женщин поражение представляет собой продуктивную вирусную инфекцию. О такой возможности свидетельствуют данные литературы [8].
При проведении анализа экспрессии изученных маркеров было обнаружено, что у 8 из 25 женщин с SIL низкой степени тяжести отсутствие экспрессии p 16INK4a и VEGF сочеталось с расположением Ki-67 позитивных клеток в нижней трети эпителия, экспрессией Е-кадгерина в клеточных оболочках. По результатам ВПЧ Digene теста эти женщины были инфицированы низкоонкогенными типами. Исходя из этого, у них можно предполагать регрессию патологического процесса в будущем и рекомендовать наблюдение с цитологическим контролем.
У других 5 женщин данной группы обнаружены аналогичные изменения изученных маркеров, за исключением p16INK4a, экспрессия которого была очаговой и располагалась в клетках парабазального слоя. Согласно ВПЧ Digene тесту, 2 из них были инфицированы низкоонкогенными типами, и 3 - высокоонкогенными. Тем не менее, особенности экспрес-
сии p 16INK4a указывают на инфицирование ВПЧ, находящимся в эписо-мальной форме, т.е. не интегрированном в ДНК пролиферирующих клеток, уровни экспрессии остальных маркеров были близкими к таковым в ткани неизмененной шейки матки и у этих женщин также можно ожидать регресс заболевания.
Особого внимания заслуживают 8 женщин с SIL низкой степени тяжести, инфицированных высокоонкогенными типами ВПЧ, у 4 из которых экспрессия p16INK4a была диффузной, а у 4 -очаговой, притом в клетках базального слоя, что свидетельствует об интеграции ВПЧ в геном клеток эпителия. У женщин с очаговой экспрессией p 16INK4a экспрессия Ki-67 была относительно низкой, наблюдалась очаговая экспрессия VEGF, цитоплазматическая локализация Е-кадгерина в нижней трети эпителия, остальные показатели мало отличались от ткани неизмененной шейки матки. У женщин с диффузной экспрессией p16INK4a, промежуточным уровнем экспрессии Ki-67 и очаговой экспрессией VEGF, отмечалось патологическое распределение Е-кадгерина в средней трети эпителия. У этих 8 женщин нельзя исключить прогрессирова-ния патологического процесса.
Еще у 4 женщин обнаружены диффузная экспрессия p16INK4a, высокий уровень экспрессии Ki-67, очаговая (у 3) и диффузная экспрессия VEGF (у 1), патологическое распределение Е-
Рис. 5. Экспрессия Е-кадгерина при SIL низкой степени тяжести. В нижней трети эпителия определяется патологическое распределение экспрессии Е-кадгерина в виде цитоплазматического окрашивания атипических клеток, в то время как в верхней половины сохраняется окрашивание оболочек клеток
кадгерина в клетках средней трети эпителия. Другими словами, результаты иммуногистохимического исследования биоптированной ткани шейки матки у этих женщин свидетельствуют о существенной тяжести патологического процесса в эпителии. В связи с этим в отношении этих женщин целесообразно применять лечебные мероприятия схожие при SIL высокой степени тяжести.
Все 28 женщин с SIL высокой степени тяжести были инфицированы высокоонкогенными типами ВПЧ. В биоптированной ткани шейки матки у 21 женщины показатели экспрессии всех изученных нами биомаркеров приближались к таковым при плоскоклеточной карциноме, что свидетельствует о необходимости проведения хирурги-
Рис. 6. Патологическая экспрессия Е-кадгерина наблюдается в 2/3 эпителия
ческого лечения. У остальных 7 женщин в патологически измененной ткани шейки матки К1-67 позитивные клетки занимали 1/3 - 2/3 эпителия, у 3 из них отмечалось мало измененное распределение Е-кадгерина, у 4 - патологическое распределение последних определялось лишь в нижней трети эпителия. Кроме того, экспрессия УЕОБ у них была очаговой (у 5) или отсутствовала (у 2). При морфологическом исследованим ткани шейки матки у этих женщин диагностирован СШ2. Учитывая результаты им-муногистохимического исследования патологически измененной шейки матки данные женщины могут быть подвергнуты более щадящим методам терапии.
Сопоставив результаты экспрессии изученных биомаркеров, мы при-
шли к выводу, что диагностика предраковых состояний шейки матки, должна быть основана не только на морфологических критериях, но и результатах им-муногистохимического исследования. Они позволяют эпителиальные изменения со структурными особенностями CIN1/SIL низкой степени тяжести у части пациенток рассматривать в качестве продуктивной вирусной инфекции, которая может самопроизвольно подвергнуться регрессии, тогда как у других можно предполагать развитие неопластического процесса [19].
Выводы
Проведенное нами исследование показало, что поражения со структурными особенностями CIN2 имеют разный злокачественный потенциал и соответственно морфологические критерии данного патологического процесса не отражает сущности биологического процесса. По-видимому, более целесообразным представляется объединение CIN2 и CIN3, и выделение SIL двух степеней тяжести [3, 11]. Следует отметить, что иммуногисто-химическое исследование способствует не только определению сущности плоскоклеточного интраэпители-ального поражения, но и, что особенно важно, индивидуального прогноза.
Литература
1. Волгарева Г.М. Экспрессия белка р16 в клетках некоторых распространенных форм рака / Г.М. Волгарева [и др.] // Архив патологии. -
2004. - №5. - С. 3-5.
2. Киселев В.И. Этиологическая роль вируса папилломы человека в развитии рака шейки матки: генетические и патогенетические механизмы / В.И. Киселев, О.И. Киселев // Цитокины и воспаление. - 2003. - Т. 2, №4. - С. 31-38.
3. Кондриков Н.И. Современные классификации заболеваний шейки матки / Н.И. Кондриков // В кн.: Заболевания шейки матки, влагалища и вульвы. -М.: Медпресс, 1999. - С. 21-24.
4. Кравинская Т.А. Результаты лечения доброкачественных заболеваний шейки матки в условиях высокой нагрузки ВПЧ / Т.А. Кравинская // Современные технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний. - М.: Пантори, 2009. - С. 106.
5. Минкина Г.Н. Предраковые заболевания шейки матки: диагностика и лечение / Г.Н. Минкина // Качество жизни. Медицина. - 2004. -№3(6). - С. 32-34.
6. Мнихович М.В. Межклеточные и клеточно-матриксные взаимодействия в опухолях: современное состояние проблемы / М.В. Мнихович // Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И.П. Павлова. - 2013. - №3. - С. 161-171.
7. Combined p53 and retinoblastoma protein detection identify persistent and regressive cervical high-grade squam-ous intraepithelial lesions // Am J Surg Pa-thol. - 2005. - Vol. 29. - P. 1062-1066.
8. p16INK4A expression is related to grade of CIN and high-risk human papillomavirus but does not predict
virus clearance after conization or disease outcome // Int J Gynecol Pathol. -2004. - Vol. 23. - P. 354-365.
9. Aberrant expression of VEGF-C is related to grade of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and high risk HPV, but does not predict virus clearance after treatment of CIN or prognosis of cervical cancer // J Clin Pathol. -2006. - Vol. 59. - P. 40-47.
10. Silencing of E7 oncogene restores functional E-cadherin expression in human papillomavirus 16-transformed keratinocytes // Carcinogenesis. - 2008. - Vol. 29. - P. 1441-1447.
11. Atlas of gynecologic surgical pathology. - Elsevier, 2008.
12. How should we grade CIN? // Histopathology. - 2002. - Vol. 40. -P. 377-390.
13. Ki-67, cyclin E, and p16INK4 are complimentary surrogate biomarkers for human papilloma virus-related cervical neoplasia // Am J Surg Pathol. -2001. - Vol. 25. - P. 884-891.
14. Increased ki-67 proliferative index and absence of p16INK4a in CIN-HPV related pathogenic pathways different from cervical squamous intraepi-
thelial lesion // British J Ophthalmol. -2006. - Vol. 90. - P. 894-899.
15. Oncogenes and tumor angi-ogenesis: the HPV-16 E6 oncoprotein activates the vascular endothelial growth factor (VEGF) gene promoter in a p53 independent manner // Oncogene. -2000. - Vol. 19. - P. 4611-4620.
16.Regulation of the Src family tyrosine kinase Blk through E6AP-mediated ubiquitination // Proc Natl Acad Sci USA.
- 1999. - Vol. 96. - P. 9557-9562.
17. Regulation of tumor angioge-nesis by p53-induced degradation of hypoxia-inducible factor 1a // Genes Dev.
- 2000. - Vol. 14. - P. 34-44.
18. Spontaneous regression of high-grade cervical dysplasia: effects of human papillomavirus type and HLA phenotype // Clin Cancer Res. - 2005. -Vol. 11. - P. 4717-4723.
19. P16INK4a immunostainig in cyto-logical and histological specimens from the uterine cervix:A systematic review and me-ta-analysis // Cancer Treatment Rev. -2009. - Vol. 35. - P. 210-220.
20. Precanceruos lesions of the cervix. In Blaustein's pathology of the female genital tract. - 5th ed. - New York; Berlin; Heidelberg, 2002. - P. 253-322.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРЕ
Шамаракова М.В. - мл. науч. сотрудник патологоанатомического отделения Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова, г. Москва. E-mail: shamarakovamar@yandex.ru.
