CC BY
57
МЕХАНИЗМЫ АНТИБЛАСТОМНОГО ДЕЙСТВИЯ НОВОГО РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОБИОТИКА, ПРОДУЦИРУЮЩЕГО ИНТЕРФЕРОН
Н.В. Литвяков1, Н.В. Чердынцева1, В.А. Белявская2
НИИ онкологии Томского научного центра СО РАМН1 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцово, Новосибирская область 2
В настоящее время показано, что при перо-ральном введении интерфероны способны оказывать иммуномодулирующее и терапевтическое действие (противовирусное и антибластомное) (Tompkins W.A., 1999). Это отрывает перспективы для создания пероральных форм интерферона. В ГНЦ ВБ «Вектор» (Кольцово, Новосибирская обл.) получен рекомбинантный штамм B. subtilis 2335pMBM105, в который введена генетическая информация, кодирующая синтез ИФН-а человека. На основе этого штамма, способного продуцировать интерферон-а in vitro и in vivo в тонком кишечнике, создан пробиотический препарат субалин (Белявская В. А., 1992). Препараты на основе живых рекомбинантных бактерий, продуцирующих интерферон, обеспечивают пролонгированный синтез интерферона вблизи имму-нокомпетентных клеток слизистой оболочки кишечника и защиту лекарственной субстанции от деградирующего влияния протеолитического содержимого ЖКТ. Субалин обладает способностью индуцировать в организме синтез эндогенных цитокинов (ИФН-а и у, ИЛ-ip, ФНО-а, ИЛ-2 и ИЛ-4). Нами была показана противоопухолевая и антиметастатическая активность суб-алина, а также его способность повышать эффективность цитостатической терапии экспериментальных опухолей (Чердынцева Н.В. и др., 1997, 2001). В настоящей работе проводилось исследование механизмов антибластомного и химиомодулирующего действия субалина.
В работе использовались половозрелые мыши обоего пола разводки питомника НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН следующих линий: C57Bl/6j (H-2b), DBA/2j (H-2d), гибриды F1 CBAxC57Bl/6j, а также мыши BALB/c, несущие мутацию nude, характеризующиеся врожденным отсутствием тимуса. В качестве модели экспериментального злокачественного роста использова-
ли карциному Льюиса (ЬЬС). Субалин мышам вводили перорально по 5 108 микробных клеток в 0,5 мл воды. Определяли мембранотоксическую активность естественных киллерных клеток (ЕК клеток), цитостатическую и цитолитическую активность макрофагов (Мф), антипролифератив-ную активность супернатантов спленоцитов.
Субалин является препаратом интерфероно-вого ряда. Известно, что интерфероны, помимо прямого цитотоксического и цитостатического действия на опухолевые клетки, способны повышать активность эффекторных клеток системы естественной резистентности организма. В настоящее время в качестве основных эффекторов системы естественной резистентности, осуществляющей противоопухолевую защиту организма, рассматриваются Мф и ЕК клетки, и можно полагать, что они играют важную роль в реализации антибластомного действия субалина. Курсовое введение субалина мышам с карциномой легких Льюиса приводило к существенному усилению цитостатического действия макрофагов на тест-клетки мастоцитомы Р-815. Кроме того, повышалась антипролиферативная и ци-толитическая активность в отношении синген-ных клеток карциномы легких Льюиса, что указывает на участие макрофагов в реализации ан-тибластомного действия субалина. Если ингибировать функциональную активность макрофагов у мышей с помощью каррагенана, отмечается существенная стимуляция интенсивности метастазирования и увеличения размеров метастатических колоний в легких по сравнению с показателями животных, которым вводили только субалин и не ингибировали активность макрофагов. Эти результаты дают основания считать, что антиметастатическое действие субалина обусловлено противоопухолевой активацией макрофагов.
Курсовое введение субалина мышам с карциномой легких Льюиса привело на 10-е сут к существенному повышению естественной киллерной активности спленоцитов. Интересен тот факт, что стимуляция метастазирования LLC при введении ингибитора макрофагов мышам, получавшим суб-алин, сочетается с ингибицией роста первичной опухоли, и это ассоциировано с повышением естественной киллерной активности спленоцитов на фоне снижения активности Мф. Эти данные приводят к выводу, что ингибирующее действие суб-алина на рост первичной опухоли обусловлено противоопухолевой активацией ЕК клеток. Нам не удалось выявить ингибирующего действия субали-на на рост карциномы легких Льюиса, перевитой бестимусным мышам nude, что свидетельствует о вовлечении Т-системы в его антибластомный эффект. Эти механизмы могут вносить вклад в усилие антибластомного эффекта при сочетанном использовании цитостатических препаратов и субалина.
Наши исследования показали, что субалин изменял функциональное состояние перитонеальных макрофагов мышей с карциномой легких Льюиса, подвергавшихся цитостатической терапии, восстанавливая их способность оказывать антипролиферативное действие на опухолевые клетки-мишени, которая практически отсутствовала у макрофагов мышей, леченных цикло-фосфаном. Мы оценили противоопухолевое действие на циклофосфан-резистентную комбинацию субалина и циклофосфана по сравнению с одним субалином. Циклофосфан, изначально не оказывающий антиметастатического эффекта на клетки резистентной ЬЬС, в комбинации с субалином начинает проявлять антиме-тастатическое действие. Это свидетельствует о том, что субалин повышает чувствительность клеток метастатических колоний к циклофос-фану, то есть проявляет химиосенсибилизирующие свойства.
