CC BY
28
УДК 616-006.3.04-092.9:615.832.3
М.А. Каплан1, А.И. Малыгина1, Г.В. Пономарев2, А.А. Михайловская1, В.В. Дрожжина1, Л.М. Архипова1, Ю.С. Осипчук1
ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОР ЛИПОСОМАЛЬНЫЙ АМИДОАМИНХЛОРИН ДЛЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ САРКОМЫ М-1 КРЫС
1Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба - филиал ФГБУ «ФМИЦ им. П.А. Герцена» Минздрава России, Обнинск
2ФГБНУ «НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича», Москва Контактная информация
Каплан Михаил Александрович, профессор, заведующий отделом фотодинамической диагностики и терапии адрес: 249036 Калужская область, г. Обнинск, ул. Королева, 4; тел. +7(48439)9-30-26 e-mail: kaplan@mrrc. obninsk. ru
Статья поступила 04.09.2014, принята к печати 10.0.2015.
Резюме
В эксперименте на модели опухоли саркома М-1 изучена эффективность липосомального амидоамин-хлорина как нового фотосенсибилизатора (ФС) при проведении ФДТ. Цель исследования: определить параметры минимально эффективной дозы ФС и лазерного излучения для достижения полной регрессии опухоли. Изучали динамику накопления ФС в опухоли и здоровой ткани для определения времени проведения ФДТ и противоопухолевую эффективность разных доз ФС и различных параметров лазерного излучения. В результате проведенного исследования определен оптимальный срок проведения ФДТ и установлены минимально эффективная доза ФС и параметры лазерного излучения.
Ключевые слова: саркома, липосомальный фотосенсибилизатор, лазер, динамика накопления.
M.A. Kaplan1, A.I. Malygina1, G. V. Ponomarev2, A.A. Mikhailovskaya1, V.V. Drozhzhina1, L.M. Arkhipova1, J.S. Osipchuk LIPOSOMAL PHOTOSENSITIZER AMIDOAMINCHLORINE FOR PHOTODYNAMIC THERAPY OF RAT SARCOMA М-1
1A.F. Tsyb Medical Radiological Center of Science, Obninsk
2V.N.Orehovich Institute of biomedical chemistry, Moscow
Abstract
Effectiveness of a new photosensitizer (PS) liposomal amidoaminchlorine for PDT was studied on a tumor model of rat sarcoma M-1. The research objective: to define parameters of PS minimum effective dose and laser irradiation to achieve complete regression of the tumor. Dynamics of PS accumulation in tumor and healthy tissue was studied to define the PDT time course and antitumor efficiency of different PS doses and various parameters of laser irradiation. The study results defined the optimum term for PDT and minimally effective PS dose and established the parameters for laser irradiation.
Keywords: sarcoma, liposomal photosensitizer, laser, dynamics of accumulation.
Введение
Фотодинамическая терапия - направление противоопухолевой терапии, в котором воздействие на ткань опухоли введенного фотосенсибилизатора инициируется световым излучением, поглощаемым этим фотосенсибилизатором [5; 7; 8; 14; 15; 19; 21].
В опухоли начинается фотохимическая реакция с образованием синглетного кислорода и свободных кислотных радикалов, оказывающих токсическое воздействие на опухолевые клетки.
Кроме прямого цитотоксического воздействия ФДТ на опухолевые клетки, важную роль в деструкции новообразования играют:
■ нарушение кровоснабжения за счет повреждения эндотелия кровеносных сосудов опухолевой ткани;
■ цитокиновые реакции, обусловленные стимуляцией продукции ФНО, активацией макрофагов, лейкоцитов и лимфоцитов.
Одной из основных задач современной онкологии является разработка новых противоопухолевых препаратов, обеспечивающих максимальное разрушение опухоли при минимальном повреждении нормальных клеток и тканей организма. В течение последнего десятилетия в ФДТ злокачественных новообразований большой интерес в качестве ФС вызывают производные ряда хлорофилла
[13; 22], а также ведутся активные работы по созданию липосомальных форм ФС, которые увеличивают эффективность ФДТ [1-4; 6; 9-12; 17; 18; 20]. Поэтому актуальной задачей является синтез препарата амидоаминхлорина (рис. 1) и разработка его новой липосомального лекарственной формы.
Амидоаминхлорин разработан на основе взаимодействия метилфеофорбида а с различными первичными аминами и является химической модификацией периферических заместителей хлорина е6. Один из пиков поглощения находится на волне 662 нм, что коррелирует с высоким квантовым выходом синглетного кислорода. Концентрация фотосенсибилизатора в PBS (фосфатном буфере при рН 7,2-7,4) составляет 1,0 мг в 1 мл. Для получения водных растворов поступали следующим образом:
1. Навески хлорина и ФХ растворяли в хлороформе и рассчитанные объёмы хлороформных растворов смешивали, чтобы получить раствор конъюгат/ФХ в соотношении 1 : 5 (моль/моль).
2. Смешанные растворы упаривали досуха и растворяли в изопропаноле при 60 °С для получения стокового раствора
3. Аликвоту нагретого изопропанольного раствора впрыскивали в 10 мл PBS при +60 °С и встряхивании.
В эксперименте использовался амидоамин-хорин е6 моноадипинат в виде липосом из ФХ для создания водорастворимой формы в виде частиц размером до 200 нм и с концентрацией основного вещества - фотосенсибилизатора амидохлорина е6 - 1,0 мг/мл водного раствора. Характерной особенностью хлорина е6 является тот факт, что в зависимости от растворителя его спектральные характеристики сильно варьируют. Так, известно, что в водных средах его максимум поглощения смещается от 662 нм в коротковолновую область. Для экспериментальных исследований можно применять раствор в водном димексиде для внутрибрюшинно-го введения. В электронных спектрах водных липо-сомальных растворов наблюдались два основных пика: в области полосы Соре при длине волны 400402 нм и длинноволновый пик при длине волны 660-665 нм.
Амидоаминхлорин может быть переведен в липосомальную форму. В липосомальной форме в воде имеет максимум поглощения длине волны 665 нм (рис. 2).
Цель работы - определить минимально эффективную дозу ФС и параметров лазерного излучения для достижения полной регрессии опухоли у 100 % животных (срок наблюдения 21 сутки после ФДТ).
Задачи исследования:
1. изучить динамику накопления липосо-мального амидоаминхлорина в опухоли и здоровой ткани;
2. изучить противоопухолевую эффективность ФДТ саркомы М-1 при разных дозах ФС липосомального амидоаминхло-рина и различных параметрах лазерного излучения.
Материалы и методы
Исследования проведены на 102 беспородных крысах. В качестве экспериментальной модели опухоли использовали саркому М-1 крыс, которую перевивали под кожу в область бедра в виде кусочков опухоли донора. В опыт крыс брали на 7-9 день, когда опухоль достигала 0,7-1,0 см в 0, шерстный покров депилировали. В качестве ФС использовали новый липосомальный амидоаминхло-рин, который вводили внутрибрюшинно в разных дозах.
Изучение динамики накопления ФС
в опухоли и здоровой ткани
Для изучения динамики накопления препарат липосомальный амидоаминхлорин вводили крысам с саркомой М-1 внутрибрюшинно в дозе 2,5 мг/кг.
Уровень накопления ФС оценивали по интенсивности флуоресценции в условных единицах. Измерение уровня накопления ФС в опухолевой и здоровой тканях изучали с помощью спектрофлуо-ресцентного метода на комплексе ЛЭСА-01 «Био-спек», Россия. Датчики подводили к коже над опухолью и в 3 точках под прямым углом к объекту (центр, периферия 1 и периферия 2). Накопление в здоровой ткани определяли на здоровой ткани бедра с опухолью (контроль 1) и на противоположенном бедре (контроль 2). Перед измерением шерстный покров депилировали. Время экспозиции составляло 1-2 с. В различные сроки после введения ФС у каждого животного измеряли спектры опухолевой и здоровой тканей. Первое измерение проводили до введения препарата (0 ч), а затем через 20 мин; 1,0 ч; 1,5 ч; 3,0 ч; 4,0 ч и 5,5 ч.
Для суждения о селективности накопления ФС в опухоли по отношению к здоровой ткани рассчитывали индекс контрастности (опухоль/здоровая ткань).
Изучение параметров
эффективной дозы ФС и лазерного излучения
В опыт было взято 8 групп животных. ФДТ проводили с разными дозами ФС и различными параметрами лазерного излучения (плотность энергии (Е), плотность мощности
■ 1 группа: доза ФС 1,0 мг/кг, Е = 75 Дж/см2, Ps = 0,34 Вт/см2;
■ 2 группа: доза ФС 0,5 мг/кг, Е = 100 Дж/см2, Ps = 0,34 Вт/см2;
■ 3 группа: доза ФС 0,75 мг/кг, Е = 100 Дж/см2, Ps = 0,34 Вт/см2;
■ 4 группа: доза ФС 1,0 мг/кг, Е = 100 Дж/см2, Ps = 0,34 Вт/см2;
■ 5 группа: доза ФС 1,25 мг/кг, Е = 150 Дж/см2, Ps = 0,34 Вт/см2;
■ 6 группа: доза ФС 1,25 мг/кг, Е = 150 Дж/см2, Ps = 0,51 Вт/см2;
■ 7 группа: доза ФС 2,5 мг/кг, Е = 150 Дж/см2, Ps = 0,51 Вт/см2;
■ 8 группа: доза ФС 2,5 мг/кг, Е = 300 Дж/см2, Ps = 0,51 Вт/см2.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРЛИПОСОМАЛЬНЫЙ... 57
Контроль - крысы-опухоленосители без ка- грамме «^аЙБйса» непараметрическими методами кого-либо воздействия. для независимых групп (описательная статистика, В качестве контроля к эффективным дозам метод и теста Манна-Уитни). липосомального амидоаминхлорина также были представлены результаты исследований нелипосо- Результаты и обсуждение мальной формы амидоаминхлорина в тех же дозах ФС и параметрах лазерного излучения: Изучение динамики накопления ФС 1. ФДТ (1,25 мг/кг, 150 Дж/см2, 0,51 в опухоли и здоровой ткани Вт/см2); Уровень и селективность накопления ФС в 2. ФДТ (2,5 мг/кг, 150 Дж/см2, 0,51 Вт/см2); опухоли, а также скорость его выведения из нор- 3. ФДТ (2,5 мг/кг, 300 Дж/см2, 0,51 Вт/см2). мальной ткани являются важнейшими характери-Животные при облучении находились под стиками для ФДТ. Они влияют как на эффектив- общим тиопенталовым наркозом (внутрибрюшинно ность метода, так и на вероятность снижения по-2,5 % раствор в объеме 0,2 мл/100 г массы живот- бочных эффектов. ного). Из данных, представленных на рис. 3, видно, Источником лазерного излучения служил что в течение 5,5 ч после внутрибрюшинного вве-полупроводниковый лазерный аппарат «Аткус-2» дения липосомального амидоаминхлорина в дозе производства ЗАО «Полупроводниковые приборы» 2,5 мг/кг происходит постепенное увеличение (Санкт-Петербург) с длиной волны излучения уровня накопления его как в опухоли, так и в здо-662±1 нм. Диаметр светового пятна составлял 1,5 ровой ткани. Максимальный уровень накопления см. Объём опухоли измеряли: до проведения ФДТ ФС в опухоли наблюдался через 4 - 5,5 ч после (V)) и на 3; 7; 10; 14 и 21 сутки (V) после терапии. введения ФС. Что касается индекса контрастности, Эффективность ФДТ оценивали (по рекомендации то самый высокий мы наблюдали через 4 ч. Фармкомитета по предклинической апробации Таким образом, оптимальное время проведе-препаратов - по коэффициенту абсолютного при- ния лазерного облучения после внутрибрюшинного роста опухоли и по эффекту ингибирования роста введения липосомального амидоаминхлорина в опухоли) [16]: дозе 2,5 мг/кг наступает через 4 ч, когда имеем вы-Для вычисления коэффициента абсолютного сокое накопление ФС в опухолевой ткани и когда прироста опухоли сначала определяли объёмы опу- индекс контрастности достигает своего максималь-холей по формуле: ного значения. 1 Изучение параметров V — ~ Л х х d2 х dз , где эффективной дозы ФС и лазерного излучения 6 В 1 группе при дозе ФС 1,0 мг/кг, Е = 75 Дж/см2 и Ps = 0,34 Вт/см2 лазерного излучения на 21 сут после (11, ( - три изшмно пфпшдакуляртьк да^тры °пу- полная регрессия наблюдалась у 25,0 % живот-холи, ,, Л1 Г з ных. У крыс с продолженным ростом отмечалось зна- V - объем опухоли в см . г г г чительное снижение темпа прироста опухоли по срав- Коэффициент абсолютного прироста опухо- нению с контролем и это снижение достоверно значили (К) рассчитывали по формуле: р р * мо (Р<0,001; З^2,60 в "Щ*® «¿Ш,^ ™ ® * 4 * у 21 сут после ФДТ составляло 88 % (табл. 1). V у Во 2 группе при снижении дозы ФС до 0,5 К = ' 0 мг/кг но при увеличении плотности энергии лязер-У0 ного излучения до 100 Дж/см2 (плотность мощно, где сти оставалась 0,34 Вт/см2) на 21 сут после ФДТ полная регрессия наблюдалась уже у 55,6 % живот-Vo - объем опухоли до воздействия, г^Г , п, „ V - объем опухоли на определенный срок наблюдения; ных, но ТРО составляло 71,4 %. Темп прироста у животных с продолженным ростом опухоли был Торможение роста опухоли (ТРО %) вычисляли по выше, чем в группе 1, но по сравнению с контролем формуле: также достоверно ниже (19,60±9,08, р<0,003). у у В 3 группе при увеличении дозы ФС до 0,75 ТРО = к ° х 100% где мг/кг, при тех же параметрах лазерного излучения, Ук как в группе 2 (100 Дж/см2, 0,34 Вт/см2) до 10 суток V], - средний объём опухоли в контрольной группе, после ФДТ наблюдалась ПР опухоли у всех жишт-Vo - средний объём опухоли в опытной группе. ных в группе. На 14 сут процент ПР опухоли снизился до 88,9 % и на 21 сут после ФДТ ПР наблю-Вычисляли процент животных в группе с далась только у 55,6 % животных. При данных па-полной регрессией (ПР %) опухоли, за которую раметрах проведения ФДТ отмечался хороший ин-принимали отсутствие видимой и пальпируемой гибирующий эффект (ТРО - 96,1 % при ПР 55,6 %). опухоли. У крыс с продолженным ростом низкий темп при-Статистическую обработку результатов роста опухоли достоверно значим по сравнению с исследований проводили в компьютерной про- контролем (6,40±3,83, р<0,001).
№ 3/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
58 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРЛИПОСОМАЛЬНЫЙ...
Таблица 1
Динамика роста саркомы М-1 крыс после ФДТ при внутрибрюшинном введении липосомального амидоамин-хлорина в разных дозах, при различной плотности энергии и плотности мощности лазерного излучения
№ гр Схема проведения ФДТ 1. Объём опухоли (V) 3. Торможение роста опух. (ТРО %) 2. Коэффициент прироста опух. (К) 4. Полная регрессия опухоли (ПР %)
Сроки наблюдений
3сутки 7 сутки 10 сутки 14 сутки 21 сутки
1 1,0 мг/кг Е=75 Дж/см2 Ps=0,3Вт/см2 Полная регрессия опухоли у 100 % животных 0,047 ± 0,047 -0,78 ± 0,22* 98,0 88,9 0,364 ± 0,364 0,75 ± 1,75* 91,0 88,9 0,926 ± 0,868 3,57 ± 4,16* 87,6 55,6 0,644 ± 0,332 3,90 ± 2,60* 88,0 25,0
2 0,5 мг/кг Е=100 Дж/см2 Ps=0,34 Вт/см2 0,177 ± 0,102 -0,21 ± 0,47 70,9 66,7 0,260 ± 0,183 -0,08 ± 0,44* 88,8 55,6 0,601 ± 0,455 0,95 ± 1,04* 85,1 55,6 1,311 ± 0,880 3,95 ± 2,23* 82.5 55.6 3,945 ± 1,846 19,60 ± 9,08* 71,4 55,6
3 0,75 мг/кг Е=100 Дж/см2 Ps=0,34 Вт/см2 Полная регрессия опухоли у 100 % животных 0,052 ± 0,052 -0,60 ± 0,40* 99,3 88,9 0,529 ± 0,529 6,40 ± 3,83* 96,1 55,6
4 1,0 мг/кг Е=100 Дж/см2 Ps=0,34 Вт/см2 Полная регрессия опухоли у 100 % животных 0,005 ± 0,005 -0,95 ± 0,05* 99,9 93,8 0,043 ± 0,043 -0,51 ± 0,49* 99,4 93,8 0,484 ± 0,422 2,79 ± 3,59* 96,5 87,5
5 1,25 мг/кг Е=150 Дж/см2 Ps=0,34 Вт/см2 Полная регрессия опухоли у 100 % животных 0,010 ± 0,010 -0,85 ± 0,15* 99,0 88,9
6 1,25 мг/кг Е=150 Дж/см2 Ps=0,51 Вт/см2 Полная регрессия опухоли у 100 % животных
7 2,5 мг/кг Е=150 Дж/см2 Ps0,51 Вт/см2 Полная регрессия опухоли у 100 % животных
8 2,5 мг/кг Е=300 Дж/см2 Ps=0,51 Вт/см2 Полная регрессия опухоли у 100 % животных
Контроль (V, К) 0,609 ± 0,064 2,52 ± 0,51 2,324 ± 0,254 13,37 ± 2,57 4,030 ± 0,534 19,38 ± 2,23 7,495 ± 1,196 34,33 ± 4,27 13,787 ± 1,543 65,31 ± 7,70
*р<0,050 результаты достоверно значимы по сравнению с контролем.
Таблица 2
Динамика роста саркомы М-1 крыс после ФДТ при внутрибрюшинном введении амидоаминхлорина в разных дозах, при различной плотности энергии и плотности мощности лазерного излучения
№ Схема проведения ФДТ 1. Объём опухоли (V) 4. Полная регрес. опух (ПР %) 2. Коэффициент прироста опух. (К) 3. Торможение роста опух. (ТРО %) 5. Уровень значимости (р)
Сроки наблюдений
3сутки 7 сутки 10 сутки 14 сутки 21 сутки
0,046 ± 0,088 ± 0,332 ± 1,035 ±
1,25 мг/кг Е=150 Дж/см2 Ps=0,51 Вт/см2 0,035 0,051 0,182 0,453
1. Полная регрессия опухоли у 100 % животных -0,39 ± 0,45* 98,0 0,16 ± 0,67 * 97,7 3,16 ± 2,38 * 95,6 11,88 ± 6,07 * 92,5
62,5 62,5 50,0 50,0
0,006 ± 0,083 ± 0,288 ±
2,5 мг/кг Е=150 Дж/см2 Ps=0,51 Вт/см2 0,006 0,039 0,144
2. Полная регрессия опухоли у 100 % животных -0,80 ± 0,20* 99,8 -0,01 ± 0,50* 98,9 3,79 ± 2,68 * 97,9
87,5 50,0 50,0
2,5 мг/кг
3. Е=300 Дж/см2 Ps=0,51 Вт/см2 Полная регрессия опухоли у 100 % животных
2,287 ± 3,858 ± 7,461 13,787 ±
Контроль (V, К) 0,627 ± 0,055 2,97 ± 0,50 0,204 14,01 ± 0,433 20,73 ± 1,014 36,00 ± 1,543 65,31 ±
2,05 2,04 3,85 7,70
*р<0,050 результаты достоверно значимы по сравнению с контролем
хСОШСН2СН2]МН2
'СООСНз СООСНз
Сз8H46N6O5
MW 666.82
403
X пт
Рис. 1. Формула ФС амидоаминхлорина.
Рис. 2. Спектр поглощения амидоаминхлорина (А - оптическая плотность).
В 4 группе при увеличении дозы ФС до 1,0 мг/кг, при тех же параметрах лазерного излучения (100 Дж/см2, 0,34 Вт/см2) до 7 сут после ФДТ наблюдалась полная регрессия опухоли у всех животных в группе. На 10-14 сут после ФДТ лишь у 1 крысы отмечался рост опухоли, на 21 сут после ФДТ рост опухоли - у 2 крыс. На данный срок исследования наблюдался значительный ингибирую-щий эффект (ТРО - 96,5 % при ПР - 87,5 %). Коэффициент абсолютного прироста опухоли достоверно ниже, чем в контроле (2,79±3,59, р<0,001).
В 5 группе при увеличении дозы ФС до 1,25 мг/кг и увеличении плотности энергии лазерного излучения до 150 Дж/см2, при той же плотности мощности 0,34 Вт/см2 (как в предыдущих исследованиях) до 14 сут после ФДТ наблюдалась полная регрессия опухоли у всех животных в группе.
На 21 сут исследования при данных параметрах проведения терапии ингибирующий эффект еще более значительный, чем в группе 4 (ТРО -99,0 %, ПР - 88,9 %).
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
Рис. 3. Уровень накопления и индекс контрастности липосомального амидоаминхлорина в опухоли и здоровой ткани крыс с саркомой М -1.
В 6 группе при увеличении плотности мощности до 0,51 Вт/см2 (при той же дозе ФС 1,25 мг/кг и плотности энергии 150 Дж/см2, как в группе 5) до 21 суток после ФДТ отмечалась полная регрессия опухоли у всех животных в группе.
Группы 7 и 8 были включены в работу для сравнения (нелипосомальная форма амидоамин-хлорина).
В 7 группе при увеличении дозы ФС до 2,5 мг/кг при той же плотности энергии и плотности мощности (150 Дж/см2, 0,51 Вт/см2) до 21 сут после ФДТ также наблюдалась полная регрессия опухоли у всех животных в группе.
В 8 группе при той же дозе ФС 2,5 мг/кг и плотности мощности 0,51 Вт/см2, но при увеличении плотности энергии лазерного излучения до 300 мы получили тот же результат - полная регрессия опухоли у всех животных в группе.
Таким образом, противоопухолевый эффект внутрибрюшинного введения липосомального ами-доаминхлорина до 21 суток после ФДТ получен при всех исследуемых дозах ФС (0,5; 0,75; 1,0; 1,25 и 2,5 мг/кг) и параметрах лазерного облучения (плотность энергии 100; 150; 300 Дж/см2 и плотность мощности 0,34 и 0,51 Вт/см2).
При увеличении дозы ФС, плотности энергии и плотности мощности лазерного излучения
повышалась противоопухолевая эффективность ФДТ. Значительный ингибирующий эффект (ТРО -у 99,0 % и ПР - у 88,9 % животных) наблюдался уже при дозе ФС 1,0 мг/кг, Е = 100 Дж/см2 и Ps = 0,34 Вт/см2 лазерного излучения.
Полная регрессия опухоли у 100 % животных до 21 сут после ФДТ отмечали при использовании липосомального амидоаминхлорина в дозе ФС 1,25 мг/кг, Е =150 Дж/см2 и Ps = 0,51 Вт/см2.
При сравнении результатов исследования с нелипосомальной формой амидоаминхлорина полная регрессия опухоли достигнута лишь при дозе ФС 2,5 мг/кг, Е = 300 Дж/см2 и Ps = 0,51 Дж/см2 лазерного облучения (табл. 2), что подтверждает эффективность липосомальной формы амидоамин-хлорина.
Заключение
Минимально эффективная доза ФС и параметры лазерного излучения, приводящие к полной регрессии саркомы М-1 у 100 % животных до 21 сут исследования после ФДТ, составляли 1,25 мг/кг массы животного (внутрибрюшинно), плотность энергии лазерного излучения 150 Дж/см2, плотность мощности 0,51 Вт/см2.
Литература
1. Барышников А.Ю. Наноструктурированные липосомальные системы как средство доставки противоопухолевых препаратов // Вестник РАМН. - 2012. - № 3. - С. 23-30.
2. Барышникова М.А., Зангиева М., Барышников А.Ю. Взаимодействие липидных капсул с клеткой // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 11-5.
3. Грищенко Н.В., Барышникова М.А., Полозкова А.П. и др. Липосомальные противоопухолевые препараты не используют CD95-зависимый сигнальный путь апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 37-42.
4. Дмитриева М.В., Санарова Е.В., Полозкова А.П. и др. Анализ липосомальной лекарственной формы нового фотосенсибилизатора хлоринового ряда // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. -Т. 12, № 2. - С. 28.
5. Корчагина К.С., Гамаюнов С.В., Каров В.А. и др. Прогностическое значение параметров флюоресценции при фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 100.
6. Матюшин А.А., Барышникова М.А., Барышников А.Ю., Караулов А.В. Липосомы: организм, опухоль, клетка // Физиология и патология иммунной системы. Иммунофармакогеномика. - 2013. - Т. 17, № 6. - С. 3-10.
7. Меерович И.Г., Казачкина Н.И., Савицкий А.П. Изучение проявлений фотоиммунного отклика при фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 110.
8. Меерович И.Г., Меерович Г.А., Оборотова Н.А., Барышников А.Ю. Распределение света по глубине опухолевого очага и эффективность использования терапевтического излучения при фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 3. - С. 93-7.
9. Меерович И.Г., Оборотова Н.А. Применение липосом в фотохимиотерапии: 1. Липосомы в ФДТ // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - № 4. - С. 3-8.
10. Меерович И.Г., Оборотова Н.А. Применение липосом в фотохимиотерапии: 2. Липосомальные формы для создания фотоактивируемых липосомальных препаратов в фотобиологических исследованиях // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, №1. - С. 6-12.
11. Оборотова Н.А. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35, № 5. - С. 32-58.
12. Оборотова Н.А., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии. - 2009. - Т. 121, № 5. - С. 464.
13. Пономарев Г.В. Перспективы создания фотосенсибилизаторов на основе природного хлорофилла А // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. - Т. 6, № 1. - С. 24.
14. Пономарев Г.В., Егоров С.Ю., Стрижаков А.А. и др. Фотогенерация синглетного кислорода фотосенсибилизаторами тетрапиррольного ряда в связи с проблемами фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 68.
15. Романко Ю.С., Цыб А.Ф., Катан М.А., Попучиев В.В. Зависимость противоопухолевой эффективности фотодинамической терапии от плотности световой энергии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2005. - Т. 139, № 4. - С. 456-61.
16. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств // М. - Гриф и К. -2012. - Часть 1. - С. 650-651; 655-669.
17. Санарова Е.В., Оборотова Н.А., Смирнова З.С. и др. Применение липосомальных систем доставки для создания нового эффективного противоопухолевого фотосенсибилизатора // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 72.
18. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Макарова О.А. и др. Доклиническое изучение липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 40-5.
19. Стронатко Е.Ф. Основные этапы развития и современное состояние ФДТ в России // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 51.
20. Тазина Е.В., Костин К.В., Оборотова Н.А. Особенности инкапсулирования лекарственных препаратов в липосомы // Химико-фармацевтический журнал. - 2011. - № 8(45). - С. 30-40.
21. Филоненко Е.В. Флуоресцентная диагностика и фотодинамическая терапия в онкологии // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 2. - С. 85.
22. Чан Тхи Хай Иен, Г.В. Раменская, Н.А. Оборотова. Фотосенсибилизаторы хлоринового ряда в фотодинамической терапии опухолей // Российский биотерапевтический журнал. - 2009. - Т. 8, № 4. - С. 99-105.
Материалы XII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты»
И.Д. Гулякин, Е.В. Санарова, А.В. Ланцова, А.П. Полозкова, О.Л. Орлова, Н.А. Оборотова ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА
ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ЛХС-1208
ФГБНУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина", Москва
Актуальность. Разработанная лекарственная форма ЛХС-1208 представляет собой лиофилизат для приготовления раствора для инъекций. Актуальным является изучение параметров качества раствора ЛХС-1208 после регидратации. Изменения показателей качества в процессе хранения раствора после регидратации указывает на нецелесообразность проведения биологических экспериментов.
Задача исследования. Изучение критериев качества лиофилизированной лекарственной формы после регидратации.
Материалы и методы. Субстанция ЛХС-1208, синтезированная в лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина». Солюбилизатор Kollidon 17 PF (BASF, Германия), растворитель -диметилсульфоксид, чда (Химмед, Россия). Количественное определение содержания препарата проводили на спектрофотометре Cary 100 (Varian, Inc., Австралия) при длине волны 320 нм. Для измерения pH раствора использовали рН-метр HANNA pH 211 (Hanna Instruments, Германия).
Результаты и выводы. Проведенные исследования показали, что раствор ЛХС-1208 после регидратации лио-филизата ЛХС-1208 стабилен в течение всего периода исследований (3-е суток) по следующим показателям качества: внешний вид, значение рН и количественное содержание действующего вещества. Изменение количественного содержания ЛХС-1208 в процессе хранения полученного раствора укладывается в ошибку спек-трофотометрического определения (~ 2 %). Незначительное снижение содержания ЛХС-1208 при регидратации лиофилизированной ЛФ после хранения: первые сутки - 0,3 %, вторые сутки - 0,3 %, третьи сутки - 0,4 %. Приведенные данные позволяют проводить доклинические исследования противоопухолевой активности разработанной лиофилизированной ЛФ ЛХС-1208 на животных с экспериментальными моделями опухолевого роста.
Работа выполнена в рамках Государственного контракта 13411.1008799.13.120 от 24 июня 2013 г. «Доклинические исследования инновационного лекарственного средства на основе производного индолокарбазола для лечения онкологических заболеваний».
О.И. Задорожная1, Л.Р. Тилова1, А.В. Савинкова1, К.И. Кирсанов1, А.М. Оглоблина1, М.Г. Якубовская1, И.В. Бу-дунова2, Г.А. Белицкий1, Е.А. Лесовая1
ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ЭФФЕКТ СЕЛЕКТИВНОГО АГОНИСТА
ГЛЮКОКОРТИКОИДНОГО РЕЦЕПТОРА CPDA В КОМБИНАЦИИ С БОРТЕЗОМИБОМ IN VIVO
ФГБНУ "РОНЦим. Н.Н. Блохина", Москва 2Northwestern University, Chicago, USA
Актуальность. Аналоги глюкокортикоидов со сниженными побочными эффектами являются перспективной альтернативой в химиотерапии гемобластозов. Ранее было показано, что соединение этого класса, CpdA, обладает противоопухолевым эффектом in vitro. Однако эффекты CpdA в комбинации с химиотерапевтическими препаратами in vivo не изучались.
Задачи исследования. Оценка влияния CpdA в сочетании с ингибитором протеасом бортезомибом на рост подкожных ксенографтов лимфомы у бестимусных мышей и изучение молекулярных механизмов их совместного биологического действия.
Материалы и методы. Клетки лимфомы линии Granta подкожно вводились иммунодефицитным мышам. После перевивки животным внутрибрюшинно вводилось одно из изучаемых соединений. После извлечения опухолевой ткани проводился ее анализ с помощью ПЦР или иммуногистохимии.
Результаты и выводы. Впервые было показано синергическое противоопухолевое действие CpdA с ингибитором протеасом бортезомибом. В образцах от животных, получавших данную комбинацию, наблюдалось меньшее количество жизнеспособных клеток, чем в контроле. Также впервые было выявлено ингибирующее влияние CpdA на убиквитин-протеасомную систему в клетках гемобластозов in vivo.
