CC BY
78
Химия растительного сырья. 2011. №4. С. 177-180.
УДК 615.322: 582.951.6:543.544
ФЕНОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РОДА ОЧАНКА (ЕиРИНА31А Ь.) ФЛОРЫ ПЕРМСКОГО КРАЯ
© Т.В. Бомбела , В.М. Петриченк^, O.A. Кроткова
Пермская государственная фармацевтическая академия,
ул. Большевистстская, 101, Пермь, 614990 (Россия), e-mail: pvm-bot@mail.ru
Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) изучен состав фенольных соединений E. brevipila Bumat et Gremli, E. parviflora Schag., E. x reuteri Wettst., E. officinalis L., E. stricta D. Wolff, ex J.F.Lehm., E. x murbeckii Wettst., E. tatarica Fisch., произрастающих в Пермском крае. В составе фенольных соединений идентифицированы: феруловая, кофейная, хлорогеновая и галловая кислоты, лютеолин, кверцетин, дигидрокверцетин, кумарин, дикумарин, скополитин, умбеллиферон. Доминирующими компонентами фенольного комплекса всех видов являются фенолкарбоновые кислоты.
Ключевые слова: флавоноиды, фенолокислоты, кумарины, ВЭЖХ, Euphrasia.
Введение
Род Очанка - Euphrasia L. (Scrophulariaceae) объединяет однолетние паразитирующие растения, характеризующиеся высоким уровнем полиморфизма с трудно отличимыми признаками внешнего и внутреннего строения [1, 2]. На территории Пермского края род представлен 11 видами [3]. Надземная часть этих растений широко применяется в научной и народной медицине, а также является сырьем для производства парафармацевтических препаратов и БАД [2]. Имеются сведения о гипотензивной [4, 5], гепато-протекторной [6], антимикробной [7], антиоксидантной [8], противолейкемической [9] активности извлечений из травы очанки. Широкий спектр фармакологической активности травы различных видов Euphrasia обусловлен наличием биологически активных веществ (БАВ), относящихся к различным классам природных соединений.
Фенольные соединения (флавоноиды, фенолокислоты, кумарины) являются доминирующими группами БАВ видов рода Очанка. Сведения о фенольных соединениях этих растений относятся преимущественно к видам, встречающимся в Западной Европе, в то время как произрастающие в России изучены недостаточно. Так, флавоноиды E. Rostkoviana Hayne. представлены агликонами и гликозидами флавона и флавонола [10,
11, 12], группа органических кислот - кофейной [13], бензойной [14] и коричной [15] кислотами. Данные по составу фенольных соединений растений рода Очанка важны как в целях хемосистематики, так и для взаимозаменяемости видов при производстве фармацевтических препаратов и БАД.
Цель настоящей работы - сравнительное изучение состава фенольных соединений семи видов рода Euphrasia флоры Пермского края методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Экспериментальная часть
Объектами исследований служила надземная часть с корнями E. brevipila Burnat et Gremli, E. parviflora Schag., E. x reuteri Wettst., E. officinalis L., E. stricta D. Wolff, ex J.F.Lehm., E. x murbeckii Wettst., E. tatarica Fisch., собранная на территории Пермского края в 2006-2007 гг (табл. 1). Образцы сырья собирали в фазу цветения - начала плодоношения. Растительное сырье сушили на воздухе в тени, измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. 10,0 г измельченного растительного материала помещали в колбу объемом 250 мл, прибавляли 50 мл 70% этилового спирта, присое-
* Автор, с котрым следует вести переписку.
17S A. T.B. Бомбела,
В.М. Петриченко
, O.A. Кроткова
диняли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 чс момента закипания спирто-водной смеси в колбе. Извлечение, охлажденное до комнатной температуры, фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу объемом 100 мл и доводили 70% этиловым спиртом до метки (исследуемый раствор). Параллельно готовили серию 0,05% растворов стандартных образцов в 70% этиловом спирте (РСО).
Анализ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON» (Франция, модель 305) с ручным инжектором RHEODYNE - 7125 (USA) и компьютерным программным обеспечением «Мультихром» для «Windows». Использовали металлическую колонку размером 4,6*250 мм Kro-masil C18, размер частиц 5 мкм.
В качестве подвижной фазы использовали систему метанол - вода - фосфорная кислота концентрированная в соотношении 400 : 600 : 5. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа 60 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «CILSTON» UV/VIS, модель 151, при длине волны 254 нм.
По 20 мкл исследуемого раствора и растворов стандартов вводили в хроматограф. Идентификацию веществ проводили путем сопоставления времен удерживания разделенных компонентов на хроматограмме с временами удерживания РСО. Для сравнительной оценки относительного состава отдельных групп фенольных соединений у различных видов использовали метод внутренней нормализации. По площадям пиков находили количественное соотношение идентифицированных веществ в пробах. Повторность определения трехкратная.
Таблица 1. Образцы растений рода Euphrasia L.
№ Виды Место сбора Дата сбора
1 E. brevipila Пермский край, Бардымский р-н, с. Бичурино, заливной луг 13.0S.06
2 E. parviflora Пермский край, Куединский р-н, с. Пантелеевка, суходольный луг 20,07,06
З E. x reuteri Пермский край, г. Пермь, м/р Бахаревка, суходольный луг 19.07.07
4 E. officinalis Пермский край, Кудымкарский р-н, с. Самково, лесная поляна 15.0S.06
5 E. stricta Пермский край, г. Пермь, п. Новобродовский, суходольный луг 22,07,06
б E. x murbeckii Пермский край, г. Лысьва, д. Лязгино, суходольный луг 04.0S.06
7 E. tatarica Пермский край, г. Краснокамск, ст. Оверята, опушка леса 27,07,06
Обсуждениерезулътатов
В результате проведенного исследования в спиртовых извлечениях из травы различных видов Euphrasia обнаружено от 15 до 28 компонентов, из которых идентифицировано 11 веществ из группы фено-локислот, флавоноидов и кумаринов (табл. 2). Большинство соединений установленного строения относятся к группе фенолокислот. Неидентифицированные соединения, вероятно, принадлежат к группе гликози-дов фенольных соединений, интенсивно поглощающих в области 240-260 нм [16, 17], что совпадает с областью хроматографического детектирования.
Качественный состав и относительное количественное соотношение идентифицированных фенольных соединений у семи видов рода Euphrasia представлены в таблице 3. Параметры количественного соотношения идентифицированных веществ, полученные в условиях аналитической идентичности, позволяют оценить состав БАВ у видов рода Euphrasia. При этом они не являются показателями количественного содержания идентифицированных веществ, а характеризуют соотношение компонентов в пробе. В данной хроматографической системе отсутствует четкая зависимость времен удерживания от полярности соединений, что довольно часто встречается в обращенно-фазовом варианте ВЭЖХ [18].
Таблица 2. Компонентный состав БАВ растений рода Euphrasia L.
Виды Количество компонентов, обнаруженных в пробе В том числе идентифицировано:
фенолокислоты флавоноиды кумарины
E. brevipila 21 4 3 2
E. parviflora 15 3 1 3
E. x reuteri 20 2 1 3
E. officinalis 18 3 1 2
E. stricta 28 4 1 2
E. x murbeckii 25 4 3 3
E. tatarica 23 4 2 1
Доминирующими компонентами у всех исследованных видов являются фенолкарбоновые кислоты (табл. 3). Их суммарное содержание в пробах находится в пределах 39-55%. Максимальное суммарное содержание фенолокислот отмечается в E. officinalis (55%), а минимальное - в гибридных видах - E. x reuteri и E. x murbeckii, 41 и 39% соответственно. Постоянными компонентами фенольного комплекса являются галловая и хлорогеновая кислоты. Наибольшее количество галловой кислоты обнаружено у E. stricta (6,8%), а хлорогеновой кислоты - у E. parviflora (47%). Количественное соотношение феруловой кислоты в пробах колеблется в широких пределах. Максимальное количество этой кислоты обнаружено в E. tatarica (20%), а минимальное - в E. parviflora (1,8%). В E. x reuteri феруловая кислота не обнаружена.
Флавоноиды у исследованных видов Euphrasia представлены производными флавона, флавонола и флаванонола. Суммарное содержание агликонов флавоноидов в пробах находиться в пределах 0,05-5,0%. Максимальное количество лютеолина отмечено в E. brevipila (2,5%), кверцетина и дигидрокверцетина в E. x murbeckii, 5,4 и 1,2% соответственно.
Кумариновые соединения у видов Euphrasia представлены окси-, метоксипроизводными кумарина и его димерами. Наибольшее содержание суммы кумариновых производных в пробах характерно для E. parviflora (9,4%), E. x reuteri (9,2%) и E. brevipila (5,5%), что, вероятно, обусловливает антикоагулянтное действие спиртовых извлечений из травы этих видов [19]. Природные кумарины замедляют процесс свертывания крови [20]. Кумарин доминирует в E. stricta (1,5%), дикумарин в E. x reuteri (8,6%), скополетин в E. brevipila (5,5%), а умбеллиферон в E. x murbeckii (1,5%).
Таблица 3. Фенольные соединения растений рода Euphrasia L.
Время Количественное соотношение, %*
Вещества удержива- E. E. E. E. E. stricta E. E.
ния, мин brevipila parviflora x reuteri officinalis x murbeckii tatarica
Фенолкарбоновые кислоты
Галловая кислота 3,12 * * О, 5, 5,5 2,6 6,4 6,8 4,0 4,4
Хлорогеновая кислота 3,69 32 47 38 32 28 26 20
Кофейная кислота 4,06 3,8 - - - 3,4 3,4 3,6
Феруловая кислота 6,59 5,0 1,8 - 17 4.5 5,9 20
Сумма: 46,5 54,3 40,6 55,4 42,7 39,3 48
Флавоноиды
Кверцетин 26,32 0,08 5,3 1,3 - - 5,4 2,2
Дигидрокверцетин 30,40 0,91 - - - - 1,2 0,43
Лютеолин 49,27 2,5 - - 0,72 0,05 0,51 -
Сумма: 3,5 5,3 1,3 0,72 0,05 7,1 2,6
Кумарины
Умбелиферон 2,75 - 0,99 0,20 0,48 - 1,5 -
Дикумарин 5,55 3,9 7,3 8,6 - 3,8 - -
Скополетин 21,46 1,6 1,1 - 0,02 - 0,40 -
Кумарин 37,40 - - 0,41 - 1,5 1,1 1,0
Сумма: 5,5 9,4 9,2 0,50 5,3 3,0 1,0
Примечание. * - соотношение идентифицированных веществ от общего количества разделенных компонентов в пробе, %; ** - среднее значение. Колебание полуширины доверительного интервала (А X) находится в пределах 5-10% от среднего значения; прочерк означает, что данное вещество не обнаружено.
Выводы
В семи видах рода Euphrasia L.: E. brevipila Bumat et Gremli, E. parviflora Schag., E. x reuteri Wettst., E. officinalis L., E. stricta D. Wolff, ex J.F.Lehm., E. x murbeckii Wettst., E. tatarica Fisch., флоры Пермского края идентифицировано 11 веществ фенольной природы, относящихся к различным классам природных соединений: фенолокислот - феруловая, кофейная, хлорогеновая и галловая кислоты; флавоноидов - лю-теолин, кверцетин, дигидрокверцитин; кумариновых производных - кумарин, дикумарин, скополетин, кумарин, умбеллиферон. Доминирующими компонентами фенольного комплекса всех видов являются фенолкарбоновые кислоты, их суммарное содержание в пробах находится в пределах 39-55%.
180 A. T.B. Бомбела,
В.М. Петриченко
, O.A. Кроткова
Список литературы
1. Гусарова Г.Л. Конспект рода Euphrasia (Scrophulariaceae) России и сопредельных государств // Бот. журн.
2005. Т. 90, вып. 7. С. 1087-1115.
2. Петриченко В.М., Сухинина Т.В. Очанки Западного Урала (фармакогностические и биологические аспекты). Пермь, 2006. 145 с.
3. Овеснов С.А. Конспект флоры Пермской области. Пермь, 1997. 252 с.
4. Юсупова Н.Я. Влияние очанки на кровообращение и экспериментальную гипертонию : дис. ... канд. мед. наук. Ташкент, 1956. 210 с.
5. Юсупова Н.Я. Влияние очанки, произрастающей в Киргизии, на кровообращение и экспериментальную гипертонию // Труды Киргизского медицинского института. 1957. Т. 9. С. 83-87.
6. Гришина Е.А., Гришин A.B., Кармацкая Н.В. Перспективы использования очанки коротковолосистой при остромгепатите // Лекарственные растения Алтайского края. Томск, 1986. С. 46-49.
7. Петриченко В.М., Сухинина Т.В., Одегова Т.Ф., Бабиян Л.К., Шрамм Н.И. Антимикробная активность извлечений из трех видов Euphrasia L. // Растительные ресурсы. 2002. Т. 38, вып. 3. С. 82-86.
8. Петриченко В.М., Сухинина Т.В., Бабиян Л.К., Шрамм Н.И. Химический состав и антиоксидантная активность биологически активных веществ очанки коротковолосистой // Химико-фармацевтический журнал.
2006. Т. 40, вып. 6. С. 66-67.
9. Goun E.A., Petrichenko V.M., Solodnikov S.U., Suchinina T.V., Kline M.A., Cunningham G., Nguyen C., Miles H. Anticancer and antithrombin activity of Russian plants // Journal of Ethnopharmacology. 2001. N81. S. 337-342.
10. Matlawska J., Sikorska M., Kowalewski Z. Zwiazki flawonoidave w herba Euphrasia // Herba pol. 1985. N3-4. Pp. 119-123.
11. Matlawska J., Sikorska M., Kowalewski Z. Zwiazki flawonoidave w herba Euphrasia // Herba pol. 1988. N3. Pp. 97-102.
12. Pethes E., Marczal G., Kery A. Ingredients of several species of the Scrophulariaceae family // Gyogyszet. 1973. V. 17, N4. S. 129-131.
13. Broda B., Jaronewski W., Swiqtek L. Owystçpowaniu kwasu kawowego w niektórich roslinach leczych // Acta pol. Pharm. 1960. V. 17, N4. S. 301-306.
14. Krolikowska M. Skladniki ziela swietlika tqkovego (Euphrasia rostkoviana Hayne.) // Rocz. Chem. 1967. V. 41, N2. Pp. 327--336.
15. Hegnauer R. Chemotaxonomie der Pflanzen. Band 3: Dioctyledoneae, I. Teil: Von Acanthaceae bis Cyrillaceae. Verlag Birkhäuser, Basel und Stuttgart, 1964. 744 s.
16. Клышев Л.К., Бандюкова B.A., Алюкина Л.С. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования) Алма-Ата, 1978. 220 с.
17. Бандюкова В.А. Фенолокислоты растений их эфиры и гликозиды // Химия природ. соединений. 1983. №2. С. 271-275.
18. Сапрыкин Л.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Харьков, 2007. 228 с.
19. Сухинина Т.В., Петриченко В.М., Сыропятов Б.Я., Шестакова Т.С. Антикоагулянтная активность паразитирующих растений семейства Норичниковые // Человек и лекарство: Мат. XIV Рос. нац. конгресса. М., 2007. С. 882.
20. Кузнецова Г. А. Природные кумарины и фурокумарины. Л., 1967. 247 с.
Поступило в редакцию 3 декабря 2010 г.
После перераработки 3 марта 2011 г.
