CC BY
40
микробиология
Пробл. особо опасных инф. 2017; 1:94-99. DOI: 10.21055/0370-1069-2017-1-94-99
УДК 616.98:579.852.11(571.121)
А.нЖуличенко1, Е.и.Еременко1, А.Г.рязанова1, л.Ю.Аксенова1, ДАЖовалев1, с.В.Писаренко1, н.Г.Варфоломеева1, А.м.Жиров1, А.с.Волынкина1, н.П.Буравцева1, Т.м.Головинская1, еАЖотенева1, о.и.цыганкова1, и.А.Дятлов2, В.с.Тимофеев2, А.Г.Богун2, и.В.бахтеева2, А.АЖисличкина2, р.и.миронова2, Г.м.Титарева2, Ю.П.скрябин2, Ю.о.селянинов3, и.Ю.егорова3, Д.В.колбасов3
биологические свойства и молекулярно-генетическая характеристика штаммов bacillus anthracis, выделенных во время вспышки сибирской язвы в ЯМАло-ненецкоМ Автономном округе в 2016 г.
'ФКУЗ «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт», Ставрополь; 2ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», п. Оболенск; 3ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии» Российской академии сельскохозяйственных наук, п. Вольгинский, Российская Федерация
цель работы - определение фенотипических свойств и генетических особенностей штаммов Bacillus anthracis, выделенных во время вспышки сибирской язвы на Ямале в 2016 г. материалы и методы. Исследовали штаммы сибиреязвенного микроба по основным, дополнительным идентификационным тестам и методами canSNP-, MLVA-генотипирования и полногеномного секвенирования. результаты и выводы. Выявлена идентичность фенотипических свойств, генотипов и профилей полногеномного секвенирования штаммов вне зависимости от источника выделения. Подтвержден общий источник заражения людей. Определены филогенетические взаимоотношения исследованных штаммов и их место в глобальной популяции B. anthracis. Впервые изучена вариабельность набора генов, связанных с патогенностью, и показана эффективность использования предложенного алгоритма генетического типирования.
Ключевые слова: сибирская язва, штаммы Bacillus anthracis, фенотипические свойства, генетическое типирование.
Корреспондирующий автор: Куличенко Александр Николаевич, e-mail: snipchi@mail.stv.ru.
A.N.Kulichenko1, E.I.Eremenko1, A.G.Ryazanova1, L.Yu.Aksenova1, D.A.Kovalev1, S.V.Pisarenko1, N.G.Varfolomeeva1, A.M.Zhirov1, A.S.Volynkina1, N.P.Buravtseva1, T.M.Golovinskaya1, E.A.Koteneva1, O.I.Tsygankova1, I.A.Dyatlov2, V.S.Timofeev2, A.G.Bogun2, I.V.Bakhteeva2, A.A.Kislichkina2, R.I.Mironova2, G.M.Titareva2, Yu.P.Skryabin2, Yu.O.Selyaninov3, I.Yu.Egorova3, D.V.Kolbasov3
Biological Properties and Molecular-Genetic Characteristics of Bacillus anthracis strains, Isolated during the Outbreak of Anthrax in the Yamalo-Nenets Autonomous District in 2016
'Stavropol Research Anti-Plague Institute, Stavropol, Russian Federation;2State Research Center of Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russian Federation;3National Research Institute of Veterinary Virology and Microbiology of the Russian Academy of Agricultural Sciences, Volginsky, Russian Federation
Objective of the study was to identify phenotypic properties and genetic peculiarities of Bacillus anthracis strains, isolated during the outbreak of anthrax in the territory of Yamal in 2016. Materials and methods. Investigated were the strains of anthrax agent, applying basic and subsequent identification tests and canSNP-, MLVA-genotyping methods and whole genome sequencing. Results and conclusions. The results showed the identity of the phenotypic properties, canSNP- and MLVA25-genotypes, and profiles of whole genome-sequencing, regardless of the source of the strains isolation. Confirmed was a common source of human infection. Defined were phylogenetic interrelations of the tested strains and their position in global B. anthracis population. For the first time ever explored was variability of the gene pattern, associated with pathogenicity, and demonstrated - the efficiency of the proposed algorithm for genetic typing.
Key words: anthrax, Bacillus anthracis strains, phenotypic properties, genotyping.
Conflict of interest: The authors declare no conflict of interest.
Corresponding author: Alexander N. Kulichenko, e-mail: snipchi@mail.stv.ru.
Citation: Kulichenko A.N., Eremenko E.I., Ryazanova A.G., Aksenova L.Yu., Kovalev D.A., Pisarenko S.V., Varfolomeeva N.G., Zhirov A.M., Volynkina A.S., Buravtseva N.P., Golovinskaya T.M., Koteneva E.A., Tsygankova O.I., Dyatlov I.A., Timofeev V.S., Bogun A.G., Bakhteeva I.V., Kislichkina A.A., Mironova R.I., Titareva G.M., Skryabin Yu.P., Selyaninov Yu.O., Egorova I.Yu., Kolbasov D.V. Biological Properties and Molecular-Genetic Characteristics of Bacillus anthracis Strains, Isolated during the Outbreak of Anthrax in the Yamalo-Nenets Autonomous District in 2016. Problemy Osobo Opasnykh Infektsii [Problems of Particularly Dangerous Infections]. 2017; 1:94-99. (In Russ.). DOI: 10.21055/0370-1069-2017-1-94-99
2016 год отмечен крупнейшей эпизоотией сибирской язвы среди северных оленей в Ямало-Ненецком автономном округе (ЯНАО), повлекшей за собой за-
болевание 36 человек с одним летальным исходом. В ходе эпидемиологического расследования выделены штаммы возбудителя сибирской язвы в пробах
от больных людей и трупов оленей. Исследование штаммов имело целью определить биологические свойства, выявить генетические особенности, сходство их генотипа с известными вариантами для обоснования эпидемиологических данных об источнике заражения людей, получить представление о генетических взаимоотношениях штаммов, определения их места в глобальной популяции Bacillus anthracis.
Материалы и методы
Исследовали 10 штаммов сибиреязвенного микроба, выделенных в 2016 г. в ЯНАО. Для сравнения генотипов использовали 10 штаммов из коллекции патогенных микроорганизмов ФКУЗ «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт», а также литературные данные о генотипе штамма B. anthracis Ames Ancestor (табл. 1).
Фенотипические свойства штаммов оценивали в соответствии со схемой идентификации сибиреязвенного микроба, приведенной в методических указаниях МУК 4.2.2413-08 «Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы».
молекулярно-генетическое типирование проводили методами с разной разрешающей способно-
стью. Анализ «канонических» единичных нуклеотид-ных полиморфизмов (canSNP-типирование) проводили по схеме [1], используя аллельспецифическую ПЦР-амплификацию с LNA-модифицированными зондами и учетом результатов в формате реального времени по модифицированной методике на ампли-фикаторе Rotor-Gene Q (QIAGEN, Германия). MLVA-типирование осуществляли по 25 VNTR-локусам с ПЦР-праймерами, описанными F.Lista et al. [2], путем секвенирования каждого из локусов в автоматическом ДИК-анализаторе ABI 3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США). Полногеномное секве-нирование (ПГС) проводили с помощью секвенатора Ion Torrent PGM, чипов Ion 316 Chips Kit V2 (Life Technologies, США) и набора реагентов Ion Xpress TM Plus Fragment Library Kit (Life Technologies, США) в соответствии с протоколом производителя. Анализ данных ПГС проводили с применением программ Wombac 2.0 (VBC (Monash University, Австралия), SplitsTree 4 (version 4.14.4) (Universität Tübingen, Германия), CLC Sequence Viewer Version 7.0 (QIAGEN, Германия, Œa.io, Aarhus A/S).
Анализ структурных и регуляторных генов, факторов патогенности (pagA, lef, cya, cap A, capB, capC, capD, capE, abrB, acpA, acpB, atxA, pagR), по дан-
Таблица 1
Происхождение и canSNP-генотипы штаммов B. anthracis
Штамм B. anth-racis Источник выделения Место выделения Год выделения Локусы canSNP canSNP-генотип
A.Br.001 A.Br.002 A.Br.003 4 0 о m < 6 0 о m < A.Br.007 8 0 о m < A.Br.009 B.Br.001 B.Br.002 B.Br.003 4 0 о m m A.Br.001
11 Больной человек ЯНАО, Салехард 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
12 Больной человек ЯНАО, Салехард 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
23 Больной человек ЯНАО, Салехард 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
24 Труп оленя ЯНАО, район озера Письёто 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
25 Труп оленя ЯНАО, район озера Письёто 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
26 Труп оленя ЯНАО, район озера Письёто 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
27 Труп оленя Ямальский р-н, Новопортовская тундра 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
28 Труп оленя ЯНАО, район озера Письёто 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
29 Зольный остаток с места сжигания оленя ЯНАО, район реки Еваяха 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
5876 Труп оленя ЯНАО, район озера Письёто 2016 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
1051/35 Труп лошади г Уфа 1935 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
14/41 Содержимое язвы больного Дагестан 1963 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
1284 Пельмени «Особые» г Омск 2010 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
140П Почва скотомогильника Тверская область 1979 T G A T C T T A T T A T A B.Br.001/002
81/1 Содержимое карбункула больного Ставропольский край 1969 Т G A T A T G A T G G T A A.Br.008/009
1266 Почва подворья Ставропольский край 2006 Т G A T A T G A T G G T A A.Br.008/009
1269 Спинномозговая жидкость больного РСО-А 2007 Т G A T A T G A T G G T A A.Br.008/009
1(œ) Материал от КРС РСО-А 1968 Т G A T A T G A T G G T A A.Br.008/009
1307 Струп язвы больного Ставропольский край 2013 Т G A T A T G A T G G T A A.Br.008/009
1322 Мясо овцы Ставропольский край 2013 Т G A T A T G A T G G T A A.Br.008/009
И-271 Почва с места падежа скота Якутская АССР 1980 T A G C A T T A T G G T A A.Br 001/002
Ames Ancestor Труп коровы США, Техас 1981 C A G C A T T A T G G T A A.Br.Ames
2017, issue 1
95
ным черновой сборки полногеномного секвенирова-ния штаммов, проводили in silico, сравнивая с последовательностями генов B. anthracis Ames Ancestor c использованием ресурса NCBI BLASTn (www.blast. ncbi.nlm.nih.gov).
Анализ SNR по нескольким генетическим областям проводили с применением праймеров, описанных L.J.Kenefic et al. [3].
Филогенетический анализ проводили в программе FYLOViZ 2.0 (www.phyloviz.net) по алгоритмам UPGMA и Neighbor-Joining.
Результаты и обсуждение
Все выделенные в ЯНАО штаммы имели биологические свойства, характерные для типичных штаммов B. anthracis, в том числе типичную бакте-риоскопическую морфологию при окрашивании по Грамму специфическими иммуноглобулинами диагностическими флуоресцирующими сибиреязвенными вегетативными адсорбированными, формировали колонии в R-форме на плотных питательных средах и придонный рост с сохранением прозрачности среды в питательном бульоне, обладали способностью к спорообразованию. У штаммов не выявлялась фос-фатазная, лецитиназная, гемолитическая активность на кровяном агаре, они проявляли гемолитическую активность на специальных средах, продуцировали протеолитические ферменты и протокатеховую кислоту, обладали способностью к токсинообразованию in vitro, капсулообразованию in vitro и in vivo, давали положительную реакцию Асколи. ПЦР с ДНК штаммов была положительной с праймерами к генам pag, cya, cap A и хромосомной областью prophage_03. Штаммы чувствительны к сибиреязвенным бактериофагам Fah-ВНИИВВиМ R/D-ph-6, Гамма А26, широкому спектру антибактериальных препаратов
групп пенициллинов, тетрациклинов, фторхиноло-нов, рифампицину, аминогликозидов, левомицетину, тилозину и устойчивы к полимиксину. Значение LD50 для белых беспородных мышей составило 5^23 споры, для морских свинок - 237^830 (подкожное заражение), что свидетельствует о высокой вирулентности штаммов.
SNP-типирование показало, что все штаммы, выделенные в 2016 г. в ЯНАО, независимо от источника и места выделения имеют одинаковый canSNP-генотип B.Br.001/002. Аналогичный генотип характерен для штаммов B. anthracis 1284, B. anthracis 1051/35, B. anthracis 14/41 и B. anthracis 140п. Штаммы B. anthracis 81/1, B. anthracis 1266, B. anthracis 1307 и B. anthracis 1322, имели генотип A.Br.008/009, а штамм B. anthracis Ames Ancestor -
A.Br.Ames (табл. 1).
Эти данные стали первым свидетельством принадлежности штаммов из вспышки в ЯНАО к одному источнику и близости их генотипа с генотипами штаммов B. anthracis 1051/35, B. anthracis 1284,
B. anthracis 14/41 и B. anthracis 140п.
Все изоляты, выделенные в 2016 г. в ЯНАО, имеют один и тот же MLVA-генотип (табл. 2). Это подтвердило предварительный вывод на основании SNP-генотипирования об общности их происхождения, связи заболевания людей с эпизоотией сибирской язвы оленей в ЯНАО. На дендрограммах, построенных по результатам MLVA, хорошо видно разделение штаммов на три кластера (рисунок, II). первый кластер включает все ямальские штаммы, а также штаммы 1051/35, 1284, 14/41 и 140П; второй -штаммы 81/1, 1(СО), 1266, 1269, 1307 и 1322; третий - штаммы И-271 и Ames Ancestor. Особенностью ямальских штаммов, как и других штаммов из первого кластера, является отсутствие амплификации с праймерами к локусу Bams34. Наиболее близким к
Таблица 2
MLVA25- и canSNP-генотипы штаммов B. anthracis
Штамм, № vrrA vrrB1 2 ra s- vrr vrrC1 2 О s- vrr CG3 pX-O1aat 2 О X p Bams01 Bams03 Bams05 Bams13 Bams15 21 s I B 2 2 s § B 3 2 s I B 4 2 s I B 5 2 s § B 8 2 s I B Bams30 Bams31 Bams34 Bams44 Bams51 Bams53
11, 12, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 5876 9 19 7 53 17 2 9 7 14 27 7 27 45 10 15 10 11 13 12 17 85 8 6 6
1051/35 9 19 7 53 17 2 7 7 14 27 7 27 45 10 15 10 11 27 12 17 85 8 6 6
14/41 9 19 7 53 17 2 8 8 14 27 7 27 45 10 15 10 11 13 13 17 84 8 8 6
1284 9 19 9 53 17 2 9 8 14 26 7 7 45 10 15 9 11 13 14 17 84 8 6 8
140П 9 19 7 53 17 2 8 8 13 27 7 27 24 10 17 10 11 13 12 17 30 8 9 8
81/1 10 16 7 57 21 1 11 8 13 27 7 30 45 10 15 9 11 13 14 76 65 9 8 9 8
1266 11 16 7 57 21 1 11 8 13 30 7 30 45 10 15 9 11 13 14 76 65 9 8 9 8
1269 11 16 7 57 21 1 11 8 13 30 7 30 45 10 15 9 11 13 14 76 65 9 8 9 8
1(СО) 10 16 7 57 21 1 11 8 13 30 7 33 45 10 15 9 11 13 14 76 40 9 8 9 8
1307 10 16 7 57 21 1 11 8 14 30 7 30 45 10 15 10 11 13 14 76 65 9 8 9 6
1322 10 16 7 57 21 1 11 8 14 30 7 30 45 10 15 10 11 13 14 76 65 9 8 9 6
И-271 10 16 7 53 17 2 7 11 16 28 7 5 45 10 16 11 13 7,3 57 64 8 11 8 9 8
Ames Ancestor 10 16 6 53 17 2 7 10 16 26 5 70 24 10 16 11 11 13 14 57 64 11 8 9 8
штаммам из Ямала был генотип штамма 1051/35, от- 14/41 (отличия по пяти локусам). Уникальность личавшийся только по двум локусам, и затем штамм MLVA25-генотипа ямальских штаммов установле-
2017, 1Б8ие 1
97
на при сравнительном анализе генотипов 1713 изо-лятов, представленных в базе данных из ресурса MLVAbank for Bacterial Genotyping (http://mlva.u-psud.fr/mlvav4/genotyping). Идентичность генотипов ямальских штаммов, выделенных в трех отдаленных очагах (район озера Письёто, Новопортовская тундра, район реки Еваяха), может быть свидетельством разлитых эпизоотий в прошлом, вызванных одним типом B. anthracis. В связи с идентичностью генотипов всех штаммов из вспышки для дальнейшего исследования были отобраны штаммы B. anthracis 12 (выделен от человека) и B. anthracis 24 (выделен от оленя), а также штаммы сравнения B. anthracis 1284, 14/41, 140П, 81/1, 1(СО), 1266, 1269, 1051/35, 1307, 1322 и Ames Ancestor.
Изучение полногеномных нуклеотидных последовательностей 149 штаммов B. anthracis и одного штамма Bacillus cereus позволило получить представление о генетических взаимоотношениях штаммов и их месте в глобальной популяции B. anthracis. Из дендрограммы, построенной по результатам анализа, видно, что штаммы B. anthracis 12 и 24, выделенные в ЯНАО, группируются вместе со штаммами B. anthracis 14/41, B. anthracis 1284, а также со штаммом B. anthracis HYU01 (выделен в Корее в 2009 г.) (рисунок, II). Штаммы сравнения B. anthracis 1(СО), 81/1, 1266, 1269, 1307 и 1322 группируются отдельно. Штамм B. anthracis И-237 является отдельной ветвью, связанной с группой Ames. Такой характер распределения штаммов соответствует данным canSNP-генотипирования и MLVA (рисунок, I, II).
Изучение генетической вариабельности 9 исследуемых штаммов (рисунок, III) проводили на основании данных черновой сборки при условии, что каждый из генов располагался в пределах одного из контигов сборки. На основании указанного критерия из исследования исключены ген pagA у штаммов B. anthracis 12 и B. anthracis 24 и гены lef, acpB и atxA у штамма B. anthracis 1284. Штаммы B. anthracis 12 и 24 отличались от референсного штамма заменами и делециями в пяти генах и вставкой из девяти оснований в acpA. Последняя встречается также у штаммов B. anthracis 140П и 141/41, у шести штаммов B. anthracis из базы данных NCBI, один из которых (B. anthracis HYU01, Корея), по данным ПГС, близок к B. anthracis 12 и 24. Изменения в гене acpB у штаммов B. anthracis 12 и 24 отличают их от всех остальных штаммов. Между собой эти штаммы отличались генами cya, acpB и atxA. В совокупности отличия в исследованных генах позволили идентифицировать от 4 до 7 типов генов lef, cya, acpA, cap A и acpB и три типа генов atxA. У геновpagR, capB, capC, capD и capE вариабельности не отмечено.
Филогенетический анализ показывает, что изученные штаммы делятся на 9 индивидуальных генотипов, составляющих две группы (рисунок, III). Штамм B. anthracis 12 по этим данным ближе всего к штамму B. anthracis 1051/35, а штамм B. anthracis 24 - к штамму 140П. Впервые примененный анализ
последовательностей генов патогенности позволил получить разделение генотипов штаммов B. anthracis
12 и 24, недостижимое при canSNP-анализе и MLVA.
Исследование штаммов B. anthracis 12 и 24, выделенных от человека и трупа оленя соответственно, показало, что существуют различия в числе единичных повторов адениновых нуклеотидов в трех SNR-локусах (CL10, CL12 и CL35): у B. anthracis 12 - 20,
13 и 12 повторов, соответственно, у B. anthracis 24 -18, 12, 11, у штамма Ames Ancestor - 16, 15 и 15.
эти отличия между двумя ямальскими штаммами могли быть следствием неоднократных трансмиссий инфекций между оленями и передачи к человеку в ходе одной вспышки, так как скорость мутации в SNR-локусах наиболее высока и достаточна для возникновения новых генетических вариантов.
Проведенное исследование показало, что все штаммы B. anthracis, выделенные в ходе вспышки сибирской язвы в ЯНA0 в 2016 г., имеют одинаковые типичные морфологические, биохимические, генетические свойства и высокую вирулентность. Штаммы B. anthracis, выделенные от оленей и больных людей, имеют одинаковые canSNP- и MLVA25-генотипы, идентичный профиль полногеномного секвенирования, что подтверждает заражение людей при различного рода контакте с заболевшими животными. Совпадение их генотипов может объясняться циркуляцией одного штамма возбудителя сибирской язвы на территории ЯНA0 сейчас и во время разлитых эпизоотий в прошлом. Иаиболее близким к ним является штамм B. anthracis 1051/35, выделенный в 1935 г. в Уфе. Выявлена внутривидовая вариабельность нуклеотидных последовательностей генов, ассоциированных с патогенностью B. anthracis. Штаммы B. anthracis 12 (от больного человека) и B. anthracis 24 (от оленя) имеют тип гена acpB, который отличает их от других штаммов B. anthracis, и тип генов cya, acpB и atxA, отличающий их между собой. Анализ SNR предполагает существование неоднократной трансмиссии возбудителя в ходе вспышки сибирской язвы. В целом, выбранный алгоритм и набор методов молекулярного анализа штаммов - canSNP-типирование, MLVA25-типирование, полногеномное секвенирование - показал пригодность для проведения оперативного молекулярно-эпидемиологического расследования вспышек сибирской язвы.
Конфликт интересов. Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
СПИС0К ЛИТЕРАТУРЫ
1. Van Ert M.N., Easterday W.R., Huynh L.Y., Okinaka R.T., Hugh-Jones M.E., Ravel J., Zanecki1 S. R., Pearson T., Simonson S.T, U'Ren J.M., Kachur S.M., Leadem-Dougherty R.R., Rhoton S.D., Zinser G., Farlow J., Coker P.R., Smith K.L., Wang B., Kenefic L.J., Fraser-Liggett C.M., Wagner D.M., Keim P. Global Genetic Population Structure of Bacillus anthracis. PLoSONE. 2007; 2(5):e461. DOI: 10.1371/journal.pone.0000461.
2. Lista F., Faggioni G., Valjevac S., Ciammaruconi A., Vaissaire J., Doujet C., Olivier G., De Santis R., Carattoli A., Ciervo A., Fasanella A., Orsini F., D'Amelio R., Pourcel C., Cassone A.,
Vergnaud G. Genotyping of Bacillus anthracis strains based on automated capillary 25-loci Multiple Locus Variable-Number Tandem Repeats Analysis. BMC Microbiol. 2006; 6:33. DOI: 10.1186/14712180-6-33.
3. Kenefic L.J., Beaudry J., Trim C., Huynh L., Zanecki S., Matthews M., Schupp J., Van Ert M., Keim P. A high resolution four-locus multiplex single nucleotide repeat (SNR) genotyping system in Bacillus anthracis. J. Microbiol. Methods. 2008; 73(3):269—/2. DOI: 10.1016/j.mimet.2007.11.014.
References
1. Van Ert M.N., Easterday W.R., Huynh L.Y., Okinaka R.T., Hugh-Jones M.E., Ravel J., Zaneckil S. R., Pearson T., Simonson S.T., U'Ren J.M., Kachur S.M., Leadem-Dougherty R.R., Rhoton S.D., Zinser G., Farlow J., Coker P.R., Smith K.L., Wang B., Kenefic L.J., Fraser-Liggett C.M., Wagner D.M., Keim P. Global Genetic Population Structure of Bacillus anthracis. PLoSONE. 2007; 2(5):e461. DOI: 10.1371/journal.pone.0000461.
2. Lista F., Faggioni G., Valjevac S., Ciammaruconi A., Vaissaire J., Doujet C., Olivier G., De Santis R., Carattoli A., Ciervo A., Fasanella A., Orsini F., D'Amelio R., Pourcel C., Cassone A., Vergnaud G. Genotyping of Bacillus anthracis strains based on automated capillary 25-loci Multiple Locus Variable-Number Tandem Repeats Analysis. BMC Microbiol. 2006; 6:33. DOI: 10.1186/1471-2180-6-33.
3. Kenefic L.J., Beaudry J., Trim C., Huynh L., Zanecki S., Matthews M., Schupp J., Van Ert M., Keim P. A high resolution four-locus multiplex single nucleotide repeat (SNR) genotyping system in Bacillus anthracis. J. Microbiol. Methods. 2008; 73(3):269-72. DOI: 10.1016/j. mimet.2007.11.014.
Authors:
Kulichenko A.N., Eremenko E.I., Ryazanova A.G., Aksenova L.Yu., Kovalev D.A., Pisarenko S.V., Varfolomeeva N.G., Zhirov A.M., Volynkina
A.S., Buravtseva N.P., Golovinskaya T.M., Koteneva E.A., Tsygankova O.I. Stavropol Research Anti-Plague Institute. 13-15, Sovetskaya St., Stavropol, 355035, Russian Federation. E-mail: snipchi@mail.stv.ru.
Dyatlov I.A., Timofeev V.S., Bogun A.G., Bakhteeva I.V., Kislichkina A.A., Mironova R.I., Titareva G.M., Skryabin Yu.P. State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology. Obolensk, Moscow Region, 142279, Russian Federation. E-mail: info@obolensk.org.
Selyaninov Yu.O., Egorova I.Yu., Kolbasov D.V. National Research Institute of Veterinary Virology and Microbiology of the Russian Academy of Agricultural Sciences. 1, Akademika Bakulova St., Volginsky, Vladimir Region, 601125, Russian Federation. E-mail: VNIIVViM@niiv.petush.el-com.ru.
об авторах:
Куличенко А.Н., Еременко Е.И., Рязанова А.Г., Аксенова Л.Ю., Ковалев ДА., Писаренко С.В., Варфоломеева Н.Г., Жиров А.М., Волынкина А.С., БуравцеваН.П., Головинская Т.М., КотеневаЕ.А., Цыганкова О.И. Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт. Российская Федерация, 355035, Ставрополь, ул. Советская, 13-15. E-mail: snipchi@mail.stv.ru.
Дятлов И.А., Тимофеев В.С., Богун А.Г., Бахтеева И.В., Кисличкина А.А., Миронова Р.И., Титарева Г.М., Скрябин Ю.П. Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии. 142279, Московская обл., Серпуховский р-н, п. Оболенск. E-mail: info@obolensk.org.
Селянинов Ю.О., Егорова И.Ю., Колбасов Д.В. Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии. Российская Федерация, 601125, Владимирская обл., Петушинский р-н, п. Вольгинский, ул. Академика Бакулова, 1. E-mail: VNIIVViM@niiv.petush.elcom.ru.
Поступила 24.01.17.
2017, issue 1
99
