CC BY
28
4. Превышение полученных нами стандартизованных показателей заболеваемости ЗНК в МЦ по сравнению с Россией и Москвой указывает на эффективность существующей программы мероприятий по выявлению ЗНК, позволяющей своевременно диагностировать ранние формы опухолей кожи.
ЛИТЕРАТУРА /REFERENCES
1. Двойрин В. В., Аксель Е. М., Трапезников H. Н. Заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них населения стран СНГ в 1995 году. — М., 1996.
2. Курдина М. И. Активное выявление злокачественных новообразований кожи: Дис. ... д-ра мед. наук. — М., 1993.
3. Чиссов В. И., Старинский В. В, Ременник
Л. В. Заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них населения России в 1995 году. — М., 1996.
4. Burg G., Dummer R., Cavegn В. // Ther. Umscli. — 1993. — Vol. 50, N 12.— P. 822—827. "
5. Farmer K. C., Naylor M. T. //Ann. Pharmacother. — 1996. — Vol. 30, N 6. — P. 662—673.
© Коллектив авторов, 1999 УДК 616-006.444-097
H. H. Тупицын, 3. Г, Кадагидзе, E. Н. Шолохова,
Л. Ю. Андреева, Н. А. Пробатова, И. В. Поддубная,
Д. Ш. Османов, П. А. Зейналова, М. А. Френкель, М. А. Волкова, ./. В rochier, Т. Reme, N. I. Shavdia, В. Klein, J.-F. Rossi
АКТИВАЦИЯ aß-РЕЦЕПТОРНОГО КОМПЛЕКСА ИНТЕРЛЕЙКИНА-6 ПРИ В-КЛЕТОЧНЫХ НЕХОДЖКИНСКИХ ЛИМФОМАХ ЧЕЛОВЕКА
Российский онкологический научный центр РАМН, Москва, Institut National de la Santé et de la Recherche Medícale U475, Montpellier, France, Hospital Lapeyronie, Montpellier, France
Рецептор интерлейкина-6 (ИЛ-6Р) состоит из двух по-липептидных цепей: a-цепь — эго собственно рецептор ИЛ-6 (иное название gp80); ß-цепь — это общая трансду-церная молекула (gpl30) для 6 различных цитокинов [8]: ИЛ-6, лейкемического ингибиторного фактора (ЛИФ), он-костатина М (ОМ), кардиогрофина-1 (КТ-1), цилиарного нейротрофного фактора (ЦНТФ) и ИЛ-11. Цитокины, передающие сигнал внутрь клетки опосредованно через молекулу gpl30, называются цитокинами семейства ИЛ-6, или gpl30-HHTOKHHaMH [9].
Рецепторы ЛИФ и ОМ носят название gp 190, имеют высокую степень гомологии с gpl30 и под влиянием специфических лигандов (ЛИФ, ОМ, КТ-1) образуют с gpl30 гете-родимерные структуры. Взаимодействие ИЛ-6, ЦНТФ и ИЛ-11 со специфическими рецепторами ведет к последующему связыванию образовавшихся комплексов с gpl30 и его гомодимеризации (рис. 1 ).
Russian rates. Females aged 30-39, 40-49 years had skin cancer 3.3-fold as frequently as males of the same age.
4. The increased standard rates observed at the HC as compared to Russia and Moscow as a whole are evidence in favor of implementation of CM screening programs to assure early CM detection.
6. Garbe C., Büttner P., Ellwang U. II Hautarz. — 1995. — Bd 46, N 10. — S. 683—692.
7. Kerenyi N. A., Pandula E., Feuer G. II Med. Hypotheses. — 1990. — Vol. 33, N 2. — P. 75—78.
8. Osterlind A. II Acta. Oncol. — 1992. — Vol. 31, N 8. — P. 903—908.
9. Reinigen D.. Ross M., Bland K. II Semin. Surg. Oncol. — 1993, —Vol. 9, N3. — P. 174—187.
10. Vosmik F. II Cas. Lfik. nes. — 1996. — Vol. 135, N 13. — P. 405—408.
11. Schart F. M., Garbe C. II Hautarzt. — 1993. — Bd 44, N 2: S. 63—68.
Поступила 03.03.98 / Submitted 03.03.98
N.N.Tupitsyn, Z.G.Kadagidze, E.N.Sholokhova,
L.Yu.Andreyeva, N.A.Probatova, I.VPoddubnaya, D.Sh.Osmanov, P.A.Zeinalova, M.A.Frenkel, M.A. Volkova,
J. Brochier, T. Reme, N. I. Shavdia, B. Klein, J.-F. Rossi
INTERLEUKIN-6 aP-RECEPTOR COMPLEX ACTIVATION IN HUMAN B-CELL NON-HODGKIN’S LYMPHOMA
Russian Cancer Research Center AMS, Moscow;
Institut National de la Santé et de la Recherche Medicale U475, Montpellier, France; Hôpital Lapeyronie, Montpellier, France
The interleukin-6 (IL-6) receptor consists of two polypeptide chains a and P: the a-chain is an IL-6 proper receptor (also referred to as gp80); the P-chain is a common transducer molecule (gpl30) for 6 different cytokines [8] such as IL-6, leukemic inhibitory factor (LIF), oncostatin M (OM), cardiotrophin-1 (CT), ciliary neurotrophic factor (CNTF) and interleukin-11 (IL-11). The cytokines that transmit the signal inside the cell via the gpl30 molecule are termed IL-6 family cytokines or gp 130-cytokines [9].
The receptors LIF and OM are referred to as gpl90, demonstrate marked homology with gpl30 and generate heterodimer structures with gp30 under the effect of specific ligands (LIF, OM, CT-1). The IL-6, CNTF and 1L-11 binding to the specific receptors leads to further conjugation of the resultant complexes with gpl30 and its heterodimers (fig.l).
The IL-6 transmission into the cell proceeds in the following order: IL-6 binding to the 1L-6R a-chain ; conjugation
ЦНТФ/CNTF
КТ-1/СТ-1
ЛИФ-Р
gp130 L1F-R др130
ЛИФ-Р др130 ЛИФ-Р др 130
LIF-R др130 LIF-R
др130 ЛИФ-Р LIF-R
др130 !
Рис. 1. Рецепторы и лиганды семейства др130-цитокинов [8].
ИЛ-6Р, ЛИФ-Р, ЦНТФ-Р, ОМ-Р, ИЛ-11Р — рецепторы для ИЛ-6, ЛИФ, ЦНТФ, ОМ и ИЛ-11 соответственно; s — растворимая форма рецептора. Остальные пояснения даны в тексте.
Fig. 1. Receptors and ligands from the gp130-cytokine family [8].
IL-6R, LIF-R, CNTF-R, OM-R, IL-11R, respective receptors of IL-6, LIF, CNTF, OM and IL-11; s, soluble receptor form. See the text for other designation.
Последовательность взаимодействий в передаче сигнала ИЛ-6 внутрь клетки такова: связывание ИЛ-6 с а-ценью ИЛ-6Р; присоединение комплекса ИЛ-6/ИЛ-6Р к gp 130; ковалентная гомодимеризация gp 130; каскад событий внутри-цитоплазматического фосфорилирования с участием JAK1, JAK2, TYK2, STAT1, STAT3.
Регуляторная роль gpl30 при гемопоэтических опухолях изучена недостаточно. Исключением является множественная миелома, при которой убедительно доказано, что активация gpl30 под влиянием ИЛ-6 способствует пролиферации злокачественных клеток и препятствует процессам апоптоза в них [5, 7, 10].
Ранее нами было показано изменение эпитопной структуры ИЛ-6Р (gp80/gp 130) под действием специфического лиганда ИЛ-6 [2, 17]. В упрощенном виде эпитопная структура рецепторного комплекса представлена на рис. 2. На молекуле gp80 есть три группы эпитопов [12]: в активном центре связывания ИЛ-6 (блокируются моноклональными антителами — МКА — М164 и М195); в области взаимодействия с gp 130 (МКАМ182); не связанные с функционированием gp80 (М91). Молекула gpl30 значительно более полиморфна в антигенном отношении и содержит 10 эпитопных групп, имеющих буквенные обозначения от А до J [13]. Некоторые эпитопы не влияют на функцию gpl30-uHTOKHHOB вообще (группы G и Н) или на функцию ИЛ-6 (эпитопы С). Взаимодействие с gp80 связано с эпитопами В, а димеризация — с эпитопами А. Схематично изменение эпитопной структуры gpl30 под влиянием ИЛ-6 представлено на рис. 3. На основании комбинации эпитопов, доступных для MICA, можно выделить 2 формы gp 130 на мембране клеток: молекула в неактивном состоянии (все эпитопы доступны для МКА — А*, В+, С+), молекула в активированном состоянии (низкая или отсутствует экспрессия функциональных эпитопов — А", В", С+).
В настоящей работе представлены результаты исследований экспрессии gpl30 у 118 больных гемобластозами.
of the IL-6/IL-6R complex with gpl30; gpl30 covalent homodimerization; intracytoplasmic phosphorylation cascade involving JAK1, JAK2, TYK2, STAT1, STAT3.
The gpl30 regulatory role in hemopoietic neoplasia is unclear. Except for multiple myeloma since there is convincing evidence of the fact that gp!30 activation under the effect of IL-6 enhances proliferation and inhibits apoptosis of malignant cells [5,7,10].
We demonstrated changes in IL-6R (gp80/gpl30) epitope pattern under the influence of the specific ligand IL-6 elsewhere [2,17]. Fig.2 is a simplified presentation of the receptor complex epitope pattern. There are three epitope groups on the gp80 molecule [12] that are located in the IL-6 active binding center (is blocked by monoclonal antibodies (MAb)
I ИЛ-6
Рис. 2. Эпитопная структура gp130/80-рецептора [2]. Fig.2. Epitope structure of gp130/80 receptor [2].
Counts
Counts
Counts
Рис. 3. Изменение эпитопной структуры gp130 под влиянием ИЛ-6.
Верхний ряд — экспрессия эпитопов (заштрихованный пик) в сравнении с контролем. Нижний ряд — экспрессия эпитопов после инкубации с ИЛ-6 (жирная линия): снижение уровней А1 (димеризация) и В1 (связывание с др 80) под влиянием ИЛ-6; уровни С2 не изменяются. Гистограммы иммунофлюоресцентного окрашивания на проточном цитометре FACScan [2, 17].
Fig.3. Changes in gp130 epitope pattern under the effect of IL-6.
The upper row demonstrates epitope expression (shaded peak) as compared to the control. The lower row shows epitope expression following incubation with IL-6 (heavy line): fall in A1 (dimerization) and B1 (binding to gp80) under the IL-6 effect; no changes in C2. FACScan immunofluorescence histograms [2,17].
Показано, что рецепторный комплекс наиболее характерен для периферических В-клеточных лимфом. Активированная форма gp 130 была характерна для мантийноклеточных лимфом и крупноклеточных В-лимфом.
Материалы и методы. Исследование различных эпитопов gp 130 проведено у 118 больных с лейкозами и лимфомами. У 17 больных был острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), у 4 — острый мислобластный лейкоз (ОМЛ), у 39 — хронический лимфолейкоз В (В-ХЛЛ) и у 58 — неходжкинские лим-фомы. Во всех случаях диагностика основывалась на стандартных морфологических, цитохимических и иммунофснотипичсских данных. Исследовали клетки гспаринизированной крови или костного мозга. У 47 больных с В-ли-нейными опухолями и у 5 больных с нс-В-клсточными лимфомами иммуно-гистохимичсскос исследование проведено на криостатных срезах опухоли.
Иммунофлюоресцентный анализ. Иммунофенотипированис клеток периферической крови и костномозгового пунктата проведено с использованием широкого комплекса МКА, стандартно используемых для иммунодиагностики в РОНЦ РАМН [I]. Выделение иммуноподвариантов ОЛЛ осуществлялось на основании принятой в РОНЦ РАМН иммуноклассификации [16]. Исследования проведены методом непрямой иммунофлюорсс-ценции с учетом результатов на проточном цитомстрс FACScan («Bccton Dickinson», США).
Моноклональные антитела к gp 130/80. МКА к gp 130/80 были любезно предоставлены J. Brochicr (Франция). Перечень и специфичность МКА приведены в табл. 1.
Иммуногистохимические исследования. Выделение вариантов неходж-кинских лимфом осуществлялось с использованием принципов REAL-классификации [б]. Для оценки экспрессии антигенов в большинстве случаев использовали иммунофлюоресцентный метод с учетом результатов на микроскопе «Leitz Orthoplan» (Германия).
M164 and M195; in the gpl30 binding site (MAb M182); not related to gp80 functioning (M91). The gpl30 molecule demonstrates a much greater antigen polymorphism and contains 10 epitope groups designated by letters A to J [13]. Some epitopes have no effect on the function of gp 130-cytokines in general (groups G and H) or on the function of IL-6 (epitopes C) in particular. The interaction with gp80 is effected through the B epitopes while the dimerization proceeds via the A epitopes. Fig.3 is the schematic presentation of changes in the gpl30 epitope pattern under the effect of IL-6. Basing on epitope combination accessible for MAb we may distinguish 2 types of cell membrane gpl30, i.e. inactive molecule (all epitopes are MAb-accessible: A' B C ), activated molecule (no or low expression of functional epitopes: ABC').
This paper summarizes results of study of gpl30 expression in 118 patients with hematology malignancies. The receptor complex was most characteristic of peripheral B-cell lymphomas. The gpl30 activated form was specific of mantel-cell lymphoma and large-cell B-lymphoma.
Materials and Methods. Study of gp 130 epitopes was performed in 118 patients with leukemia and lymphoma including 17 acute lymphoblastic lcukemias (ALL), 4 acute mycloblastic leukemias (AML), 39 B-chronic lymphatic leukemias (B-CLL) and 58 non-Hodgkin’s lymphomas. The
Результаты и обсуждение. Мембранная экспрессия gp80 или gpl30 была изучена на злокачественных клетках 118 больных с различными типами лейкозов и неходжкинских лимфом. Для определения gp80 и gpl30 были использованы в основном МКА М91 (в ряде случаев в смеси с М5) или МКА С2 (в ряде случаев в смеси с D2). Использование пар МКА, применявшееся для усиления флюоресцентного сигнала, не привело к увеличению частоты антигенположитель-ных случаев (табл. 2). Применение МКА М91 или С2 позволяло обнаружить мембранную экспрессию gp80 и gpl30 методом проточной цитофлюоримегрии. В иммуногистохи-мических реакциях ни отдельно взятые МКА к gp80, ни их пары МКА не давали яркого флюоресцентного окрашивания, достаточного для однозначной интерпретации данных (по этой причине результаты иммуногистохимического изучения gp80 не приведены в табл. 2). Напротив, применение анти-gpl30 в исследованиях на криостатных срезах, позволяло надежно выявлять антигенположительные клетки.
Мембранные gp80 и gpl30 не были обнаружены при не-В-клеточных лимфоидных опухолях (4 пре-Т-ОЛЛ, 4 ОМ Л, 1 Т-ХЛЛ, 3 периферические Т-клеточные лимфомы, lKi-1 лимфома и 1 Х-гистиоцитоз).
Примерно у половины обследованных больных с В-ли-нейными лейкозами и лимфомами злокачественные клетки экспрессировали gp80/gp 130-рецептор. В 47% случаев (26 из 55) обнаружены gp80 и в 54% случаев (54 из 100) — gpl30. Наиболее часто ос- и P-цепи рецептора ИЛ-6 были экспрессированы одновременно. Однако gpl30 был обнаружен в отсутствие gp80 в 6 случаях, а обратное сочетание имело место в 3 случаях (табл. 3).
В пределах В-линейных опухолей ни gpl30, ни gp80 не были обнаружены при про-В-ОЛЛ и пре-пре-В-ОЛЛ. Наибольшая частота экспрессии gpl30 (см. табл. 2) отмечена при лимфомах из клеток мантии фолликулов (12/15, 80%), при крупноклеточных В-лимфомах (6/8, 75%) и В-ХЛЛ (24/39, 62%).
Детальное иммунофенотипическое изучение проведено у 76 больных с В-линейными лейкозами и лимфомами (табл. 4 и 5). Наиболее значимые различия получены относительно экспрессии антигена CD5. Экспрессия этого антигена с достоверно большей частотой обнаружена в gp80 -и gpl30+-rpynnax. Некоторые различия, близкие к достоверным, получены и относительно других антигенов. По-видимому, они связаны с отсутствием ИЛ-6-рецепторного комплекса при В-линейных ОЛЛ.
Эпитопный анализ антигенов gpl30 и gp80 проведен у 18 больных В-ХЛЛ (табл. 6). «Активированный» фенотип gpl30, то есть отсутствие (маскировка) антигенов, расположенных в участках ковалентной димеризации или в участках связывания с gp80, установлен у 28% (5 из 18) больных. Совокупность эпитопов молекул gpl30 и gp80 отличалась от типичного «активированного» фенотипа gpl30, возникающего на миеломных клетках под действием ИЛ-6. Во всех 5 случаях отмечена маскировка экспрессии А1-эпитопа (ди-меризация). Однако наличие В1-эпитопа или отсутствие молекулы gp80 не исключало возможность активации gpl30 иными, нежели ИЛ-6, цитокинами семейства gpl30.
У большинства больных В-ХЛЛ при наличии мембранной экспрессии gp80/gp 130 все эпитопы рецепторного
Т а б л и ц а 1 ТаЫе1
Специфичность МКА к др130/80 Specificity of MAbs to gpl 30/80
Наименование Молекула Функциональная роль
M91 др80 Неизвестна Unknown
M5 др80 « «
M164 др80 Связывание ИЛ-6 IL-6 binding
M195 др80 « «
M182 дрво Взаимодействие с др130 Interaction with др130
A1 др 130 Димеризация Dimerization
B1 дртзо Взаимодействие с др80 interaction with др80
C2 др130 Не связана с ИЛ-6 Not related to IL-6
D2 др130 Блок. др130-цитокины Gp130-cytokine blockade
MAb Molecule Functional role
diagnosis was verified by morphological, cytochcmical and immunophcno-typing findings in all cases. The study was performed in heparinized blood or bone marrow cells. In 47 eases with B-lincage tumors and in 5 cases with non-B-ccll lymphomas the immunohistochcmical study was carricd out on tumor cryostat sections.
Immunofluorescence Assay. The immimophenotyping of peripheral blood and bone marrow cclls was performed using a MAb broad range panel routinely used at the RCRC AMS for immunodiagnosis [1|. ALL immunophcnosubtyping was carricd out basing on the classification adopted at the RCRC [16]. The cclls were studied for reactivity by indirect immunofluorcsccncc and counted using a FAC Scan flow cytomctcr (Bccton Dickinson, USA).
Monoclonal Antibodies to gp130/80. MAbs to gp 130/80 were supplied by J.Brochicr (France). The MAb types and specificity arc shown in table I.
Immunohistocheinical Study. Non-Hodgkin's lymphoma subtyping was carricd out basing on the REAL classification principles |6|. Antigen expression was mainly evaluated by immunofluorcsccncc microscopy using a Lcitz Orthoplan (Germany) microscope.
Results and Discussion. Membrane expression of gp80 or gpl30 was studied on malignant cells from 118 patients with various leukemia and non-Hodgkin’s lymphoma types. MAb M91 (sometimes in mixture with M5) or MAb C2 (sometimes in mixture with D2) were mainly used to recognize gp80 or gpl30. The use of MAb pairs to enhance fluorescence failed to increase antigen positivity (table 2). The MAb M91 or C2 discovered gp80 or gpl30 membrane expression which was evaluated by flow cytometry. Since both individual MAbs to gp80 and MAb pairs failed to generate bright enough fluorescence for definite interpretation of results, the gp80 immunohistochemical findings are not shown in table 2. In contrast, the use of anti-gpl30 in the cryostat section study provided reliable detection of antigen-positive cells.
There were no gp80 or gpl30 on cell membrane in non-B-cell lymphoid tumors (4 pre-T ALL, 4 AML, 1 T-CLL, 3 peripheral T-cell lymphomas, 1 Ki-1 lymphoma and 1 X-histiocytosis).
Таблица 2 Table2
Экспрессия gp130 и gp80 при В-линейных лейкозах и лимфомах Gp130 and gp80 expression in B-lineage leukemia and lymphoma
Вариант лейкоза или лимфомы gp130 (проточная цитометрия) gp80 (проточная цитометрия) gp130 (иммуногистохимия) Всего
gpi gp80
ОЛЛ:/А1Х:
про-В 0/2 0/2 0/1 0/3 0/2
pro-В
(CD104T)
пре-пре-В 0/5 (0/4) 0/5 0/5 (0/3) 0/10 0/5
рге-рге-В
(CD10"m )
Лимфомы:/1_утр1ютаБ:
ЛМЛ/SLL 1/2 1/2 2/2 (1/1) 3/4 1/2
ХЛЛ/CLL 21/33 (8/13) 19/33 (4/13) 3/6 (2/3) 24/39 19/33
ЛПЛ/LPL 1/1 1/1
МКЛ/МСХ 7/8 5/7 5/7 (4/5) 12/15 5/7
ККЛ/LCL 6/8 (2/3) 6/8
ФКЛ/FCL 1/5 0/5 3/8(3/6) 4/13 0/5
ЛТБ/BL 1/1 2/2 2/2 1/1
ЛМЗ/MZL 1/1 0/1 1/2 2/3 0/1
ИБЛ/IBL 0/5 (0/1) 0/5
Leukemia or lymphoma type gp130 (flow cytometry) gp80 (flow cytometry) gp130 (immuno-histochemical assay) gpl30 gp80
Total
Примечания. В числителе — число больных с экспрессией gp130 (С2) или др80 (М91); в знаменателе — общее число обследованных. В скобках указаны результаты при использовании пар антител С2 + D2 или М91 + М5.
Здесь и в табл. 8 : ЛМЛ — лимфома из малых лимфоцитов; ЛПЛ — лимфоплазмоцитарная лимфома; МКЛ — мантийноклеточная лимфома; ККЛ — крупноклеточная лимфома; ФКЛ — фолликулярноклеточная лимфома; ЛТБ — лимфома типа Беркитта; ЛМЗ — лимфома маргинальной зоны; ИБЛ — иммунобластная лимфома.
Note. Numerals in the numerator show the number of cases with gp130 (C2) or gp80 (M91) expression; numerals in the denominator show the total number of cases studied. Fractions in parentheses show results with antibody pairs (C2+D2 or M91+M5).
Here and in table 8 : SLL, small lymphocyte lymphoma; LPL, lymphoplasmatic lymphoma; MCL, mantle-cell lymphoma; LCL, large-cell lymphoma; FCL, follicle-cell lymphoma; BL, Burkitt’s lymphoma; MZL, marginal zone lymphoma; IBL, immunoblastic lymphoma.
Таблица 3 Table 3
Сравнение экспрессии gp130 и gp80 при В-клеточных опухолях
Comparison of gp130 and gp80 expression in В-cell tumors
Молекула gp80- gp80
дрізо' 17 6
дрізо 3 17
Molecule gp80* gp80"
комплекса визуализировались с помощью МКА. В 5 таких случаях оценили возможность видоизменения зпитопной структуры §р8()/дрі30 под действием ИЛ-6. Клетки инкубировали с ИЛ-6, после чего повторно изучали иммунофенотип рецепторного комплекса (табл. 7). У 3 из 5 больных под действием естественного лиганда (ИЛ-6) произошло перераспределение эпитопов (активация) мембранного рецептора клеток. Это свидетельствует о функциональной
About, half the B-lineage leukemias and lymphomas expressed the gp80/gpl30 receptor: 47% (26/55) presented with gp80 and 54% (54/100) with gpl30. The 1L-6R a- and (3-chains were mainly expressed together. Though 6 cases presented with gpl30 and no gp80 and another 3 were gpl307gp80T(table 3).
Within the B-lineage tumors there were neither gpl30 nor gp80 in pro-B ALL and pre-pre-B All. The highest gpl30 expression (see table 2) was detected in follicle mantle cell lymphomas (12/15, 80%), in large-cell B-lymphomas (6/8, 75%) and B-CLL (24/39, 62%).
Detailed immunophenotyping was performed in 76 patients with B-lineage leukemia and lymphoma (tables 4 and 5). The most significant differences were obtained for CD5 expression. The antigen expression was significantly more frequent in gp80" and gpl30~ cases. Certain differences close to statistical significance were found for other
Таблица 4 Table 4
Иммунофенотипическое сравнение др80* и др80 В-линейных опухолей
Immunophenotypic comparison of др80* and др80~ B-lineage tumors
Антиген gp80* gp80~ P
CD38 4/14(29) 14/22(64) 0,04
CD5 12/14(86) 9/22(41) 0,008
CD23 9/14(64) 15/22(68) 0,8
HLA-DR 13/14(93) 20/22(91) 0,8
CD10 1/12(8) 5/20(25) 0,2
CD37 13/13(100) 18/22(82) 0,1
CD71 5/11(46) 6/19(32) 0,4
Antigen gp80* gp80- P
Примечание. Количество больных (в скобках — процент), экспрессирующих CD-антигены, в пределах др80*- и др80‘-групп. Note. The number of cases (percentage) expressing CD antigens within gp80* and gp80~ groups.
Tаблица 6 Table 6
Экспрессия функциональных эпитопов gp130/80 при В-ХЛЛ Expression of functional epitopes gp130/80 in B-CLL
№ n/n Диагноз C2 или D2 A1 B1 M91 или M5 M195
1 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + +
2* В-ХЛЛ/В-CLL + - + - -
3 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + +
4* В-ХЛЛ/В-CLL + - - - -
5* В-ХЛЛ/В-CLL + - - + +
6 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + +
7 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + +
8 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + +
9 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + +
10 В-ХЛЛ/В-CLL + + h. д./n.d. - h. д./n.d.
11 В-ХЛЛ/В-CLL + + h. д./n.d. + h. д./n.d.
12 В-ХЛЛ/В-CLL + + h. д./n.d. + h. д./n.d.
13 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + h. д./n.d.
14 В-ХЛЛ/В-CLL + + H. д./n.d. + h. д./n.d.
15* В-ХЛЛ/В-CLL + - - - -
16 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + +
17 В-ХЛЛ/В-CLL + + + + +
18* В-ХЛЛ/В-CLL h. д./n.d. - + + +
No. Diagnosis C2 or D2 A1 B1 M91 or M5 M195
* Активированный эпитопный фенотип gp130. Здесь и в табл. 7, 8: н. д. — нет данных.
*, gp130 activated epitope phenotype. Here and in Tables 7,8:
‘n.d.’ means ‘no data available’.
зрелости ИЛ-6Р при В-ХЛЛ и о способности опухолевых лимфоидных клеток взаимодействовать с ИЛ-6. Связывание ИЛ-6 с клетками В-ХЛЛ было также подтверждено применением биотинилированного ИЛ-6 и последующей визуализацией лиганда на мембране комплексом стрепта-видин — фикоэритрин (данные не приведены).
Значительно чаще «активированный» gp 130/80 обнаруживается при периферических В-клеточных лимфомах.
Таблица 5 Table 5
Иммунофенотипическое сравнение др130* и др1 ЗО-В-линейных опухолей
Immunophenotypic comparison of др130* and др130' B-lineage tumors
Антиген gp130* gp130 P
CD38 CD5 CD23 HLA-DR CD10 CB45 CD37 CD71 13/31(42) 18/31(58) 16/31(52) 30/31(97) 2/24(8) 14/14(100) 30/30(100) 4/12(33) 22/45(49) 14/45(31) 16/45(36) 35/43(81) 10/37(27) 19/23(83) 33/43(77) 7/18(39) 0,6 0,02 0,2 0,045 0,07 1,0 0,004 0,8
Antigen gpl30* gp130 P
Примечание. Количество больных (в скобках — процент) экспрессирующих CD-антигены, в пределах др130'- др130 -групп.
Note. The number of cases (percentage) expressing CD antigens within gp130* and gp130~ groups.
Таблица 7 Table7
Влияния ИЛ-6 на мембранные эпитопы др130 лимфоцитов В-ХЛЛ
IL-6 effect on lymphocyte membrane epitopes gp130 in B-CLL
№ n/n C2 A1 B1 M91 M195
7* => u U => u
8* h. д./n.d. u u =>
9 => => => => =>
13 => => H. д. => =>
14* => u h. д./n.d. h. д./n.d. h. д./n.d.
No. C2 A1 B1 M91 M195
Примечания. ‘Перераспределение эпитопов под влиянием ИЛ-6. -И — снижение экспрессии антигена; => — нет изменений в уровнях экспрессии антигена.
Note. *, Epitope redistribution under the effect of IL-6.
U, fall in antigen expression; =>, no changes in antigen expression.
antigens. They seem to be related to the absence of IL-6R complex in B-lineage ALL.
Epitope analysis of gpl30 and gp80 was performed in 18 patients with B-CLL (table 6). Activated gpl30 phenotype,
i.e. the absence (masking) of the antigens located in covalent dimerization or in gp80 binding sites was found in 28% (5/18) of the patients. The gpl30 and gp80 epitope pattern was different from the typical activated gpl30 phenotype arising on myeloma cells under the effect of IL-6. The masking of A1 epitope (dimerization) was found in all the 5 cases. However, the presence of B1 epitope or the absence of gp80 did not excluded gpl30 activation by other than IL-6 cytokines from the gpl30 family.
In most B-CLL patients with membrane expression of gp80/gpl30 all receptor complex epitopes were detectable by the MAbs. In 5 of these cases we attempted to find out whether the gp80/gpl30 epitope pattern was changing under the effect of IL-6. The cells were incubated with IL-6, and
Counts Counts Counts
Рис. 4. Активационный эпитопный фенотип gp130 при лимфоме из клеток зоны мантии фолликулов.
Гистограммы иммунофлюоресцентного окрашивания на прочном цитометре FACScan; заштрихованный пик — изотипический контроль. Процент антигенположительных клеток в области М1: контроль — 3,6; А1 — 6,5; D1 — 8,1; С2 — 87,9.
Fig.4. Gp130 activated epitope phenotype in lymphoma originating from follicle mantle cells.
FACScan immunofluorescence histograms; the shaded peak shows isotypic control. Fraction of antigen-positive cells in M1 region: control 3.6%; A1 6.5%; B1 8.1%; C2 87.8%.
Таблица 8 Table8
Экспрессия функциональных эпитопов gp130/80 при В-клеточных лимфомах
Expression of functional epitopes gp130/80 in В-cell lymphomas
Изучение эпитопов рецептора проведено у 14 больных (табл. 8). При лимфомах из клеток мантии фолликулов лимфатических узлов «активация» gpl30 имела место в 6 (75%) из 8 изученных случаев (вдвое чаще, чем при В-ХЛЛ). Во всех4 случаях крупноклеточных В-лимфом gpl30 также находился в активированном состоянии. На рис. 4 представлен типичный пример активированного фенотипа gpl30 при лимфоме из клеток зоны мантии фолликулов: практически полное отсутствие эпитопов А1 и В1 и яркая экспрессия эпитопа С2.
receptor immunophenotyping was repeated (table 7). Three of the 5 cases presented with redistribution of membrane receptor epitopes (activation). This is evidence of 1L-6R maturity in B-CLL and of the ability of tumor lymphoid cells to interact with IL-6. The IL-6 binding to B-CLL cells was also confirmed in assays with biotin-modified IL-6 and further ligand visualization using a streptovidin-ficoerythrin complex (data not shown).
Prevalence of activated gp 130/80 was much greater in peripheral B-cell lymphomas. Study of the receptor epitopes was performed in 14 patients (table 8). The gpl30 activation was discovered in 6 of 8 (75%) lymphomas from follicle mantle cells, i.e. twice as frequently as in B-CLL. The activated gpl30 was also found in all 4 cases with large-cell B-lymphomas. Figure 4 demonstrates a typical activated gpl30 phenotype in lymphoma from follicle mantle cells with practically complete absence of A1 and B1 epitopes and bright expression of C2.
Our findings may add to the knowledge of gpl30-medi-ated mechanisms of growth of non-Hodgkin’s B-cell lymphomas. The significance of IL-6 in the lymphoma pathogenesis could be expected since IL-6 is a powerful B-cell growth and differentiation factor [14]. It plays a central part in tumor cell growth in multiple myeloma [7] as well as in Castleman disease [18]. The IL-6 is synthesized by tumor surroundings in AIDS-associated large-cell lymphoma [3] and its inhibition may produce an antitumor effect [4].
The gp80 was expressed in a considerable fraction of B-CLL patients and some low-grade B-cell lymphoma cases [11]. This study demonstrated high frequency of expression and activation of IL-6 aP-receptor complex in lymphomas originating from lymph node follicular mantle cells. These findings should be verified as to what extent the activated epitope phenotype of gpl30 molecule reflects the receptor actual functioning. Besides, it is not quite clear whether the gpl30-mediated signal enhances growth and survival of malignant mantle lymphocytes. We are currently trying to elucidate these problems. They are of much clinical signifi-
№ n/n Диагноз C2 A1 B1 M91 M95
1* МКЛ/MCL - - + - -
2 МКЛ/MCL + + + + +
3* МКЛ/MCL + - - h. д./n.d. H. д./n.d.
4 МКЛ/MCL + + + + +
5* МКЛ/MCL + - - + +
6* МКЛ/MCL + - + - -
7* МКЛ/MCL h. д./n.d. - + + +
8* МКЛ/MCL + - h. д./n.d. H. д./n.d.
9* ККЛ/LCL + _ - H. д./n.d. h. д./n.d.
10* ККЛ/LCL + - - h. д./n.d. h. д./n.d.
11* ККЛ/LCL + - - h. д./n.d. h. д./n.d.
12* ККЛ/LCL + - - h. д./n.d. h. д./n.d.
13 ЛМЗ/MZL + c/w c/w h. д./n.d. h. д./n.d.
14 ЛМЛ/SLL + c/w - h. д./n.d. h. д./n.d.
No. Diagnosis C2 A1 B1 M91 M95
Примечания. * Активированный эпитопный фенотип gp130. с — слабая экспрессия по данным иммуногистохимии.
Note . *, gp130 activated epitope phenotype; w, weak expression by immunohistochemical assay.
Таким образом, полученные в нашей работе данные могут оказаться полезными в понимании gpl 30-опосредовапных механизмов роста ряда неходжкинских В-клеточных лимфом. Роль ИЛ-6 в патогенезе этих лимфом не является чем-то неожиданным. ИЛ-6 — это мощный ростовой и дифференциро-вочный фактор В-клеток [14]. Он играет центральную роль в росте опухолевых клеток при множественной миеломе [7], а также в развитии болезни Кастельмана [18]. ИЛ-6 синтезируется опухолевым окружением при крупноклеточных лим-фомах, ассоциированных со СПИДом [3], и его ингибирование может оказывать противоопухолевый эффект [4].
Известно, что gp80 экспрессирован у значительной части больных В-ХЛЛ и ряда больных В-клеточными лимфомами низкой степени злокачественности [11]. В настоящей работе нами впервые показана высокая частота экспрессии и активации aß-рецепторного комплекса ИЛ-6 при лимфомах из клеток мантии фолликулов лимфоузлов. Эти данные нуждаются в дополнительной проверке с точки зрения того, насколько «акгивиро-ванный эпитопный фенотип» молекулы gpl30 реально отражает функционирование рецептора. Более того, не совсем понятно, способствует ли gpl30-onocpeAOBaHHbm сигнал росту и выживанию злокачественных лимфоцитов мантии. Эти вопросы в настоящее время нами изучаются. Их клиническая актуальность обусловлена тем, что мантийноклеточные лимфо-мы, диагностированные на основе принципов REAL-классифи-кации [6], характеризуются наихудшим прогнозом среди В-клеточных лимфом. Пятилетняя выживаемость при лимфомах из клеток мантии не превышает 30% [15], и адекватных подходов к лечению на сегодняшний день не существует.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований.
ЛИТЕРАТУРА /REFERENCES
1. Тупицын H. Н. //Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека. (Руководство для врачей-морфологов) /Ред. Петров С. В., Киясов А. А. — Казань, 1998. — С. 138—153.
2. Autissier Р., De Vas J., Liautanl J., Tupitsyn N. ct al. /'/Intern. Immunol. — 1998, —Vol. 10.— P. 1881—1889.
© Коллектив авторов, 1999 УДК 616.441 -006.6-073.916;681.3
I Г. Глазкова, Л. Ф. Романова, Е. Е. Станякина, С. В. Ширяев
СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА УРОВНЕЙ ТИРЕОИДНЫХ ГОРМОНОВ И ОПУХОЛЕВЫХ МАРКЕРОВ В ДИАГНОСТИКЕ УЗЛОВЫХ ОБРАЗОВАНИЙ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Р1ИИ клинической онкологии
Щитовидная железа (ЩЖ) является жизненно важным органом, она отвечает за продукцию гормонов, обеспечивающих полноценное физическое, половое и интеллектуальное
cance since mantle-cell lymphomas diagnosed by the REAL classification [6] have the poorest prognosis of all B-cell lymphomas with the 5-year survival 30% or less [15] and there is no adequate treatment of the disease so far.
This study was supported by the Russian Foundation for Fundamental Research.
3. Emilie D., Peuchmaur М., Maillot М. C. et al., //J. clin. Invest. — 1990. — Vol. 86. — P. 148—159.
4. Emilie D., Coumbaras J., Raphael M. et al. //Blood. — 1991. — Vol. 80. — P. 498—504.
5. Ferlin-Bezombes М., Jourdan М., Liautanl J. et al. //J. Immunol. — 1998. — Vol. 161. — P. 2692—2699.
6. Harris N. L„ Jaffe E. S., Stein H. et al. //Blood. — 1994. — Vol. 84, N 5. — P. 1361—1392.
7. Kawano M„ Hirano Т., Matsuda T. et al. //Nature. — 1988. — Vol. 332. — P. 83—85.
8. Kishimoto Т., Akira S., Narasaki S. et al. //Blood. — 1995. — Vol. 86, N 4. — P. 1243—1254.
9. Klein B. //Cuit. Opin. Haematol. — 1998.— Vol. 5. — P. 186—191. \0.Klein B., Zhang S. G., Jourdan M. et al. //Blood. — 1989. —
Vol. 73. — P. 517—526.
W.Lavabre-Bertrand Т., Exbrayat C„ Liautard J. ct al. //Brit.
3. Haematol. — 1995. — Vol. 91. — P. 871—877.
12.Liautard J., Gaillard J. P., Mani J. C. et al. //Eur. Cytokine Network. — 1994. — Vol. 5. — ■ P. 293—300.
13.Liautard./., Sun R. X., Cotte N. et al. //Cytokine. — 1997. — Vol. 9, N4. — P. 233—241.
\A.Snick V. //Ann. Rev. Immunol. — 1990. — Vol. 8. — P. 253—257. 15.The Non-Hodgkin’s lymphoma classification project //Blood. — 1997. — Vol. 89. — P. 3909—3918. lb.Tupitsyn N. N.. Frenkel M. A., Rudinskayu T. D. et al. //Int.
J. Cancer. — 1996. — Vol. 68, N 2. — P. 160—163.
17.Tupitsyn N.. Kadagidze Z, Gaillard J.-P. et al. //J. clin. Lab.
Haemat. — 1998. — Vol. 20. — P. 345—352.
\S.Yoshizaki K., Matsuda Т., Nishinioto N. ct al. //Blood. — 1989. -- Vol. 74. — P. 1360—1367.
Поступила 15.12.98 / Submitted 15.12.98
T.G.Glazkova, L.F.Romanova, E.E.Stanyakina, S.V.Shiriayev
STATISTICAL EVALUATION OF THYROID HORMONES AND TUMOR MARKERS IN DIAGNOSIS OF THYROID NODULAR LESIONS
Institute of Clinical Oncology
The thyroid is a vital organ that produces hormones contributing to correct physical, sexual and intellectual development and growth, adequate metabolism, functioning of
