CC BY
29
УДК 616.24-002.5-022-07
ЗНАЧИМОСТЬ КОНЦЕНТРАЦИИ №1ß В СЫВОРОТКЕ КРОВИ В ОПРЕДЕЛЕНИИ ИНФИЦИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЯМИ ТУБЕРКУЛЕЗА
А. А. Шурыгин, О. В. Моисеева
В последние годы все большее внимание при туберкулезной инфекции уделяется изучению цитокинов, так как туберкулез относят к интерлейкинзависимым заболеваниям [1]. Однако вопрос о количественном определении цитокинов, в частности ИЛ-1Р, в зависимости от клинической формы туберкулезной инфекции освещен недостаточно. Вместе с тем ИЛ-1р вырабатывается в основном моноцитами периферической крови и играет особую роль в развитии воспаления.
Цель работы — изучение значимости содержания интерлейкина-1р (ИЛ-Щ в сыворотке крови пациентов для определения инфицирования микобактериями туберкулеза.
Материал и методы
Изучено состояние иммунитета по оценке общего анализа крови и иммунограммы у 88 школьников 7—12 лет (45 девочек, 43 мальчика). Из них 28 детей, инфицированных микобактериями туберкулеза с нормергической реакцией к туберкулину по пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л (ИМБТ, 1-я группа), 15 человек — с гиперчувствительностью к туберкулину (ИМБТ, 2-я группа), 26 — не-инфицированных МБТ (НМБТ, 3-я группа), 19 пациентов с различными формами внут-ригрудного туберкулеза (4-я группа). По полу и возрасту группы больных сопоставимы.
Определялись показатели клеточного и гуморального иммунитета: относительное и абсолютное количество Е-РОК общих, Е-РОК активных (ранних), Е-РОК термостабильных, Е-РОК тфр (теофиллинрезистентных), Е-РОК тфч (теофиллинчувствительных), М-РОК, процент фагоцитоза, фагоцитарное число и индекс, концентрация сывороточных иммуноглобулинов основных классов M, ^ A общепринятыми методами [2]. Степень иммунной недостаточности определялась по методике А. М. Земскова, в сравнении с показателями здоровых детей Пермского края [3]. Одновременно определяли концентрацию общего сывороточного ^Е методом ИФА на тест-системах фирмы «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).
Определение концентрации цитоки-нов в сыворотке крови: интерферона-гамма (ИФН-у) и интерлейкина-1р (ИЛ-1Р) в дублирующих пробах, на иммуноферментном анализаторе ВП-800 с помощью соответствующих тест-систем отечественного производства (ООО «Цитокин», г. Санкт-Петербург) — проведено у 36 детей, инфицированных МБТ, 19 — больных туберкулезом, 26 — неинфи-цированных МБТ (с синдромом нарушения противоинфекционной защиты) и у 15 здоровых детей. У этих же детей была определена активность антителогенеза в отношении вирусов простого герпеса (ВПГ) методом ИФА на тест-системах фирмы «Вектор-Бест» (г. Новосибирск). На момент обследования
клинические проявления у пациентов отсутствовали.
Сравнительный анализ иммунологических показателей и индивидуальной девиации от нормативных значений при инфицировании МБТ с разной чувствительностью к туберкулину и НМБТ (табл. 1, 2) показал, что у инфицированных МБТ школьников независимо от чувствительности к туберкулину определялся более высокий уровень абсолютного числа Е-РОК активных лимфоцитов (табл. 1). При этом доля детей с девиацией от
нижней и верхней границ возрастных нормативных значений превышала таковую у не-инфицированных достоверно в 2,6—3,3 раза (50-66,7 против 19,5%, р<0,05).
При гиперергии к туберкулину, в отличие от группы с нормергией, на фоне снижения относительного количества лимфоцитов (у 66,7% детей) и абсолютного числа Т-лимфоцитов были достоверно повышены показатели содержания в 1 мкл крови нейт-рофилов и моноцитов; ^ и ^М (р<0,05) (табл. 1, 2).
Таблица 1
Показатели Инфицированные с нормергией (1) п=28, M±m Инфицированные с гиперергией (2) п=15, M± 111 НМБТ (3) п=26, М±т
Лейкоциты (абс.) 4872,2±242,08 5810±608,6 4976±214,24
Лимфоциты (%) 55,5±5,091* 39,5±4,031' 2* 56,8±2,082 *
Лимфоциты (абс.) 2730,8±244,06 2329,1±318,2 2805,8±146,29
Эозинофилы (%) 3,28±1,04 7,3±2,25 4,24±0,83
Эозинофилы (абс.) 175,11±18,92 409,0±146,8 189,93±37,57
Нейтрофилы (абс.) 1837,6±146,83* 2598,6±402,73 * 1840,7±211,1
палочкоядерные % 0,33±0,194* 2,12±0,814' 5 * 0,04±0,045 *
палочкоядерные (абс.) 25,6±5,686* 130,1±51,316 * 57,85±18,69
сегментоядерные % 38,5±2,44 41,6±4,36 34,2±1,98
сегментоядерные (абс.) 1824,2±238,91 2425,8±453,6 1738,1±140,49
Моноциты (%) 2,5±0,177* 8,52±1,987' 8 * 3,52±0,368 *
Моноциты (абс.) 132,5±16,09* 518,7±144,09' 10 * 165,31±15,2510 *
Е-РОК (абс.) 1448,34±174,411* 1017,8±151,811 * 1250,24±94,65
Е-РОК акт. (абс.) 945,23±64,614* 918,3±140,5 795,4±60,814 *
^ (МЕ/мл) 285,00±77,84 181,2±56,1 164,61±54,92
^ (г/л) 1,47±0,14 1,88±0,15 1,52±0,11
ДО (г/л) 10,73±0,3912* 12,8±0,3512 * 11,32±0,35
^ (г/л) 1,30±0,0913* 1,83±0,2613' 15 * 1,22±0,0615 *
% фагоцитоза 43,06±2,7116* 56,7±1,916 * 42,2±1,79
Фагоцитарное число 0,71±0,08 0,77±0,03 0,67±0,05
Фагоцитарный индекс 1,57±0,1117* 0,96±0,0917> 18 * 1,56±0,0918 *
Примечание. * — достоверность p<0,05.
Сравнительный анализ иммунологических показателей школьников 7—12 лет с СНПЗ, инфицированных МБТ, в зависимости от чувствительности к туберкулину
Таблица 2
Девиация показателей фагоцитоза, клеточного и гуморального иммунитета в зависимости от чувствительности к туберкулину
Показатели Ниже нижней границы (%) Выше верхней границы (%)
Нормер-гия (1) п=28 Гиперер-гия (2) п=15 НИМБТ (3) п=26 Нормер-гия (1) п=28 Гиперер-гия (2) п=15 НИМБТ (3) п=26
Лейкоциты 100,0 100,0 100,0 0 0 0
Эозинофилы (абс.) 96,4' * 26,71 , 2 * 87,82 * 3,6 13,3 12,2
Нейтрофилы (абс.) 85,73 * 13,33 , 4 * 80,44* 7,1 13,3 9,8
Моноциты (абс.) 50,07 * 07, 8 * 46,38 * 05 * 26,75' 6 * 06 *
Лимфоциты (%) 25,0 66,7 19,5 71,49 * 13,39' 10 * 80,510 *
Лимфоциты (абс.) 67,9 53,3 85,4 25,0 13,3 14,6
Е-РОК-лимфоциты (абс.) 50,0 66,7 26,9 7,1 0 7,7
Е-РОК акт. (абс.) 39,3 40,0 14,6 10,7 26,7 4,9
1&А (г/л) 25,0 0 31,7 53,6 80,0 63,4
ДО (г/л) 89,3'' * 13,3й- 12 * 85,412 * 7,1 13,3 9,8
^М (г/л) 21,4 13,3 29,3 21,4 13 * 86,713' 14 * 9,814 *
ДО (МЕ/мл) 0 0 0 67,9 66,7 58,5
% фагоцитоза 46,4 26,0 24,4 46,4 53,4 24,4
Фагоцитарный индекс 53,615 * 13,315, 16 * 58,516 * 28,6 17 * 66,717 * 31,7
Фагоцитарное число 64,3 19,2 61,0 28,5 60,0 22,0
Примечание. * — достоверность р<0,05.
Определение процента фагоцитоза выявило его достоверное (р<0,05) повышение у гиперергентов (56,7±1,9%), по сравнению НМБТ (42,01±3,23%) и ИМБТ с нормергией к туберкулину (43,06±2,71%), при резком угнетении фагоцитарного индекса (0,96±0,09 против 1,57±0,11).
Доля детей с увеличенным значением ^Е была высокой во всех группах: 67,6% (1-я группа), 66,7% (2-я группа) 58,5% (3-я группа). Среди 26,7% пациентов с гипер-ергией к туберкулину, имевших повышенное содержание Е-РОК активных лимфоцитов, отмечались более низкие показатели ^Е. По-видимому, вызванная тубинфицирова-
нием активация ТЫ лимфоцитов приводит к подавлению активности ТИ2, с которыми связано повышение ^Е.
Как известно, значительное влияние на последовательность и сбалансированность иммунного ответа, а также его завершенность оказывают цитокины. Особая роль в стимуляции лимфоцитов и моноцитов приписывается интерлейкину-1р (ИЛ-1Р).
Сравнительный анализ концентраций в сыворотке крови интерлейкинов (ИЛ-1Р и ИФН-у) среди ИМБТ при нормергической реакции к туберкулину позволил зарегистрировать их достоверное повышение по сравнению со здоровыми (табл. 3). Полученные
отклонения побудили нас к дальнейшему изучению этих цитокинов в качестве диагностики инфицирования МБТ.
Таблица 3
Содержание интерлейкина-1р и ИФН-у в периферической крови инфицированных МБТ школьников 7—12 лет в сравнении со здоровыми (пг/мл)
Показатель ИМБТ с нормергией (1-я группа) п=21, M±m Здоровые п=15, M±m р
ИЛ-1Р 1158,3±313,3 252,8±118,6 0,022
ИФН-у 35,8±3,3 3,43±0,7 0,001
Изучена концентрация ИЛ -1р в сыворотке крови у детей в зависимости от чувствительности к туберкулину. При оценке результатов пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л установлено, что ответная реакция на туберкулин у школьников 1-й группы была достоверно ниже (11,33+0,37 мм), чем во 2-й группе (18,5±0,7) и у больных туберкулезом (15,4+1,2 мм) (р= 0,001-0,046) (табл. 4). При этом увеличение степени чувствительности к туберкулину сопровождалось повышением уровня ^М и что свидетельствовало о напряженности гуморального иммунитета.
Сравнительный анализ полученных результатов уровня ИЛ-1Р в зависимости от инфицирования МБТ показал, что в 1-й группе с нормергией к туберкулину содержание ИЛ-1Р составило 1158,3± ±313,3 пг/мл, с гиперергией к туберкулину (2-я группа) - 1914,9+131,09 пг/мл, что достоверно выше в 4,6 и 7,6 раза (р<0,05), чем в группе здоровых (252,8+118,6 пг/мл). Развитие специфического процесса в легких сопровождалось резким подъемом ИЛ-1Р (5587,6+2264,4 пг/мл) (рис. 1).
О 1000 2000 3000 4000 5000 6000
пг/мл
Рис. 1. Содержание ИЛ-1в в сыворотке крови школьников при инфицировании МБТ, больных туберкулезом и здоровых
Распространенность вторичной иммунной недостаточности (ВИН) в сравниваемых группах составляла: 1-я группа — 57,1%; 2-я — 66,7%; больные туберкулезом — 63,5%; неинфицированные — 34,6%. Тяжелая степень ВИН отсутствовала при нормерги-ческой чувствительности к туберкулину и у неинфицированных лиц, составив 6,7%
Таблица 4
Содержание ИЛ-1р в зависимости от чувствительности к туберкулину у инфицированных МБТ школьников 7—12 лет в сравнении с больными туберкулезом
Показатель М±m p1-2 p1-4 р2-4
Инфицрованные с нормергией (1) п=21 Инфицрованные с гиперергией (2) п=15 Больные туберкулезом (4) п=19
ИЛ-1Р, пг/мл 1158,3±313,3 1914,9±131,1 5587,6±2264,4 р=0,04 р=0,049 р=0,16
Чувствительность к туберкулину (мм) 11,33±0,37 18,5±0,7 15,4±1,2 р=0,001 р=0,002 р=0,046
в группе гиперергентов и 21,1% у больных туберкулезом. Умеренная степень при инфицировании микобактериями независимо от чувствительности к туберкулину имела место в 14,3 и 13,3%; у больных туберкулезом — в 15,8%; в группе неинфицированных — 7,7%. Выявлена прямая корреляционная взаимосвязь между степенью иммунной недостаточности и содержанием ИЛ-1Р (г=0,589; р<0,05).
Вторичная иммунная недостаточность у школьников в 35,4% случаев сопровождалась хронической рецидивирующей инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса, с высокими показателями антителогене-за (^ к ВПГ >1: 800). В связи с этим было изучено содержание ИЛ-1Р и ИФН-у у инфицированных МБТ с нормергической реакцией к туберкулину и неинфицированных школьников при высоких показателях в обеих группах специфического антителогенеза (табл. 5).
Значение ИЛ-1Р у инфицированных МБТ детей при сочетании с хронической ВПГ инфекцией, сопровождающейся напряженным антителогенезом, трехкратно превышало этот показатель у НМБТ (1614,0 пг/мл против 538,7 пг/мл) (р=0,045), а на содержание ИФН-у инфицирование МБТ достоверного влияния не оказывало (табл. 5).
Таблица 5
Содержание ИЛ-1р и ИФН-у у инфицированных МБТ с нормергией
и неинфицированных школьников (при высоких титрах анти-ВПГ)
Группа с титром 1: 800 и более анти-ВПГ ИЛ-1р (пг/мл), М±т ИФН-у (пг/мл), М±т
ИМБТ (1-я группа) 1614,0±199,9 (6) 40,9±2,54 (6)
НИМБТ (3-я группа) 538,7±385,0 (8) 40,2±11,8 (8)
Уровень р р1-3=0,045 р1-3=0,9
Сравнительный анализ содержания ИЛ-1р у лиц с высоким антителогенезом к ВПГ и у серонегативных к ВПГ пациентов представлен в таблице 6.
Таблица 6 Содержание ИЛ-1р у инфицированных МБТ с нормергической реакцией и неинфицированных школьников при высоких титрах к ВПГ и при серонегативности
Группы школьников ИЛ-1Р (пг/мл), М±т Уровень р
Титр IgG к ВПГ 1: 800 и более (1) Серонегатив-ность к ВПГ (^ «-») (2)
ИМБТ (1-я группа) 1614,0±199,9 (6) 1158,3±313,3 (8) р1-2>0,05
НМБТ (3-я группа) 538,7±385,0 (8) 252,8±118,6 (15) Р1-2>0,05
Концентрация ИЛ-1Р при высокой напряженности антителогенеза к ВПГ у ИМБТ была выше, чем у НМБТ лиц, в 3 раза. Среди серонегативных к ВПГ сохранялась такая же тенденция (в 4,6 раза). Высокая напряженность противовирусного иммунитета к вирусам простого герпеса и се-ронегативных среди НМБТ пациентов не оказывала достоверного влияния на концентрацию ИЛ-1р (538,7±385,0 пг/мл и 252,8±118,6 пг/мл) (р=0,35). Это является свидетельством достоверного влияния на повышение ИЛ-1Р именно инфицирования ми-кобактериями туберкулеза.
Выводы
1. ИЛ-1р является высокоинформативным диагностически надежным показателем, перспективным для определения инфицирования микобактериями туберкулеза.
2. Между содержанием ИЛ-1Р и степенью иммунной недостаточности существует прямая корреляционная связь. Исследование иммунного статуса инфицированных МБТ
детей должно быть включено в план обследования с целью диагностики уровня нарушения противоинфекционной защиты.
3. Диагностический уровень с учетом особенностей тест-систем составляет 1158+313,3 пг/мл.
4. Определение концентрации провос-палительного цитокина ИЛ-1Р в комплексе диагностических мероприятий может быть использовано для оптимизации дифференциальной диагностики туберкулезного инфицирования.
Библиографический список
1. Елькин А. В. Комплексное лечение прогрессирующего туберкулеза легких с применением Ронколейкина®/А. В. Елькин, Б. Е. Кноринг, Л. А. Иванова, Т. С. Басек и др.— СПб.: Изд-во СПб. ун-та, 2002.— 103 с.
2. Караулов А. В. Клиническая иммунология и аллергология/А. В. Караулов— М., 2002.— 650 с.
3. Основные показатели иммунограммы детей и взрослых Пермской области/ Б. А. Бахметьев, С. В. Ширшев, Н. Н. Кеворков— Пермь, 2002.— 44 с.
A. A. Shurygin, O. V. Moiseeva
SIGNIFICANCE OF BLOOD SERUM ПЛр
CONCENTRATION IN DETERMINATION OF TUBERCULOUS MYCOBACTERIA INFECTION
Significance of blood serum interleukin ip content was investigated in 88 pupils aged 7—12 to determine tuberculous mycobacteria infection. High information level of IL-ip was obtained to diagnose infection with tuberculous mycobacteria, its diagnostic level was 1158±313,3 pg/ml. Direct correlation between IL-ip content and degree of immune deficit was detected.
Keywords: tuberculosis, diagnosis, cytokines, interleukin 1p, pupils.
Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е. А. Вагнера, Ижевская государственная медицинская
академия
Материал поступил в редакцию 17.11.2008
