CC BY
15
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Первичные иммунодефициты Primary immunodeficiencies
Выводы. В ходе работы была успешно отработана и внедрена в клиническую практику методика генетического анализа НАО 1 и 2 типов. Секвенирование ДНК у конкретного индивидуума и накопление данных о конкретных мутациях может существенно облегчить и ускорить постановку диагноза у больных НАО.
ПЕРСПЕКТИВЫ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОГО ПОДХОДА В ДИАГНОСТИКЕ И НАБЛЮДЕНИИ БОЛЬНЫХ С СЕЛЕКТИВНЫМ ИММУНОДЕФИЦИТОМ ИММУНОГЛОБУЛИНА А
Савин Т.В.1, Кузнецова Р.Н1 2
1 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
им. Пастера, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Распространенность селективного дефицита иммуноглобулина А в мире, по данным Pereira L.F., Sapina A.M. (1997), составляет 1:163 человека. В Российской Федерации частота данного первичного иммунодефицита, по данным Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов (2014), составляет 1:300-1:700 человек. Несмотря на то, что данная форма иммунодефицита является самой распространенной формой первичного иммунодефицита, стандартного лечения, позволяющего контролировать данное заболевание, в настоящий момент не предложено.
Цель. Разработка клинико-иммунологических критериев течения различных форм селективного иммунодефицита иммуноглобулина А и оценка возможности дифференцированного подхода в лечении больных.
Материалы и методы. Всего было обследовано 24 пациента в возрасте от 18 до 42 лет (женщины — 13, мужчины — 11), которые наблюдаются в Центре первичных иммунодефицитов в ФБУН НИИ ЭМ им. Пастера. Контрольную группу составили 25 условно здоровых лиц.
Оценка иммунного статуса включала определение у больных концентрации иммуноглобулинов, подклассов иммуноглобулина G в сыворотке крови и носоглоточных смывах, определение субпопуляций лимфоцитов.
В работе использованы коммерческие тест-системы «Вектор-Бест». Оценка концентрации сывороточных иммуноглобулинов проводилась методом иммунотур-бидиметрии, подклассы иммуноглобулина G — методом иммуноферментного анализа. Оценка субпопуляций лимфоцитов проводилась с использованием метода проточной цитофлюориметрии.
Результаты. Выявлены различные клинические формы течения селективного иммунодефицита иммуноглобулина А (1 группа — больные с аутоиммунной патологией, 2 группа — пациенты с рецидивирующими заболеваниями верхних и нижних дыхательных путей).
Анализ показателей гуморального иммунитета показал, что концентрация иммуноглобулина A в сыворотке крови больных была достоверно ниже уровня данного иммуноглобулина у пациентов группы практически здоровых лиц (p < 0,001), что подтверждало наличие у больных селективного иммунодефицита иммуноглобулина А.
Проведенный сравнительный анализ гуморального профиля позволил выявить, что в группе больных с преимущественно аутоиммунной патологией уровень имму-
ноглобулина А в сыворотке крови был достоверно выше, чем в группе больных с рецидивирующими заболеваниями верхних и нижних дыхательных путей (p < 0,01).
При проведении нашего исследования мы обнаружили, что концентрация иммуноглобулина А в носоглоточных смывах больных была снижена всего в 1,5 раза в сравнении с показателями практически здоровых лиц, а уровень иммуноглобулина М резко повышен. Но выявленная особенность требует дальнейшего изучения и проведения статистической обработки.
Таким образом, анализ клинического течения селективного иммунодефицита иммуноглобулина А и показателей гуморального иммунитета позволяет предположить наличие связи между особенностями течения заболевания и гуморальным профилем больных.
ЗНАЧИМОСТЬ КЛЕТОЧНЫХ ФАКТОРОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУННОГО ОТВЕТА У БОЛЬНЫХ ОБЩЕВАРИАБЕЛЬНОЙ ИММУННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ
Сизякина Л.П., Андреева И.И., Кролевец Д.И.
ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Ростов-на-Дону, Россия
Патогенетически значимым принципом терапии пациентов с общевариабельной иммунной недостаточностью (ОВИН) — гипогаммаглобулинемией является замещение недостающего эффекторного звена гуморальной иммунной защиты внутривенными иммуноглобулинами (ВВИГ). Однако не у всех больных на фоне регулярной заместительной терапии происходит полное купирование признаков иммунной недостаточности (Караулов А.В., Сидоренко И.В., 2011; Сизякина Л.П., Андреева И.И., 2012). Возможно, что помимо протективной роли заместительной иммуноглобулинотерапии немаловажный вклад в обеспечение эффективности работы иммунной системы у больных с первичными иммунодефицитами по гуморальному типу вносят факторы врожденного иммунитета, в первую очередь — клеточное звено.
Целью настоящей работы является выявление роли клеточных факторов врожденного иммунитета у пациентов с первичным иммунодефицитом — ОВИН.
Под наблюдением находилось 16 пациентов в возрасте 8-59 лет (9 мужчин, 7 женщин) с диагнозом ОВИН — ги-погаммаглобулинемия, получавших в течение года заместительную терапию ВВИГ (0,4 г/кг массы ежемесячно). При этом у пяти больных на фоне регулярного приема препаратов регистрировались эпизоды воспаления придаточных пазух, обострение хронического бронхита, гнойный конъюнктивит. Комплексную оценку параметров иммунного статуса проводили методом проточной лазерной цитометрии на приборе «FC 500» и определяли экспрессию CD16 и содержание Гранзима В в CD3-CD16+ лимфоцитах, экспрессию HLA-DR на CD14+ моноцитах периферической крови с использованием соответствующих моноклональных антител (Bekcman Coulter). Кисло-родзависимую метаболическую активность нейтрофилов оценивали в НСТ-тесте. Контрольную группу составили 10 практически здоровых доноров крови в возрасте 2032 лет. Математическую обработку полученных данных проводили, используя программу Statistica 7.0.
При анализе параметров клеточных факторов врожденного иммунитета выявлено, что для всех обследован-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ных больных характерным является снижение количества циркулирующих CD16+ лимфоцитов (6,3±2,1%, в контроле 12,1±1,2%), также как и угнетение их цитолитического потенциала в сравнении с данными практически здоровых (CD16+GrB+ 4,30±2,3; в контроле 10,21±1,10%). Однако функциональная активность CD16+ натуральных киллеров (НК), оцениваемая по процентному содержанию Гранзим-содержащих НК от их общего числа, у не болеющих выше (20,1±3,7%) по сравнению с пациентами с клиническими признаками иммунной недостаточности на фоне терапии ВВИГ (7,2±2,9%). Кроме того, у больных без клинических проявлений ОВИН в условиях заместительной терапии более высокий антигенпрезентирующий потенциал макро-фагальных клеток: CD14+HLA-DR+ — 73±8% (в контроле 85±5%), тогда как у болеющих отитами, конъюнктивитами, бронхитами количество CD14+HLA-DR+ составило лишь 52±3%. Также выявлены отличия функционирования фагоцитирующих нейтрофилов, которые наиболее показательны при сопоставлении значения К ст. НСТ-теста. У болеющих на фоне ВВИГ-терапии регистрируется существенное снижение адаптационного потенциала нейтро-фильного фагоцитоза (К ст. 1,4±0,2 у.е.) в сравнении с аналогичным показателем не болеющих пациентов (1,8±0,3).
Таким образом, у больных с врожденным дефектом гуморальной составляющей адаптивной иммунной защиты клеточные факторы врожденного иммунитета играют существенную роль в поддержании целостного функционального потенциала иммунной системы, что следует учитывать при иммунокоррекции в случае неполной эффективности заместительной терапии.
ТАРГЕТНОЕ СЕКВЕНИРОВАНИЕ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ (NGS) В ДИАГНОСТИКЕ ПЕРВИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТОВ
Суспицын Е.Н.1, 2, Гусева М.Н.3, 4, Соколенко А.П.1, 2, Бизин И.В.5, Имянитов Е.Н.1' 2
1ФГБОУ «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет», Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБУ«Научно-исследовательский институт онкологии им. Н.Н. Петрова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
3 Консультативно-диагностический центр Санкт-Петербургского государственного педиатрического медицинского университета, Санкт-Петербург, Россия
4 ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова», Санкт-Петербург, Россия
5 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
Первичные иммунодефициты (ПИД) — заболевания, связанные с наличием наследственного дефекта како-
го-либо звена иммунной защиты. Диагностика ПИД затрудняется существованием большого числа нозологических форм (более 300), которое регулярно увеличивается. Клинико-лабораторные признаки часто недостаточно специфичны, что не всегда позволяет с уверенностью поставить диагноз, а высокая генетическая гетерогенность ограничивает ценность ДНК-анализа. Эффективность диагностики может быть повышена за счет применения методов секвенирования нового поколения (NGS), которые дают возможность одномоментного тестирования множества генов.
Цель и задачи. Установление генетической причины заболевания у детей с клиническими признаками возможного первичного иммунодефицита.
Материалы и методы. Для проведения ДНК-анализа были отобраны 34 пациента с подозрением на наличие ПИД; отбор осуществлялся на основании наличия клинических признаков ПИД, предложенных Jeffrey Modell Foundation. Клинические и иммунологические признаки позволяли заподозрить конкретные нозологические формы ПИД лишь в трети случаев (12/34, 35%). Поиск мутаций проводился посредством высокопроизводительного таргетного секвенирования на платформе Illumina. При этом целевому обогащению c помощью наборов зондов SeqCapEZMedExome (Roche) подвергались кодирующие последовательности 302 известных генов первичных им-мунодефицитов. При отборе потенциально патогенных вариантов учитывались тип мутации, популяционная частота, наличие сведений о патогенности, а также данные предиктивных программ.
Результаты. Однозначный результат генетического исследования, т.е. выявление патогенной мутации, соответствующей клинической картине и типу наследования заболевания, был получен в 13/34 (38%) случаев. Выявлен широкий спектр нозологических форм ПИД, включаята-кие заболевания как аутоиммунный полиэндокринный синдром 1 типа, синдром IPEX, агаммаглобулинемия Брутона, хроническая грануломатозная болезнь, атак-сия-телеангиэктазия, синдром Нетертона, аутовоспали-тельные синдромы и др. В 6 из 13 случаев результат ДНК-анализа соответствовал диагнозу, предполагаемому ранее на основании клинических и лабораторных данных.
Заключение. Мультигенное таргетноесеквенирова-ние является ценным методом диагностики первичных иммунодефицитных состояний, особенно в ситуациях, когда клинико-лабораторные данные не дают оснований к проведению «прицельного» тестирования отдельных генов. Эффективность выявления генетических причин ПИД в проведенном исследовании соответствует данным зарубежных работ, выполненных с использованием аналогичных подходов.
Работа поддержана за счет средств гранта РНФ 15-15-00079.
