CC BY
47
ВЕСТНИК ПЕРМСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
2015 БИОЛОГИЯ Вып* 3
УДК 612.018:612.017
С. В. Ширшев"ь, И. В. Некрасова1, О, J1, Горбунова3, Е. Г. Орлова*, И, Л. Масленникова"
J Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь. Россия ь Пермский государственный национальный исследовательский университет, Пермь. Россия
ЗНАЧЕНИЕ ГОРМОНОВ РЕПРОДУКЦИИ В РЕГУЛЯЦИИ NK-КЛЕТОК
Исследовано влияние хорионического гонадотропина, эстриола, кисспептина, лептина и гре-лина в концентрациях, соответствующих I и III триместрам беременности, на функциональную активность сепарированных NK-клеток фертильных женщин. Установлено, что исследуемые гормоны способствуют формированию фенотипа и цитокинового спектра, характерного для регуляторных субпопуляций NK-клеток и могут рассматриваться в качестве индукторов и факторов поддержания иммунной толерантности при беременности.
Ключевые слова: NK-клетки; хорионический гонадотропин; эстриол; легттин; грелин; кисспептин; цитокины.
S. V. Shirshev3 \ L V. Nekrasova\ О. L. Gorbuiiova", Е* G. Orlova*, I. L. Maslennikova3
* Institute of Ecology' and Genetics of Microorganisms, Ural Branch RAS, Perm, Russia Federation b Perm State University. Perm, Russian Federation
IMPORTANCE OF REPRODUCTIVE HORMONES IN REGULATION OF NK CELLS
The influence of human chorionic gonadotropin, estriol. kisspeptin. leptin and ghrelin in concentrations corresponding to the I and III trimesters of pregnancy on the functional activity of separated cytokine-primed NK-cells were studied. It was established that the hormones facilitate formation of phenotype and cytokine spectrum characteristic of NK cells regulatory subpopulation and may be considered as inductors and maintenance factors of immune tolerance during pregnancy.
Key words: NK cells, chorionic gonadotropin: estriol; leptin; ghrelin: kisspeptin: cytokines.
Введение
Беременность представляет собой феномен по-луаллогенной трансплантации, поскольку' плод наполовину' генетически чужероден по отношению к матери. При беременности происходит формирование новых эндокринных взаимодействий, обеспечивающих нормальное сосуществование организмов матери и плода.
Известно, что гормоны могут детерминировать функциональную активность клеток иммунной системы [Ширшев, 2014]. Наиболее физиологически значимыми, с этой точки зрения, являются гормоны, появляющиеся в организме женщины только во время беременности, - хорионический
гонадотропин (ХГ) и эстриол (ЕД Помимо этого, иммунорегуляторную функцию осуществляют пептидные гормоны, уровень которых существенно повышается во время беременности '*а счет плацентарного синтеза, - лептин. грелин и кисспептин, Эти гормоны не только играют важную роль в регуляции процессов репродукции [Hardie et al., 1997; Fuglsang et al.. 2005; Horikoshi et al. 2003], но и способны оказывать существенное влияние на функциональную активность клеток иммунной системы [Ширшев, 2014].
Гестационный процесс затрагивает многие системы организма, в том числе и иммунную, что сопровождается изменениями в функциональной активности различных популяций лейкоцитов, направленных на сохранение плода. Естественные
С, Ширшев С В.; Некрасова И. В., Горбунова О. Л., Орлова Е. Г., Масленникова И. Л., 2015
287
киллерные (NX) клетки представляют собой популяцию лимфоцитов врожденного иммунитета, способных к проявлению цитотоксической. а также регуляторной активности. NK-клетки доминируют среди лнмфоидных клеток, локализованных в децимальной оболочке во время беременности. Они продуцируют цитокины, хемокины. ферменты, факторы роста сосудов, тем самым способствуя формированию и моделированию спиральных артерий. плацентации и регуляции инвазии трофоб-ласта [Koopman et al. ,2003]. Фетотрофические функции NK-клеток проявляются под воздействием специфических регуляторных сигналов, к которым, в первую очередь, можно отнести гормоны фетоплацентарного комплекса.
Цель работы - оценка влияния ХГ, Е^ лептина. грелина и кисспептина на экспрессию фенотипиче-ских маркеров сепарированными NK-клетками. а также проду кцию ими цитокинов.
Материалы и методы
В работе использована периферическая венозная кровь здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста (п=10). из которой в градиенте плотности фиколл-верографина (1.077 г/мл) выделяли мононуклеарные клетки. После этого получали обогащенную су спензию NK-клеток с использованием набора Dynabeads Untouched Human NK Cells («Invitrogcn». США). Чистота выделения, оцениваемая по экспрессии маркера NK-клеток NKp46 (Anti-human CD335-PC5, «Beckman Coulter». США), составила 90-95%. Для поддержания жизнеспособности сепарированных NK-клеток во все пробы добавляли цитокины («GIBCO», США): интерлейкин (IL)-2 - 1 нг/мл, IL-12 - 2 нг/мл. IL-15 - 10 нг/мл [Vitale et al.. 2002].
Гормоны использовали в физиологических; концентрациях, соответствующих I и III триместрам бсрсмснности, соответственно: ХГ («Profasi». Италия) - 100 МЕ/мл и 10 МЕ/мл [Cole. 2012], Е3 («Biomedicals Inc.», Германия) - 2 и 20 нг/мл [Kase. Reyniak. 1985]. лептин («Sigma», США) - 10 и 35 нг/мл [Hardie et al.; 1997]. грелин («Sigma». Израиль) - 1.25 и 0.83 нг/мл IFuglsang et al., 2005]. кисспептин (Кисспептин-54. M eta stin. Synthetic. «Calbiochem», США) - 4.6 пМ/л и 9.6 пМ/л [Horikoshi et al., 2003].
NK-клетки культивировали в объеме 500 мкл в полной питательной среде на основе среды RPMI-1640 с добавлением 10%-ной эмбриональной телячьей сыворотки («Sigma», США). 10 мМ Hopes («ICN Pharmaceuticals, Inc.», США), 2 мМ L-глутамина («ICN Phannaceuticals, Inc.», США) и 100 мкг/мл гентамицина («KRKA», Словения) в присутствии цитокинов и гормонов в течение 3 сут., после чего отбирали супернатанты и оценивали фенотип клеток в лимфоцитарном гейте на про-
точном цитометре («Becton Dickinson», США). Окрашивание клеток осуществляли согласно методике производителя моноклональных антител («Bcckman Coulter», США). При учете результатов подсчитывали не менее 100 000 клеток. Для контроля неспецифического связывания и выделения негативного по флюоресценции лимфоцитарного окна использовали соответствующие изотипиче-ские контроли.
На выделенных NK-клетках оценивали экспрессию ингибиторной молекулы NKG2A (Anti-human CD 159-РЕ), L-селектнна (Anti-human CD62L-FITC), а также плотность экспрессии маркера CD56 (Anti-human CD56-PE).
В супернатантах клеточных культур методом иммуноферментного анализа оценивали концентрацию цитокинов: IL-4, IL-10. интерферон (IFN)-gamina и трансформирующий фактор роста (TGF)-beta («Цитокин», Россия, «R&D», США).
Поскольку выборочное распределение, оцениваемое по критерию Фишера, было нормальным, достоверность различий между средними величинами оценивали согласно парному г-критерию Стьюдента.
Результаты и их обсуждение
Известно, что низкая экспрессия молекулы CD56 (CD56dim) служит маркером высокой цито-токсичности NK-клеток, уровень которых снижается во время беременности [Saito et aL 2008]. При этом повышенное содержание CD16+56dim NK-клеток в периферической крови у женщин ассоциировано с привычным невынашиванием беременности [Михнина, 2009]. Напротив. NK-клетки с высокой степенью экспрессии CD56 (CD56bri?ht) обладают низкой цитотоксичностью и выполняют регуляторные функции [Zhang et aL 2006; Saito et aL 2008J, и именно Эти клетки инфильтрируют де-цидуальную оболочку во время беременности [Trundley, Moffett. 2004].
При оценке уровня экспрессии CD56 молекул на поверхности NK-клеток установлено, что кисспептин в концентрации, соответствующей I триместру беременности, достоверно увеличивает долю С056Ы|йЫ клеток относительно контроля. вне зависимости от концентрации обладает аналогичным действием, параллельно снижая уровень CD56du" клеток. ХГ, лептин и грелин не оказали влияния на изменение экспрессии маркера CD56 (табл 1)
Важным показателем функциональной активности NK-клеток является наличие на их поверхности ингибиторных рецепторов. Известно, что экспрессия таких рецепторов, особенно NKG2A, периферическими NK-клетками повышается в первые недели беременности, достигая максимума к третьем} месяцу гсстации [Dosiou. Giudicc, 2005]. Культивирование исследуемых гормонов с сепарированными NK-клетками приводит к вида-
мому повышению процента NX-клеток, несущих ингибиторную молекулу NKG2A. однако статистически значимым действием обладают только ХГ в концентрации, соответствующей III триместру беременности. и Ез вне зависимости от концентрации (табл. 2). Большинство гормонов, за исключением грелина, а также лептина и ХГ в низких концентрациях, стимулирует экспрессию L-селектина на CD56b,,sht NK-клетках. а Ез в высокой концентрации; кроме того, угнетает экспрессию данного маркера на CD56dim клетках, Рядом авторов высказывается предположение о существовании субпопуляции регуляторных NK-клеток. характеризую-
щейся повышенной экспрессией CD 56, L-селектина. NKG2A. а также некоторых маркеров Т-регуляторных клеток [Zhang et aL 2006; Saito et al.. 2008|. Следовательно, во время бсрсмснности ХГ (концентрация, характерная для I тримсстра), Ез и кисспептин могут индуцировать регуляторный фенотип NK-клеток. одновременно снижая их ци-тотоксический потенциал. Кроме того, достоверное увеличение CD56lasl,t CD62L1 клеток под влиянием ХГ, Ез и кисспептина говорит об их способности усиливать миграцию данных NK-клеток в плаценту при физиологически протекающей беременности [MofleU-Kmg, 20021.
Таблица I
Влияние гормонов на степень экспрессии молекул CD56 NK-клегками (М±т)
Экспериментальное воздействие и N Кр46+CD 5 6bri ght (%) N Кр46+CD 5 6d im (%)
Контроль 7 33.22± 1.441 68.07±2.688
Лептин (10 нг/мл) 7 30.35± 1.665 72.25±5,873
Лептин (35 нг/мл) 7 29.51=Н 558 75-14±8 704
Грелин (1.2 нг/мл) 7 31.42=1=2.654 70.26±7.387
Грелин (0.8 нг/мл) 7 32.15±2.496 71.56±5.685
Кисспептин (4.6 пМ/л) 7 37.12=Ы,262 1>(6-1)«М)5 60.30±7.365
Кисспептин (9.6 пМ/л) 7 33.5ЫХ652 67.84±6.703
ХГ(100 МЕ/мл) 7 33.50±2,288 66.39±4.326
ХГ (ЮМЕ/мл) 7 35.31±2 Л 34 66.36±4.588
ЕЗ (2 нг/мл) 7 40.60±2,838 р(10-1)<0,05 57.80±4.260 р(10-1)<0.05
ЕЗ (20 нг/мл) 7 39.20±3>558 ц(11-1)<0*05 57.81i4.145 р(11-1)<0,05
Таблица 2
Влияние гормонов на экспрессию NKG2A и L-селектина (CD62L) NK-клетками (М±т)
Экспериментальное воздействие Т1 NKp46+NKG2 А+ % CD56brightCD62L+ % CD56dnnCD62L+ %
Контроль 7 2167±1.312 8.3Ы.778 27.01±4.631
Лептин (10 иг/мл) 7 21.55±3+476 9,58±2.806 29.85i4.968
Лептин (35 нг/мл) 7 21.48±2+666 12.47±29Ü5 р(3-1)<0.05 32.63±5.303
Грелин (1.2 нг/мл) 7 22.36±3.984 10.48±2.079 30.75±5.078
Грелин (0.8 нг/мл) 7 24.10±4.760 11.28±2.235 32.34±6.133
Кисспептин (4.6 пМ/л) 7 27.73±4.399 12.09±1.673 р(6-1)<0.05 26.32±4.726
Кисспептин (9.6 пМ/л) 7 28.47±4,938 13.59±2.911 р(7-1)<0.05 32.40±6,430
ХГ (100 МЕ/мл) 7 28.88±3.697 11.84±2.496 р(8-1)<0.05 31.57±4,261
ХГ (10 МЕ/мл) 7 29.12±3.360 р(9-1)<0.05 12.51*4.419 24.81±2.750
ЕЗ (2 нг/мл) 7 30.57±3.498 р(10-1)<0.05 12.87±2.221 р(10-1)<0.05 25.61±4.675
ЕЗ (20 нг/мл) 7 29.60±3.186 р(11-1)«).05 20.96±5.306 р(11-1)«).05 21.81±2,577 р(11-1)«),05
Таким образом, в I триместре беременности Е3 и кисспептин повышают процент клеток и одновременно усиливают экспрессию на них Ь-селектина. ХГ. не влияя на уровень С056ъ,,ёЬ'. повышает только экспрессию Ь-селектина В отличие от кисспептина и ХГ. до-
полнительно достоверно снижает количество CD56dun клеток и стимулирует экспрессию ингиби-торной молекулы NKG2A. В III триместре высокий уровень CD56br,&htCD62L клеток поддерживается всеми исследуемыми гормонами, за исключением грелина. При этом Ез тормозит формирование
СВ56<,1т лимфоцитов, в том числе несущих Ь-селектин, но так же как и ХГ, стимулирует экспрессию ИК02 А.
Известно, что СП56Ьп?ы ИК-клетки способны продуцировать значительные количества различных цитокинов, что послужило основанием выделения различных субтипов периферических и децимальных №С-клеток. Так. КК1 продуцируют ПТО^апипа и ТИР-а1рЬа, ИК2 - 1Ь-4. 1Ь-5, 1Ь-6. 1Ь-13; ЫКЗ - ТСР-Ье1а, ЫКт1 - 1Ь-10 [Н^ниа-Муор & а1., 2005: вайо а а1.? 2007, 2008]. Установлено. что в периферической крови небеременных женщин преобладают НК1-клетки. В период беременности повышается количество ККг1 клеток. а децидуальные КК-клетки представлены в основном ТОР-Ье1а-продуцир> ющими ККЗ лимфоцитами. При этом ТСБ-Ьеи не только оказывает
иммуносупрессорное действие на многие попу ляции лимфоцитов, но и способствует ангиогенезу [Ferrari et aL 2009]. определяя иммунотрофиче-ское действие.
При оценке гормонального контроля за уровнем регуляторных цитокинов NK-клеток установлено. что в супернатантах периферических NK-клеток преобладает IFN-gamma (NK1). При этом кисспептин, ХГ и вне зависимости от концентрации, достоверно угнетают его продукцию и параллельно в концентрациях, соответствующих III триместру беременности, усиливают секрецию противовоспалительного цитокина TGF-bela. Продукция цитокинов IL-4 и IL-10 изначально была на низком уровне и угнеталась иод влиянием исследуемых гормонов (табл. 3).
Таблица 3
Влияние гормонов на продукцию цнтокинов NK-клетками« пг/мл (М±т)
Экспериментальное воздействие п IL-4 IL-10 TGF-beta IFN-gamma
Контроль 9 8.69±0Л88 25.62il.247 263.08±7.843 506.45i26.403
Лептин (10 нг/мл) 9 7.57±0,984 24.96±1.698 270.49±20,374 520.45i45.285
Лептин (35 нг/мл) 9 7.63±0.306 р(3-1)<0.05 23.61±0.973 р(3-1)<0.05 275.88± 19,999 555.91i36.438
Грелин (1.2 нг/мл) 9 8.87±0+897 23.89±1.945 271.98±10.385 450.36i45.695
Грелин (0.8 нг/мл) 9 8.26±0.579 22.04il.328 р(5-1)<0.05 267.50±8.001 439.89i55.319
Кисспептин (4.6 пМ/л) 9 7.46±0.449 р( 6-1)<0.05 22.97il.056 р(6-1)<0.05 247.26± 10.622 345.82i34.631 р(6-1)<0.05
Кисспептин (9.6 пМ/л) 9 7.72±0.370 р(7-1)<0.05 22.24il.049 р(7-1)<0.05 278.89± 12.457 р(7-])<0.05 366.27i42.325 р(7-1)<0.05
ХГ(100 МЕ/мл) 9 7.92=Ь0.762 24.59iL754 277.07i 13.010 372.06i48.037 р(8-1)0.05
ХГ (ЮМЕ/мл) 9 7.06=t0.489 р(9-1)<0.05 21.81Ü.431 р(9-1)<0.05 282.38Ü2.19 6 р(9-1)0.05 344.68i43.732 р(9-1)0.05
ЕЗ (2 нг/мл) 9 7.00±0.323 р( 10-1 )<0.05 21.08il.358 р( 10-1)0.05 284.98±10.882 32I.25i38.747 р(10-1)<0.05
ЕЗ (20 нг/мл) 9 7.28±0.218 р(11-1)<0.05 21.51Ü.590 р(11-1)0.05 287.53±5.165 р(11-1)<0.05 374.38i52.381 р(11-1)0.05
Таким образом, в I триместре беременности кисспептин и Е5 снижают продукцию IL-4, IL-10 и IFN-gamma, а ХГ только секрецию IFN-gamma сепарированными NK-клетками. В III триместре практически все исследуемые гормоны способствуют снижению концентрации IL-4 и IL-10, которые в поздний период беременности не играют значимой роли. При этом Е3. ХГ и кисспептин, стимулируют продукцию TGF-beta, угнетая секрецию IFN-gamma. По-видимому, гормоны репродукции выступают факторами, определяющими дифференцировку NKI клеток в NK3 лимфоциты. Учитывая, что TGF-beta является одним из факторов, способствующих трансформации периферических NK-клеток в децидуальные [Cerdeira et al., 2013]. роль гормонов как факторов индукции де-
цидуальных МС-клеток существенно возрастает. В заключение необходимо отметить, что, во время беременности, репродуктивные гормоны могут выступать в качестве физиологических регуляторов фенотипа и уровня секреции отдельных цитокинов, характерных для регуляторной №СЗ субпопуляции.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ №13 -04-9603 5-р_урал_а.
Библиографический список
Ыыхиииа Е.А. Морфофункциональное состояние эндометрия у женщин с бесплодием и невынашиванием беременности: авторсф. дис. ... д-ра мед. наук. СПб., 2009. 40 с.
Ширшев С.В. Молекулярные механизмы гормонального и гормонально-цитокинового контроля имму нной толерантности при беременности // Биологические мембраны. 2014. Т. 31. № 5.
С. 303.
Cerdeira A S., Rajakumar A., Rov Ic С А/. et al. Conversion of peripheral blood NK cells to a decidual NK-like phenotype by a cocktail of defined factors // J. Immunol. 2013. Vol. 15. P. 3939-3948.
Cole L A, HCG. the wonder of today's science // Re-prod, Biol. Endocrinol. 2012. Voi. 10. P. 10-24.
Dosiou C, Giudice LC. Natural killer cells in pregnancy and recurrent pregnancy loss: endocrine and immunologic perspectives // Endocr. Rev. 2005. Vol. 26(1), P. 44-62,
Ferrari G., Cook B.D., Terushkm V, Transforming growth factor-beta 1 (TGF-($1) induces angiogene-sis through vascular endothelial growth factor (VEGF)-mediated apoptosis // J, Cell, Physiol. 2009. Vol. 219(2), P. 449-458,
Hug!sang J , Skjaerbaek C., Espehmd V et al, Ghre-lin and its relationship to growth hormones during nonnal pregnancy// Clin. Endocrinol. 2005. Vol. 62. P. 554-559.
Hard ¡г L . Trayhurn P., Abramovich D.t Fowler P. Circulating leplin in women; a longitudinal study in the menstrual cycle and during pregnancy // Clin. Endocrinol. 1997. Vol. 47. P. 101-106.
Higuma-AIyojo S. Sasaki Y.„ Aliyazaki S. ct al Cytokine profile of natural killer cells in early human pregnancy // AJR1. 2005. Vol. 54. P. 21-29.
Horikoshi } ., Alatsumoto H, Takatsu Y. et al. Dramatic elevation of plasma metastin concentrations in human pregnancy: metastin as a novel pla-centa-derived hormone in humans // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003. Vol. 2. P. 914-919.
Kase N.G., Revniak J.V. Endocrinology of pregnancy // Mount. Sinai J. Med. 1985. Vol. 52. P. 11-34. *
Koopman L A., Kopam IID., Rybalov B. et al. Human decidual natural killer cclls arc a unique NK subset with immunomodulatory potential // J. Exp. Med. 2003. Vol. 198. P. 1201-1212.
AIoffett-K'mg A. Natural killer cells and pregnancy If Nat. Rev. Immunol. 2002. Vol. 2. P. 656-663.
Saito S., Akitoshi N.f Subaru XL, Shiozaki A. The balance between cytotoxic NK cells and regulatory NK cells in human pregnancy if J Reprod. Immunol. 2008, Vol. 77. P. 14-22.
Saito S., Nakashima A., Alyojo-Higuma S., Shiozaki A. The balance between cytotoxic NK cells and regulatory NK cclls in human prcgnancv // J- Re-prod. Immunol. 2008. Vol 77. P. 14-22."
Trundiey A., Afoffett A. Human uterine leukocytes and pregnancy If Tissue Antigens. 2004. Vol. 63. P. 1-12
l iiaie M, Bassini A., Secchiero AL et al. NK-active cytokines IL-2.1L-12, and IL-15 selectively modulate specific protein kinase С (PKC) isoforms in primary human NK cells // Anat. Record. 2002. Vol. 266. P. 87-92.
Zhang C„ Zhang J., Tian Z. The regulatory effect of natural killer cells: do "NK-reg cells" exist9 // Cell. Mol. Immunol. 2006. Vol. 3. P. 241-254.
References
Michnina E.A. Morfofunkciortal'noe sostojame en-dome trij a u zemcin s besplodiem i nevynasivaniem beremennosti. A vioref. diss. dokt. med. nauk [Morpho-functional status of the endometrium in women with infertility and miscarriage. Abstract Dokt. Diss.]. St, Petersburg, 2009. 40 p. (InRuss.).
Shirsliev S.V, [Molecular mechanisms of honnonal and honnonal and cytokine control of immune tolerance in pregnancy]. Biohgideskie membranv. 2014. V. 31, N 5, p. 303. (In Russ.).
Cerdeira A S., Rajakumar A.. Royle C M. et al. Conversion of peripheral blood NK cells to a decidual NK-like phenotype by a cocktail of defined factors. J. Immunol 2013. Vol. 15. P. 3939-3948.
Cole L A. HCG, the wonder of today's science. Re-prod. Biol, Endocrinol 2012. Vol. 10. P. 10-24.
Dosiou C.? Giudicc L C. Natural killer cclls in pregnancy and recurrent pregnancy loss: endocrine and immunologic perspectives. Endocr, Rev. 2005. Vol. 26(1). P. 44-62.
Ferrari G., Cook B.D., Terushkin V, Transforming growth factor-beta 1 (TGF-pl) induces angiogene-sis through vascular endothelial growth factor (VEGF)-mediated apoptosis. J. Cell. Phvsiol. 2009. Vol. 219(2). P. 449-458.
Fuglsang J., Skjaerbaek C, Espelund U. et al. Ghre-lin and its relationship to growlh hormones during normal prcgnancy. din, Endocrinol. 2005. Vol. 62. P. 554-559.
Hardie L., Trayhurn P., Abramovich D., Fowler P. Circulating leptin in women: a longitudinal study in the menstrual cycle and during pregnancy. din. Endocrinol. 1997. Vol. 47. P. 101-106.
Higuma-Myojo S., Sasaki Y > Miyazaki S et al. Cytokine profile of natural killer cells in early human pregnancy. AJRI. 2005. Vol 54. P. 21-29'
Horikoshi Y.. Malsumoto H., Takatsu Y. et al. Dramatic elevation of plasma metastin concentrations in human pregnancy: metastin as a novel placenta-derived hormone in humans. J. din, Endocrinol, Ale tab. 2003. Vol. 2. P. 914-919.
Kase N.G.. Reyniak J. V. Endocrinology7 of pregnancy. Mount Sinai J. Aled. 1985. Vol. 52. P. 11-34.
Koopman L.A., Kopcow H.D., Rybalov B. et al. Human decidual natural killer cells are a unique NK subset with immunomodulatory potential. ./. Exp. Aled. 2003. Vol. 198. P. 1201-1212.
Moffett-King A. Natural killer cells and pregnancy. Nat. Rev. Immunol. 2002. Vol. 2. P. 656-663.
Saito S., Akitoshi N.. Subaru M.? Shiozaki A. The balance between cytotoxic NK cells and regulatory NK cclls in human prcgnancy. J. Reprod. Immunol. 2008. Vol. 77. P. 14-22.
Saito S., Nakasliima A.. Myojo-Higuma S.. Shiozaki A. The balance between cytotoxic NK cells and regulatory NK cells in human pregnancy'. J Re-prod Immunol 2008. Vol. 77. P. 14-22.
Trundlcy A., Moffctt A. Human uterine lcukocytcs and pregnancy. Tissue Arnigens. 2004. Vol. 63. P. 1-12.
Vitale M,. Bassini A.. Secchiero M. et al. NK-active cytokines IL-2, IL-12, and IL-15 selectively modu-
late specific protein kinase С (PKC) isoforms in priinarv human NK cells. Anat. Record. 2002. Vol. 266. P. 87-92. Zhang С. Zhang J.. Tian Z. The regulatory cffcct of natural killer cclls: do "NK-rcg cells" exist9 Cefl. Mo/. Immunol. 2006. Vol. 3. P, 241-254.
Поступила в редакцию 05.09.2015
Об авторах
Ширшев Сергей Викторович, доктор медицинских наук, заведующий лабораторией иммунорегуляции
ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН 614081. Пермь, ул. Голева, 13; shirshev@iegm.ru; (342)2808431 профессор кафедры микробиологии и иммунологии
ФПБОУ ВПО «Пермский государственный национальный исследовательский университет» 614990, Пермь, ул. Букирева. 15
Некрасова Ирина Валерьевна, кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории иммунорегуляции ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН
614081. Пермь, ул. Голева, 13; nirina5fiiiniail.ru; (342)2808431
Горбунова Ольга Леонидовна, кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории иммунорегуляции ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН 614081. Пермь, ул. Голева, 13; оИа15_77@1ши1'ги: (342)2808431
Орлова Екатерина Григорьевна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории иммунорегуляции ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН 614081, Пермь, ул. Голева, 13; orlova_katyamail.ru; (342)2808431
Масленникова Ирина Леонидовна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории иммунорегуляции ФГБУН Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН 614081, Пермь, ул. Голева, 13, i.maslenmkoya@rambler.ru; (342)2808431
About the authors
Shirshev Sergej Viktorovich, doctor of medicine, head of laboratory of immunoregulation Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms. Ural Branch, Russian Academy of Sciences. 13, Goleva str, Perm, Russia, 614081; shirshev@iegni.ni: (342)2808431 professor of the Department of microbiology and immunology
Perm State University. 15, Bukirev str., Perm. Russia, 614990
Nekrasova Irina Valerevna, candidate of biology, researcher of laboratory of immunoregulation Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms. Ural Branch, Russian Academy of Sciences. 13, Goleva str., Perm. Russia, 614081; nirina5ia.mail.ru; (342)2808431
Gorbunova Olga Leonidovna, candidate of biology, researcher of laboratory of immunoregulation Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms. Ural Branch, Russian Acadciny of Sciences. 13, Goleva str., Perm. Russia, 614081; ohal5_77^mail.ni; (342)2808431
Orlova Ekaterina Grigor'evna. candidate of
biology, senior rcscarchcr of laboratory of
immunoregulation
Institute of Ecology' and Genetics of
Microorganisms. Ural Branch, Russian Academy
of Sciences. 13, Goleva sir., Perm. Russia, 614081;
orlova_katy@.mail.ru; (342)2808431
Maslennikova Irina Leonidovna. candidate of biologyr. senior researcher of laboratory' of immunoregulation
Institute of Ecology and Genetics of Microorganism UB RAS. 13, Golcv str., Perm, Russia, 614081; i.ma$lennikova@rambler.ru: (342)2808431
