CC BY
22
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. 2016; 61(8) DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-8-474-478
БИОХИМИЯ
© КАЛИТИН Н.Н., БУРАВЦОВА И.В., 2016 УДК 616-006.448-085.277.3-074
Калитин Н.Н.1, Буравцова И.В.2
значение экспрессии изоформ RARa1 и RARa2 В оТВЕТЕ НА ЛЕКАРСТВЕННУю терапию и в оценке общей выживаемости ебольных с впервые выявленной множественной миеломой
1 ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, 115478, Москва; 2 ГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского», 129110, Москва, Российская Федерация
Введение. RARa является транскрипционным фактором, играющим важную роль в таких процессах, как пролиферация, диф-ференцировка и апоптоз клеток в норме и в опухоли. В то же время мало что известно о значении экспрессии двух основных продуктов транскрипции гена RARa — изоформ RARa1 и RARa2 — в патогенезе солидных и несолидных опухолей, в том числе и множественной миеломы (ММ). Полученные к настоящему времени данные свидетельствуют о неоднозначности того вклада, который вносят изоформы RARa1 и RARa2 в процессы опухолеобразования и прогрессии злокачественных опухолей. Результаты. Мы обнаружили, что более высокий уровень экспрессии изоформы RARa2 в сочетании с увеличенной экспрессией изоформы RARP4 (группа 1) статистически достоверно ассоциировался с меньшим снижением концентрации белка Бенс-Джонса в моче пациентов в результате проведенного лечения и, следовательно, меньшей эффективностью ответа на стандартное лечение по протоколу M-2 по сравнению с группой 2, в которую были включены больные с более низкими уровнями экспрессии RARa2 и RARfi4 (32,8 и 62,8% для групп 1 и 2 соответственно; p = 0,037). Анализ показателей выживаемости исследованных пациентов групп 1 и 2 продемонстрировал, что медиана общей выживаемости пациентов из группы 1 была достоверно ниже, чем у пациентов, включенных в группу 2 (30 и 84 мес соответственно; p = 0,046). Заключение. Наши результаты показывают, что повышенный уровень экспрессии в первую очередь изоформы RARa2 в сочетании с гиперэкспрессией изоформы RARfi, но не RARa1 может иметь неблагоприятное значение при оценке ответа на лекарственную терапию и прогнозе общей выживаемости у пациентов с ММ.
Ключевые слова: изоформы RARa1 и RARa; экспрессия генов; ответ на лекарственную терапию; множественная миелома.
Для цитирования: Калитин Н.Н., Буравцова И.В. Значение экспрессии изоформ RARa1 и RARa2 в ответе на лекарственную терапию и в оценке общей выживаемости больных с впервые выявленной множественной миеломой. Клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(8): 474-478. DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-8-474-478
KalitinN.N.1, BuravtsovaI.V.2
THE SIGNIFICANCE OF EXPRESSION OF ISOFORMS RARA1 AND RARA2 IN RESPONSE TO MEDICINAL THERAPY AND IN EVALUATION OF TOTAL SURVIVAL OF PATIENTS WITH PRIMARILY DETECTED MULTIPLE MYELOMA
1The N.N. Blokhin Russian oncologic research center, 115478, Moscow; 2The M.F. Vladimirskii Moskovskii oblastnoii clinical research institute, 129119 Moscow, Russia
Introduction. The RARa is a transcription factor playing important role in such processes as proliferation, differentiation and apoptosis of cells in norm and in tumor. At the same time, it is little known about significance of expression of two major products of transcription of gene RARa - isoforms RARa1 and RARa2 - in pathogenesis of solid and non-solid tumors, including multiple myeloma. The actual data testify ambiguity of input made by isoforms RARa1 and RARa2 into processes of tumor development and progression of malignant tumors.
The results. It was established that higher level of expression of isoform RARa2 in combination with increased expression of isoform RARfi4 (group 1) statistically reliable associated with lesser decreasing of concentration of Bence Jones protein in urine ofpatients in the result of applied treatment and, therefore, lesser effectiveness of response to standard treatment according protocol M-2 in comparison with group II which included patients with lesser levels of expression of RARa2 and RARfi4 (32.8% and 62.8% for groups I and II correspondingly; p=0.037). The analysis of indices ofsurvival of examined patients in groups I and II demonstrated that median of total survival of patients from group I was reliably lower than in patients included into group II (30 and 84 correspondingly; p=0.046). Сondusion. The results of study demonstrate that increased level of expression in the first instance of isoform RARa2 in combination with hyper-expression of isoform RARP4 but not RARa1 can have unfavorable significance in case of evaluation of response to medicinal therapy and prognosis of total survival in patients with multiple melanoma.
Keywords: isoforms RARat and RARa2; gene expression; response to medicinal therapy; multiple melanoma.
For citation: Kalitin N.N., Buravtsova I.V. The significance of expression of isoforms RARa1 and RARa2 in response to medicinal therapy and in evaluation of total survival ofpatients with primarily detected multiple myeloma. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2016; 61 (8): 474-478 (in Russ.) DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-8-474-478
For correspondence: KalitinN.N., candidate of biological sciences, research worker of laboratory of tumor cells of the research institute of cancerogenesis. e-mail: f.oskolov@mail.ru Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests. Financing. The study had no sponsor support.
Received 13.04.2016 Accepted 20.04.2016
Д л я к о р р е с п о н д е н ц и и: Калитин Николай Николаевич, канд. биол. наук, науч. сотр. лаб. генетики опухолевых клеток НИИ канцерогенеза «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, е-mail: f.oskolov@mail.ru
BIOCHEMISTRY
Введение. Множественная миелома (ММ) — злокачественное лимфопролиферативное заболевание из группы ге-мобластозов. В основе патологических изменений при ММ лежат разнообразные нарушения плазматических клеток, представляющих собой конечное звено в дифференцировке В-клеток лимфоидного ряда гемопоэза [1]. Вследствие этого трансформированные плазматические клетки начинают активно синтезировать и секретировать различные типы патологического иммуноглобулина (парапротеина), обнаруживаемого в сыворотке крови и моче больных ММ [2].
Для ММ, как и для других солидных и несолидных опухолей, характерна высокая степень интраклональной гетерогенности, обусловливающей прогрессию заболевания и формирование резистентности к лекарственной терапии [3]. Следует отметить, что неконтролируемый рост малигнизиро-ванных плазматических клеток, продукция ими опухолевого парапротеина, а также значительная внутриклональная гетерогенность при ММ являются, в конечном счете, следствием дисрегуляции рост-индуцирующих и рост-супрессивных сигналов на клеточном и тканевом уровнях [4].
Одним из важных регуляторов пролиферативной активности клеток в нормальных условиях и при онкогенезе служит ядерный рецептор ретиноевой кислоты RARa (retinoic acid receptor a), функционирующий в виде двух главных изо-форм — RARaj и RARa2 [5, 6]. Изоформы RARa и RARa2 образуются в процессе транскрипции с общего гена RARa, но с разных промоторов, названных Р1 и Р2 и локализованных выше первого и третьего экзонов соответственно [7].
Несмотря на то, что структурные особенности изоформ RARaj и RARa2, а также продуктов их альтернативного сплайсинга детально изучены, функциональное значение RARaj и RARa2 остается практически не исследованным [8]. Так, было показано, что в эстроген-зависимых линиях рака молочной железы T47D и ZR-75-1 подавление экспрессии RARaj (но не RARa2) приводило к уменьшению количества клеток в S-фазе и, следовательно, пролиферации [9]. В то же время, в другой работе, выполненной также на клетках рака молочной железы, было выявлено негативное влияние экспрессии изоформы RARaj на их пролиферативную активность [Ю].
Таким образом, можно заключить, что имеющиеся литературные данные по этой проблеме крайне немногочисленны, а полученные результаты зачастую носят противоречивый характер. В связи с этим изучение роли, которую играют изоформы RARaj и RARa2 в патогенезе ММ, а также исследование их значения в клинике ММ представляют несомненный интерес как с теоретической, так и с практической точек зрения.
Цели и задачи. В данной работе мы исследовали значение экспрессии мРНК изоформ aj и a2 гена рецептора ретиноевой кислоты RARa у больных с впервые выявленной ММ и сопоставили полученные данные с эффективностью ответа на лекарственную терапию, а также с общей выживаемостью у исследованных больных.
Материал и методы. В исследование были включены j5 больных с впервые выявленной ММ (6 мужчин и 9 женщин) в возрасте от 37 до 75 лет. У всех пациентов была диагностирована ММ III стадии. Диагноз устанавливали на основании жалоб, связанных с основным заболеванием: боли в костях различной интенсивности, боли в поясничном отделе позвоночника, обусловленные корешковым синдромом. Диагноз подтверждали цитологическим исследованием аспиратов костного мозга, где выявлялась плазмоклеточная инфильтрация у всех больных, а также иммунохимическим исследованием белков сыворотки крови и мочи. По изотипу патологического иммуноглобулина IgGk выявили у 8 пациентов, IgGl — у 2, IgAk — у j ^Мк — у j IgGk + BJk — у 2, IgGl + BJl — у L
Всем больным была проведена рентгенография костей скелета в двух проекциях. Генерализованный остеолитический синдром диагностирован у 10 из 15 больных. Стадирование проводили по общепринятой методике В. Durie и S. Salmon
[11]. Индукционный период лечения включал от 6 до 8 курсов цитостатической терапии по протоколу М-2 (винкристин по 1,2 мг/м2 внутривенно (в/в), кармустин по 20 мг/м2 в/в, мелфалан по 8 мг/м2 внутрь, циклофосфан по 400 мг/м2 в/в, преднизолон по 40 мг/м2 внутрь). Поддерживающую терапию проводили по протоколу М-2 1 раз в 3 мес.
Материалом для исследования была мононуклеарная фракция клеток, которую получали путем разделения костномозговых пунктатов в градиенте плотности фиколла («ПанЭко», Россия). Тотальную РНК выделяли с помощью Trizol Reagent (MRC, США). Все процедуры подробно описаны нами ранее
[12]. Для синтеза кДНК в ходе обратной транскрипции использовали праймер 0ligo-dT(18) (МВ1 Fermentas, Литва). Компоненты и условия реакции описаны ранее [12].
Полимеразную цепную реакцию в реальном времени (ПЦР-РВ) проводили на амплификаторе Bio-Rad CFX (BioRad, США) с использованием интеркалирующего красителя Eva Green (BIOTIUM, США) по следующей схеме: 95°С в течение 5 мин — 1 цикл, и далее 39 циклов: денатурация — 95°С, 20 с; отжиг праймеров — 59°С, 25 с; синтез — 72°С, 20 с. Для нормирования данных использовали экспрессию гена «домашнего хозяйства» GAPDH. Относительный уровень экспрессии каждого гена определяли по значению ACt по формуле: [ACt = Ct (GAPDH) - Ct (исследуемого гена), где Ct — минимальный пороговый цикл гена в экспоненциальной фазе амплификационной кривой]. Относительную разницу в уровнях экспрессии генов определяли по формуле 2n (где n — значение ACt исследуемого гена). Все эксперименты выполнены трехкратно. Нуклеотидные последовательности праймеров приведены в таблице.
Статистическую обработку результатов проводили, используя программное обеспечение Graph Pad Prism 5.02. Результаты представлены как М ± ЕМ (где М — среднее арифметическое выборки, а ЕМ — стандартная ошибка средней). Статистическую значимость определяли с помощью /-критерия Стьюдента или непараметрического критерия Манна—Уитни при значении p < 0,05. Корреляционные зависимости определяли с помощью критериев Пирсона (r) или Спирмена (R). Расчет кривых общей выживаемости проводили методом Каплан-Майера, статистически значимую разницу в выживаемости определяли с помощью теста Мантеля—Кокса.
Последовательность праймеров, использованных в ПЦР-РВ
Ген Последовательность Размер продукта, пар оснований
RARa1 5'- GCCAGGCGCTCTGACCACTC- 3' (for) 5'- AGCCCTTGCAGCCCTCACAG-3' (rev) 222
RARa2 5'- ACTCCGCTTTGGAATGGCTCAAAC- 3' (for) 5'- AGCCCTTGCAGCCCTCACAG-3' (rev) 182
RARß2 5'- TTCCCTCACTCTGCCAGCT- 3' (for) 5'- CGAGTTCCTCAGAGCTGGTG -3' (rev) 86
RARß„ 5'- TTGGAAGGAGAACTTGGGATC -3' (for) 5'- TCAATTGCATTTTCCAGGCT -3' (rev) 71
GAPDH 5'- CTGGGCTACACTGAGCACC -3' (for) 5'- AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG -3' (rev) 101
Примечание: for — последовательность прямого праймера, rev — последовательность обратного праймера.
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. 2016; 61(8) DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-8-474-478
БИОХИМИЯ
sa
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
О V/ЖЯ V/ХУЯ IV/KX] V/JMA У/УУЗ К/ЛХХ1 V/1MA Г/ЖХ] V/ХЖ V/m V/ЛУЯ I//KXH Г/А/Я V/ХУЯ 1/ЛОЯ I 0 ■
-5 --10 --15 --20 --25 -
kz
-5 --10 --15 -
-20 J
RARa, RARa,
Рис. 1. Экспрессия изоформ КАТ^ и КАГа2 у пациентов с впервые выявленной ММ.
а — гистограмма распределения пациентов по уровням экспрессии изоформ ЯАЯа1 и ЯАЯа2; б — аддитивные показатели экспрессии изоформ ЯАЯа1 и ЯАЯа2 в общей группе из 15 обследованных пациентов; * — р < 0,05.
Здесь и на рис. 2, 3 по оси абсцисс — порядковые номера больных; по оси ординат — значения ДС( в виде количества циклов.
Результаты. При анализе уровней экспрессии изоформ RARa1 и RARa2 у исследованных больных оказалось, что изоформы RARa1 и RARa2 экспрессируются у всех 15 больных, однако уровень экспрессии изоформ RARa1 и RARa2 отличался значительной вариабельностью (рис. 1, а). Так, уровень экспрессии изоформы RARa1 находился в диапазоне от -14,75 до -2,65 (-10,2 ± 0,93) и превалировал над экспрессией изоформы RARa2 у 13 из 15 больных (86,7%). В то же время у 2 из 15 больных (13,3%) уровни экспрессии обеих изоформ были практически сопоставимы и являлись одними из самых высоких в общей группе больных. Как видно из рис. 1, б, сравнение суммарных уровней экспрессии изоформ RARa1 и RARa2 показало, что среднее значение ACt экспрессии изоформы RARa1 было достоверно выше относительно среднего значения ACt экспрессии изоформы RARa2 (в 23,6 раза; p = 0,012).
В связи с тем, что ген RARß является RARa индуцибель-ным геном, и его экспрессия обнаруживается измененной при многих типах злокачественных опухолей, на следующем этапе нашей работы мы исследовали экспрессию двух изо-форм гена RARß — RARß2 и RARß4. Мы определили, что суммарные уровни экспрессии изоформ RARß2 и RARß4 в общей группе практически не отличались (рис. 2, а). Однако при сравнении индивидуальных значений ACt изоформ RARß2 и RARß4 каждого пациента оказалось, что у 8 из 15 больных уровень экспрессии изоформы RARß4 превалировал над экспрессией изоформы RARß2 (группа 1), в то время
Группа 1
Группа 2
Рис. 2. Экспрессия изоформ RARß4 и RARß2 у пациентов с впервые выявленной ММ.
а — аддитивные показатели экспрессии изоформ RARß4 и RARß2 в общей группе из 15 обследованных пациентов; б — дифференциальный характер экспрессии изоформ RARß4 и RARß2 в общей группе больных; ** — p < 0,01; *** — p< 0,001.
как у 7 больных (группа 2) была отмечена противоположная тенденция: ДС( экспрессии изоформы КАТР2 была выше, чем ДС( экспрессии изоформы КАТР4 (рис. 2, б). Кроме того, мы обнаружили положительную корреляцию между экспрессией изоформ КАТа1 и КАКР2 (г = 0,68; р = 0,0055), но не между КАКа1 и КАТР4. Экспрессия изоформы КАКа2 статистически достоверно коррелировала с экспрессией изофор-мы КАКр (г = 0,67; р = 0,007).
Далее мы проанализировали изменение уровней экспрессии изоформ КАКа1 и КАКа2 в группах, различающихся по экспрессии изоформ КАКР2 и КАКР4. Так, для группы 1 (КАКР4 > КАКР2) аддитивный показатель экспрессии изоформы КАКа1 был незначительно повышен (в 1,95 раза; р = 0,62) по сравнению с группой 2 (КАКР4 < КАКР2). Вместе с тем мы обнаружили кардинальное различие групп 1 и 2 по экспрессии изоформы КАКа2: совокупный уровень экспрессии изоформы КАКа2 был в 10,95 раза выше у больных с преобладанием экспрессии изоформы КАКР4 над КАКР2 (группа 1) в отличие от пациентов из группы 2, у которых экспрессия КАКР2 была повышена относительно изоформы КАКР4 (рис. 3).
Известно, что снижение концентрации опухолевого па-рапротеина в моче больных (белок Бенс-Джонса) является одним из важнейших маркеров ответа на проводимую противоопухолевую терапию при ММ [13]. Наши данные показывают, что среднее значение снижения концентрации белка Бенс-Джонса в группе 1, в которую были включены пациенты с гиперэкспрессией изоформ КАТа2 и КАКР4, равнялось 32,8% и было статистически достоверно ниже аналогичного показателя для группы 2 (62,8%; р = 0,037), пациенты из которой характеризовались сниженными значениями ДС( экспрессии этих изоформ относительно группы 1 (рис. 4, а).
RARa(
RARa,
Группа 1 Группа 2
Рис. 3. Экспрессия изоформ RARa1 и RARa2 в группах 1 и 2, различающихся по уровням экспрессии изоформ RARß4 и RARß2.
BIOCHEMISTRY
80-1
di 60-
0-
ш s 40-
X
О)
s ^ 20-
X
О
о4
Группа 1 Группа 2
£ 150-, S
о
œ 100
ce
m
*
м m к es 3 ю О
50-
0
100
20 40 60 80 Время, мес --+- Группа 1 (медиана: 30 мес) —•— Группа 2 (медиана: 84 мес)
Рис. 4. Эффективность ответа на лекарственную терапию и общая выживаемость в группах 1 и 2, различающихся по экспрессии изоформ RARa2, RARP4 и RARP2.
а — средние значения снижения концентрации патологического иммуноглобулина (Pig) в моче пациентов из групп 1 и 2 после проведенной химиотерапии; * — p < 0,05; б — кривые общей выживаемости пациентов из групп 1 и 2.
Сравнение показателей общей выживаемости в группах 1 и 2 также выявило значительное различие между ними. Медиана общей выживаемости больных, включенных в группу 1, равнялась 30 мес и была статистически достоверно более чем в 2 раза ниже данного параметра, определенного для группы 2 (рис. 4, б). В то же время мы не обнаружили статистически значимой корреляции между общей выживаемостью и величиной ответа на проведенное лечение в общей группе из 15 больных (r = -0,046; p = 0,88). Также мы не выявили достоверной корреляции между общей выживаемостью больных и концентрацией патологического иммуноглобулина (r = 0,21; p = 0,47).
Обсуждение. ММ характеризуется латентным течением и обнаруживается, как правило, на поздних стадиях с ярко выраженной клинической симптоматикой [14]. Эффективность современных режимов полихимиотерапии в сочетании с аутоло-гичной трансплантацией костного мозга позволяет в ряде случаев увеличить медиану общей выживаемости в сравнении с применявшимся в течение нескольких десятилетий сочетанием «мелфалан—преднизолон» [15—18]. Однако ММ по-прежнему остается инкурабельным заболеванием, а медиана общей выживаемости для данной нозологии в основном не превышает 3—4 лет. Эти обстоятельства создают предпосылки для поиска и изучения новых маркерных факторов, которые могли бы иметь важное значение при выборе оптимальных режимов лекарственной терапии ММ и служить возможными мишенями для известных и вновь синтезируемых таргетных препаратов.
В своей работе мы исследовали значение экспрессии изоформ RARa1 и RARa2 у первичных больных ММ. Экспрессия изоформ RARa1 и RARa2 была детектирована у всех 15 исследованных пациентов, однако у большинства из них экспрессия изоформы RARa1 превалировала над экспрессией изоформы RARa2 с разницей между суммарными уровнями АС( более чем в 20 раз (см. рис. 1, б). Полученные данные, вероятно, указывают на то, что изоформа RARa1 (но не RARa2) является доминантно экспрессируемой изоформой, образующейся в процессе транскрипции с общего гена RARa. Наши результаты частично подтверждаются работой S. Wang и др., которые установили, что экспрессия изоформы RARa2 обнаруживается у ~ 30% больных с впервые выявленной ММ, тогда как экспрессия изоформы RARa1 была выявлена у всех исследованных ими пациентов [19].
Известно, что одним из важнейших RARa-таргетных генов является ген рецептора ретиноевой кислоты RARfi [20]. Следу-
ет отметить, что в результате альтернативного сплаисинга гена ЕЛЕв происходит образование двух главных изоформ КАйР — КАТР2 и КАКР4, обладающих антагонистичными функциями [21]. Кроме того, ранее мы установили, что дифференциальный характер экспрессии изоформ КАКР2 и КАКР4 может служить новым прогностическим фактором в оценке общей выживаемости больных ММ [22]. В связи с этим в дальнейшем мы оценили экспрессию изоформ КАКР2 и КАКР4 у исследованных нами больных и сопоставили полученные данные с изменениями экспрессии изоформ КАйа1 и КАйа2.
Мы обнаружили, что в исходной группе у 53,3% пациентов превалировала экспрессия изоформы КАКР4, что рассматривается в качестве неблагоприятного прогностического фактора. При этом приблизительно у половины больных (46,7%) наблюдалась обратная картина: значительное снижение экспрессии изоформы КАКР4 в сочетании с гиперэкспрессией изоформы КАКР2. Высокий уровень экспрессии КАКР2, ассоциированный с низкой экспрессией изоформы КАКР4 или ее инактивацией, расценивается большинством исследователей как позитивный прогностический фактор, поскольку КАйР2 является опухолевым супрессором, активность которого оказывается частично или полностью подавленной в результате злокачественной трансформации.
Интересно, что при сравнении уровней экспрессии изоформ КАйа1 и КАйа^ в группах, различающихся по преобладанию экспрессии изоформ КАйР или КАйР (группы 1 и 2), мы не выявили значительных различий между этими двумя группами по среднему уровню экспрессии изоформы КАйа1, тогда как по уровню экспрессии изоформы КАйа2 группы 1 и 2 различались более чем в 10 раз (см. рис. 3).
Полученные молекулярно-биологические различия в группах 1 и 2 по уровню экспрессии изоформы КАйа2 оказались сопряжены со значительным различием этих групп по таким важным клиническим показателям, как ответ на лекарственную терапию и общая выживаемость больных (рис. 4, а, б). Так, для группы 1 с гиперэкспрессией изоформы КАйа2 были отмечены меньшая величина ответа на лекарственную терапию и более низкое значение медианы общей выживаемости по сравнению с группой 2, включавшей пациентов с более низким уровнем экспрессии изоформы КАйа2.
Таким образом, мы предположили, что экспрессия изоформы КАйа2, но не КАйа1 в первую очередь может играть роль маркерного фактора, изменения которого, вероятно, отражают степень злокачественного потенциала малигнизиро-ванных плазматических клеток, выражающуюся в большей агрессивности их фенотипических свойств и высокой резистентности к цитостатической терапии.
Заключение. В данной работе мы исследовали значение экспрессии изоформ а1 и а2 гена рецептора ретиноевой кислоты ЕЛЕа у 15 больных с впервые выявленной ММ. Мы показали, что различный характер экспрессии — прежде всего, изофор-мы КАйа2 в сочетании с гиперэкспрессией изоформы КАйР4, но не КАйа1 — может рассматриваться в качестве возможного маркерного фактора при оценке ответа на лекарственную терапию и прогнозе общей выживаемости больных ММ.
Дальнейшее исследование роли изоформ КАйа1 и КАйа2 в патогенезе не только ММ, но и других злокачественных опухолей, безусловно, должно расширить и систематизировать наши предварительные результаты, полученные в этой работе, главным образом в направлении изучения и детализации различных эффекторов и сигнальных каскадов, которые могут регулироваться изоформами КАйа1 и КАйа2 и вносить существенный вклад в процесс канцерогенеза.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии скрытых конфликтов интересов.
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. 2016; 61(8) DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-8-478-484
БИОХИМИЯ
ЛИТЕРАТУРА (п.п. 1—11, 13—21 см. REFERENCES)
12. Калитин Н.Н., Буравцова И.В. Корреляция экспрессии транскрипционного фактора RARa и генов VEGFRS-зависимой сигнальной системы при множественной миеломе. Клиническая он-когематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2015; 8(1): 31—6.
22. Калитин Н.Н., Буравцова И.В. Дифференциальная экспрессия изоформ р2 и р4 гена рецептора ретиноевой кислоты RAR|3 в качестве возможного прогностического фактора при множественной миеломе. Вопросы онкологии. 2015; 61(6): 945—8.
Поступила 13.04.16
REFERENCES
1. LeBien T.W., Tedder T.F. В lymphocytes: how they develop and function. Blood. 2008; 112(5): 1570—80.
2. Palumbo A., Anderson K. Multiple myeloma. N. Engl. J. Med. 2011; 364(11): 1046—60.
3. Bjorklund C.C., Baladandayuthapani V., Lin H.Y., Jones R.J., Kui-atse i., Wang H. et al. Evidence of a role for CD44 and cell adhesion in mediating resistance to lenalidomide in multiple myeloma: therapeutic implications. Leukemia. 2014; 28(2): 373—83.
4. Boyle E.M., Davies F.E., Leleu X., Morgan G.J. Understanding the multiple biological aspects leading to myeloma. Haematologica. 2014; 99(4): 605—12.
5. Hjalt T.A., Murray J.C. Genomic structure of the human retinoic acid receptor-a1 gene. Mamm. Genome. 1999; 10(5): 528—9.
6. Leroy P., Krust A., Zelent A., Mendelsohn C., Garnier J.M., Kastner P. et al. Multiple isoforms of the mouse retinoic acid receptor a are generated by alternative splicing and differential induction by retinoic acid. EMBO J. 1991; 10(1): 59—69.
7. Brand N.J., Petkovich M., Chambon P. Characterization of a functional promoter for the human retinoic acid receptor-alpha (hRAR-a). Nucleic Acids Res. 1990; 18(23): 6799—806.
8. Parrado A., Despouy G., Kra@ba R., Le Pogam C., Dupas S., Cho-quette M. et al. Retinoic acid receptor alpha1 variants, RARalph-a1DeltaB and RARalpha1DeltaBC, define a new class of nuclear receptor isoforms. Nucleic Acids Res. 2001; 29(24): 4901—8.
9. Salazar M.D., Ratnam M., Patki M., Kisovic i., Trumbly R., iman M. et al. During hormone depletion or tamoxifen treatment of breast cancer cells the estrogen receptor apoprotein supports cell cycling
through the retinoic acid receptor al apoprotein. Breast Cancer Res. 2011; 13(1): R18.
10. Van der Leede B.J., Folkers G.E., van den Brink C.E., van der Saag P.T., van der Burg B. Retinoic acid receptor alpha 1 isoform is induced by estradiol and confers retinoic acid sensitivity in human breast cancer cells. Mol. Cell. Endocrinol. 1995; 109(1): 77—86.
11. Durie B.G., Salmon S.E. A clinical staging system for multiple myeloma. Correlation of measured myeloma cell mass with presenting clinical features, response to treatment, and survival. Cancer. 1975; 36(3): 842—54.
12. Kalitin N.N., Buravtsova I.V. Correlation between expression of RARa transcription factor and genes of VEGFR3-dependent signaling system in multiple myeloma. Klinicheskaya onkogematologiya. Fundamental'nye issledovaniya i klinicheskayapraktika. 2015; 8(1): 31—6. (in Russian)
13. Durie B.G., Bataille R. Therapeutic implications of myeloma staging. Eur. J. Haematol. Suppl. 1989; 51: 111—6.
14. Collins C.D. Multiple myeloma. Cancer Imaging. 2004; 4 Spec. No A: s47—53.
15. Barlogie B., Jagannath S., Desikan K.R., Mattox S., Vesole D., Siegel D. et al. Total therapy with tandem transplants for newly diagnosed multiple myeloma. Blood. 1999; 93(1): 55—65.
16. Attal M., Harousseau J.L., Stoppa A.M., Sotto J.J., Fuzibet J.G., Rossi J.F. et al. A prospective, randomized trial of autologous bone marrow transplantation and chemotherapy in multiple myeloma. Intergroupe Fran@ais du My@lomc. N. Engl. J. Med. 1996; 335(2): 91—7.
17. Child J.A., Morgan G.J., Davies F.E., Owen R.G., Bell S.E., Hawkins K. et al. High-dose chemotherapy with hematopoictic stem-cell rescue for multiple myeloma. N. Engl. J. Med. 2003; 348(19): 1875—83.
18. Kyle R.A., Rajkumar S.V. Multiple myeloma. Blood. 2008; 111(6): 2962—72.
19. Wang S., Tricot G., Shi L., Xiong W., Zeng Z., Xu H. et al. RARalpha2 expression is associated with disease progression and plays a crucial role in efficacy of ATRA treatment in myeloma. Blood. 2009; 114(3): 600—7.
20. Pozzi S., Rossetti S., Bistulfi G., Sacchi N. RAR-mediated epigenetic control of the cytochrome P450 Cyp26a1 in embryocarcinoma cells. Oncogene. 2006; 25(9): 1400—7.
21. Xu X.C. Tumor-suppressive activity of retinoic acid receptor-beta in cancer. Cancer Lett. 2007; 253(1): 14—24.
22. Kalitin N.N., Buravtsova I.V. Differential expression |2 and |4 isoforms of retinoic acid receptor gene RAR| as possible prognostic factor at multiple myeloma. Voprosy onkologii. 2015; 61(6): 945—8. (in Russian)
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 616.72-008.8-076.4
Доценко Т.Г.1, Шлыкова Г.И.1, Теплякова О.В.1,2
исследование синовиальной жидкости — клиническая значимость полученных результатов
1 Медицинское объединение «Новая больница», 620109, Екатеринбург; 2 ГБОУ ВПО Уральский государственный медицинский университет Минздрава России, 620028, Екатеринбург, Российская Федерация
В обзоре представлены современные данные об особенностях взятия синовиальной жидкости (СЖ), а также об информативности ряда ее показателей для решения основной клинической дифференциально-диагностической задачи, а именно — выделения группы септических и микрокристаллических артритов. Показано, что минимальный общедоступный объем исследования СЖ должен включать: определение числа лейкоцитов (пороговый уровень для диагностики септических артритов — 50 000—100 000 кл/мкл) и доли полиморфноядерных клеток (пороговый уровень — 90%), исследование с помощью световой микроскопии на содержание кристаллов, окраску по Граму и культуральное исследование СЖ; все это — при обязательном учете клинических данных. Традиционная оценка содержания глюкозы и протеина в СЖ малоинформативна. Определение концентрации прокальцитонина и лактата в СЖ перспективно для установления септического генеза артрита. Чувствительность и специфичность световой микроскопии достаточно высоки, в связи с чем отсутствие поляризационного микроскопа не может являться препятствием для проведения кристаллографического исследования СЖ.
Д л я к о р р е с п о н д е н ц и и: Теплякова Ольга Вячеславовна, д-р мед. наук, проф. каф. поликлинической терапии ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, 620028, Екатеринбург, е-таП: oteplyakova69@gmail.com
