CC BY
10
Клиническая онкогематология. 2022;15(2):140-7
Clinical oncohematology. 2022;15(2):140-7
ЛИМФОИДНЫЕ ОПУХОЛИ LYMPHOID TUMORS
Значение экспрессии активационных белков pAKT1, pSyk при диффузной В-крупноклеточной лимфоме
Е.В. Ванеева, В.А. Росин, Д.А. Дьяконов, С.В. Самарина, И.В. Парамонов
ФГБУН «Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА», ул. Красноармейская, д. 72, Киров, Российская Федерация, 610027
РЕФЕРАТ
Актуальность. Диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВКЛ) составляет 30-40 % всех неходжкинских лимфом взрослых. После иммунохимиотерапии R-CHOP у 40 % больных развиваются ранние рецидивы или наблюдается рефрактерное к лечению течение болезни. Параметры, используемые для оценки прогноза ДВКЛ, не всегда эффективны. В связи с этим проблема изучения дополнительных предикторов течения заболевания остается актуальной. Цель. Оценить прогностическое значение экспрессии pAKTI и рБук при ДВКЛ.
Материалы и методы. В исследование включено 100 пациентов с впервые диагностированной ДВКЛ, получавших иммунохимиотерапию первой линии по схеме R-CHOP. С помощью иммуногистохимического и морфо-метрического методов определяли относительное количество опухолевых клеток, экспрессирующих pAKTI, pSyk. Пороговый уровень экспрессии указанных белков вычисляли с применением ROC-анализа. Взаимосвязь экспрессии белков с клиническими параметрами ДВКЛ анализировали с применением точного двустороннего критерия Фишера. 5-летние общую (ОВ) и выживаемость без прогрессирования (ВБП) рассчитывали по методу Каплана—Мейера (лог-ранговый тест). Результаты. Высокая экспрессия pAKTI была связана с распространенными стадиями ДВКЛ, международным прогностическим индексом более 2 баллов, концентрацией лактатдегидрогеназы в сыворотке выше нормальных значений, неудачами терапии по схеме R-CHOP, худшими показателями ОВ и ВБП. Взаимосвязи экспрессии рSyk с клиническими характеристиками лимфомы не установлено. Самая низкая 5-летняя ОВ (27,6 %) зафиксирована в наблюдениях с сочетанной гиперэкспрессией pAKTI и pSyk (отношение рисков [ОР] 5,2; 95%-й доверительный интервал [95% ДИ] 2,49-10,9; p < 0,001). Аналогичная закономерность установлена и для ВБП (ОР 3,3; 95% ДИ 1,54-7,30; p = 0,002). Заключение. Гиперэкспрессия pAKT1 служит информативным параметром, позволяющим прогнозировать неблагоприятное течение ДВКЛ. Сочетанная гиперэкспрессия маркеров pAKT1, рSyk связана с более низкими показателями ОВ и ВБП по сравнению с их изолированной экспрессией и другими вариантами коэкспрессии.
Significance of the Expression of pAKT1 and pSyk Activation Proteins in Diffuse Large B-Cell Lymphoma
EV Vaneeva, VA Rosin, DA Dyakonov, SV Samarina, IV Paramonov
Kirov Research Institute of Hematology and Transfusiology, 72 Krasnoarmeiskaya ul., Kirov, Russian Federation, 610027
ABSTRACT
Background. Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) amounts for 30-40 % of all adult non-Hodgkin's lymphomas. After R-CHOP immunochemotherapy 40 % of patients develop early relapsed or therapy-refractory disease. The conventional prognostic parameters in DLBCL are not always effective. Therefore, exploring further predictors of disease course remains an issue.
Aim. To assess the prognostic value of pAKTI and pSyk expression in DLBCL.
Materials & Methods. The study enrolled 100 patients with newly diagnosed DLBCL treated with R-CHOP first-line immunochemotherapy. The relative count of pAKTI- and pSyk-expressing tumor cells was determined by immunohis-tochemical and morphometric methods. The expression cutoff of these proteins was calculated by ROC analysis. The relationship of protein expression with clinical parameters of DLBCL was analyzed by Fisher's exact two-tailed test. The 5-year overall (OS) and progression-free (PFS) survivals were estimated by Kaplan-Meier method (log-rank test). Results. High pAKTI expression was associated with advanced DLBCL stages, International Prognostic Index > 2, serum lactate dehydrogenase concentration above normal, failures of R-CHOP therapy, as well as worse OS and PFS. No correlation between pSyk expression and clinical lymphoma characteristics was found. The worst 5-year OS (27.6 %) was reported in cases of pAKTI and pSyk co-over-expression (hazard ratio [HR] 5.2; 95% confidence interval [95% CI] 2.49-10.9; p < 0.001). A similar trend was observed for PFS (HR = 3.3; 95% CI 1.54-7.30; p = 0.002). Conclusion. Overexpression of pAKT1 is an informative indicator of a poor DLBCL prognosis. Co-overexpression of pAKT1 and pSyk markers is associated with worse OS and PFS compared to their isolated expressions and other co-expression variants.
140
© 2022 практическая медицина
Ключевые слова: диффузная В-крупноклеточная Keywords: diffuse large B-cell lymphoma, pAKT1 and
лимфома, экспрессия pAKT1 и pSyk, общая выжи- pSyk expression, overall survival, progression-free
ваемость, выживаемость без прогрессирования. survival.
Received: November 17, 2021 Accepted: March 2, 2022
For correspondence: Elena Viktorovna Vaneeva, 72 Krasnoarmeiskaya ul., Kirov, Russian Federation, 610027; Tel.: +7(922)975-23-34; e-mail: vaneeva.elena.vic@mail.ru For citation: Vaneeva EV, Rosin VA, Dyakonov DA, et al. Significance of the Expression of pAKTI and pSyk Activation Proteins in Diffuse Large B-Cell Lymphoma. Clinical oncohematology. 2022;15(2):140-7. (In Russ).
DOI: 10.21320/2500-2139-2022-15-2-140-147
Получено: 17 ноября 2021 г. Принято в печать: 2 марта 2022 г.
Для переписки: Елена Викторовна Ванеева,
ул. Красноармейская, д. 72, Киров, Российская Федерация, 610027;
тел.: +7(922)975-23-34; e-mail: vaneeva.elena.vlc@mall.ru
Для цитирования: Ванеева Е.В., Росин В.А., Дьяконов Д.А.
и др. Значение экспрессии активационных белков pAKTI, pSyk
при диффузной В-крупноклеточной лимфоме.
Клиническая онкогематология. 2022;15(2):140-7.
DOI: 10.21320/2500-2139-2022-15-2-140-147
ВВЕДЕНИЕ
Среди всех неходжкинских лимфом взрослых диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВКЛ) составляет 30-40 %. Опухоль гетерогенна, представлена широким спектром вариантов, различающихся по своим морфологическим, иммунофенотипическим, генетическим характеристикам, а также клиническому течению и прогнозу [1, 2]. Несмотря на выраженное разнообразие форм и проявлений заболевания, лечение в большинстве случаев остается однотипным. В качестве стандартной первой линии при ДВКЛ используется иммунохимиотерапия R-CHOP (ритук-симаб, циклофосфамид, доксорубицин, винкристин, преднизолон). Однако у 40 % больных регистрируются ранние рецидивы, прогрессирование или отмечается рефрактерное течение опухоли [3].
Широко применяемым стандартным инструментом для оценки индивидуального риска раннего прогрессирования ДВКЛ служат международный прогностический индекс (МПИ) и его модификации. Однако в эпоху применения R-CHOP значимость МПИ ограничена и не всегда позволяет достоверно определять прогноз заболевания. Расчеты в соответствии с МПИ проводят, в основном опираясь на клинические характеристики ДВКЛ без учета молекулярных особенностей опухолевых клеток. Отмечается высокая вариабельность ответов на противоопухолевое лечение в пределах одной группы риска, определенной по шкале МПИ. Это особенно актуально в отношении пациентов из низкой и промежуточной низкой групп риска. В связи с этим поиск дополнительных биологических критериев, уточняющих прогноз заболевания, является актуальным [4, 5].
К настоящему времени успехи молекулярной генетики позволили существенно продвинуться в понимании биологии ДВКЛ. Установлено, что заболевание неоднородно по профилю экспрессии генов (GEP) в опухолевых клетках [6]. Выделены два основных молекулярных подтипа болезни: из В-клеток герминативного центра (GCB) и из активированных В-клеток (ABC), которые соотносятся с прогнозом заболевания при лечении по протоколу R-CHOP. Несмотря на вы-
сокую информативность, применение GEP в рутинной практике ограничено трудоемкостью и большими материальными затратами [7].
Среди других потенциальных факторов прогноза течения заболевания большое внимание уделяется идентификации компонентов различных онкогенных путей, дисрегуляция которых связана с биологической гетерогенностью ДВКЛ. В ряде исследований установлено, что аберрантная активация сигнальных каскадов BCR, PI3K/AKT/mTOR лежит в основе патогенеза лимфомы. Степень экспрессии ключевых молекул-посредников этих путей влияет на биологические характеристики опухолевых клеток и может определять прогноз заболевания [8].
Известно, что пролиферация и дифференцировка лимфоидных клеток тесно связаны с функционированием В-клеточного рецептора (BCR). Способность В-клеток пролиферировать в ответ на инфекцию лежит в основе адаптивного иммунитета человека. Однако данный защитный механизм сопряжен с риском опухолевой трансформации. На функционирование BCR могут влиять генетически обусловленные поломки многочисленных молекул-адаптеров (BLNK, CARD11, GRB2 и др.), активность регуляторных киназ и фосфатаз (LYN, Syk, тирозинкиназа Брутона, SHIP-1 и др.) [9]. Нарушение передачи сигнала через BCR занимает важное место в возникновении злокачественных лимфоидных новообразований, в т. ч. ДВКЛ. Одной из критически значимых сигнальных молекул BCR, являющейся перспективной мишенью таргетной терапии, считается тирозинкиназа Syk. Белок участвует в регуляции нисходящей передачи сигнала в клетке, ангиогенезе, а также клеточной дифференцировке от стадии пре-В-клеток до плазмоцитов. Избыточная экспрессия фосфорилированной формы Syk ^ук) способствует нарушению созревания лимфоидных элементов на стадии пре-В-клетки, возникновению мутаций и злокачественной трансформации лимфоцитов [10, 11]. Работы, посвященные изучению прогностического значения рSyk, проводились преимущественно при солидных опухолях. Сведения о значении их экспрессии при ДВКЛ отсутствуют.
Сигнальный каскад PI3K/AKT/mTOR взаимодействует со множеством онкогенных путей и опосре-
Таблица 1. Характеристика больных диффузном В-крупноклеточной лимфомой
Показатель Число пациентов, %
Возраст
> 60 лет 60
< 60 лет 40
Стадия по Ann Arbor I-II 40
III-IV 60
Концентрация ЛДГ
Норма 50
Выше нормы 50
< 2 баллов 45
> 2 баллов 55
Статус пациента на момент исследования Летальный исход 35
Остается под наблюдением_65_
ЛДГ — лактатдегидрогеназа; МПИ — международный прогностический индекс.
дует широкий спектр клеточных функций, включая пролиферацию, апоптоз, метаболизм, ангиогенез [12, 13]. Активация пути представляет собой ферментный каскад последовательных реакций фосфо-рилирования таких ключевых белков, как Р13К, Р1Р2, Р1Р3, протеинкиназа В (АКТ1), негативный регулятор передачи сигнала РТЕЫ и др. Особое внимание уделяется исследованию функций белка АКТ1, т. к. он является онкогеном при многих злокачественных опухолях, в т. ч. ДВКЛ [14, 15]. Показано, что повышенный уровень фосфорилированных форм этого фермента влияет на устойчивость опухоли к химиотерапии через негативную регуляцию активности белков-транспортеров, контролирующих поступление и выведение веществ из клетки [16, 17]. Результаты исследований прогностического значения рАКТ1 при ДВКЛ противоречивы, что определяет необходимость дальнейшего изучения указанного сигнального белка.
Таким образом, функционирование сигнальных путей Р13К/АКТ/шТОЯ и ВСЯ при ДВКЛ изучено недостаточно. Не установлено значение изолированной и сочетанной экспрессии рАКТ1 и рБук при определении прогноза заболевания.
Цель исследования — оценить прогностическое значение экспрессии рАКТ1 и рБук при ДВКЛ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В ретроспективное исследование включено 100 первичных пациентов с морфологически и им-муногистохимически подтвержденным диагнозом ДВКЛ, установленным в соответствии с критериями классификации опухолей кроветворной и лим-фоидной тканей ВОЗ 2008-2017 гг. [13]. Больные обследовались в КНИИГиПК ФМБА России с 2012 по 2018 г. (клинико-диагностическое отделение гематологии и химиотерапии с дневным стационаром) и получали терапию первой линии по схеме R-CHOP. Медиана возраста больных составила 59 лет (диапазон 24-83 года). Среди заболевших 60 % (п = 60) представлены возрастной группой 60 лет и старше, 40 % (п = 40) составили пациенты моложе 60 лет. Распределение пациентов по полу было сопоставимым: 49 мужчин, 51 женщина. Клиническая характеристика больных ДВКЛ представлена в табл. 1. Проведение научной работы одобрено локальным этическим комитетом КНИИГиПК ФМБА России (протокол № 30 от 27.10.2021 г.).
Для исследования использовали архивные образцы (парафиновые блоки) и интраоперационный материал лимфатических узлов или других вовлеченных в патологический процесс тканей. Морфологическое и иммуногистохимическое (ИГХ) исследования выполняли в лаборатории патоморфологии ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России (зав. лабораторией канд. мед. наук Д.А. Дьяконов). Постановку ИГХ-реакций осуществляли непрямым пероксидазным методом в соответствии с протоколом для систем визуализации EnVISION (DAB+, Dako) с использованием широкой диагностической панели антител. Для обнаружения pAKT1 (GeneTex, phosphor Ser473) и рSyk (GeneTex, phosphor Tyr348) в опухолевых клетках гистологические срезы инкубировали с соответствующими мо-ноклональными антителами (GeneTex). ИГХ-подтип опухоли определяли на основании алгоритма Hans. В 35 случаях установлен GCB-подтип ДВКЛ, в 65 — non-GCB.
Тирозинкиназа рSyk и протеинкиназа pAKT1 являются важнейшими ферментами в системе передачи сигналов в клетке, т. е. относятся к активационным (сигнальным) белкам.
Морфометрическую оценку относительного содержания опухолевых клеток выполняли визуально способом двойного «слепого» анализа на световом микроскопе AxioScope.A1 со встроенной фото-/ви-деокамерой и программным обеспечением анализа изображений (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Германия). Оценивали 10 полей зрения в каждом образце с применением окуляров х10 и объектива х100. Исходя из полученных результатов, вычисляли среднее относительное содержание антигенпозитивных опухолевых клеток в исследуемом материале.
Статистический анализ
Статистическую обработку данных, полученных в ходе исследования, проводили с использованием статистической программы IBM SPSS Statistics 26. Прогностически значимый порог экспрессии белков
Пол
Мужчины Женщины 49 51
В-симптомы
Нет Есть 51 49
Экстранодальные поражения
Нет Есть 64 36
Иммуногистохимический подтип
GCB non-GCB 35 65
МПИ
Ответ на противоопухолевую терапию
Полный Частичный/рецидив/рефрактерность 62 38
Рис. 1. Диффузная В-крупноклеточная лимфома. Биоптат лимфатического узла. Иммуногистохимическое окрашивание опухолевых клеток моноклональным антителом к pAKTI (клон phosphor Ser473), система визуализации EnVision (Dako, Дания). Продукт реакции окрашен в коричневый цвет (стрелки). Докраска ядер гематоксилином, *1000: А — высокая экспрессия (количество опухолевых клеток, экспрессирующих pAKTI, > 70 %); Б — низкая экспрессия (количество опухолевых клеток, экспрессирующих pAKTI, < 70 %)
Fig. 1. Diffuse large B-cell lymphoma. Lymph node biopsy. Immunohistochemical staining of tumor cells by monoclonal pAKTI antibody (clone phosphor Ser473), EnVision visualization system (Dako, Denmark). The reaction product is brown (arrows). Hematoxylin final nuclear staining, *1000:
А — high expression (count of pAKTI-expressing tumor cells > 70 %); Б — low expression (count of pAKTI-expressing tumor cells < 70 %)
Рис. 2. Диффузная В-крупноклеточная лимфома. Биоптат лимфатического узла. Иммуногистохимическое окрашивание опухолевых клеток моноклональным антителом к pSyk (клон phosphor Tyr348), система визуализации EnVision (Dako, Дания). Продукт реакции окрашен в коричневый цвет (стрелки). Докраска ядер гематоксилином, *1000: А — высокая экспрессия (количество опухолевых клеток, экспрессирующих pSyk, > 28 %); Б — низкая экспрессия (количество опухолевых клеток, экспрессирующих pSyk, < 28 %)
Fig. 2. Diffuse large B-cell lymphoma. Lymph node biopsy. Immunohistochemical staining of tumor cells by monoclonal pSyk antibody (clone phosphor Tyr348), EnVision visualization system (Dako, Denmark). The reaction product is brown (arrows). Hematoxylin final nuclear staining, *1000: A — high expression (count of pSyk-expressing tumor cells > 28 %); 5 — low expression (count of pSyk-expressing tumor cells < 28 %)
рАКТ1, рБук в опухолевых клетках вычисляли с помощью ЯОС-анализа с расчетом соответствующих показателей специфичности и чувствительности. Высокий, или надпороговый, — уровень экспрессии маркера выше порогового значения (для рАКТ1 — > 70 % опухолевых клеток, для рБук — > 28 %); низкий, или подпороговый, — уровень экспрессии белка ниже порогового значения (для рАКТ1 — < 70 % опухолевых клеток, для рБук — < 28 %) (рис. 1 и 2). Пороговый уровень соответствует критическому значению опухолевых клеток, экспрессирующих тот или иной маркер.
Согласно установленным пороговым значениям, всех обследуемых разделили на группы с высокой (гиперэкспрессия: > 70 % (+) для рАКТ1; > 28 % (+) для рБук) и низкой (< 70 % (-) для рАКТ1; < 28 % (-) для рБук) экспрессией белков. Проанализировали взаимосвязь различных вариантов коэкспрессии рАКТ1 и рБук с течением ДВКЛ.
Статистическую оценку наличия/отсутствия связи изучаемых маркеров с клиническими характеристиками опухоли осуществляли с помощью критерия х2 Пирсона с расчетом отношения шансов
Таблица 2. Взаимосвязь экспрессии pAKTI и pSyk с клиническими показателями диффузной В-крупноклеточной лимфомы
_Показатель_Экспрессия pAKTI_Экспрессия pSyk_
Высокая Низкая Высокая Низкая (п = 43), (п = 57), (п = 32), п (п = 68), п (%)_п (%) ОШ (95% ДИ) р (%)_п (%) ОШ (95% ДИ) р
Пол
Мужчины Женщины 22 (44,9) 27 (55,1) 1,0 (0,30-0,96) 0,580 20 (40,8) 29 (59,2) 0,6 (0,73-1,1) 0,785 26 (51,0) 25 (49,0) 29 (56,9) 22 (43,1)
Возраст
> 60 лет 30 (50,0) 30 (50,0) 1,1 (0,12-0,99) 0,387 39 (65,0) 21 (35,0) 1,2 (0,50-2,30) 0,436
< 60 лет 18 (45,0) 22 (55,0) 17 (42,5) 23 (57,5)
Стадия по Ann Arbor
I-II III-IV 11 (27,5) 29 (72,5) 0,3 (0,14-0,78) 0,011 13 (32,7) 27 (68,3) 0,9 (0,75-1,30) 0,930 32 (53,3) 28 (46,7) 19 (32,5) 41 (67,5)
В-симптомы
Нет 29 (49,2) 30 (50,8) 1,8 (0,81-4,24) 0,136 23 (39,0) 36 (61,0) 1,7 (0,92-3,44) 0,085
Есть 14 (34,1) 27 (65,9) 9 (28,0) 32 (47,0)
Экстранодальные поражения
Нет Есть 18 (43,9) 23 (56,1) 1,0 (0,47-2,37) 0,879 10 (24,4) 31 (75,6) 0,5 (0,22-1,37) 0,174 25 (42,4) 34 (57,6) 22 (37,3) 37 (62,7)
Концентрация ЛДГ
Норма 31 (45,6) 37 (54,4) 1,4 (0,50-3,30) 0,446 11 (34,4) 21 (69,1) 0,8 (0,49-1,63) 0,727
Выше нормы 12 (37,5) 20 (62,5) 21 (30,9) 47 (69,1)
МПИ
< 2 баллов > 2 баллов 26 (57,8) 19 (42,2) 3,0 (1,34-6,96) 0,007 15 (33,3) 30 (66,7) 0,9 (0,73-1,26) 0,796 17 (30,9) 38 (69,1) 17 (30,9) 38 (69,1)
Ответ на противоопухолевую терапию
Полный 22 (57,9) 16 (42,1) 2,7 (1,17-6,16) 0,019 15 (39,5) 23 (60,5) 1,1(0,61-1,91) 0,210
Частичный/рецидив/рефрактер- 21 (33,9) 41 (66,1) 17 (27,4) 45 (72,6)
ность
Иммуногистохимический подтип
GCB non-GCB 15 (22,9) 20 (77,1) 3,9 (1,55-9,95) 0,003 11 (28,6) 24 (71,4) 1,3 (0,52-3,13) 0,591 28 (53,8) 37 (46,2) 21 (33,8) 44 (66,2)
95% ДИ — 95%-й доверительный интервал; ЛДГ — лактатдегидрогеназа; МПИ — международный прогностический индекс; ОШ — отношение шансов. Полужирным шрифтом выделены статистически значимые различия между группами.
(ОШ) и 95%-го доверительного интервала (95% ДИ). В случае числа ожидаемых частот менее 5 применяли точный двусторонний критерий Фишера (Р). 5-летние общую выживаемость (ОВ) и выживаемость без прогрессирования (ВБП) рассчитывали по методу Каплана—Мейера с графическим построением соответствующих кривых (лог-ранговый тест) и расчетом отношения рисков (ОР) и 95% ДИ. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Проанализирован характер распределения вариантов изолированной экспрессии биомаркеров рАКТ1, рБук в группах пациентов с различными клиническими характеристиками ДВКЛ (табл. 2). При этом наиболее значимые закономерности обнаружены для белка рАКТ1. Установлено, что гиперэкспрессия рАКТ1 в 2 раза чаще регистрировалась у пациентов с Ш-1У стадией заболевания, чем у больных с 1-11 стадией (53,3 и 27,5 % соответственно; р = 0,011). Надпороговый уровень экспрессии рАКТ1 почти в 2 раза чаще выявлялся у пациентов с высоким и промежуточным высоким риском по шкале МПИ, чем у больных с низкими значениями этого показателя (57,8 и 30,9 % соответственно; р = 0,007).
У пациентов с гиперэкспрессией рАКТ1 шансы на регистрацию неудачи терапии увеличивались в 2,7 раза по сравнению с больными , имевшими низкую выраженность маркера по количеству опухолевых клеток (ОШ 2,7; р = 0,019). Взаимосвязи изучаемого биомаркера с другими клиническими показателями не обнаружено (р > 0,05).
Гиперэкспрессия рБук преобладала у лиц возрастной группы 60 лет и старше, у обследуемых с В-симптомами, повышенной концентрацией сывороточной лактатдегидрогеназы, значениями МПИ > 2 баллов и прогрессированием заболевания (р > 0,05).
Частота высокой экспрессии рАКТ1 у обследуемых с подтипом поп-ССВ была статистически значимо выше по сравнению с пациентами с ССВ-вариантом ДВКЛ (53,8 % и 22,9 % соответственно; р = 0,003).
В результате анализа 5-летней ОВ в группах пациентов с дифференцированной экспрессией рАКТ1 установлены межгрупповые отличия (рис. 3). Показатель 5-летней ОВ статистически значимо различался у обследуемых с высоким и подпороговым уровнями экспрессии маркера (41,2 и 82,5 % соответственно; р < 0,001). Вероятность не дожить до 5-летнего рубежа у лиц с гиперэкспрессией белка рАКТ1 была в 5,7 раза выше в сравнении с пациентами, у которых
А
100
. 80 .п н и о
И 60
m
s
*
j
ш 40
к
л
3
ю
0 20
Б
100
х
л m
8 80
<и ю л н и о S Я) л m
60
40
20
— pAKTI > 70 % — pAKTI < 70 %
+н—«—н—»-
"Ч
низкая экспрессия pAKTI, п = 43
высокая экспрессия pAKTI, п = 57
п
p < 0,001
0 20 40
Время наблюдения, мес.
60
низкая экспрессия pAKTI, п = 43
высокая экспрессия pAKTI, п = 57
p = 0,003
0 20 40
Время наблюдения, мес.
60
А
Б
1,0
0,8
0,6
0,4
а
si б
о
0,2
1,0
н
а
m
g. 0,8
0,6
е б
л н
с
О
м
е а
m
0,4
0,2
— pSyk > 28 % — pSyk < 28 %
низкая экспрессия pSyk,п = 68
высокая экспрессия pSyk, п = 32
p = 0,154
0 20 40
Время наблюдения, мес.
60
низкая экспрессия pSyk, п = 68
—
высокая экспрессия pSyk, п = 32
p = 0,155
0 20 40
Время наблюдения, мес.
60
Рис. 3. Общая (А) и выживаемость без прогрессирования (Б) в группах больных ДВКЛ с различным уровнем экспрессии pAKTI
Fig. 3. Overall (А) and progression-free (Б) survivals depending on pAKTI expression levels in DLBCL patients
Рис. 4. Общая (А) и выживаемость без прогрессирования (Б) в группах больных ДВКЛ с различным уровнем экспрессии рSyk
Fig. 4. Overall (А) and progression-free (Б) survivals depending on рSyk expression levels in DLBCL patients
зарегистрирован низкий уровень его экспрессии (ОР 5,7; 95% ДИ 2,65-12,49; р < 0,001).
В группе пациентов с надпороговым уровнем экспрессии рАКТ1 5-летняя ВБП соответствовала 39,7 % при медиане выживаемости 41 мес. и была значительно ниже таковой у обследуемых с низкой выраженностью маркера по количеству опухолевых клеток (65,1 % при недостигнутой медиане; р = 0,003). При этом риск развития рецидива/прогрессирования ДВКЛ у лиц с гиперэкспрессией белка рАКТ1 был в 2,7 раза выше, чем у лиц с низким уровнем его выраженности (ОР 2,7; 95% ДИ 1,42-5,33; р = 0,001).
У больных с гиперэкспрессией рБук 5-летняя ОВ составила 53,1 % при медиане выживаемости 47 мес., у обследуемых с низкой выраженностью маркера — 70,6 % (медиана не достигнута). Однако полученные различия не были статистически значимыми (р = 0,154) (рис. 4).
5-летняя ВБП у пациентов с гиперэкспрессией рБук была в 1,2 раза ниже по сравнению с группой обследуемых, имевших низкую экспрессию биомаркера (53,1 и 66,2 % соответственно). При этом статистически
значимой связи экспрессии рБук с ВБП не установлено (р = 0,155).
Изучалась сочетанная экспрессия АКТ1 и рБук при ДВКЛ (рис. 5). Комбинация рАКТ1+/рБук+ зарегистрирована у 15 пациентов, одновременно низкая экспрессия белков (рАКТ1-/рБук-) — у 41. Варианты сочетанной экспрессии рАКТ1+/рБук- и рАКТ1-/рБук+ выявлены у 29 и 15 обследуемых соответственно.
Лучшие показатели 5-летней ОВ зафиксированы в группе пациентов с одновременной низкой экспрессией онкобелков (90,2 %, медиана не достигнута). Эти данные статистически значимо отличались от показателей 5-летней ОВ у больных с сочетанной гиперэкспрессией маркеров: 26,7 % при медиане 10 мес. (р < 0,001). Риск наступления неблагоприятного события у обследуемых с вариантом экспрессии рАКТ1+/рБук+ при использовании стандартной схемы Я-СИОР возрастал в 5,2 раза по сравнению с больными, имевшими одновременно низкую выраженность отмеченных биомаркеров или изолированную гиперэкспрессию одного из них (ОР 5,2; 95% ДИ 2,49-10,9; р < 0,001).
0
0
0
0
А
pAKT1+/pSyk+ pAKT1+/pSyk-
— pAKT1-/pSyk+
— pAKT1-/pSyk-
100
80
о
IS 60
40
3
ю О
20
- 27 %, n = 15
— 52 %, n = 29 p < 0,001
Б
20 40
Время наблюдения, мес.
60
, 100
80
60
е б
л н
с
о
м
е
40
20
— 40 %, n = 15
— 55 %, n = 29 p = 0,002
0 20 40
Время наблюдения, мес.
60
Рис. 5. Общая (А) и выживаемость без прогрессирования (Б) в группах больных ДВКЛ с коэкспрессией pAKTI и pSyk
Fig. 5. Overall (А) and progression-free (Б) survivals depending on pAKTI and pSyk co-expression in DLBCL patients
При оценке 5-летней ВБП значение этого показателя в группе лиц с одновременной гиперэкспрессией рАКТ1 и рSyk соответствовало 40 % при медиане 14 мес. уз 78,1 % (медиана не достигнута) у обследуемых с подпороговым уровнем экспрессии маркеров. Риск развития рецидива/прогрессиро-вания в группе больных с сочетанием pAKT1+/рSyk+ был в 3,3 раза выше, чем у лиц с другими комбинациями их экспрессии (ОР 3,3; 95% ДИ 1,54-7,30; р = 0,002).
Приведенные результаты свидетельствуют о том, что биомаркер рАКТ1 может служить предиктором неблагоприятного прогноза при ДВКЛ.
ОБСУЖДЕНИЕ
ДВКЛ является самой частой нозологической формой среди всех неходжкинских лимфом взрослых. В настоящее время активно изучается значение сигнальных путей Р13К/АКТ/шТОЯ, ВСЯ в патогенезе ДВКЛ. Показано, что степень экспрессии основных моле-
кул-посредников (рАКТ1, рSyk) этих путей влияет на биологическое поведение опухолевых клеток и определяет прогноз заболевания. Однако полученные результаты отличаются противоречивостью.
В настоящем исследовании проведен сравнительный анализ экспрессии маркеров рАКТ1 и рSyk с биологическими параметрами опухоли, а также с выраженностью клинических проявлений ДВКЛ. В результате установлен ряд закономерностей, которые в основном связаны с особенностями экспрессии маркера рАКТ1. Определена взаимосвязь гиперэкспрессии рАКТ1 с неблагоприятными кли-ническо-биологическими параметрами заболевания (поп-вСВ-подтипом заболевания, ПЫУ стадией, высоким и промежуточным высоким риском в соответствии с критериями МПИ, неудачами терапии по схеме Я-СНОР). Результаты исследования указывают на связь высокого уровня экспрессии рАКТ1 с распространенностью опухолевого процесса в дебюте ДВКЛ.
Установлена взаимосвязь дифференцированной экспрессии рАКТ1 с прогнозом ДВКЛ. В группе больных с гиперэкспрессией белка регистрировались наихудшие показатели ОВ и ВБП по сравнению с пациентами, имевшими подпороговый уровень экспрессии маркера. Полученные данные подтверждают результаты исследований других авторов [16, 17]. Вероятно, более низкая выживаемость больных с высокой экспрессией рАКТ1 связана с антиапопто-тическим эффектом белка, опосредованным синергизмом с белком ВСЬ2. Кроме того, этот биомаркер способствует подавлению экспрессии ингибиторов циклинзависимых киназ, следствием чего является бесконтрольное деление опухолевых клеток. Таким образом, выявление гиперэкспрессии рАКТ1 на этапе первичной диагностики служит фактором высокого риска неблагоприятного течения ДВКЛ при использовании стандартных программ лечения и дает возможность выделить группу пациентов, требующих другого подхода к терапии.
Корреляция экспрессии маркера рSyk с течением заболевания не установлена. Предположительно это связано с тем, что передача сигнала через ВСЯ при ДВКЛ осуществляется в обход тирозинкиназы за счет других посредников, а также с более сильным влиянием регуляторных компонентов взаимосвязанных с ним каскадов.
Согласно современным представлениям, сигнальная система клетки — это сложноорганизованный комплекс, состоящий из множества пересекающихся и взаимодействующих сигнальных ферментных каскадов. Постоянная активация какого-либо фермента оказывает влияние не только на функции того сигнального пути, к которому он относится, но и на другие каскады. Поскольку в трансформированных В-лимфоцитах при ДВКЛ часто отмечается дисрегу-ляция сразу нескольких сигнальных путей, представляло интерес изучить связь коэкспрессии рАКТ1 и рSyk с течением заболевания.
Установлено, что больные с сочетанной гиперэкспрессией биомаркеров отличались худшей выживаемостью или прогрессирующим течением заболевания по сравнению с группой пациентов, имевших одновременную низкую экспрессию рАКТ1 и рSyk. На
0
0
0
основании полученных результатов можно предположить, что наличие активации нескольких сигнальных путей способствует значительному повышению пролиферативной активности опухолевых клеток, а также устойчивости патологического процесса к проводимому лечению. Анализ дифференцированной экспрессии биомаркеров рАКТ1 и рБук на этапе первичной диагностики ДВКЛ может способствовать выявлению групп пациентов с возможным неблагоприятным ответом на стандартную терапию этой опухоли. Исследования коэкспрессии белков рАКТ1 и рБук при ДВКЛ не проводились.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, pAKTI может рассматриваться в качестве дополнительного критерия прогноза течения ДВКЛ. Сочетанная гиперэкспрессия маркеров pAKTI и рБук увеличивает риск летального исхода или прогрессирования заболевания в сравнении с их изолированной гиперэкспрессией. Взаимосвязи изолированной экспрессии рБук c неблагоприятными параметрами заболевания, а также с выживаемостью больных не выявлено.
КОНФЛИКТЫ ИНТЕРЕСОВ
Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
ИСТОЧНИКИ ФИНАНСИРОВАНИЯ
Исследование выполнено при поддержке ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России.
ВКЛАД АВТОРОВ
Концепция и дизайн: Е.В. Ванеева, В.А. Росин, Д.А. Дьяконов.
Сбор и обработка данных: В.А. Росин, Е.В. Ванеева. Предоставление материалов исследования: С.В. Самарина.
Анализ и интерпретация данных: Е.В. Ванеева, В.А. Росин.
Подготовка рукописи: В.А. Росин, Е.В. Ванеева, Д.А. Дьяконов.
Административная поддержка: И.В. Парамонов.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Bahar T, Chowdhury ZZ, Rahman S, et al. Clinicopathological Correlation with Outcome of Diffuse Large B Cell Lymphoma: Experience in a Specialized Cancer Care Centre in Bangladesh. J Medicine. 2021;22(1):3-6. doi: 10.3329/ jom.v22i1.51383.
2. Самарина С.В., Лучинин А.С., Минаева Н.В. и др. Иммуногистохими-ческий подтип и параметры международного прогностического индекса в новой модели прогноза диффузной B-крупноклеточной лимфомы. Клиническая онкогематология. 2019;12(4):385-90. doi: 10.21320/2500-21392019-12-4-385-390.
[Samarina SV, Luchinin AS, Minaeva NV, et al. Immunohistochemical Subtype and Parameters of International Prognostic Index in the New Prognostic Model of Diffuse Large B-Cell Lymphoma. Clinical oncohematology. 2019;12(4):385-90. doi: 10.21320/2500-2139-2019-12-4-385-390. (In Russ)]
3. Mondello P, Mian M, Frontline treatment of diffuse large B-cell lymphoma: Beyond R-CHOP. Hematol Oncol. 2019;37(4):333-44. doi: 10.1002/hon.2613.
4. Song JL, Wei XL, Zhang YK, et al. The prognostic value of the international prognostic index, the national comprehensive cancer network IPI and the age-adjusted IPI in diffuse large B cell lymphoma. Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. 2018;39(9):739-44. doi: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2018.09.007.
5. Roschewski M, Staudt LM, Wilson WH. Diffuse large B-cell lymphoma treatment approaches in the molecular era. Nat Rev Clin Oncol. 2014;11(1):12-23. doi: 10.1038/nrclinonc.2013.197.
6. Alizadeh AA, Eisen MB, Davis RE, et al. Distinct types of diffuse large B-cell lymphoma identified by gene expression profiling. Nature. 2000;403(6769):503-11. doi: 10.1038/35000501.
7. Расторгуев С.М., Королева Д.А., Булыгина Е.С. и др. Клиническое и прогностическое значение молекулярных маркеров диффузной В-крупно-клеточной лимфомы. Клиническая онкогематология. 2019;12(1):95-100. doi: 10.21320/2500-2139-2019-12-1-95-100.
[Rastorguev SM, Koroleva DA, Boulygina ES, et al. Clinical and Prognostic Value of Molecular Markers of Diffuse Large B-Cell Lymphoma. Clinical oncohematology. 2019;12(1):95-100. doi: 10.21320/2500-2139-2019-12-1-95-100. (In Russ)]
8. Miao Yi, Medeiros LJ, Xu-Monette ZY, et al. Dysregulation of Cell Survival in Diffuse Large B Cell Lymphoma: Mechanisms and Therapeutic Targets. Front Oncol. 2019;9:107. doi: 10.3389/fonc.2019.00107.
9. Seda V, Mraz M. B-cell receptor signalling and its crosstalk with other pathways in normal and malignant cells. Eur J Haematol. 2014;94(3):193-205. doi: 10.1111/ejh.12427.
10. Никитин E.A. Передача сигнала через B-клеточный рецептор: механизмы и ингибиторы. Клиническая онкогематология. 2014;7(3):251-63. [Nikitin EA. BCell Receptor Signaling Pathway: Mechanisms and Inhibitors. Klinich-eskaya onkogematologiya. 2014;7(3):251-63. (In Russ)]
11. Wossning T, Herzog S, Kohler F, et al. Deregulated Syk inhibits differentiation and induces growth factor-independent proliferation of pre-B cells. J Exp Med. 2006;203(13):2829-40. doi: 10.1084/jem.20060967.
12. Kumar А, Rajendran V, Sethumadhavan R, Purohit R. AKT Kinase Pathway: A Leading Target in Cancer Research. ScientificWorldJournal. 2013; 2013:756134. doi: 10.1155/2013/756134.
13. Ванеева Е.В., Росин В.А., Дьяконов Д.А. и др. Значение экспрессии pAKT1 при диффузной В-крупноклеточной лимфоме. Бюллетень сибирской медицины. 2021;3:6-13.
[Vaneeva EV, Rosin VA, D'yakonov DA, et al. Significance of pAKT1 expression in diffuse large B-cell lymphoma. Byulleten' sibirskoi meditsiny. 2021;3:6-13. (In Russ)]
14. Karmali R, Gordon LI. Molecular Subtyping in Diffuse Large B Cell Lymphoma: Closer to an Approach of Precision Therapy. Curr Treat Options Oncol. 2017;18(2):11. doi: 10.1007/s11864-017-0449-1.
15. Wang X, Cao X, Sun R, et al. Clinical Significance of PTEN Deletion, Mutation, and Loss of PTEN Expression in De Novo Diffuse Large B-Cell Lymphoma. Neoplasia. 2018;20(6):574-93. doi: 10.1016/j.neo.2018.03.002.
16. Wang J, Xu-Monette ZY, Jabbar KJ, et al. AKT Hyperactivation and the Potential of AKT-Targeted Therapy in Diffuse Large B-Cell Lymphoma. Am J Pathol. 2017;187(8):1700-16. doi: 10.1016/j.ajpath.2017.04.009.
17. Hong JY, Hong ME, Choi MK, et al. The impact of activated p-AKT expression on clinical outcomes in diffuse large B-cell lymphoma: A clinicopathological study of 262 cases. Ann Oncol. 2014;25(1):182-8. doi: 10.1093/annonc/mdt530.
